燥备用；
(2)将步骤(I)所得灰树花菌丝体中加入纯净水，灰树花菌丝体与纯净水体积质量体积比为1:35，600W微波提取15min，60°C浸提6小时，提取结束后，进行4000r/min离心20min，取上清液备用，将离心的残渣进行上述步骤提取3次，合并上清液；
(3)将步骤(2)上清液在60°C、转速为40r/min进行旋转蒸发，将上清液浓缩为原来的I/
20；
(4)醇沉，往浓缩的上清液加入4倍体积的95%乙醇，置于4°C中醇沉1h，醇沉后，进行4000r/min离心20min，取沉淀物；
(5)向步骤(4)所得提取物中加入20倍体积的纯净水，进行搅拌复溶，用三氟三氯乙烷法除蛋白3-5次；
(6)除小分子物质:利用透析袋，截留分子量14000以上，除去有机小分子、色素；
(7)重复步骤(3)，得到多糖，并进行冷冻干燥，研磨灰树花多糖粉末。
[0020]所述的固体培养基为具体配制为:五节芒40%，巨菌草5%，芦苇5%，玉米粉10%，麸皮15%，石膏粉1%，水24%，pH值为6，装瓶，中央打孔；
所述的香精为苹果香精。
[0021]制备方法:
(1)称取灰树花多糖粉末，加入纯净水，搅匀得到灰树花多糖溶液;加入蔗糖，搅匀，加入香精、甜菊糖，调节PH值至7.5，搅匀；
(2)将步骤(I)得到的溶液静置10小时，取上清液经中空纤维膜超滤设备超滤，得滤液； (3)将步骤(2)得到的溶液分装，封口，121°C灭菌20mim，制备得到口服液。
[0022]实施例3
一种灰树花多糖抗肠道病毒71型口服液，所述口服液按以下重量份计组分组成:8份灰树花多糖粉末，2份蔗糖，0.02份甜菊糖，0.07份香精，750份纯净水。
[0023]所述灰树花多糖粉末的制备方法为:
(1)灰树花菌种以7%接种量接种于固体培养基上，置于25°C中避光培养30天，得到菌丝体，干燥备用；
(2)将步骤(I)所得灰树花菌丝体中加入纯净水，灰树花菌丝体与纯净水体积质量体积比为1:35，450W微波提取1min，80°C浸提5小时，提取结束后，进行4000r/min离心15min，取上清液备用，将离心的残渣进行上述步骤提取3次，合并上清液；
(3)将步骤(2)上清液在60°C、转速为30r/min进行旋转蒸发，将上清液浓缩为原来的I/
10；
(4)醇沉，往浓缩的上清液加入3倍体积的95%乙醇，置于3°C中醇沉7h，醇沉后，进行3000r/min离心15min，取沉淀物；
(5)向步骤(4)所得提取物中加入15倍体积的纯净水，进行搅拌复溶，用三氯乙酸法除蛋白5次；
(6)除小分子物质:利用透析袋，截留分子量13000以上，除去有机小分子、色素；
(7)重复步骤(3)，得到多糖，并进行冷冻干燥，研磨灰树花多糖粉末。
[0024]所述的固体培养基为具体配制为:五节芒30%，巨菌草10%，芦苇10%，玉米粉13%，麸皮10%，石膏粉2%，水25%，pH值为8，装瓶，中央打孔；
所述的香精为葡萄香精、苹果香精、草莓香精、蓝莓香精、橘子香精中的一种或几种。
[0025]制备方法:
(1)称取灰树花多糖粉末，加入纯净水，搅匀得到灰树花多糖溶液;加入蔗糖，搅匀，加入香精、甜菊糖，调节PH值至7.0，搅匀；
(2)将步骤(I)得到的溶液静置9小时，取上清液经中空纤维膜超滤设备超滤，得滤液；
(3)将步骤(2)得到的溶液分装，封口，110°C灭菌15mim，制备得到口服液。
[0026]以上所述仅为本发明的较佳实施例，制备灰树花的培养基不仅限于以上所述配方，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。
【主权项】
1.一种灰树花多糖抗肠道病毒71型口服液，其特征在于:所述口服液按以下重量份计组分组成:5-10份灰树花多糖粉末，1-3份蔗糖，0.01- 0.03份甜菊糖，0.05- 0.1份香精，500-1000份纯净水。2.根据权利要求1所述的一种灰树花多糖抗肠道病毒71型口服液，其特征在于:所述灰树花多糖粉末的制备方法为: (1)灰树花菌种以5-10%接种量接种于培养基上，置于20-30°C中避光培养25-35天，得到菌丝体，干燥备用； (2)将步骤(I)所得灰树花菌丝体中加入纯净水，灰树花菌丝体与纯净水体积质量体积比为1:35，300-600W微波提取6-15min，60-90°C浸提3-6小时，提取结束后，进行3000-4000r/min离心10-20min，取上清液备用，将离心的残渣进行上述步骤提取2-3次，合并上清液； (3)将步骤(2)上清液在50-60°C、转速为20-40r/min进行旋转蒸发，将上清液浓缩为原来的 1/20-1/10; (4 )醇沉，往浓缩的上清液加入3-4倍体积的95%乙醇，置于2-4°C中醇沉5_1 Oh，醇沉后，进行3000~4000r/min离心5_20min，取沉淀物； (5)向步骤(4)所得提取物中加入10-20倍体积的纯净水，进行搅拌复溶，用Sevag法、三氟三氯乙烷法、三氯乙酸法中一种除蛋白3-5次； (6)除小分子物质:利用透析袋，截留分子量12000-14000以上，除去有机小分子、色素； (7 )重复步骤(3 )，得到多糖，并进行冷冻干燥，研磨灰树花多糖粉末。3.根据权利要求2所述的一种灰树花多糖抗肠道病毒71型口服液，其特征在于:所述的培养基为具体配制为:五节芒20-40%，巨菌草5-10%，芦苇5-10%，玉米粉10-13%，麸皮10-15%，石膏粉1%-2%，水15%-40%，各组分百分数之和为百分百，pH值为5_8，装瓶，中央打孔。4.根据权利要求2所述的一种灰树花多糖抗肠道病毒71型口服液，其特征在于:所述的香精为葡萄香精、苹果香精、草莓香精、蓝莓香精、橘子香精中的一种或几种。5.—种如权利要求所述的一种灰树花多糖抗肠道病毒71型口服液的制备方法，其特征在于:所述方法包括如下: (1)称取灰树花多糖粉末，加入纯净水，搅匀得到灰树花多糖溶液;加入蔗糖，搅匀，加入香精、甜菊糖，调节PH值至6.8-7.5，搅匀； (2)将步骤(I)得到的溶液静置8-10小时，取上清液经中空纤维膜超滤设备超滤，得滤液； (3 )将步骤(2 )得到的溶液分装，封口，100-121°C灭菌10-20mim，制备得到口服液。
【专利摘要】本发明涉及一种灰树花多糖抗肠道病毒71型口服液及其制备方法。该口服液以五节芒、巨菌草、芦苇、玉米粉、麸皮等组成的培养基发酵制备的灰树花多糖为主要原料，其制备步骤：制备灰树花菌丝体多糖，配制灰树花多糖溶液，加入辅料并灌装封口，最后杀菌制得成品。体外细胞试验表明，灰树花多糖在前期对EV71病毒的抑制率达80%以上。灰树花多糖能下调宿主细胞内EV71病毒结构蛋白VP1的表达合成，抑制EV71病毒引起的IêBá蛋白下调来控制EV71病毒复制，增强机体的免疫力。该口服液能预防和控制手足口病的发生，口服液的原材料来自药食兼用菌灰树花，安全无毒。
【IPC分类】A61K9/08, C08B37/00, A61K47/26, A61K31/715, A61P31/14
【公开号】CN105434344
【申请号】CN201610009952
【发明人】赵超, 刘斌, 高路营, 陈玉青, 肖正, 杨成凤
【申请人】福建农林大学
【公开日】2016年3月30日
【申请日】2016年1月8日