一种肉苁蓉鳞茎提取物的制备方法及延缓皮肤衰老作用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及天然药物化学领域和化妆品领域，更具体地说，涉及一种从中草药肉 巧蓉的鱗茎提取得到的主要成分之一多糖经降解后获得的寡糖混合物。此外，本发明还涉 及所述方法提取得到的肉巧蓉鱗茎提取物的延缓皮肤衰老作用。具体涉及该肉巧蓉鱗茎提 取物在制备具有延缓皮肤衰老作用的化妆品中的应用。
【背景技术】
[0002] 化妆品已成为人们日常生活中的必需品，它对美化面容和肌肤，促进身必健康具 有极大的作用。近年来随着社会经济的发展和科学技术的进步，人们对化妆品的需求亦随 之提高，对化妆品的作用从观念上发生了很大的变化，更加注重化妆品的功效性。而在众多 的功效中，延缓衰老成为直古不变的主题。
[0003] 衰老是指随着时间的推移所有个体都将发生的功能性和器质性衰退的渐进过程。 影响衰老的因素有很多，各种社会因素、经济、疾病、营养、遗传、环境及精神状态等都起着 一定的作用。归纳起来不外乎两类，一种是内因所致，先天所决定的，即人丛胚胎到死亡是 由体内基因或生物钟决定的（生理性衰退）；另一种是外因所致，即由上述提到的外在环境 有害因素所致，引起细胞壁和细胞脱氧核糖核酸的损伤、人体蛋白质大分子等遭到破坏等 (病理性衰退）。
[0004] 衰老的机制非常复杂，比较有代表性的衰老学说主要包括：细胞突变学说，DNA损 伤学说，线粒体损伤学说，端粒学说，自由基学说，非酶糖基化学说，免疫功能改变学说，神 经内分泌衰老学说。
[0005] 细胞突变学说认为细胞分裂次数与寿命成正比，衰老是由于细胞受损而产生突 变，从而使细胞本身及其分裂之后的细胞异常，生理功能下降，分裂次数降低。年老肌肤的 表皮层厚度明显变薄，其中的主要组成细胞角质细胞的分裂速度减慢、新陈代谢水平也明 显降低，肌肤失去活力，也因此变得暗沉、细纹曾多、水分流失快。故而，增加表皮细胞的新 陈代谢和增殖能力，成为延缓衰老的重要手段之一。
[0006] 线粒体是细胞氧化代谢的部位，其活性可W直接反映细胞新陈代谢的能力。我们 通过XTT法来检测角质细胞的线粒体活性，从而反映细胞的新陈代谢水平。XTT是一种四哇 氮衍生物，能被活细胞中线粒体脱氨酶降解而产生踪黄色水溶性的甲臓，在450nm处有吸 光度，其读数对应的甲臓生成量与细胞的线粒体活性呈正相关。在实验室的体外细胞平台 中，细胞增殖带来的线粒体数量增多，也能引起XTT结果升高。目P，本发明涉及的XTT实验 结果，反映的是细胞新陈代谢水平和增殖能力的综合结果。
[0007] 就组成真皮层的主要细胞成纤维细胞而言，随着衰老的发生，成纤维细胞分裂次 数减少，合成胶原蛋白及弹性蛋白的能力下降。最终导致皮肤逐渐变薄，皱纹增多，弹性下 降。因此促进细胞增殖W及增强成纤维细胞合成胶原蛋白的能力也是延缓衰老的重要手段 之一。
[0008] 居脯氨酸是胶原蛋白中的一种主要成分，它与胶原蛋白的稳定性密切相关。与此 同时，我们很少在其他蛋白质中发现居脯氨酸，因此，很多研究常用居脯氨酸的含量来反映 胶原蛋白的量。本发明涉及的测量居脯氨酸表达量的方法，原理是基于胶原在碱性条件下 被切割降解，由此得来的游离的居脯氨酸被氧化，在反应液中能产生在550皿处有吸光度 的发色基团，从而由吸光度的读数来反映胶原含量。
[0009] I型胶原占到皮肤中所有胶原的80%，是与肌肤衰老密切相关的蛋白，而I型前胶 原作为胶原I的合成前体，其含量多少也能反映出皮肤合成胶原蛋白的能力。通过抗原抗 体的特异性结合，可W用英光基团标记出表皮细胞表达的I型前胶原，英光强度即对应了 该蛋白的表达量，从而可W-定程度上反映出胶原I的表达量。
[0010] 我国中医药资源丰富，为我们寻找优越的延缓皮肤衰老的添加剂提供了基 础。肉巧蓉化erba Cistanche) Cistanche dese;rticolaY. C. Ma(C. dor)为列当科 (化obanchaeceae)肉巧蓉属（Cistanche)多年生高等寄生植物，其味甘咸微辛酸、微温， 在《神农百草经》中列为上品，具有补肾益精、润肠通便和延缓衰老等功效，被誉为"沙漠人 参"。别名大芸、寸芸、巧蓉、纵蓉、肉松蓉、精算、地精、查干告亚（蒙语）。长期的药学实践 和大量近代药理学研究表明，它具有提高机体的免疫功能，促进DNA合成，增强体力，提高 智能，还有抗衰老等方面的作用。肉巧蓉多糖作为肉巧蓉药材的主要功效成分之一，也有许 多报道称其有抗衰老、抗氧化等方面的作用。
[0011] 例如，中国专利申请CN201110039116. 2公开了一种肉巧蓉提取物提取方法及其 应用。具体说，该申请公开了属于药用植物应用研究技术领域的一种肉巧蓉提取物提取方 法及其应用。该提取物来源于列当科肉巧蓉属的荒漠肉巧蓉或管花肉巧蓉。将肉巧蓉的干 燥肉质茎磨成粉末，通过回流提取、过滤、药渣再回流提取、冰冻干燥仪干燥得到踪色粉末， 即为肉巧蓉提取物。本发明的肉巧蓉提取物可激活免疫系统，增加免疫器官脾脏的重量，治 疗肠癌，减少肠道增生的发生，保护正常的肠道表皮细胞，减少肠道幽口杆菌感染。
[0012] 例如，中国专利申请CN201210064589. 2公开了一种含管花肉巧蓉提取物的美白 抗衰老化妆品及其制备方法。具体说，该申请提供了一种管花肉巧蓉提取物的制备方法及 美白抗衰老化妆品，所述管花肉巧蓉提取物的制备方法包括粉碎、粗提取、将粗提取物进行 离必收集、并经过静置后洗脱、烘干，得管花肉巧蓉提取物。该制备方法简单并无污染，所述 提取物的松果菊巧的含量> 25%，毛蕊花糖巧的含量> 55%，总巧含量> 80% ;将此方法 制得的管花肉巧蓉提取物经过抗氧化性活性等的测试后，证明管花肉巧蓉提取物具有抗氧 化，美白、抗衰老的作用。将其添加到化妆品制得美白抗衰老化妆品，并对化妆品进行细胞 毒性及安全性等测试，验证了化妆品的安全无刺激、且具有很好的美白效果。
[0013] 但是，现有技术均未公开由肉巧蓉提取得到的多糖降解形成寡糖混合物的方法。 也就是说，迄今为止还没有对肉巧蓉鱗茎提取得到的多糖进行降解，形成寡糖混合物的研 究报道，更没有关于送种寡糖混合物具有延缓衰老功效的报道。本发明首次研究得出此寡 糖混合物能通过提高角质细胞活力（增值能力与新陈代谢能力的综合，通过XTT反映 ），W 及增加成纤维细胞表达胶原蛋白（通过居脯氨酸与I型前胶原含量反映）来达成延缓皮肤 衰老的功效，其延缓皮肤衰老能力强于原多糖。
【发明内容】
[0014] 本发明的目的在于提供一种具有延缓皮肤衰老作用的肉巧蓉鱗茎提取物。本发明 的肉巧蓉鱗茎提取物按提供的方法制成，其成分主要为寡糖混合物，包含寡糖混合物的肉 巧蓉鱗茎提取物可直接用于延缓皮肤衰老。
[0015]因此，本发明的一个目的是提供一种包含寡糖混合物的肉巧蓉鱗茎提取物的制备 方法及其可能的分纯方法，它能通过W下方法制备得到：
[001引 a)沸水提取；
[0017] b)浓缩，然后脱蛋白，然后碱中和；
[0018] C)透析，浓缩，离必去沉淀，上清液用有机溶剂沉淀；
[0019] d)收集沉淀，干燥后得到干燥的肉巧蓉鱗茎水提多糖；
[0020] e)步骤d)所得肉巧蓉鱗茎水提多糖在强酸、70-20(TC温度条件下降解，得到包含 寡糖混合物的肉巧蓉鱗茎提取物；
[0021] f)去除酸性成分，离必后取上清液，得到包含寡糖混合物的肉巧蓉鱗茎提取物。
[0022] 在本发明的一个实施方式中，所述方法还包括在步骤a)之前进行脱脂的步骤。
[0023] 在本发明的一个实施方式中，所述方法还包括在步骤f)之后采用活性炭娃藻± 层析柱进行分离纯化的步骤。
[0024] 在本发明的一个实施方式中，所述步骤e)中使用的强酸选自；H氣己酸、盐酸、高 儘酸、硫酸、硝酸、高氯酸、砸酸、氨漠酸、氨贿酸、氯酸。
[00巧]在本发明的一个实施方式中，所述步骤a)包括取肉巧蓉