s表示，Y代表均值。采用SPSS17. 0统计软件进行数据分析。统 计学方法采用单因素方差分析，组间多重比较采用LSD-t检验，以P〈0. 05为差异具有统计 学意义，P〈0. 01为差异具有显著统计学意义。
[0043] 2. 5实验结果
[0044] 该实验结果（见表1)显示：高糖作用下视网膜神经细胞凋亡率显著升高 (Ρ〈0· 01)，7' -甲基-8' -溴-2-甲氧基苯并[C]吡啶并[4, 3, 2-mn]吖啶-8-酮保护组细 胞凋亡率显著低于高糖损伤组（P〈0. 01)，显示7' -甲基-8' -溴-2-甲氧基苯并[c]吡啶 并[4, 3, 2-mn]吖啶-8-酮能够抑制高糖损伤所致的细胞凋亡。
[0045] 表1为7'-甲基-8' -溴-2-甲氧基苯并[c]吡啶并[4, 3,2-mn]吖啶-8-酮对 糖尿病性视网膜病变的视网膜神经损伤的影响
[0046]
[0047] 注：*表示与正常组比较P〈0. 05;**表示与正常组比较P〈0. 01，#表示与高糖组比 较〈0. 01
[0048] 实施例2中的7'-甲基-8'-溴-2-甲氧基苯并[c]吡啶并[4, 3, 2-mn]吖啶-8-酮 采用实施例1所述的方法制得。
[0049] 实施例3
[0050] 本发明通过细胞水平的研究及建立动脉粥样硬化模型等技术揭示了7'-甲 基-8'-溴-2-甲氧基苯并[c]吡啶并[4, 3, 2-mn]吖啶-8-酮对动脉粥样硬化的作用。
[0051] 本发明经口及静脉注射给予7' -甲基-8' -溴-2-甲氧基苯并[c]吡啶并 [4, 3, 2-mn]吖啶-8-酮，可使动脉粥样硬化大鼠斑块面积/内膜面积（％)、内膜厚度（um)/ 中膜厚度（％)显著降低；MDA的含量显著降低（P〈0. 05)，SOD的含量显著升高，表明7'-甲 基-8' -溴-2-甲氧基苯并[c]吡啶并[4, 3, 2-mn]吖啶-8-酮可治疗动脉粥样硬化。
[0052] 材料与方法
[0053] 3.实验材料：
[0054] 3. 1动物和饲料
[0055] 实验动物：健康大鼠，雌雄各半，体重（200. 0± 20)g。
[0056] 伺料：基础伺料由江苏省实验动物中心提供；尚脂伺料由2%的胆固醇、10%的猪 油和88%的基础饲料组成，由江苏省实验动物中心加工完成。
[0057] 3. 2.实验方法：
[0058] 3. 2. 1内皮细胞培养及7' -甲基-8' -溴-2-甲氧基苯并[c]吡啶并[4, 3, 2-mn] 吖啶-8-酮作用研究
[0059] 3. 2. 1. 1建立高脂血清损伤的内皮细胞模型
[0060] 取健康日本大耳白兔6只，每日饲喂高脂饲料（2%胆固醇，10%猪油，88%基础饲 料），4周后无菌条件下心脏取血5ml，分离血清，合并，56°C水浴30min灭活处理，再以0. 45 及0. 22双层微孔滤膜过滤后，-30°C冷冻保存备用。
[0061] 3. 2. 1. 2细胞培养和传代
[0062] 将传代培养的人脐静脉内皮细胞株ECV304培养于含20%小牛血清、2mmol/L 1-谷氨酰胺、1001]/1111青霉素和10(^/1链霉素的01^1培养基中。用0.25%胰蛋白酶液与 0. 02%EDTA(1:1)消化传代。接种于100ml培养瓶中，送入5%C02培养箱中培养。以备实 验用。
[0063] 7' -甲基-8' -溴-2-甲氧基苯并[c]吡啶并[4, 3, 2-mn]吖啶-8-酮，临用前用 无血清培养基稀释。
[0064] 3. 2. 1. 3 分组
[0065] 取对数生长期的细胞用于实验。细胞加处理因素前24h更换无血清培养基，使细 胞同步化至G1期，然后随机分3组：对照组、高脂血清组、7' -甲基-8' -溴-2-甲氧基苯 并[c]吡啶并[4, 3, 2-mn]吖啶-8-酮组30μmol/ml组（给药组）。其中对照组：加无血 清01^1培养基；高脂血清组：加含5%高脂血清01^1培养基。
[0066] 3. 2. 1. 4MTT法检测细胞存活率
[0067] 将生长良好的EVC304细胞制备成3X107个，L-1的细胞悬液，按每孔0. 1ml接种 于96孔板，37°C，5%C02温育24h，无血清同步化处理及分组同上。各组细胞作用24h后， 每孔加入20ulMTT(5. 0g·L^，37°C孵育4h，弃去上清液，每孔加入二甲基亚砜100ul，充 分细胞存活率（％ )=处理组A57。/对照组A57QX100%
[0068] 3. 2. 1. 5MDA和SOD含量测定
[0069] 细胞分组及处理同上。作用24h后弃去上清液，用PBS洗3次后每孔加入0. 5ml 细胞裂解液（150mmol/LNaCl，150mmol/LTris-HCl，lmmol/LEDTA，l%TritonX-100)，待 细胞充分裂解后，参照MDA和SOD检测试剂盒说明书测定细胞MDA含量。
[0070] MDA即丙二醛，是自由基引起的脂质过氧化过程中生成的一种醛类物质。丙二醛 可以作为交联剂促进核酸、蛋白质及磷脂的交联，改变生物大分子的功能。通过检测丙二醛 的含量可以反映脂质过氧化的程度。S0D即超氧化物岐化酶，可以岐化超氧离子生成H202， 哺乳类细胞含有S0D，S0D作用的重要意义在于清除H202和0H·的前身超氧离子，从而保 护细胞不受毒性氧自由基的损伤。故S0D是人体防御内、外环境中超氧离子损伤的重要酶。 MDA水平升高，S0D活性降低，即可引发氧化应激反应，导致细胞损伤甚至细胞死亡。
[0071] 3. 2. 2 7'-甲基-8'-溴-2-甲氧基苯并[c]吡啶并[4, 3, 2-mn]吖啶-8-酮对高 脂动物的影响
[0072] 3.2.2. 1动物以基础饲料喂养1周，作为适应期。随机等分为3组：正常组、模型 组、7'-甲基-8'-溴-2-甲氧基苯并[c]吡啶并[4, 3, 2-mn]吖啶-8-酮低剂量组（300μg/kg)。正常组喂以基础饲料100g·只^d1;模型组及给药组喂以高脂饲料20g· 100 只^d1，给药组每天经口或注射给予相应剂量的7'-甲基-8'-溴-2-甲氧基苯并[c]吡 啶并[4, 3, 2-mn]吖啶-8-酮药物，连续给药20天。
[0073] 3. 2. 2. 2指标的测定
[0074] 3. 2. 2. 2. 1主动脉斑块的病变分级
[0075] 动物处死后，立即摘取主动脉（自心脏至髂动脉分叉处），将其上的脂肪组织剔 除，于背侧面纵行切开，用10%的甲醛溶液固定，苏丹IV染色，使斑块呈红色，铺平，照像。 图像分析仪测定斑块面积及血管内膜总面积，并计算斑块/血管内膜面积比。
[0076] 按以下规定进行分级：
[0077] 0级：无病变
[0078] 1 级：病变占 1%-25% ;
[0079] 2 级：病变占 26 % -50 %;
[0080] 3 级：病变占 51% -75% ;
[0081] 4 级：病变占 76%-100%。
[0082] 3. 2. 2. 2. 2 血清MDA及S0D的测定
[0083] 动物心脏采血，3000rpm·min1离心lOmin，取上清，用生理盐水稀释5倍，混勾待 测。采用MDA试剂盒测定MDA含量及S0D活性。
[0084] 实验结果
[0085] (1) 7' -甲基-8' -溴-2-甲氧基苯并[c]吡啶并[4, 3, 2-mn]吖啶-8-酮对高脂 血清损伤的内皮细胞细胞存活率的影响
[0086] 高脂血清能显著降低内皮细胞的细胞存活率（P〈0. 01)，7' -甲基-8' -溴-2-甲 氧基苯并[c]吡啶并[4, 3, 2-mn]吖啶-8-酮30μmol/ml能显著抑制高脂血清引起的细胞 存活率的降低（P〈〇.〇l)。
[0087] 表2为7'-甲基-8' -溴-2-甲氧基苯并[c]吡啶并[4, 3,2-mn]吖啶-8-酮对 高脂血清损伤的内皮细胞细胞存活率的影响
[0088]
[0089] 与正常组相比*Ρ〈0· 01 ;与模型组相比#Ρ〈0· 01
[0090] (2) 7' -甲基-8' -溴-2-甲氧基苯并[c]吡啶并[4, 3, 2-mn]吖啶-8-酮对高脂 致动脉粥样硬化大鼠血清MDA、S0D的影响
[0091] 与正常组相比，模型组血清中MDA的含量显著升高（P〈0. 01)，S0D活性显著下降； 与模型组相比，7' -甲基-8' -溴-2-甲氧基苯并[c]吡啶并[4, 3, 2-mn]吖啶-8-酮组血 清中MDA的含量显著降低（P〈0. 05)，SOD的含量显著升高（P〈0. 05)。
[0092] 表3为7'-甲基-8'-溴-2-甲氧基苯并[c]吡啶并[4, 3, 2-mn]吖啶-8-酮对 高脂致动脉粥样硬化大鼠血清中MDA、S0D的影响
[0093]
[0094] 与正常组相比*Ρ〈(λ01;与模型组相比#Ρ〈(λ01
[0095] (3) 7' -甲基-8' -溴-2-甲氧基苯并[c]吡啶