量"应当被理解为指足够量的STRO-Γ细胞和/或其 后代细胞和/或源自它们的可溶性因子，其足以预防或抑制或延迟呼吸病症的发作或其恶 化或其复发。
[0136] 如本文所用，术语"全身剂量"应当被理解为意指给予个体指定剂量的细胞和/或 可溶性因子，不考虑其体重或体表面积。
[0137] 如本文所用，术语"治疗（treat/treatment/treating) "应当理解为意指给予治疗 有效量的可溶性因子和/或细胞，减缓或抑制与呼吸病症的症状，以使得个体不再被临床 诊断为患有该病症或其恶化。
[0138] 如本文所用，术语"预防（prevent/preventing/prevention) "应当理解为意指给 予预防有效量的可溶性因子和/或细胞，阻止或妨碍或延迟呼吸病症或其恶化的发生或进 程。预防呼吸病症还包括给予预防有效量的可溶性因子和/或细胞，预防或减缓病症恶化 的频率。
[0139] 如本文所用，术语"可溶性因子"应当理解为意指由STRO-Γ细胞和/或其后代产 生的水溶性的任何分子，例如，蛋白、肽、糖蛋白、糖肽、脂蛋白、脂肽、糖类等。此类可溶性因 子可以为细胞内的，和/或由细胞分泌的。此类可溶性因子可以为复合混合物（例如，上清 液）和/或其部分，和/或可以为纯化的因子。在一实例中，可溶性因子位于上清液中，或 包含于上清液中。因此，本文中涉及给予一种或多种可溶性因子的任何实例加以必要的修 改后适用于给予上清液。
[0140] 如本文所用，术语"上清液"是指在适当的培养基例如液体培养基中，体外培养 STR0-1+细胞和/或其后代后产生的非细胞物质。通常，上清液通过以下方式产生：于适当 的条件和时间下在培养基中培养细胞，然后通过诸如离心的步骤去除细胞物质。在给予前， 上清液可以进行或不进行进一步的纯化步骤。在一实例中，上清液包含少于1〇 5,例如少于 1〇4,如少于1〇3,例如，无活细胞。
[0141] 如本文所用，术语"正常或健康个体"应当理解为意指未患有通过本领域已知的和 /或本文描述的任何方法所评估的呼吸病症的个体。在一实例中，"正常或健康个体"未患 有呼吸病症的任何症状。
[0142] 讨敏原
[0143] 在一实例中，本公开提供了用于减少或预防对过敏原的反应（如，过敏反应）的方 法。如本文所用的，术语"过敏原"应被理解为意指包括能够诱导特异性IgE形成（即，过 敏反应）的一种或多种抗原的物质。IgE产生之后，IgE与肥大细胞或嗜碱性粒细胞表面 的Fc受体结合。随后接触过敏原之后，结合到过敏原至少两种表位的至少两种IgE抗体引 起IgE分子的Fab'区的交联，导致肥大细胞或碱性粒细胞释放多种血管活性胺，如，例如组 胺，由此诱导过敏症状。术语过敏原包括所有类型的过敏原，例如多肽过敏原、磷脂过敏原、 脂肪酸或碳水化合物。常见过敏原的实例列于表1中。
[0144] 表1:由生物体分离的常见过敏原
[0145]
[0149] 在一实例中，过敏原来自动物，如哺乳动物，例如狗或猫或大鼠或小鼠。
[0150] 在一实例中，过敏原来自植物，如植物花粉。
[0151] 在一实例中，过敏原来自昆虫，如螨。
[0152] 在一实例中，过敏原为HDM。
[0153] STRO-l1细朐或后代细朐以及源自它们的h清液或者一种或多种可溶件闵子
[0154] STRO-Γ细胞为发现于骨髓、血液、乳牙（如脱落的乳牙）、牙髓细胞、脂肪组织、皮 肤、脾脏、胰腺、脑、肾脏、肝、心脏、视网膜、脑、毛囊、肠、肺、淋巴结、胸腺、骨、韧带、腱、骨骼 肌、真皮和骨膜中的细胞。
[0155] 在一实例中，STRO-Γ细胞能够分化为一种或多种或两种或更多种和/或三种胚 系，如中胚层和/或内胚层和/或外胚层。
[0156] 在一个实例中，STRO-Γ细胞是能够分化为许多细胞类型的专能性细胞 (multipotentialcells)，包括但不限于：脂肪组织、骨组织、软骨组织、弹性组织、肌肉组 织和纤维结缔组织。这些细胞进入的具体定型谱系和分化途径，取决于来自机械影响和/ 或内源性生物活性因子如生长因子、细胞因子和/或宿主组织确立的局部微环境条件的多 种影响。因此，STRO-Γ专能性细胞为非造血祖细胞，其分裂产生的子代细胞为干细胞或前 体细胞，它们会适时地不可逆分化而产生表型细胞。
[0157] 在一个实例中，STRO-Γ细胞从获自个体的样品富集而来，例如，待治疗的个体或 相关的个体或不相关的个体（相同物种或不同物种的个体）。本文所用术语"富含"、"富 集"或其变型用来描述，当相比未处理的细胞群（例如，处于它们天然环境中的细胞）时， 细胞群中一种特定细胞类型的比例或多种特定细胞类型的比例增加。在一个实例中，富集 STRO-Γ的细胞群包含至少约0. 1%，或0. 5%，或1%，或2%，或5%，或10%，或15%，或 20 %，或25 %，或30 %，或50 %，或75 %的STRO-Γ细胞。在这个方面，术语"富集STR0-1 + 细胞的细胞群"应当理解为给术语"包含X%的STR01+细胞的细胞群"提供了明确的支持， 其中X%为本文所述的百分比。
[0158] 在一些实例中，STRO-Γ细胞可以形成克隆性集落，例如CFU-F(成纤维细胞）或其 子集（例如，50%，或60%，或70%，或70%，或90%，或95% )可以具有该活性。
[0159] 在一个实例中，以可选形式从包含STRO-Γ细胞的细胞制剂富集细胞群。在这个方 面，术语"可选形式"应当理解为指细胞表达允许选择STRO-Γ细胞的标志物（例如，细胞表 面标志物）。所述标志物可以但并非必须为STR0-1。例如，如本文所述和/或示例的，表达 STR0-2 和 / 或STR0-3 (TNAP)和 / 或STR0-4 和 / 或VCAM-1 和 / 或CD146 和 / 或 3G5 的细 胞（例如，MPCs)还表达STR0-1 (且可以为STR0-1* )。因此，细胞为STRO-Γ的说明并不 意味着该细胞是通过STR0-1表达而选择的。在一个实例中，基于至少STR0-3表达来选择 所述细胞，例如，它们为STR0-3+ (TNAP+)。
[0160] 提及挑选细胞或其群体不要求从特定组织来源挑选。如本文所述，可以从大量不 同来源来挑选或分离或富集STRO-Γ细胞。即，在一些实例中，这些术语为从包含STRO-Γ 细胞（例如，MPCs)的任何组织或血管化组织或包含周细胞（例如，STRO-Γ周细胞）的组 织或任何一种或多种本文所述的组织进行挑选提供支持。
[0161] 在一个实例中，用于本公开的方法的细胞表达一种或多种标志物，其单独地或共 同地选自：TNAP+、VCAM-Γ、ΤΗΥ-Γ、STR0-2+、STR0-4+(HSP-90β)、CD45+、CD146+、3G5+或它们 的任何组合。
[0162] 所用"单独地（individually) "是指本公开分别包括所述标志物或标志物的组，并 且，虽然本文可能没有分别列出单个标志物或标志物的组，所附的权利要求可以分别地和 彼此分开地定义此类标志物或标志物的组。
[0163] 通过"共同地（collectively) "是指本公开包括任何数目或组合的所述标志物或 肽的组，并且，虽然本文可能没有明确列出此类数目或组合的标志物或标志物的组，所附的 权利要求可以分别地和与任何其他标志物或标志物组的组合分开地定义此类组合或亚组 合。
[0164] 例如，所述STRO-Γ细胞为STR0-1 * (同义词为STR〇-lbfl)。在一个实例中，所述 Str〇-ltol细胞相对于STR0-1 或STR0-1#1细胞优先被富集。
[0165] 在一个实例中，另外地，所述STR0-1*细胞为ΤΝΑΡ+、VCAM-Γ、ΤΗΥ-Γ、STR0-2+、 STR0-4+(HSP-90f3)和/或⑶146+的一种或多种（或全部）。例如，所述细胞针对一种或多 种前述标志物进行挑选，和/或被证明表达一种或多种前述标志物。在这方面，显示表达了 标志物的细胞不需要被特别测试，但先前富集的或分离的细胞可以被测试，并且随后被使 用，分离或富集的细胞可以被合理地假定为也表达相同标志物。
[0166] 在一个实例中，间充质前体细胞为W0 2004/85630中定义的血管周间充质前体细 胞。
[0167] 对于给定标志物被称为"阳性"的细胞，其可以表达低（1〇或暗淡）或高（亮，bri) 水平的该标志物，这取决于标志物在细胞表面上存在的程度，其中该术语与用于所述细胞 的分选过程中的荧光或其他标志物的强度有关。在将标志物用于被分选的特定细胞群的情 形下，1〇(或者，暗或暗淡）和bri的区别容易理解。对于给定标志物被称为"阴性"的细 胞，不一定完全不存在于该细胞。该术语是指细胞以相对非常低的水平表达标志物，并且其 在当可检测地标记时产生非常低的信号，或在背景水平例如利用同种型对照抗体检测的水 平上不可检测。
[0168] 当用于本文时，术语"亮"是指当被可检测地标记时，产生相对高的信号的细胞表 面上的标志物。不希望受理论的束缚，认为相比样品中的其他细胞，"亮"细胞表达更多的靶 标标志物蛋白（例如被STR0-1识别的抗原）。例如，当用FITC-偶联的STR0-1抗体标记时， 如通过荧光活化的细胞分选（FACS)分析所测定的，相比非亮细胞（STR〇-lBM/e)，STR〇-lbn 细胞产生更强的荧光信号。在一个实例中，"亮"细胞构成起始样品中所包含的最亮标记的 细胞（例如骨髓单个核细胞）的至少约〇. 1%。在其它实例中，"亮"细胞构成起始样品中所 包含的最亮标记的细胞，例如骨髓单个核细胞的至少约〇. 1%、至少约〇. 5%、至少约1%、 至少约1. 5%或至少约2%。在一个实例中，相对于"背景"即STRO-1细胞，STRO-1胃细胞 的STRO-1表面表达具有2个对数量级的较高表达。通过比较，相比"背景"，STR〇-leg^P/ 或STRO-1#1细胞的STRO-1表面表达具有小于2个对数量级的较高表达，通常约为1个对 数量级或小于背景。
[0169] 如本文所用，术语"TNAP"旨在包括组织非特异性碱性磷酸酶的所有同种型。例如， 该术语包括肝同种型（LAP)、骨同种型（BAP)和肾同种型（KAP)。在一个实例中，所述TNAP 为BAP。在一个实例中，如本文所用，TNAP是指能结合由杂交瘤细胞系产生的STR0-3抗体 的分子，所述杂交瘤细胞系根据布达佩斯条约的条款于2005年12月19日保藏在ATCC，保 藏登录号为PTA-7282。
[0170] 此外，在优选的实例中，所述STRO-Γ细胞能产生克隆性CFU-F。
[0171] 在一个实例中，显著比例的STRO-Γ专能性细胞能分化为至少两种不同的胚系。专 能性细胞可以发展成的的谱系的非限制性实例包括：骨前体细胞；肝细胞祖细胞，其能专 能分化为胆管上皮细胞和肝细胞；神经受限细胞，其能产生能发展为少突胶质细胞和星形 胶质细胞的神经胶质细胞前体；神经元前体，其发展为神经元；心肌和心肌细胞、葡萄糖响 应性胰岛素分泌性胰β细胞系的前体。其他谱系包括但不限于，成牙本质细胞、牙质生成 细胞（denti-producingcells)和软骨细胞，以及以下细胞的前体细胞：视网膜色素上皮 细胞、成纤维细胞、皮肤细胞如角质细胞、树状细胞、毛囊细胞、肾管上皮细胞、平滑肌和骨 骼肌肉细胞、睾丸祖细胞、血管内皮细胞、腱细胞、韧带细胞、软骨细胞、脂肪细胞、成纤维细 胞、骨髓基质、心肌细胞、平滑肌细胞、骨骼肌细胞、周细胞、血管细胞、上皮细胞、神经胶质 细胞、神经元细胞、星形胶质细胞和少突胶质细胞。
[0172] 在另一个实例中，所述STRO-Γ细胞培养后不能产生造血细胞。
[0173] 在一个实例中，所述细胞采集自待治疗的个体，并利用标准技术体外培养，以及被 用来获得上清液或可溶性因子或扩增的细胞，以作为自体型或同种异体型组合物用于给予 至所述个体。在可选的实例中，使用了一种或多种已建立的人细胞系的细胞。在本公开另 一个有用的实例中，使用了非人的动物（或者如果患者不为人，则来自另一物种）的细胞。
[0174] 本公开还包括获自或来源于经体外培养产生的STRO-Γ细胞和/或其后代细胞 (后者也被称为扩增的细胞）的上清液或可溶性因子的用途。根据培养条件（包括培养基 中刺激因子的数目和/或类型）、传代次数等，本公开的扩增的细胞可以具有多种表型。在 某些实例中，所述后代细胞由亲本细胞群经过约2、约3、约4、约5、约6、约7、约8、约9或约 10次传代后获得。然而，所述后代细胞可以由亲本细胞群经过任何次传代后获得。
[0175] 所述后代细胞可以通过在任何合适的培养基中培养获得。在提及细胞培养物时所 用的术语"培养基"包括细胞周围环境的组分。培养基可以为固体、液体、气体或相和物质的 混合物。培养基包括液体生长培养基以及不维持细胞生长的液体培养基。培养基还包括凝 胶状培养基如琼脂、琼脂糖、明胶和胶原基质。示例性气体培养基包括生长在培养皿（petri dish)或其他固体或半固体支持物上的细胞所暴露于其中的气相。术语"培养基"还指旨在 用于细胞培养的物质，即使其还未与细胞接触。换句话说，制备的用于细菌培养的富营养液 体为培养基。与水或其他液体混合时变得适于细胞培养的粉末状混合物可以称为"粉末状 培养基"。
[0176] 在一个实例中，通过利用标记有STR0-3抗体的磁珠从骨髓中分离TNAP+STR0-1+细 胞可以得到用于本公开所述方法的后代细胞，然后培养扩增所述分离的细胞（合适培养条 件的实例，参见Gronthosetal.Blood85:929-940, 1995)〇
[0177]在一个实例中，此类扩增的细胞（后代）（例如，至少5次传代后）可以为TNAP、 〇：9+、!11^1+类、!11^11类、〇)14、〇)19、〇)3、〇)113(3、〇)31、〇)86、〇)34和/或〇)80。 然而，可能在与本文描述的那些不同的培养条件下，不同标志物的表达可能存在差异。另 外，虽然这些表型的细胞可能在扩增的细胞群中占优势，但这不意味着小比例的所述细胞 不具有该表型（例如，小百分比的扩增细胞可以为CC9 )。在一个实例中，扩增的细胞仍然 具有分化为不同细胞类型的能力。
[0178] 在一个实例中，用来得到上清液或可溶性因子或细胞本身的扩增的细胞群，包含 其中至少25% (例如至少50% )的细胞为CC9+的细胞。
[0179] 在另一个实例中，用来得到上清液或可溶性因子或细胞本身的扩增的细胞群，包 含其中至少40% (例如至少45% )的细胞为STRO-Γ的细胞。
[0180] 在其他的实例中，扩增的细胞可以表达一种或多种共同地或单独地选自以下的标 志物：LFA-3、THY-1、VCAM-1、ICAM-1、PECAM-1、P-选择素、L-选择素、3G5、CD49a/CD49b/ CD29、CD49c/CD29、CD49d/CD29、CD90、CD29、CD18、CD61、整合素β6-19、血栓调节蛋白、 CD10、CD13、SCF、PDGF-R、EGF-R、IGF1-R、NGF-R、FGF-R、瘦素-R(STR0-2 =瘦素-R)、RANKL、 STR0-4(HSP-90β)、STR0-1*^PCD146 或这些标记的任何组合。
[0181 ] 在一个实例中，所述后代细胞为专能性扩增的STRO-Γ专能性细胞后代（MEMPs)， 如TO2006/032092中所定义和/或描述。制备可衍生后代细胞的STRO-Γ专能性细胞的 富集细胞群的方法描述于W0 01/04268和W0 2004/085630。在体外情形下，STRO-Γ专能 细胞很少作为完全纯的制剂提供，并且通常与其他细胞即组织特异性定型细胞（TSCCs) - 起提供。W0 01/04268涉及以约0.1%至90%的纯度水平从骨髓收获此类细胞。包含可衍 生后代的MPCs的细胞群可以直接从组织源收获，或可选地，其可以为已体外扩增的群体。
[0182] 例如，所述后代可以获自收获的、未扩增的基本上纯化的STRO-Γ专能性细胞群 体，其包含所存在的群体总细胞的至少约〇. 1%、1%、5%、10%、20%、30%、40%、50%、 60 %、70 %、80 %或95 %。例如，可以通过选择对于至少一种单独地或共同地选自以下的标 志物为阳性的细胞来达到该水平：TNAP、STRO-4 (HSP-90β)、STR0-1*、3G5+、VCAM-1、THY-1、 CD146 和STR0-2。
[0183] MEMPS与新鲜收获的STRO-Γ专能细胞的区别可以在于，它们对标志物STR0-1 为阳性，而对标志物碱性磷酸酶（ALP)为阴性。相反，新鲜分离的STRO-Γ专能性细胞对 STR〇-ltol和ALP均为阳性。在本公开的一个实例中，施用的细胞中至少15%、20%、30%、 40 %、50 %、60 %、70 %、80 %、90 % 或 95 % 具有STR〇-lbn、ALP表型。在其他的实例中，MEMPS 对标志物Ki67、⑶44和/或⑶49c/⑶29、VLA-3、α3β1中的一种或多种为阳性。在又一 个实例中，MEMPs不展示TERT活性，和/或对标志物⑶18为阴性。
[0184] STRO-Γ细胞起始群体可以源自W0 01/04268或W0 2004/085630中所列的任何 一种或多种组织类型，即骨髓、牙髓细胞、脂肪组织和皮肤，或者可能更广义地来自：脂肪 组织、牙、牙髓、皮肤、肝、肾、心脏、视网膜、脑、毛囊、肠、肺、脾脏、淋巴结、胸腺、胰腺、骨、韧 带、骨髓、腱和骨骼肌。
[0185] 应当理解，在实施本公开所述方法时，对携带任何给定细胞表面标志物的细胞进 行分离可受到多种不同方法的影响，然而，一些示例性方法依赖于，将结合剂（例如，抗体 或其抗原结合片段）结合至所关注的标志物，然后分离展现出结合的那些，其为高水平结 合，或低水平结合或无结合。最方便的结合剂为抗体或基于抗体的分子，例如单克隆抗体或 基于单克隆抗体的（例如，包含其抗原结合片段的蛋白）分子，这是由于这些后述试剂的特 异性。抗体可以用于这两个步骤，然而也可以使用其他试剂，因此还可以利用这些标志物的 配体来富集携带它们或缺少它们的细胞。
[0186] 可以将抗体或配体结合到固相支持物上，以允许粗分离。例如，分离技术将待收集 部分的活力保留最大化。可以利用各种不同效率的技术来获得相对的粗分离。采用的具体 技术取决于分离效率、相关的细胞毒性、进行的容易度和速度，以及所需的尖端设备和/或 专业技术。分离方案可以包括但不限于：利用包被有抗体的磁珠的磁力分离、亲和层析和用 结合至固相基质的抗体"淘选"。提供精确分离的技术包括但不限于FACS。进行FACS的方 法对本领域技术人员显而易见。
[0187] 针对每种本文所述标志物的抗体可商购（例如，针对STR0-1的单克隆抗体可从R&DSystems,USA商购），可从ATCC或其他保藏机构获得，和/或可以利用本领域公认的技 术制备。
[0188] 在一个实例中，用于分离STRO-Γ细胞的方法包括的第一步骤为固相分选步骤，其 利用例如磁力活化的细胞分选（MACS)来识别STR0-1的高水平表达。随后可以进行的第二 分选步骤（如需要）导致如专利说明书W0 01/14268所描述的更高水平的前体细胞表达。 该第二分选步骤可涉及使用两种或更多种标志物。
[0189] 获得STRO-Γ细胞的方法还可以包括利用已知的技术在第一富集步骤前收获细胞 来源。因此，可手术去除组