并[4, 3, 2-mn]吖啶-8-酮对高脂 致动脉粥样硬化大鼠主动脉斑块的病变分级的影响
[0096] 与模型组相比，7'-甲基-8'-溴-2-甲氧基苯并[c]吡啶并[4, 3, 2-mn]吖 啶-8-酮组斑块面积/内膜面积（％ )、内膜厚度（um)、内膜厚度/中膜厚度（％ )均显著 降低（P〈〇. 05)。
[0097] 表4为7'-甲基-8'-溴-2-甲氧基苯并[c]吡啶并[4, 3, 2-mn]吖啶-8-酮对 高脂致动脉粥样硬化大鼠主动脉斑块的病变分级的影响
[0098]
[0099] 与模型组相比#Ρ〈0·01
[0100] 结论：7'-甲基-8'-溴-2-甲氧基苯并[c]Ρ比啶并[4, 3, 2-mn]吖啶-8-酮能够 显著抑制动脉粥样硬化，可以用来制备抗动脉粥样硬化药物。
[0101] 实施例3中的7'-甲基-8'-溴-2-甲氧基苯并[C]吡啶并[4, 3, 2-mn]吖啶-8-酮 采用实施例1所述的方法制得。
[0102] 实施例4
[0103] 7'-甲基-8'-溴-2-甲氧基苯并[c]吡啶并[4, 3, 2-mn]吖啶-8-酮抗血管生成 活性的测定
[0104] (1)斑马鱼给药方式：显微镜下挑选正常发育斑马鱼24hpf胚胎，浸入lg/mL链霉 蛋白酶脱膜，剔除受损胚胎，移入12孔培养板，每孔20枚胚胎。各药物经DMS0助溶后，用 Holtbuffer稀释成lg/mL的药物浓度，同时设空白对照组（含等量助溶剂）的实验组， 28°C恒温控光孵化48h。
[0105] (2)NBT/BCIP血管染色：将发育72hpf的斑马鱼胚胎浸入4%多聚甲醛固定，梯度 乙醇渗透脱水，逐渐浸润后置于NTMT缓冲液中平衡，分别加入NBT和BCIP染色，脱色液脱 色，Olym.p.us显微镜拍照观察72hpf时胚胎肠下静脉血管（SIVs)生长情况，评价化合物 对斑马鱼胚胎血管生成的影响。
[0106] (3)结果判断：与空白组比较，处理组的斑马鱼胚胎SIVs生长均有抑制，主要表现 为肠下篮状血管网面积缩小，网中血管分支减少。
[0107] 运用ImageJ软件测量胚胎SIVs长度，定量评价代表化合物对72hpf斑马鱼胚胎 血管生成的影响，结果见表5。
[0108] 表5化合物对72hpf斑马鱼胚胎血管生成的影响
[0109]
[0110] 实施例4中的7'-甲基-8'-溴-2-甲氧基苯并[c]吡啶并[4, 3, 2-mn]吖啶-8-酮 采用实施例1所述的方法制得。
[0111] 实施例5
[0112] 7'-甲基-8'-溴-2-甲氧基苯并[c]R比啶并[4, 3, 2-mn]吖啶-8-酮在胶原诱导 小鼠关节炎动物模型体内免疫保护作用。
[0113] 构建原型小鼠关节炎动物模型，研究7' -甲基-8' -溴-2-甲氧基苯并[c]吡啶 并[4, 3, 2-mn]吖啶-8-酮，以下简称化合物A，对小鼠胶原诱导性关节炎（CIA)的治疗作 用。采用小鼠作为受试动物，SPF级DBA/1小鼠90只（由上海西普尔-必凯实验动物有限 公司）提供，雄性，7-8周龄，体重18-22g，随机分成6组，分别是正常对照组、模型对照组、 化合物A低中高（0. 3、0. 6、1. 2mg/kg) 3个剂量组和阳性药物（甲氨蝶呤2mg/kg)对照组。
[0114] 除正常对照组外，实验第0天，6个实验组均建立小鼠CIA模型，方法是鸡软骨II型 胶原（cII)用0.lmol/L醋酸溶液溶解成4mg/mL的溶液，于4°C冰箱中放置一夜。实验当 天将醋酸溶解后的鸡软骨II型胶原（cII)与含4mg/mL结核分枝杆菌菌株H37Rv的完全弗 氏佐剂（CFA)等体积充分乳化，制得第一乳化液，待DBA/1小鼠麻醉后，于其尾部皮内每只 注射第一乳化液50μL进行致敏，21d后将醋酸溶解后的鸡软骨II型胶原（cII)与不完全 弗氏佐剂（IFA)等体积充分乳化，制得第二乳化液，待DBA/1小鼠麻醉后，于其尾部皮内每 只注射第二乳化液50μL进行再次免疫。
[0115] 造模第30d起皮下注射给药，化合物Α低中高3个剂量组（0. 3、0.6、1.2mg/kg)， 每日两次，每次给药30mg，连续给药10d;阳性药物对照组（甲氨蝶呤2mg/kg)，每五天一 次，每次给药30mg，连续3次；正常对照组和模型对照组（生理盐水），每日两次，每次注射 30mg，连续10天。
[0116] 分别于造模后第21天至第70天每3天称量体重、关节评分、分别检测左右后足足 踝直径来观察药物对小鼠胶原型关节炎的影响。
[0117] 实验结果：造模后小鼠与正常小鼠相比，免疫后第27天，CIA小鼠足爪红肿，关节 炎指数评分增高，模型组第42-55天为肿胀高峰，模型组第34天开始体重几乎不增加，后期 略有下降。
[0118] 化合物A在胶原诱导小鼠关节炎动物模型体内免疫保护作用具体结果如下：
[0119] 化合物A对小鼠胶原型关节炎左足足爪肿胀度的影响：阳性对照组、化合物A低中 高剂量组左后足踝直径与模型组比较，均有极显著的差异（P〈〇. 01)，实验结果具有统计学 意义。化合物A对小鼠胶原型关节炎右足足爪肿胀程度的影响：阳性对照组、化合物低中高 剂量组右后足踝直径与模型组相比，均有极显著差异（P〈〇. 01)，实验结果具有统计学意义。 化合物A对胶原型关节炎小鼠临床评分的影响：化合物低中高剂量组四肢评分明显低于模 型对照组（P〈〇. 01)，与模型对照组比较有极显著差异，实验结果具有统计学意义。化合物A 对胶原型关节炎小鼠体重影响，化合物低中高剂量组体重显著高于模型对照组（P〈〇. 01)， 与模型组比较有极显著性差异，实验结果具有统计学意义。由此可知，化合物A对小鼠胶原 型关节炎具有治疗作用。
[0120] 实施例5中的7'-甲基-8'-溴-2-甲氧基苯并[c]吡啶并[4, 3, 2-mn]吖啶-8-酮 采用实施例1所述的方法制得。
[0121] 实施例6
[0122] 7'-甲基-8'-溴-2-甲氧基苯并[c]吡啶并[4, 3, 2-mn]吖啶-8-酮的体外药效 试验（以下将7' -甲基-8' -溴-2-甲氧基苯并[c]吡啶并[4, 3, 2-mn]吖啶-8-酮简称 化合物A)
[0123] 精确称取化合物A，加入二甲基亚砜完全溶解，实验前用培养液梯度稀释成所需浓 度（二甲基亚砜最终浓度〈0. 1% )。
[0124] 取第三代滑膜细胞以5X104个/mL细胞密度接种于96孔细胞培养板中，48h后更 换培养基并分别加入各浓度药物，使化合物A最终浓度为100、50、10、5、1、0. 5M，同时设空 白调零组（即只加培养液200μL/孔）、对照组、及甲氨蝶呤对照组（最终浓度分别为5、1、 0. 1μΜ)每组5个复孔。继续培养48h后每孔加入15μL质量浓度为5mg/mL的ΜΤΤ后继 续培养4h，吸净培养液，加入150μL二甲基亚砜，振荡lOmin，在酶标仪上于490nm测定0D 值。
[0125] 药物对滑膜细胞生长抑制率（％ ) = (1-受试药物组平均0D值/对照组平均0D 值）X100%
[0126] 以上各组0D值均需减去空白调零组0D值。
[0127] 用SPSS软件计算IC5。值，体外MTT法试验结果表明，化合物A具有很强的抑制成 纤维样滑膜细胞的增殖活性，其IC5。值为5μΜ。
[0128] 实施例6中的7'-甲基-8'-溴-2-甲氧基苯并[c]吡啶并[4, 3, 2-mn]吖啶-8-酮 采用实施例1所述的方法制得。
[0129] 尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列 运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地 实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限 于特定的细节和这里示出与描述的实施例。
【主权项】
1. 7'-甲基-8'-溴-2-甲氧基苯并[C]吡啶并[4, 3, 2-mn]吖啶-8-酮在血管生成抑 制药物中的应用，所述化合物的结构如式（1)所示；2. -种如权利要求1所还的皿官王成?H」制约物甲的K用，兵狩祉仕卞，治疗糖尿病引 起的视网膜神经损伤。3. -种如权利要求1所述的血管生成抑制药物中的应用，其特征在于，治疗类风湿性 关节炎。4. 一种如权利要求1所述的血管生成抑制药物中的应用，其特征在于，治疗动脉粥样 硬化。
【专利摘要】本发明公开了7’-甲基-8’-溴-2-甲氧基苯并[c]吡啶并[4,3,2-mn]吖啶-8-酮在血管生成抑制药物中的应用，所述化合物的结构如式(1)所示；；该应用在治疗糖尿病引起的视网膜神经损伤、类风湿性关节炎以及动脉粥样硬化上具有意想不到的效果。
【IPC分类】C07D471/06, A61P29/00, A61P19/02, A61K31/4375, A61P27/02, A61P9/10
【公开号】CN105250281
【申请号】CN201510820792
【发明人】杨洋
【申请人】杨洋
【公开日】2016年1月20日
【申请日】2015年11月23日