-12(IL-12)是又称为自然杀伤细胞刺激因子（NKSF)或细胞毒 性淋巴细胞成熟因子的一种促炎性Thl细胞因子。在培养基中，在存在或不存在10μg/mL 0ΡΝ的情况下进行离体细胞培养。添加0ΡΝ对所测定的细胞因子的分泌不具有显著影响，因 此合并来自0ΡΝ处理的细胞和未处理的细胞的数据。对于PBMC和脾的所有处理的具有细 胞因子浓度（pg/mL)的数据对应地概述于表4和表5中。然后基于统计学差异合并统计学 显著的数据，并且示于图10-17中。
[0152] 外周血单核细朐:在未刺激的PBMC中，IL-6和IL-10的浓度在检测水平以下（表 4)。在未刺激的细胞的上清液中检测到IL-12们并且膳食和疫苗接种这两者的作用都是统 计学显著的（P〈〇. 05)(图10)。在0PNV组的PBMC中，IL-12相对于所有其他处理组是最高 的。在PBMC中PHA刺激细胞因子不受疫苗接种影响。然而，膳食对IL-12分泌的影响是统 计学显著的，其中在0PNV中观察到最高分泌（图11A)。IL-10分泌趋向于在膳食组之中不 同，其中获自0ΡΝ组的细胞趋向于高于来自来自SR和FF小猪的细胞（图11B)。
[0153] 在来源于0ΡΝ喂养的小猪的LPS刺激的PBMC中，IL-6和IL-12的浓度相对于SR 组和FF组显著更高（p〈0. 05)，无论是否疫苗接种（对应地图12A和图12B)。在LPS刺激 IL-10分泌中观察到类似的模式，其中暴露于OPN引起IL-10的浓度更高。另外，疫苗接种 在0PN组和SR组中引起更高的IL-10水平（图12C)。
[0154] 流感病毒疫苗对IL-12的作用是疫苗接种依赖性的，其中在膳食与疫苗接种之间 具有统计学显著的相互作用（图13A)。疫苗接种在SRV和FFV中导致IL-12分泌减少，而 0ΡΝ组保持不变。与SR和FF相比，在流感病毒疫苗刺激的细胞中的IL-10分泌高于在0ΡΝ 喂养的组中，而接种疫苗的小猪具有更低的IL-10浓度（图13B)。
[0155] 脾免痔细朐:用PHA、LPS和流感病毒疫苗刺激从脾中分离的细胞，并且在72小时 孵育之后所收集的上清液中测量细胞因子产生（表5)。脾细胞不产生对用于本研究的刺激 物有响应的任何IL-6。另一方面，在未刺激的细胞的上清液中发现IL-12(图14A)。来自 SR组和FF组的细胞分泌更高量的IL-12,而膳食0ΡΝ和疫苗接种趋向于（p= 0. 07)降低 IL-12浓度。未刺激的细胞的上清液中的IL-10浓度在SRV组中最高（图14B)。对PHA刺 激有响应的由脾细胞产生的IL-12和IL-10分泌是类似的。当与在未接种疫苗的组中发现 的水平相比时，疫苗接种降低IL_12(图15A)和IL-10 (图15B)的浓度。此外，0ΡΝ组具有 比SR组和FF组显著更低的这两种细胞因子的水平。类似地，对LPS有响应的IL-12分泌 在来源于未接种疫苗的小猪的细胞上清液中显著高于接种疫苗的小猪（p〈〇. 05)(图16A)。 获自0ΡΝ组的细胞相对于SR组和FF组分泌最低量的IL-12。在LPS刺激的细胞中的IL-10 分泌不受疫苗接种影响，但在SR组中高于FF组和0ΡΝ组（图16B)。当流感病毒疫苗刺激 时，IL-12和IL-10分泌在接种疫苗的组中最低（p〈0. 05)，并且从0ΡΝ动物中分离的细胞比 SR和FF分泌更少的IL-12 (图17)。
[0156] 总之，当小猪接受用0ΡΝ补充的配方膳食时，它们的胃细胞暴露于恒定的0ΡΝ浓度 中。这与大母猪养育的小猪相反，在这些大母猪养育的小猪中，它们接受的0ΡΝ水平将随 着用大母猪乳替代大母猪初乳的供应而下降，并且将低于在0ΡΝ补充的配方膳食中提供的 140mg/L。当在不存在和存在免疫刺激剂这两种情况下离体孵育时，当与来源于配方喂养 的小猪或大母猪养育的小猪的细胞相比时，接受0ΡΝ补充的配方的小猪特征在于分泌更多 IL-12和IL-10的免疫细胞（PBMC)。这提供了以下证据：膳食0ΡΝ具有引发PBMC细胞分泌 IL-12和IL-10的作用。当用PHA(T细胞活化）和LPS(B细胞活化）刺激时，来自0ΡΝ-配 方喂养的小猪的PBMC分泌IL-12 (促炎性）和IL-10 (抗炎性）的能力表明免疫机制推向 免疫平衡。
[0157] 实例 2
[0158] 使用向婴儿给予的Lacprodaiv? 0PN-10进行的临床试验
[0159] 2.1试验设计
[0160] 在中国上海进行双盲随机临床试验以便评估将牛0ΡΝ添加到配方中的作用。母亲 选择母乳喂养或者配方喂养她们的从1至6月龄的婴儿。分组如下（η= 60/组）：
[0161] 1)母乳喂养的婴儿
[0162] 2)用没有0ΡΝ添加的常规配方（RF) (F0)喂养的婴儿
[0163] 3)用添加大约 65mg0PN/L的牛 0ΡΝ的RF(F65)
[0164] 4)用添加大约 130mg0PN/L的牛 0ΡΝ的RF(F130)
[0165] *在（未补充的）常规配方中发现的0ΡΝ的基础水平是大约15mg0PN/L。
[0166] 按月登记人体测量学，并且在1月龄、4月龄和6月龄时通过静脉穿刺取得静脉血 液样品。分析血液学、免疫参数、血浆氨基酸类和血液尿素氮（BUN)。
[0167] 2. 2试验结果
[0168] 与母乳喂养的婴儿相比，在接受常规配方（F0)的婴儿中，对感染（诸如病毒、细 菌、真菌或变形虫感染）有响应的婴儿中的发热发病率显著增加（图18)。以65mg0ΡΝ/ L或130mg0PN/L的量将0ΡΝ添加到常规配方中可使在用常规配方喂养时所见到的高发热 发病率降到极为接近在母乳喂养的婴儿中见到的低发病率水平。当与母乳喂养的婴儿相比 时，接受常规配方（F0)的婴儿组是仅有的显示发热发病率统计学显著增加的组。
[0169] 参考文献：
[0170] 阿尔伯斯等人2013通过普通群体中的营养学监测免疫调制：对人健康的 鉴定和持续作用（Monitoringimmunemodulationbynutritioninthegeneral population:identifyingandsubstantiatingeffectsonhumanhealth).英国营养学 杂志（BritishJNutrition) 110 (2): 1-22。
[0171] 比松内特等人2012 ;牛乳骨桥蛋白同工型的蛋白质组学分析和免疫检测 (Proteomicanalysisandimmunodetectionofthebovinemilkosteopontin isoforms).乳品科学杂志（JournalofDairyScience)，95 (2): 567-579，
[0172] 普洛特金SA，008 ;疫苗诱导的免疫的相互关系（CorrelatesofVaccine-Induced Immunity).疫苗杂志（Vaccines)47:401-409
[0173] 索伦森等人1995牛骨桥蛋白的翻译后修饰：鉴定28个磷酸化位点和3个0-糖 基化位点（Posttranslationalmodificationsofbovineosteopontin:Identification oftwenty-eightphosphorylationandthree0-glycosylationsites);蛋白质科学杂 志（ProteinScience)4:2040-2049
【主权项】
1. 哺乳动物乳骨桥蛋白和/或其一种或多种活性截短物，用作用于在哺乳动物中增强 对感染性疾病的免疫抵抗力的药剂，其中该骨桥蛋白和/或其活性截短物是用于口服给予 的。2. 用于根据权利要求1所述使用的哺乳动物乳骨桥蛋白和/或其活性截短物，其中该 哺乳动物乳是选自以下各项之中：牛、山羊、绵羊、骆驼、水牛、单峰骆驼、美洲驼以及其任何 组合。3. 用于根据权利要求1或2所述使用的哺乳动物乳骨桥蛋白和/或其活性截短物，其 中该骨桥蛋白和/或其活性截短物在该哺乳动物中加强体液免疫。4. 用于根据权利要求1至3中任一项所述使用的哺乳动物乳骨桥蛋白和/或其活性截 短物，其中该哺乳动物是人。5. 用于根据权利要求1至4中任一项所述使用的哺乳动物乳骨桥蛋白和/或其活性 截短物，其中该人属于一个年龄组，该年龄组选自以下各项之中：〇 - 5岁、6 - 11岁、12 - 18 岁、19 - 34 岁、35 - 44 岁、45 - 54 岁、55 - 64 岁、65 - 74 岁、75 - 84 岁、以及大于 84 岁。6. 用于根据权利要求1至5中任一项所述使用的哺乳动物乳和/或其活性截短物，其 中在哺乳动物中对感染性疾病的免疫抵抗力是通过疫苗接种来诱导的。7. 用于根据权利要求1至5中任一项所述使用的哺乳动物乳和/或其活性截短物，其 中该感染性疾病是选自以下各项之中：流感、白喉、破伤风、百日咳、脊髓灰质炎、麻疹、腮腺 炎和风疹、结核病、乙型肝炎、丙型脑膜炎、轮状病毒、人乳头瘤病毒、甲型流感、乙型流感、 肺炎球菌感染以及带状疱疹。8. -种营养组合物，包含根据权利要求1至7中任一项所述的哺乳动物乳和/或其一 种或多种活性截短物。9. 一种用于在哺乳动物中预防性或治疗性治疗感染性疾病的疫苗系统，该疫苗系统包 含一种疫苗和一种哺乳动物乳骨桥蛋白和/或其一种或多种活性截短物，其中该骨桥蛋白 和/或其活性截短物是用于口服给予的；其中给予该骨桥蛋白和/或其活性截短物增强由 该疫苗诱导的免疫抵抗力。10. 用于根据权利要求9所述使用的疫苗系统，其中该哺乳动物乳骨桥蛋白和/或其活 性截短物在该哺乳动物中加强体液免疫。11. 用于根据权利要求9或10所述使用的疫苗系统，其中该骨桥蛋白和/或其活性截 短物是选自以下各项之中：牛、山羊、绵羊、骆驼、水牛、单峰骆驼、美洲驼、以及其任何组合。12. 用于根据权利要求9至11中任一项所述使用的疫苗系统，其中该骨桥蛋白和/或 其活性截短物是用于在对该哺乳动物进行疫苗接种之前、同时、或之后、或其组合进行口服 给予的。13. 用于根据权利要求9至12中任一项所述使用的疫苗系统，其中该哺乳动物是人。14. 用于根据权利要求9至13中任一项所述使用的疫苗系统，其中该感染性疾病是选 自以下各项之中：流感；白喉、破伤风、百日咳、脊髓灰质炎、麻疹、腮腺炎和风疹、结核病、 乙型肝炎、丙型脑膜炎；轮状病毒、人乳头瘤病毒；甲型流感、乙型流感、肺炎球菌感染以及 带状疱疹。15. 用于根据权利要求9至14中任一项所述使用的疫苗系统，其中该人属于一个年 龄组，该年龄组选自以下各项之中：〇 - 5岁、6 - 11岁、12 - 18岁、19 - 34岁、35 - 44岁、 45 - 54岁、55 - 64岁、65 - 74岁、75 - 84岁、以及大于84岁。
【专利摘要】所披露的发明提供了哺乳动物乳骨桥蛋白和/或其活性截短物或活性肽，用于在哺乳动物例如人受试者中提高对感染性疾病的免疫应答，以及在哺乳动物诸如人中增强用于预防性或治疗性治疗感染性疾病的疫苗接种的功效。本发明进一步提供了一种用于在哺乳动物中预防性或治疗性治疗感染性疾病的疫苗系统，该疫苗系统包含用于向哺乳动物口服给予的一种疫苗和一种哺乳动物乳骨桥蛋白和/或其活性截短物或活性肽，以及通过给予一种疫苗和一种哺乳动物乳骨桥蛋白和/或其活性截短物来在哺乳动物中增强对感染性疾病的免疫抵抗力的方法。
【IPC分类】A61P37/02, A61K38/17
【公开号】CN105407910
【申请号】CN201480038124
【发明人】安妮·施陶特·科维斯特加德, 彼得·朗堡·魏谢, 莎伦·多诺万, 玛西亚·H·毛纳科·西格尔, 莎拉·S·康斯托克
【申请人】阿拉食品公司
【公开日】2016年3月16日
【申请日】2014年7月4日
【公告号】CA2916821A1, EP3016673A1, US20160136268, WO2015001092A1