特异性免疫应答，并且从而提高它们对疫苗接种的特异性免疫 应答。本发明是基于证明口服给予0ΡΝ能够用来通过疫苗接种增强在哺乳动物受试者中诱 导的特异性免疫应答的第一研究。
[0033] 本发明提供了用作用于在哺乳动物中增强对感染性疾病的免疫抵抗力的药剂的 哺乳动物乳0ΡΝ和/或其活性截短物，例如通过增强由对抗该疾病的疫苗接种诱导的免疫 抵抗力，其中该0ΡΝ和/或其活性截短物是用于口服给予。根据一个实施例，该活性截短的 0ΡΝ包含通过蛋白水解裂解可来源于哺乳动物乳0ΡΝ的至少一种活性0ΡΝ肽。该0ΡΝ或其 活性截短物可以用于在对该哺乳动物进行疫苗接种之前、同时、或之后、或其组合进行口服 给予。
[0034] 该哺乳动物乳0ΡΝ和/或其活性截短物能够在该哺乳动物中加强体液免疫。
[0035] 该哺乳动物乳0ΡΝ和/或其活性截短物可以来源于以下各项中的任何一种：牛、山 羊、绵羊、骆驼、水牛、单峰骆驼、美洲驼以及其任何组合。
[0036] 根据一个实施例，该哺乳动物乳0ΡΝ和/或其活性截短物是用于在哺乳动物中 增强对感染性疾病的免疫抵抗力，其中该哺乳动物是人。根据一个实施例，该人属于一个 年龄组，该年龄组选自以下各项之中：〇 - 5岁、6 - 11岁、12 - 18岁、19 - 34岁、35 - 44岁、 45 - 54岁、55 - 64岁、65 - 74岁、75 - 84岁、以及大于84岁。
[0037] 根据一个实施例，该感染性疾病是选自以下各项之中：流感；白喉、破伤风、百日 咳、脊髓灰质炎、麻疹、腮腺炎和风疹、结核病、乙型肝炎、丙型脑膜炎；人乳头瘤病毒；轮状 病毒；甲型流感、乙型流感、肺炎球菌感染和带状疱疹。
[0038] 本发明进一步提供了一种疫苗系统，该疫苗系统包含用于在哺乳动物中预防性或 治疗性治疗感染性疾病的一种疫苗和一种哺乳动物乳0ΡΝ和/或其活性截短物，其中该哺 乳动物乳0ΡΝ和/或活性截短物是用于例如在对该哺乳动物进行疫苗接种之前、同时、或之 后、或其组合进行口服给予。口服给予该哺乳动物乳0ΡΝ和/或活性截短物可在哺乳动物 中增强由疫苗接种诱导的对感染性疾病的免疫抵抗力。该哺乳动物乳骨桥蛋白和/或活性 截短物能够在接种疫苗的哺乳动物中加强体液免疫。
[0039] 根据一个实施例，该疫苗系统包含来源于以下各项的0ΡΝ和/或其活性截短物： 牛、山羊、绵羊、骆驼、水牛、单峰骆驼、美洲驼、或其任何组合。
[0040] 根据该疫苗系统的一个实施例，该哺乳动物是人。
[0041] 根据该疫苗系统的一个实施例，该感染性疾病是选自以下各项之中：流感、白喉、 破伤风、百日咳、脊髓灰质炎、麻疹、腮腺炎和风疹、结核病、乙型肝炎、丙型脑膜炎、轮状病 毒、人乳头瘤病毒、甲型流感、乙型流感、肺炎球菌感染以及带状疱疹。
[0042] 根据该疫苗系统的一个实施例，该疫苗是选自以下各项之中：白喉疫苗、破伤风疫 苗、百日咳疫苗、脊髓灰质炎疫苗、或组合的疫苗（例如TaP/IPV疫苗）；组合的麻疹、腮腺 炎和风疹疫苗（例如MMR疫苗）；结核病疫苗（例如BCG疫苗）；乙型肝炎疫苗；丙型脑膜 炎疫苗；轮状病毒（轮状病毒疫苗）；人乳头瘤病毒（HPV)疫苗；甲型流感和乙型流感疫苗 (例如流感疫苗）；肺炎球菌疫苗；以及带状疱疹疫苗。
[0043] 根据该疫苗系统的一个实施例，该人属于一个年龄组，该年龄组选自以下各项之 中：0-5 岁、6- 11 岁、12- 18 岁、19-34 岁、35 - 44 岁、45 - 54 岁、55 - 64 岁、65 - 74 岁、 75 - 84岁、以及大于84岁。
[0044] 本发明进一步提供了一种在哺乳动物中增强对感染性疾病的免疫抵抗力的方法， 该方法包括向该哺乳动物给予一种疫苗和哺乳动物乳0ΡΝ和/或其一种或多种活性截短 物，其中该0ΡΝ和/或其活性截短物被口服给予。该哺乳动物乳0ΡΝ和/或活性截短物能 够在接种疫苗的哺乳动物中加强体液免疫。
[0045] 根据在哺乳动物中增强对感染性疾病的免疫抵抗力的该方法的一个实施例，该哺 乳动物是人。
[0046] 根据该方法的一个实施例，该0ΡΝ或其活性截短物在对该哺乳动物进行疫苗接种 之前、同时、或之后、或其组合进行给予。
[0047] 根据该方法的一个实施例中，该0ΡΝ或其活性截短物以在约0. 05mg/kg所治疗的 受试者体重至约5g/kg所治疗的受试者体重的范围内的每日剂量来给予。
[0048] 根据在人中增强对感染性疾病的免疫抵抗力的该方法的一个实施例，该人属于一 个年龄组，该年龄组选自以下各项之中：〇 - 5岁、6 - 11岁、12 - 18岁、19 - 34岁、35 -44 岁、45 - 54岁、55 - 64岁、65 - 74岁、75 - 84岁、以及大于84岁。
[0049] 根据该方法的一个实施例，该0ΡΝ或其活性截短物具有哺乳动物来源，选自牛、山 羊、绵羊、骆驼、水牛、单峰骆驼、美洲驼、以及其任何组合。
[0050] 根据该方法的一个实施例，该感染性疾病是选自以下各项之中：流感、白喉、破伤 风、百日咳、脊髓灰质炎、麻疹、腮腺炎和风疹、结核病、乙型肝炎、丙型脑膜炎、轮状病毒、人 乳头瘤病毒；甲型流感、乙型流感、肺炎球菌感染以及带状疱疹。
[0051] 根据该方法的一个实施例，该疫苗是选自以下各项之中：白喉疫苗、破伤风疫苗、 百日咳疫苗、脊髓灰质炎疫苗、或组合的疫苗（例如TaP/IPV疫苗）；组合的麻疹、腮腺炎和 风疹疫苗（例如MMR疫苗）；结核病疫苗（例如BCG疫苗）；乙型肝炎疫苗；丙型脑膜炎疫 苗；轮状病毒（轮状病毒疫苗）；人乳头瘤病毒（HPV)疫苗；甲型流感和乙型流感疫苗（例 如流感疫苗）；肺炎球菌疫苗；以及带状疱疹疫苗。
[0052] 发明详细说明
[0053] 本发明解决了对在哺乳动物受试者，具体地配方喂养的婴幼儿；具有下降的免疫 能力的成年人（例如免疫受损受试者）；以及老年人中增强免疫应答的需要。发明人已经 发现，当向受试者口服给予时哺乳动物乳0ΡΝ和/或其活性截短物可在该哺乳动物中增强 免疫应答，从而提高对该哺乳动物进行疫苗接种的功效。
[0054] I哺乳动物乳骨桥蛋白（0ΡΝ)和/或其活性截短物
[0055] I.i哺乳动物乳0ΡΝ的结构
[0056] 根据一个第一实施例，本发明提供了用于增强对感染性疾病的免疫应答，并且具 体地在哺乳动物中增强对感染性疾病的疫苗诱导的免疫抵抗力的哺乳动物乳0ΡΝ和/或其 活性截短物。
[0057] 哺乳动物乳0ΡΝ是通过从乳腺中分泌所产生的可溶性乳蛋白质。虽然哺乳动物乳 0ΡΝ作为具有大约60kDa分子量（如通过SDS-PAGE所确定）的多肽被分泌，但通常发现它 与0ΡΝ的截短形式一起共存于乳中。与在其他组织中表达的可变（转录）剪接0ΡΝ同工型 相反，哺乳动物乳0ΡΝ仅以一种剪接同工型存在；而乳0ΡΝ的截短形式是这种分泌性多肽同 工型的蛋白水解裂解的结果。乳0ΡΝ(全长多肽和其截短形式两者）是高度磷酸化和糖基 化的多肽。已知0ΡΝ的磷酸化和糖基化的翻译后模式是组织特异性的并且可调节它的生理 特性。乳0ΡΝ多肽同工型的磷酸化和糖基化的高水平和模式是对于它的功能特性重要的特 定（比松内特等人2012)。
[0058] 根据本发明的该乳0ΡΝ具有哺乳动物来源，并且可以例如来源于牛、山羊、绵羊、 骆驼、水牛、单峰骆驼或美洲驼乳。乳0ΡΝ多肽包含多个其特征在于α-整联蛋白结合特性 的高度保守序列基序，具体地RGD基序。在哺乳动物乳0ΡΝ多肽之中保守的这些基序的位 置是关于牛0ΡΝ来鉴定的，牛0ΡΝ的主要翻译产物氨基酸序列在表1中列出。
[0059]
[0060]
[0061] 当该哺乳动物乳0ΡΝ来源于牛乳时，该0ΡΝ典型地包含除了成熟的全长0ΡΝ多肽 以外的至少一种活性截短的0ΡΝ多肽。典型地，该一种或多种活性截短的0ΡΝ多肽具有大约 40kDa的分子量（如通过SDS-PAGE所确定）。典型地，该一种或多种活性截短的0ΡΝ多肽 来源于通过在作为RGD基序的C末端的位置处体内肽键裂解所得到的全长0ΡΝ多肽。典型 地，该至少一种或多种活性截短的牛乳0ΡΝ来源于全长成熟的0ΡΝ多肽，其中该成熟的0ΡΝ 具有与SEQIDNO: 1的残基17 - 278具有确定的序列一致性的氨基酸序列。牛乳0ΡΝ是具 有信号肽（相应于SEQIDNO: 1的氨基酸残基1-16)的分泌性多肽，该信号肽被共翻译去 除以得到成熟的全长多肽。当该牛乳0ΡΝ包含全长0ΡΝ多肽时，它典型地具有SEQIDN0:1 的残基17 - 278的氨基酸序列。一种活性截短的牛乳0ΡΝ被预测通过处于或接近凝血酶裂 解位点（表1)处的肽裂解而来源于牛0ΡΝ多肽（SEQIDNO: 1)，从而得到保留RGD基序的 具有大约40kDa分子量（如通过SDS-PAGE所确定）的C末端截短的0ΡΝ多肽。
[0062] 根据一个实施例，该哺乳动物乳0ΡΝ包含与SEQIDN0:1具有至少66%、68%、 70%、72%、74%、76%、78%、80%、82%、84%、88%、90%、92%、94%、96%、98%、100%氨 基酸序列一致性的成熟全长0ΡΝ多肽；和/或与一种多肽具有至少66%、68%、70%、72%、 74%、76%、78%、80%、82%、84%、88%、90%、92%、94%、96%、98%、100%氨基酸序列一 致性的一种或多种活性截短的0ΡΝ多肽，该多肽具有选自以下各项中的任何一种之中的序 列：SEQIDNO: 1的氨基酸残基17-161 ;氨基酸残基17-162 ;氨基酸残基17-163 ;氨基酸残 基17-164和氨基酸残基17-165。
[0063] 在本发明的上下文中，术语"序列一致性"涉及两个氨基酸序列之间或两个核酸 序列之间（优选地具有相等长度）的一致性程度的定量度量。如果有待比较的两个序 列不具有相等长度，必须将它们比对以尽可能最好地配合。该序列一致性可以被计算为 (Nref-Ndif)*100)/(Nref)，其中Ndif是当比对时在两个序列中不一致的残基的总数，并 且其中Nref是参照序列的残基数。因此，DNA序列AGTCAGTC将与序列AATCAATC具有75% 的序列一致性（Ndif= 2并且Nref= 8)。空位被算作特定的一个（多个）残基的不一致 性，S卩DNA序列AGTGTC将与DNA序列AGTCAGTC具有75%的序列一致性（Ndif=2并且 Nref= 8)。可以例如使用适当的BLAST程序，诸如由美国国家生物技术信息中心（NCBI) 提供的BLASTp算法来计算序列一致性。
[0064]该哺乳动物乳0ΡΝ可以包含活性截短的0ΡΝ多肽（tOPN)或全长0ΡΝ多肽（f10PN)、 或可以不同比率存在的这两种形式。例如，tOPN/flOPN的比率可以在从0:100至100:0 之间的范围内；更优选地，该比率是以下各项中的任何一种：5:95 ;10:90 ;15:85 ;20:80 ; 25:75 ；30:70 ；35:65 ；40:60 ；45:55 ；50:50 ；55:45 ；60:40 ；65:35 ；70:30 ；75:35 ；80:20 ； 85:15 ;90:10 ;以及95:5。典型地，牛乳中的该比率是75%tOP比25%flOPN，其中该tOPN 具有大约40kDa的分子量（如通过SDS-PAGE所确定）。
[0065] 根据一个另外的实施例，该哺乳动物乳0ΡΝ是一种截短的0ΡΝ，其中该截短的0ΡΝ 包含通过蛋白水解裂解可来源于哺乳动物乳0ΡΝ(例如具有SEQIDNo. 1的牛乳0ΡΝ)的至 少一种活性0ΡΝ肽。在穿过哺乳动物受试者的消化道过程中，哺乳动物0ΡΝ被暴露于蛋白 水解酶中，具体地内切蛋白酶胃蛋白酶、胰朊胸以及糜蛋白酶。根据本发明的活性0ΡΝ肽是 在暴露于典型地存在于哺乳动物消化道中的蛋白酶之后保留活性的肽。活性0ΡΝ肽可以典 型地包括包含整联蛋白结合基序的部分或全部，典型地具有从5至16个氨基酸残基的长度