紫染色法发现，本发明可以显著抑制C6胶质瘤细胞的侵袭性； 5. 本发明通过抑制C6胶质瘤细胞释放TNF- α，并通过PI3K/AKT/mT0R信号通路引起 肿瘤细胞自，进而引起细胞凋亡而抑制肿瘤的侵袭性。
[0024] 本发明抑制胶质瘤的实验研究结果： (1)本发明及其拆方对C6胶质瘤细胞培养液中TNF- α含量的影响。（见表1)
注：CHI1 :川芎、地龙、合欢皮、鸦胆子组；CHI2 :通关藤、赤芍、蒿本、白芷组；T :本发明 组。同一浓度抑制率比较：与本发明组比较，*尸〈0.05产尸〈0.01。
[0025] 结果提示，两拆方组随药物浓度增高，培养液中TNF-α含量亦增加，具有明显的 剂量依赖关系，其引起培养液中TNF- α含量最高值可以达到为23. 9 μ g /L和26. 52 μ g / L，本发明组促进胶质瘤细胞释放TNF-α的作用强于两拆方组，具有显著性差异，可以达 38. 38 μ g /L，证明两拆方组具有协同作用。
[0026] (2)本发明及拆方对C6胶质瘤细胞内PI3K/AKT/mT0R信号通路蛋白和Atg7蛋白 表达水平的影响(见附图1、2)。
[0027] 附图中：C:空白对照组；CHI1 :川考、地龙、合欢皮、鸦胆子组；CHI2:通关藤、赤 芍、蒿本、白芷组；T:本发明组。
[0028] 本发明及拆方处理的C6胶质瘤细胞，PI3K/AKT/mT0R信号通路蛋白的蛋白条带与 对照组相比均增强，说明本发明及拆方对这些信号通路蛋白的表达具有促进作用，促进作 用强弱依次为：T > CH2 > CHI > C。而自噬蛋白Atg7的表达水平与对照组相比均减弱，说 明本发明及拆方对Atg7蛋白的表达具有抑制作用，抑制作用强弱依次为：T > CH2 > CH1 > C〇
[0029] 细胞对自噬的形成有着精细的调节，有多种基因的参与，这些基因总称为自噬 相关基因 （autophagy related gene, ATG),它们编码的蛋白参与自·的诱导、产生、成熟 和再循环，同时自噬还受到一些信号途径如PI3K/ AKT/m TOR及 P38-MAPK等的调控。
[0030] 磷酯酰肌醇-3 激酶（phosphatidylinositol-3-kinase，PI3K)，存在于细胞质 的复合体，是一种能可催化磷脂酰肌醇D3位磷酸化的脂类激酶。当细胞受各种生长因子等 刺激后，PI3K的激活将导致3,4-二磷酸磷脂酰肌醇（PIP2)转化为3,4, 5-三磷酸磷脂酰 肌醇（PIP3)。作为第二信使的PIP3再激活诸多下游蛋白。Akt即为PI3K下游关键蛋白 之一，是一种进化上高度保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。激活后的Akt蛋白再到胞浆中 或者胞核内，将磷酸化一系列底物，进而发挥促进细胞增殖、抗凋亡等作用。
[0031] 哺乳动物雷帕霉素革巴蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR)是 PI3K 信 号通路下游分子之一。mTOR参与细胞的自。自 ( autophagy)，又称自体吞，是细胞 利用溶酶体降解自身一些受损的细胞器和大分子物质过程，对细胞进行调节。mTOR作为一 种保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，是调节细胞生长、增殖、运动、存活和自噬等上游通路 的汇合点，mTOR作为自噬启动阶段关键调节因子，其活化后可抑制自噬的发生。其中PI3K/ AKT/mTOR是抑制自噬的信号通路，它在许多肿瘤中可以被激活。
[0032] 在本次实验中我们用Western blot法检测对照组和本发明及拆方组中PI3K/ AKT/mTOR信号蛋白的蛋白表达。结果显示应用本发明全方和两拆方处理C6胶质瘤细胞后， 与对照组相比各蛋白表达有不同程度地增强，全方作用强于拆方。而自噬基因蛋白Atg7的 表达与P13K/AKT/mT0R信号蛋白的蛋白表达正好相反，应用本发明全方和两拆方处理C6胶 质瘤细胞后，与对照组相比各蛋白表达有不同程度地减弱，全方抑制作用强于拆方。实验结 果说明本发明治疗胶质瘤的有效组分在散结止痛类药。
[0033] 研究证明，本发明中的各味药物正是紧扣胶质瘤气滞阻络、血虚挟瘀壅脑的病机， 以散结止痛为主要功效治疗胶质瘤。
[0034] (3)本发明及拆方对C6胶质瘤细胞凋亡水平的影响(见附图3、4)。
[0035] 附图中：C:空白对照组；CHI1 :川芎、地龙、合欢皮、鸦胆子组；CHI2:通关藤、赤 芍、蒿本、白芷组；T:本发明组。
[0036] 胶质瘤防治机制研究中肿瘤细胞凋亡是一个重要环节。在本实验中，通过 AnnexinV-FITC检测细胞凋亡，结果显示应用本发明和拆方处理C6胶质瘤细胞后，与对照 组相比各组细胞凋亡水平均有增高，其中全方的作用最强，两拆方稍弱。实验结果说明本发 明抑制胶质瘤侵袭性的机制与促进细胞凋亡有关，其药效部位在散结止痛类药物协同作用 下产生。
[0037] (4)本发明及拆方对C6胶质瘤细胞侵袭性的影响(见附图5)。
[0038] 胶质瘤的治疗以手术治疗为主，但由于胶质瘤具有高侵袭性的特点，因此术中不 能做到病理学彻底切除，术后患者往往在短期内复发、转移，严重影响了患者的生活质量， 重者在短期内即引起死亡，因此，胶质瘤患者术后常规要进行化学治疗等辅助治疗。肿瘤患 者本身身体虚弱，往往不能耐受治疗剂量的化学药物，导致术后化疗效果并不理想。如果能 够从中医的角度对机体实施整体提高免疫力的角度来治疗，可能会达到事半功倍的作用。 在使用本发明及其拆方作用于C6胶质瘤细胞后，发现本发明和拆方均能降低胶质瘤侵袭 性，3组药物对C6胶质瘤细胞抑制侵袭性作用强弱依次为：本发明 >通关藤、赤芍、蒿本、白 芷组 > 川芎、地龙、合欢皮、鸦胆子组。
【主权项】
1. 一种治疗胶质瘤的散结止痛中药制剂，其特征在于：由川芎、地龙、合欢皮、鸦胆子、 通关藤、赤芍、蒿本、白芷组成，各中药组分的重量百分比为：川芎8-15%，地龙8-15%，合欢 皮15-25%，鸦胆子15-20%，通关藤15-25%，赤芍8-15%，蒿本8-15%，白芷8-15%。2. -种治疗胶质瘤的散结止痛中药制剂的制备方法，其特征在于包含如下工艺步骤： 选择中药川芎、地龙、合欢皮、鸦胆子、通关藤、赤芍、蒿本、白芷，洗净，打成粉末；按 照重量百分比配制及煎煮，各中药组分的重量百分比为川芎8-15%，地龙8-15%，合欢皮 15-25%，鸦胆子15-20%，通关藤15-25%，赤芍8-15%，蒿本8-15%，白芷8-15% ;加水煎煮，过 滤，将药渣再加水煎煮、过滤，水浴浓缩，成膏状，干燥，研碎，制成治疗胶质瘤的散结止痛中 药制剂。3. 根据权利要求2所述的治疗胶质瘤的散结止痛中药制剂的制备方法，其特征在于： 治疗胶质瘤的散结止痛中药制剂制成胶囊、片剂、散剂。
【专利摘要】本发明涉及一种治疗胶质瘤的散结止痛中药制剂及其制备方法，属于治疗胶质瘤中药制剂技术领域。技术方案是：由川芎、地龙、合欢皮、鸦胆子、通关藤、赤芍、蒿本、白芷组成，各中药组分的重量百分比为：川芎8-15%，地龙8-15%，合欢皮15-25%，鸦胆子15-20%，通关藤15-25%，赤芍8-15%，蒿本8-15%，白芷8-15%。全方散结、止痛、解毒功效优良，能有效治疗由于神经压迫症状导致的头痛症状，作用于全身多个脏器，充分体现了中医学对人体有机整体的独特认识，通过调节全身机能，达到抗肿瘤的目的。本发明的积极效果是：疗效明确，药源广、成本低廉、生产和服用方便，治疗胶质瘤效果显著。
【IPC分类】A61K36/65, A61P35/00, A61K36/71, A61K35/62
【公开号】CN105232658
【申请号】CN201510752058
【发明人】秦丽娟, 贾永森, 王银环, 彭海兵, 张伟
【申请人】华北理工大学
【公开日】2016年1月13日
【申请日】2015年11月9日