的肽。
[0066] I.ii哺乳动物乳0ΡΝ可增强通过疫苗接种在哺乳动物中诱导的特异性免疫应答
[0067] 根据本发明的该哺乳动物乳0ΡΝ包含能够增强哺乳动物的免疫应答的全长0ΡΝ多 肽（flOPN)和/或至少一种活性截短的0ΡΝ多肽或肽（tOPN)，并且从而增加通过暴露于（并 且任选地感染有）感染性疾病或通过疫苗接种在哺乳动物中诱导的特异性免疫应答。在暴 露于（被感染）感染性疾病的哺乳动物中或在接种疫苗的哺乳动物中的特异性免疫应答包 括产生一群抗体分子，这些抗体分子选择性地与存在于该感染性疾病的试剂（感染性疾病 的实例和它们的试剂在IIi中详细描述）或疫苗中的抗原反应。关于本发明的截短的0ΡΝ 多肽或肽的术语"活性"被定义为增强哺乳动物对感染性疾病或疫苗接种的特异性免疫应 答的能力。
[0068] 通过疫苗接种所诱导的特异性抗体的效价通常被用作疫苗接种时综合免疫应答 的体内指示物；以及作为可以赋予对给定疫苗的特异性的临床保护的指示物（阿尔伯斯 (Albers)等人 2013)。
[0069] 给予牛乳0ΡΝ对通过疫苗接种在哺乳动物中诱导的特异性免疫应答的作用在实 例1中举例说明。在这个实例中，以具有牛乳0ΡΝ补充的配方膳食喂养小猪，通过在21天的 周期内产生流感病毒疫苗特异性的IgG而对流感病毒疫苗有响应，在小猪血清样品中的这 些IgG的效价明显高于来自对照配方喂养的小猪的血清，同时匹配在接受含有天然猪0ΡΝ 的猪乳的小猪中看到的IgG水平。
[0070] 在接种疫苗的哺乳动物中的特异性免疫应答可以通过直接或间接地检测并且定 量存在于来源于该哺乳动物的体液样品中的抗体来确定，这些抗体可以与一种或多种疫苗 抗原形成复合体。在疫苗是粒状的，例如全细胞灭活疫苗的情况下，可以使用定量凝集（细 胞结块）测试来确定对体液样品的连续稀释，该体液样品含有足够特异性抗体以便诱导全 细胞疫苗的细胞结块。当疫苗是可溶的，例如蛋白质亚单位或肽疫苗的情况下，酶联免疫吸 附测定（ELISA)是用于特异性抗体检测的适合的方法。对用于抗体检测的该ELISA方法的 使用在实例1. 3中说明，其中使用对猪具有特异性的ELISA测定来检测流感病毒疫苗特异 性的IgG抗体。
[0071] I.iii哺乳动物乳0ΡΝ可增强哺乳动物的体液免疫应答
[0072] 出人意料地，口服给予例如以膳食的0ΡΝ补充剂形式的0ΡΝ可诱导对体液免疫的 强烈刺激，如此以致在接种疫苗的哺乳动物中提供增强的抗原特异性IgG水平和通常更高 的IgG水平。这在实例1中举例说明，其中将接受0ΡΝ补充的配方膳食的小猪与以配方膳 食或大母猪养育的小猪进行比较。认为这种应答的原因在于在接受0ΡΝ-配方膳食的小猪 中看到的免疫系统的多种修改。第一，当与对照配方喂养或大母猪养育的小猪相比时，接受 0ΡΝ补充的膳食的小猪具有升高的IL-10水平，这促成对Th2应答的诱导并且刺激B细胞分 化成引起更高IgG水平的分泌抗体的细胞。0ΡΝ诱导的IL-10产生还在抑制下游Thl应答 诸如巨噬细胞活化和促炎性应答上起关键作用。
[0073] 第二，在0ΡΝ-配方喂养的小猪的血清中发现的升高的IL-12水平将刺激Thl细胞 的分化，这进而将引起分化的B细胞的活化，从而诱导它们分泌抗体（IgG)。当与来源于配 方喂养或大母猪养育的小猪的细胞的淋巴细胞分布相比时，在接受0ΡΝ补充的膳食的小猪 中的这种体液应答诱导被反映在明显升高的分泌T辅助细胞的CD4水平和相对较低的分泌 细胞毒性T细胞的CD8水平上。通过Thl和Th2系统产生的T辅助细胞群体促成所观察的 体液应答，并且重要地促成疫苗接种之后升高的抗原特异性IgG水平。在以配方膳食饲养 的婴儿小猪的情况下，向该膳食中添加0ΡΝ使疫苗接种应答提高到在猪喂养的小猪中看到 的水平。这些研究提供了以下证明：向膳食中添加0ΡΝ具有增强和提升对疫苗接种的免疫 应答的能力，并且从而提高对所给予的疫苗中的抗原的免疫性。这个结论通过以下事实来 支持：由疫苗接种诱导的抗体效价至少与通过该疫苗接种所赋予的对抗疾病的保护有相互 关系（普洛特金（Plotkin)SA.，2008)。
[0074] Iiv哺乳动物乳0ΡΝ可在哺乳动物中增强对感染性疾病的免疫抵抗力
[0075] 向哺乳动物，具体地人婴儿口服给予根据本发明的哺乳动物乳0ΡΝ可增强它们对 感染性疾病的免疫抵抗力。这在实例2中所述的临床试验中被清楚地证明，其中感染事件 的频率通过在婴儿中测量并且检测作为由该婴儿染上的感染性疾病的诊断症状的体温升 高（发热）来监测，该体温升高（发热）由感染剂（例如病毒、细菌、真菌或真核生物病原 剂诸如原生动物感染）所引起。
[0076] Iv制备适合用于给予的哺乳动物乳0ΡΝ
[0077] 可以纯化存在于泌乳哺乳动物的乳中的哺乳动物乳0ΡΝ以便提供一种富集的0ΡΝ 来源，该富集的0ΡΝ来源可以是至少约50%至约60%、至少约60%至约70%、或至少约 70 %至约80 %纯的。在一些实施例中，它是至少约80 %至约90 %纯的，而在其他实施例中， 乳0ΡΝ来源是至少约90%至约95%纯的、或更纯。在某些实施例中，纯化的乳0ΡΝ来源是 至少约95%纯的，诸如95%、96%、97%、98%、99%或99.5%纯的、或更纯。
[0078] 在具体实施例中，该0ΡΝ来源是一种纯化的牛乳0ΡΝ制剂，诸如 例如LacprodanOPS-10? (丹麦维比市阿拉食品原料公司（AriaFoods1即代(1161^8，￥让7,〇6111]1&11〇)(还参见美国专利号 7,259,243)。1^〇卩1'〇(1&11〇【)1'14-丨0_贫包 含大约22% (w/w)的全长牛乳0PN和大约65% (w/w)的牛乳0PN同工型（截短的0PN)。
[0079] Ivi哺乳动物乳0ΡΝ的配制和剂量
[0080] 根据本发明的该哺乳动物乳0ΡΝ，例如牛乳0ΡΝ可以在约0. 05mg/kg所治疗的受试 者体重至约5g/kg所治疗的受试者体重的范围内的每日剂量来给予。对于婴儿，该每日0ΡΝ 剂量典型地在约5 - 50mg/kg体重的范围内，对于具有3至10kg重量范围的体重的婴儿，优 选地在25_50mg/kg体重的范围内。典型地，对于成年人，建议每天给予0. 5_5g0ΡΝ，例如以 100-250ml的每日剂量体积。剂型可以含有在0.lmg- 10g/剂型范围内的哺乳动物乳0ΡΝ。 例如，口服剂型可以含有在lmg-lg/剂型范围内的0ΡΝ的量。可替代地，口服剂型可以含 有在10mg- 800mg/剂型范围内的0ΡΝ的量。口服剂型可以例如含有在25mg- 500mg/剂型 范围内的0ΡΝ的量。
[0081] 可以营养补充剂的形式给予哺乳动物乳0ΡΝ，其中该补充剂包含以在 0.01%-90% (w/w)范围内的量的乳0ΡΝ。例如，该营养补充剂可以包含以在0.1%-80% (w/w)范围内的量的乳0ΡΝ。可替代地，该营养补充剂可以包含以在1%-70% (w/w)范围 内的量的乳0ΡΝ。
[0082] 在本发明的一些实施例中，该营养补充剂包含以在5%-60% (w/w)范围内的量的 乳0ΡΝ。例如，该营养补充剂可以包含以在10%-50% (w/w)范围内的量的乳0ΡΝ。可替代 地，该营养补充剂可以包含以在0.1 %-20 % (w/w)范围内的量的乳0ΡΝ。
[0083] 在本发明的其他实施例中，该营养补充剂包含以在0.001%-5% (w/w)范围内的 量的乳0ΡΝ。例如，该营养补充剂可以包含以在0.005%-2% (w/w)范围内的量的乳0ΡΝ。 可替代地，该营养补充剂可以包含以在0.01 %-1 % (w/w)范围内的量的乳0ΡΝ。该营养补 充剂可以例如包含以在0.05%-0.5% (w/w)范围内的量的乳0ΡΝ。典型地，即饮营养饮料 包含以在0.005%至0.05% (w/w)范围内的量的乳0ΡΝ。
[0084] 包含乳0ΡΝ的营养补充剂可以被预先包装呈液体或粉状形式（例如罐装或 瓶装的液体饮品）。在一些实施例中，将该粉状形式添加到一种食物或饮料中以提 供另外的营养素。在某些实施例中，可与例如水果、蔬菜、酸奶、乳、和/或冰淇淋配 制这些营养饮料。在一些实施例中，将这些营养补充剂共混为思慕雪（smoothie)稠 度。在具体实施例中，可用例如蛋白质、维生素、矿物质、抗氧化剂、益生菌和/或 益生元强化这些营养饮料。在某些实施例中，这些营养饮料不含乳糖和/或不含 谷蛋白。在一些实施例中，这些营养补充剂是有机的。儿童营养饮料的实例包括 PEDIASURE?、PEDIASMART?、以及仅针对儿童的RESOURCE?。成 人营养饮料的实例包括ENSURE·?、BOOST?、NESTLE? CARNATION⑩ INSTANT BREAKFAST?、GLUCERNA?、GLYTROL?、NUTREN?、以及 PEPTAMEN?。营养补充剂还包括乳，豆乳和牛乳（例如全脂、半脱脂或低脂、脱脂或无 脂（例如英国奶制品公司（Cravendale))、不含有乳糖（例如LACTOFREE?））两者。
[0085] Ivii哺乳动物乳0ΡΝ的给予
[0086] 如Iv中所述的配制用于向哺乳动物口服给予的哺乳动物乳0ΡΝ(包括包含哺乳 动物乳OPN的营养补充剂或饮料）可以在疫苗接种之前、同时或之后、或其组合向哺乳动物 给予。优选地，在疫苗接种之前开始口服给予乳0PN，并且继续该给予至少直到给予该疫苗 接种。在疫苗接种之前开始给予乳0PN的情况下，优选的是在疫苗接种之前至少1-21天开 始给予，典型地在疫苗接种之前至少1-7天，并且继续该给予至少直到给予该疫苗接种。有 利地，在疫苗接种之后，可以将给予乳0PN的周期进一步延长至少另外的1-4周。如果对该 哺乳动物进行的疫苗接种包括加强疫苗接种，给予乳0PN(或其配制品）的周期优选地被延 长到至少递送加强疫苗。
[0087] II疫苗
[0088] II.i用于预防性和治疗性治疗哺乳动物的疫苗
[0089] 疫苗可以起预防性和治疗性作用，因而可以使用预防性或治疗性治疗来在哺乳动 物中增加对感染性疾病的免疫抵抗力并且从而降低感染的风险或治疗现存的感染。
[0090] 根据一个实施例，使用该疫苗来增加对感染性疾病的免疫抵抗力，其中该疫苗包 含能够在哺乳动物受试者中诱导免疫原性应答的免疫原。该免疫原可以包括引起感染性疾 病的活的（优选地减毒的）或被杀死的感染剂（例如微生物诸如细菌或病毒、寄生物、或其 他病原体）。可替代地，该免疫原可以包括免疫原性多肽，例如来源于感染剂的多肽，该多肽 可以是抗原并且该多肽因此在动物中激活免疫应答。在其他实施例中，该免疫原可以是核 酸，诸如编码抗原并且可以例如作为DNA疫苗的一部分给予的重组载体（包括DNA载体或 质粒、逆转录病毒载体和慢病毒载体）。
[0091] 在一个实施例中，该免疫原来源于选自以下各项之中的病原体：病毒、细菌、真菌、 或哺乳动物（例如人）的原生动物病原体。根据本发明的有待通过疫苗治疗的感染性疾病 包括白喉、破伤风、百日咳和脊髓灰质炎（典型地通过组合的疫苗例如TaP/IPV疫苗治疗）； MMR:麻疹、腮腺炎和风疹（例如MMR疫苗）；结核病（例如BCG疫苗）；乙型肝炎（例如乙型 肝炎疫苗）；丙型脑膜炎（例如丙型脑膜炎疫苗）；作为用于宫颈癌/肛门癌和生殖器疣的 致病剂人乳头瘤病毒（HPV)(例如HPV疫苗）；甲型流感和乙型流感（例如流感疫苗）；肺炎 球菌感染（肺炎球菌疫苗）；轮状病毒（轮状病毒疫苗）以及带状疱疹（带状疱疹疫苗）。 对抗带状疱疹的疫苗接种大部分限于老年人，而对抗所有其他列出的疾病的疫苗接种与所 有年龄组相关，虽然疫苗接种主要在儿童早期的过程中给予。
[0092] IIii用于预防性和治疗性治疗的疫苗的配制
[0093] 疫苗通常包含治疗有效量的免疫原（例如，感染剂的抗原、肿瘤抗原、固定的肿瘤 细胞），和优选地佐剂和/或药学上可接受的载体。术语"佐剂"是指增强对抗原的免疫应 答的化合物