腱薄片再置入碱性溶液中（例如0.75M氢氧化钠溶液）于适当温度下（例如室温 下）进行一段时间（例如12-24小时）的萃取，然后将碱性溶液去除后，再以水清洗肌腱薄 片直至残留的碱完全去除。之后，此肌腱薄片以酸性溶液（例如0. 1N盐酸溶液）调整其pH 值为4至7 (例如PH值为5)。随后将肌腱薄片以醇类溶剂（例如异丙醇）于室温下进行脱 脂一段时间（例如16小时），轻轻将萃取剂倒出，然后再以醇类溶剂（例如异丙醇）于适 当温度下（例如室温下）进一步进行萃取一段时间（例如12-24小时），以形成一含胶原 蛋白的溶液，该含胶原蛋白的溶液置于干净的无菌操作台中风干而形成胶原蛋白粉末。该 胶原蛋白粉末可分散于酸性溶液（例如0.5M或0.25M醋酸水溶液）中形成混合物，且存在 一蛋白质水解酶（例如胰蛋白酶或胃蛋白酶），并于4°C下培养一段时间。所述混合物经由 100目的不锈钢筛网过滤后，于5%氯化钠溶液中沉淀；胶原蛋白沉淀物可再度溶解于前述 的酸性溶液中而形成胶原蛋白溶液，并且经由100目的不锈钢筛网过滤以去除其中的不溶 物，而后将该胶原蛋白溶液于蒸馏水中进行透析以去除其中的酸类。
[0025] 透明质酸
[0026] 本发明所述"透明质酸（hyaluronan) "是指存在于自然界中、具有阴离 子且未经硫酸化的葡萄糖胺聚糖（glycosaminoglycan)，其包含N-乙酰葡萄糖胺 (N-acetylglucosamine)、D_葡萄糖醛酸（D-glucuronicacid)及其衍生物的双醣分子重 复单元。自然存在的透明质酸（也可称之为玻尿酸）可以利用现有的技术从天然的物质中 分离出来，例如链球菌的荚膜、鸡冠、软骨、关节液、脐带、皮肤组织以及眼睛的玻璃体，可参 考如GuillermoLagoetal.CarbohydratePolymers62(4) :321-326, 2005 以及Ichika Amagaietal.FisheriesScience75 (3) :805-810, 2009 等文献。除此之外，透明质酸 亦可为市售产品，例如GenzymeCorporation、LifecoreBiomedicalLLC以及Hyaluron ContractManufacturing。
[0027] 天然透明质酸的衍生物包括，但不限于：透明质酸酯（hyaluronanesters)、经己 二酸二酰餅修饰的透明质酸（adipicdihydrazide-modifiedhyaluronan)、透明质酸胺产 物（hyaluronanamideproducts)、交耳关透明质酉爱（cross-linkedhyaluronicacid)、琥 ?白酸半酯（hemiestersofsuccinicacid)或其重金属盐类的透明质酸、部分或整体的透 明质酸酯、硫化透明质酸（sulphatedhyaluronicacid)、N-硫化透明质酸（N-sulphated hyaluronicacid)、以及经胺基或二胺基修饰的透明质酸。上述物质可通过对一个或多 个以上的官能基（例如：羧基、氢氧基、还原端基团、N-乙酰基）进行化学修饰而获得。 其中，对羧基进行修饰的方式可通过酯化反应或经过碳二亚胺（carbodiimide)及双酰 肼（bishydrazide)等中间物的反应达成；氢氧基的修饰包括，但不限于：硫酸化反应、酯 化反应、异脲偶合（isoureacoupling)反应、溴化氰活化（cyanogenbromide)反应、过 碘酸盐氧化（periodateoxidation)反应；对还原端基团进行修饰可通过还原胺化反应 (reductiveamination)达成，亦可连结磷脂（phospholipid)、染料（例如：焚光基团 或发色基团）或一适用于制备亲和性基质的试剂。天然透明质酸的衍生物可通过使用交 联剂进行交联反应，或者可通过内酯化（internalesterification)、光交联反应（photo cross-linking)或表面电衆处理（surfaceplasmatreatment)。所述交联剂例如：双环 氧化物（bisepoxide)、二乙烯基讽（divinylsulfone)、碳二亚胺（biscarbodiimide)、 小型同质双功能链接剂（smallhomobifunctionallinker)、甲醒、环己基异氰化物 (cyclohexylisocyanide)以及赖氨酸醚酯、金属阳离子、酰肼交联反应或其混合物。
[0028] 用于细胞生长的营养素
[0029]所述"营养素（nutrient)"是指细胞生长的必要营养来源，其可以是氨基酸、维 生素、矿物质、碳源（如葡萄糖）、脂肪酸或其混合物。于实例中，本发明的细胞组织胶体 中所使用的营养素为细胞培养基，该细胞培养基例如：MEM培养基（MinimumEssential Medium)、BME培养基（BasalMediumEagle)、DMEM培养基（Dulbecco'sModifiedEagle's medium)，Ham'sF-10 培养基（Ham'sNutrientMixturesF-10)、Ham'sF-12 培养基 (Ham'sNutrientMixturesF-12)、M199 培养基（Medium199)、RPMI培养基、Ames培养 基、BGJb培养基（修改Fitton-Jackson)、Click培养基、CMRL-1066 培养基、Fischer培养 基、GMEM培养基（GlascowMinimumEssentialMedium)、IMDM培养基（Iscove'sModified Dulbecco'sMedium)、L_15 培养基、McCoy's5A培养基（McCoy's5AModifiedMedium)、 NCTC培养基、Swim'sS-77 培养基、Waymouth培养基或William'sMediumE培养基。
[0030] 生物活性剂
[0031] 任何增进细胞存活力、促进细胞增生或诱导细胞分化的试剂（例如：胜肽 (peptide)、多肽、寡糖、多糖或小分子）均可用于制备本发明的细胞组织胶体。于实例中， 生物活性剂为生长因子，如上皮生长因子（epidermalgrowthfactor)、纤维母细胞生长 因子（fibroblastgrowthfactor)、血管内皮生长因子（vascularendothelialgrowth factor)、结缔组织生长因子（connectivetissuegrowthfactor)、血小板衍生性生长 因子（platelet-derivedgrowthfactor)、类膜岛素生长因子（insulin-likegrowth factor)、神经生长因子（nervegrowthfactor)、肝细胞生长因子（hepatocytegrowth factor)、细胞菌落刺激因子（colony-stimulatingfactors)、干细胞因子（stemcell factor)、血清素（serotonin)、温韦伯式因子（vonWillebrandfactor)、转化生长因子 (transforminggrowthfactor)、角质细胞生长因子（keratinocytegrowthfactor)、颗粒 球细胞菌落刺激因子（granulocytecolony-stimulatingfactor)、颗粒球/巨·细胞菌 落刺激因子（granulocyte/macrophagecolony-stimulatingfactor)、胶质衍生神经营养 因子（glialderivedneurotrophicfactor)、睫状神经营养因子（ciliaryneurotrophic factor)、内皮单核细胞活化多胜肽（endothelialmonocyteactivatingpolypeptide)、 上皮中性粒细胞活化胜肽（epithelialneutrophilactivatingpeptide)、红血球生成 素（erythropoietin)、骨形成蛋白（bonemorphogeneticproteins)、大脑衍生神经营养 因子（brain-derivedneurotrophicfactor)。在另一实例中，该生物活性剂可为细胞激 素（cytokine)或趋化激素（chemokine)，其包含但不限于：介白素-2(IL-2)、胸表达趋化素 (breast-expressedchemokine，如BRAK)、肾表达趋化素（kidney-expressedchemokine， 如CXCL14)。该生物活性剂亦可为细胞分化因子，如甲氟稀素（dexamethasone)、丙酮酸 钠（sodiumpyruvate)、抗坏血酸 _2_ 磷酸（ascorbicacid-2-phosphate)、维生素A酸 (retinoicacid)、脯氨酸（proline)、胰岛素（insulin)、运铁蛋白（transferrin)、亚硒酸 (selenousacid)、亚麻油酸（linoleicacid)、小牛血清蛋白（bovineserumalbumin)或 转化生长因子-33(TGF-e3)中的一种或多种。于较佳的实施例中，细胞分化因子为化合 物。其中，可参见美国第5, 908, 784号专利，该化合物可促进间叶干细胞（mesenchymalstem cell)的软骨生成作用（chondrogenesis);而所述化合物若为甲氟稀索（dexamethasone)、 维生素C(ascorbicacid)及β-甘油磷酸酯（β-glycerolphosphate)时，则可促进骨生 成作用（osteogenesis);所述化合物若为胰岛素、异丁基-甲基黄卩票呤（isobutyl-methyl xanthine)、甲氟稀索（dexamethasone)或吲噪美洒辛（indomethacin)时，贝丨j可促进脂肪 生成作用（adipogenesis);所述化合物为活化素A(activin-A)、骨形成蛋白-4(BMP-4) 时，贝丨j可促进心肌分化作用（cardiomyogenicdifferentiation);所述化合物为内皮细 胞基础培养基（EBM-2)、甲氟烯素（dexamethasone)、血管内皮生长因子（VEGF)时，则可 促进内皮细胞分化作用（endothelialcelldifferentiation);所述化合物为血小板 衍生性生长因子-BB(PDGF-BB)时，贝丨j可促进平滑肌细胞分化作用（smoothmusclecell differentiation);所述化合物为碱性纤维母细胞生长因子（bFGF)、上皮细胞生长因子 (epithelialgrowthfactor,EGF)、B27营养补给物、二甲基亚砜（DMSO)、丁基羟基甲氧苯(butylatedhydroxyanisole)、氣斯柯林（forskolin)、丙戊酸（valproicacid)、氯化钾、 K252a蛋白、N2营养补给物（N2supplement)，则可促进神