经诱导机制（neuralinduction); 所述化合物为甲氟烯素（dexamethasone)、肝细胞生长因子（HGF)、纤维母细胞生长因 子-4(FGF_4)时，贝lj可促进内胚层品系分化作用（endodermallineagedifferentiation)。 所述生物活性剂亦可是一种中草药或是中草药内部的活性成分。
[0032] 基质要素
[0033] 基质要素为一种辅助细胞维持在植入位置的化合物，其可以是一种于细胞外 基质中发现的胞外因子（extracellularfactor)。该基质要素例如，但不限于：明胶 (gelatin)、纤维连接蛋白（fibronectin)、弹性蛋白（elastin)、细胞黏合素（tenacin)、 层黏蛋白（laminin)、玻璃连接蛋白（vitronectin)、多胜肽（polypeptide)、硫酸肝素 (heparansulfate)、软骨素（chondroitin)、硫酸软骨素（chondroitinsulfate)、角质 素（keratan)、硫酸角质素（keratansulfate)、硫酸皮肤素（dermatansulfate)、鹿角 菜胶（carrageenan)、肝素（heparin)、几丁质（chitin)、几丁聚糖（chitosan)、褐藻胶 (alginate)、琼脂糖（agarose)、琼脂（agar)、纤维素（cellulose)、甲基纤维素（methyl cellulose)、駿甲基纤维素（carboxylmethylcellulose)、肝醋（glycogen)及其衍 生物。此外，该基质要素可以是纤维蛋白（fibrin)、纤维蛋白原（fibrinogen)、凝血酶 (thrombin)、多聚谷氨酸（polyglutamicacid)、合成聚合物（如丙稀酸酯、聚乳酸、聚乙醇 酸或聚乳酸-乙醇酸）或交联剂（如京尼平（genipin)、戊二醛、甲醛、环氧化合物）。较佳 地，本发明细胞组织胶体中，基质要素具有较高的分子量，使胶体的黏度增加。
[0034] 赋形剂
[0035] 本发明的细胞组织胶体可包括一个或多个药学上可接受的赋形剂，以提供润滑和 保湿。本发明的赋形剂也可作为乳液，可结合并平顺上皮层，有助于浅层的伤口愈合愈合。
[0036]卵磷脂、凡士林及甘油为示例性的赋形剂，皆可被包含在本发明的细胞组织胶体 中。其它习知的赋形剂亦可添加于本发明的细胞组织胶体中。
[0037] 内嵌细胞的组织胶体的制备
[0038] 本发明所述组织胶体可通过将前述各成分以一理想的重量比例混合，并将该混合 物置于适当的环境中以形成胶体。为了制备内部嵌埋有细胞的胶体，可先将细胞与上述成 分混合，再进一步形成胶体，其中细胞可为哺乳类动物（例如：牛、猪、老鼠、马、狗、猫、绵 羊、猴子及人类）体内获得的细胞。该细胞包括，但不限于：胎盘干细胞（placenta-derived stemcells)、骨髓干细胞（bonemarrow-derivedstemcells)、基质细胞（stromal cells，如脂肪衍生基质细胞（adipose-derivedstromalcells))、间叶干细胞、组织先驱 细胞（tissueprogenitorcells)、胚细胞（blastcells)或纤维母细胞（fibroblasts)。
[0039] 藉此，该细胞组织胶体则可制备完成且其内部嵌埋有细胞，所述细胞组织胶体可 植入在理想的位置以实现组织修复及其他医疗上的用途。
[0040] 伤口愈合
[0041] 本发明的细胞组织胶体，无论是否有内嵌细胞，皆可用于治疗或促进伤口愈合 (例如：皮肤伤口）。细胞组织胶体可应用于伤口，例如部分地、基本地或完全地覆盖伤 口。特别是，细胞组织胶体可用于治疗糖尿病患者的伤口。所述伤口可为浅伤口（shallow wound)、局部伤口（partialwound)或全层伤口（full-thicknesswound)。
[0042] 所有说明书中所揭示的发明技术特点可以任意方式组合。说明书中所揭示的每一 技术特点可以相同、等同或相似目的的其他方式替换。因此，除非另有特别说明，文中所有 揭示的特点均只是等同或相似特点的一般实例。
[0043] 相信本技术领域的人员可根据以上描述，使本发明充分的利用，而无需进一步详 尽说明。以下所举实施例仅作为范例，并非用于限制本发明。本文所引用的公开数据，皆以 文献方式并入于本发明中。 【实施例】
[0044] 1.含有胶原蛋白及透明质酸的组织胶体中的干细胞存活度
[0045] 从人类足月胎盘（full-termhumanplacentas)获得的绒毛膜绒毛（chorionic Villi)，经由机械方式切碎后，以胶原蛋白酶处理，而得到含有胎盘间叶干细胞的材料。该 含有胎盘间叶干细胞的材料分别依序由孔径为300μm、100μm、37μm的筛网过筛，然后 以percoll密度梯度离心法（percolldensitygradientcentrifugation)收集干细 胞。将该干细胞悬浮于内含有2倍低量葡萄糖且添加有20%胎牛血清以及200U/ml紫菌 素（gentamycin)的DMEM培养基（购自GibcoBRL,LifeTechnologies)中，使其浓度为 105-107细胞/每毫升，并以不同量的透明质酸混合以形成悬浮液。将自猪皮中取得的胶 原蛋白溶解于0.01N盐酸溶液中形成具有pH4-7的胶原蛋白溶液。该胶原蛋白溶液与 该干细胞悬浮液以相等体积混合形成混合溶液，该混合溶液可含有6mg/ml的胶原蛋白以 及0. 05mg/ml、0. 2mg/ml或0. 5mg/ml的透明质酸，或者含有9mg/ml胶原蛋白以及0. 2mg/ ml透明质酸。实验过程中使用具有等量干细胞数目且分别含有6mg/ml以及9mg/ml胶原 蛋白的混合溶液作为对照组。上述混合溶液均置于37°C的培养箱培养30min，使其内部的 胶原蛋白开始进行固化，以形成内嵌干细胞的组织胶体。该组织胶体于37°C下且流通有 5%二氧化碳的环境中进行培养，所需培养天数最多14天。通过锥蓝染色法（trypanblue staining)于不同时间（如培养第1、7、14天）测量其细胞存活度，测试结果如下表一所示。
[0046] 表一、在含有胶原蛋白及透明质酸的组织胶体中，干细胞存活度的结果比较表
[0049] 由表一可知，对于维持干细胞于该组织胶体中生长时的存活度，胶原蛋白与透明 质酸在该组织胶体的重量比例是极为重要的。
[0050] 2.含有胶原蛋白、透明质酸及明胶的组织胶体中的干细胞存活度
[0051] 将实施例1所述的干细胞悬浮液及胶原蛋白溶液以等体积比例混合，并于混合液 中加入2mg/ml或10mg/ml的明胶以形成内嵌干细胞的组织胶体，其中胶原蛋白、透明质酸 及明胶的最终浓度如表二所示。
[0052] 该组织胶体于37°C下且流通有5%二氧化碳的环境中进行培养，所需培养天数最 多14天。接着采用锥蓝染色法（trypanbluestaining)于不同时间（如培养第1、7及14 天）测量其细胞存活度，测试结果如下表二所示。
[0053] 表二含胶原蛋白、透明质酸及明胶的组织胶体中干细胞存活度的结果比较表
[0054]
[0055] 3.含胶原蛋白及透明质酸的组织胶体对细胞生长的影响
[0056] 已知以1. 3 %的二甲基亚砜（DMSO)活化HL-60细胞7天，会使该细胞类似于活化 的人类嗜中性球，具有CDllb及CD32的表现。因此在本实施例中，使用活化的HL-60细胞来 研究细胞组织胶体对嗜中性球生长的影响。在96孔盘中，将每孔加入IX104活化的HL-60 细胞，并培养于含有各种细胞组织胶体的RPMI1640培养基中。培养不同时间的细胞生长状 况如图1A，其中实验组1为含有50mg/mL胶原蛋白及0. 5mg/mL透明质酸（即胶原蛋白与透 明质酸比为1〇〇: 1)，实验组2为含有50mg/mL胶原蛋白及lmg/mL透明质酸（即胶原蛋白与 透明质酸比为50:1)，实验组3为含有50mg/mL胶原蛋白及5mg/mL透明质酸（即胶原蛋白 与透明质酸比为10:1)，实验组4为含有50mg/mL胶原蛋白及10mg/mL透明质酸（即胶原蛋 白与透明质酸比为5:1)，实验组5为含有50mg/mL胶原蛋白及50mg/mL透明质酸（即胶原 蛋白与透明质酸比为1:1)，实验组6为含有10mg/mL胶原蛋白及lmg/mL透明质酸（即胶原 蛋白与透明质酸比为10:1)，实验组7为含有10mg/mL胶原蛋白及10mg/mL透明质酸（即胶 原蛋白与透明质酸比为1:1)，实验组8为含有10mg/mL胶原蛋白及50mg/mL透明质酸（即 胶原蛋白与透明质酸比为0. 2:1)，实验组9为含有10mg/mL胶原蛋白及100mg/mL透明质酸 (即胶原蛋白与透明质酸比为0. 1:1)。
[0057] 已知小鼠巨噬细胞株RAW264. 7会表现巨噬细胞F4/80,因此可用来研究细胞组 织胶体对巨噬细胞生长的影响。在96孔盘中，将每孔加入3X103RAW264. 7细胞，并培养 于含有各种细胞组织胶体的DMEM-10%FBS培养基，培养不同时间细胞生长状况如图1B，图 1B中实验组1-9细胞组织胶体的胶原蛋白与透明质酸的含量与图1A中各组细胞组织胶体 中胶原蛋白与透明质酸的含量相同。
[0058]NIH-3T3纤维母细胞可代表组织基质层的细胞，因此使用NIH-3T3纤维母细胞研 究细胞组织胶体对纤维母细胞生长的影响。在96孔盘中，将每孔加入2xl03NIH-3T3纤维 母细胞，并培养于含有各种细胞组织胶体的DMEM-10%FBS培养基，培养不同时间细胞生长 状况如图1C，图中实验组1-9细胞组织胶体的胶原蛋白与透明质酸的含量与图1A中各组细 胞组织胶体中胶原蛋白与透明质酸的含量相同。
[0059] 上述细胞在含有5% 0)2的37°C培养箱中培养3至5天后，将细胞离心、破碎以露 出细胞核，并以Hoechst33258进行染色。接着在365nm及460nm下，用SpectraMaxM2e Multi-ModeMicroplate侦测仪侦测荧光强度，该荧光强度与细胞数量成正比。
[0060] 试验结果显示，在长时间下，即第5天以后，细胞胶体中的透明质酸会稍微地抑制 嗜中性球的增生，然而对巨噬细胞皆没有显著影响。此外，含不同比例的胶原蛋白与透明质 酸的细胞组织胶体，皆可在第3天及第5天促进纤维母细胞的增生。此结果表明细胞组织 胶体对于儇口愈合的过程中具有正向影响。
[0061] 4.含胶原蛋白及透明质酸的组织胶体对发炎细胞生长的影响
[0062] 为了分析组织胶体中的透明质酸对于人类嗜中性球及巨噬细胞的生长影响，因此 分别使用活化的HL-60细胞及U937细胞进行