一种枳实提取物及其制备方法与在延缓皮肤衰老中应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及植物提取领域，尤其设及一种积实提取物及其制备方法与在延缓皮肤 衰老中应用。
【背景技术】
[0002] 衰老，乃是指机体各器官功能普遍的、逐渐降低的过程。在机体衰老过程中，皮肤 由于与外界环境直接接触极易显露衰老痕迹。皮肤老化一般有两种表现形式：自然老化和 光老化。
[0003] 自然衰老的皮肤厚度总趋势是变薄的，表皮更新减慢，角质层屏障功能下降，与真 皮连接部变平。表皮细胞渐呈扁平，角质形成细胞活力下降，角质层水合能力下降。自然的 皮肤衰老是由遗传因素 W及体内的激素水平决定的。
[0004] 而光老化则是一个单独的进程，其对皮肤中胶原蛋白和弹力纤维的损害明显。福 照对皮肤真皮组织的负面影响可促使早衰的发生。UVB可直接对皮肤中的DNA造成损伤，而 UVA对皮肤的不良影响主要是通过氧自由基而产生的，综合起来会引起细胞核W及线粒体 DNA的损伤并引起一些酶如基质金素蛋白酶的活化，进而损伤细胞外基质的结构和功能。
[0005] 自古W来，抗衰老便是人们热切关注的问题，抗衰老的产品也多种多样，不仅包括 各种中药的组合物，也包括各种活性物质。运些抗衰老的产品大多具有提高机体免疫力、缓 解体力疲劳等作用，但对表皮细胞是否有效却鲜有提及。
[0006] 积实（Fructus Aurantii Immaturus)是中医临床常用药物之一，性溫味苦、辛、 酸，归脾胃经，具有破气消积，化疲散瘡的功效。经化学成分分析，积实的主要活性成分包括 黄酬类、生物碱类、挥发油类等。其中，黄酬类含量约占5%~28%，主要为澄皮巧、澄皮素、 抽皮巧、抽皮素等。生物碱类主要为辛弗林、N-甲基酪胺等，在积实中的含量约为lOmg/g左 右。挥发油类主要包括祗締类化合物，W单祗为主。
[0007] 积实提取物在抗衰老方面的用途目前尚未见报道。
【发明内容】
[000引有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种积实提取物及其制备方法与在 延缓皮肤衰老中应用，本发明提供的积实提取物能够可显著降低紫外对成纤维细胞和角质 形成细胞的伤害，促进成纤维细胞中I型胶原蛋白表达，抑制MMP-I的表达，发挥延缓皮肤衰 老的功效。
[0009] 本发明提供了一种积实提取物，主要包括质量分数为17.35 %~29.27 %的抽皮 巧、质量分数为13.83%~26.82%的新澄皮巧和质量分数为1.69%~3.03%的辛弗林。
[0010] 本发明提供的积实提取物的制备方法为，将积实饮片粉碎，W乙醇水溶液提取制 得积实提取物；
[0011] 乙醇水溶液中乙醇的体积分数为30%~90% ;
[0012] 提取的溫度为20°C~70°C，提取的时间为化~化。
[0013] 积实饮片为积实原药材经炮制后获得的药材。所述积实原药材为酸澄积实、香祿 积实、绿衣积实、甜澄积实;所述的炮制方法为切制或教炒。
[0014] 所述切制为将积实原药材加水密闭闷润至完全吸收后切薄片，于60°C干燥12h。
[0015] 所述教炒为将生品积实与麦教W质量比为100:5于180°(：炒制1111^。
[0016] 在本发明采用的积实饮片的原药材为酸澄积实或甜澄积实，炮制方法为教炒。
[0017] 不同的溶剂具有不同的极性，对各种成分的溶解性也不同，不同的溶剂提取所得 的提取物也不童。本发明将积实饮片经乙醇水溶液提取，所得的提取物经试验证明能够具 有，能够抑制成纤维细胞衰老，增加胶原生成，抑制胶原酶；同时还能抑制角质形成细胞衰 老，对真皮和表皮共同作用对抗皮肤衰老。本发明通过优化工艺参数，使所得提取物对皮肤 的抗衰老作用显著提高。
[0018] 在一些实施例中，乙醇水溶液中乙醇的体积分数为60%。
[0019] 在另一些实施例中，乙醇水溶液中乙醇的体积分数为30%或90%。
[0020] 物质的渗透、溶解、扩散能力随溫度升高而增大，溶液的黏度随溫度升高而降低， 因此，提取中加热可加强分子运动，又可软化组织、提高溶解度、加速扩散、从而提高提取 率。但过高的溫度不仅回造成提取过程中溶剂的挥发，也会使一些对热敏感的活性物质发 生降解。
[0021] 有效成分的提取率随提取时间的延长而增加，直至达到平衡为止。因此，过长的提 取时间是没有必要的，不仅浪费时间，且往往使无效成分随时间延长而大量提出，影响提取 物品质，降低提取物的效果。
[0022] 在一些实施例中，提取的溫度为50°C，提取的时间为化。
[0023] 在另一些实施例中，提取的溫度为20°C或70°C，提取的时间为化或化。
[0024] 通常认为，溶剂用量过低，有效成分不能充分浸出，但如果用量过大，则会给浓缩 工作带来负担。
[0025] 在本发明的实施例中，积实饮片与乙醇水溶液的质量-体积比为1: (5~20)。
[0026] 在一些实施例中，积实饮片与乙醇水溶液的质量-体积比为1:15。
[0027] 在另一些实施例中，积实饮片与乙醇水溶液的质量-体积比为1:5或1:20，
[0028] 提取次数对提取效果也会产生影响，并且，提取次数与提取溶剂的关系密切。在本 发明中，对积实的提取次数为1次。
[0029] 药物有效成分提取后常包括浓缩和干燥的步骤，干燥或浓缩的方法对提取物的质 量和效果有着直接的影响。理论上讲，浓缩的时间越长，溫度越高，有效成分损失越大。
[0030] 在本发明的实施例中，W乙醇水溶液提取后还包括干燥的步骤;干燥的方法为真 空薄膜浓缩;干燥的溫度为20~60°C。
[0031] 在一些实施例中，干燥的溫度为45 °C。
[0032] 在另一些实施例中，干燥的溫度为20°C或60°C。
[0033] 根据FICK第二定律，药材粉碎的大小可W影响提取效果，将原料粉碎到一定程度， 增加固体余溶剂的接触面积可使提取效率得到显著的提高，但对本发明而言，所得提取物 的效果与粉碎的粒度并不呈正相关。
[0034] 在本发明的实施例中，积实饮片粉碎至粒度为10目~65目。
[0035] 在一些实施例中，粉碎至粒度为60目。
[0036] 植物活性物质的提取方法多种多样，提取方法影响提取物的成分与提取效率。本 发明对积实的提取采用水浴提取。
[0037] 多种因素相互影响，共同作用决定提取物的组成和有效成分的含量。在
[0038] 在本发明的一个实施例中，积实提取物的制备方法具体为：
[0039] 将积实饮片，粉碎至粒度为24目；加入5倍质量的的体积分数为30%乙醇水溶液， 于20°C水浴提取化，过滤，得到滤液;滤液于20°C经真空薄膜浓缩，得到积实提取物。
[0040] 在本发明的一个实施例中，积实提取物的制备方法具体为：
[0041] 将积实饮片，粉碎至粒度为50目；加入20倍质量的的体积分数为90%乙醇水溶液， 于70°C水浴提取化，过滤，得到滤液;滤液于60°C经真空薄膜浓缩，得到积实提取物。
[0042] 在本发明的一个实施例中，积实提取物的制备方法具体为：
[0043] 将积实饮片，粉碎至粒度为60目；加入15倍质量的的体积分数为90%乙醇水溶液， 于50°C水浴提取化，过滤，得到滤液;滤液于45 °C经真空薄膜浓缩，得到积实提取物。
[0044] 本发明提供的方法制备的积实提取物在制备胶原蛋白表达促进剂中的应用。
[0045] 在本发明中，积实提取物能够促进表达的胶原蛋白为I型胶原蛋白。特别是成纤维 细胞中的I型胶原蛋白。
[0046] 在本发明中，积实提取物促进胶原蛋白表达的剂量为化g/mL~20化g/mL。
[0047] 作为优选，积实提取物促进胶原蛋白表达的剂量为20化g/mL。
[0048] 胶原蛋白是动物结缔组织中的主要成分，其中I型胶原蛋白主要存在余人的皮肤 和骨组织。研究表明，内源性老化的皮肤中胶原和弹性纤维均表现为减少。紫外线福射造成 的光老化皮肤中胶原的减少更加明显，但弹性纤维却大量增生和变性。经实验证实，本发明 制备的积实提取物能够增加成纤维细胞中I型胶原蛋白含量的表达。并且，在紫外照射作用 下，积实提取物仍能促进成纤维细胞中I型胶原蛋白的表达。而未经积实提取物处理的细胞 经紫外照射后，I型胶原蛋白的含量显著降低。试验表明，积实提取物促进胶原蛋白表达的 作用呈剂量依赖关系。
[0049] 本发明提供方法制得的积实提取物在制备MMP-I表达抑制剂中的应用。
[0050] 在本发明中，积实提取物能够抑制成纤维细胞中MMP-I的表达。
[0化1 ] 在本发明中，积实提取物抑制MMP-I表达的剂量为化g/mL~200yg/mL。
[0052] 作为优选，积实提取物抑制MMP-I表达的剂量为20化g/mL。
[0053] 基质金属蛋白酶-I(MMP-I)是讲解I型和HI型胶原最主要的酶，当MMP-I过度表达 时，特异性降解细胞外基质成分，破坏胶原纤维和弹力纤维的正常结构，导致皮肤出现皱缩 细纹等衰老症状。实验表明，本发明制备的积实提取物能够显著降低成纤维细胞中MMP-I的 表达，即便在紫外福射下，本发明制备的积实提取物对MMP-I的表达也具有显著的抑制作 用，而未经积实提取物处理的细胞经紫外照射后，MMP-I的表达显著升高。
[0054] 本发明提供方法制得的积实提取物用于降低紫外线对细胞损伤。
[0055] 本发明提供方法制得的积实提取物能够降低紫外线对成纤维细胞或表皮细胞的 损伤。
[0056] 该积实提取物能够降低紫外线对成纤维细胞或角质形成细胞的剂量为化g/mL~ 200]ig/mL〇
[0057] 作为优选，该积实提取物能够降低紫外线对成纤维细胞或角质形成细胞的剂量为 200]ig/mL〇
[0058] 成纤维细胞和角质形成细胞是构成人类皮肤的主要细胞，其中成纤维细胞位于真 皮，角质形成细胞位于表皮。实验表明，在紫外照射下，本发明提供的积实提取物能够使成 纤维细胞衰老模型的灰度值得到有效控制，该效果呈剂量依赖关系。在紫外照射下，该提取 物对角质形成细胞的灰度值有显著的抑制作用，该效果呈明显的剂量依赖关系。
[0059] 本发明提供制备方法制得的积实提取物在制备抗衰老的产品中的应用。
[0060] 本发明提供了一种积实提取物的制备方法，并研究发现，该提取物能够促进胶原 蛋白的表达，抑制MMP-I的表达，且能够降低紫外照射对成纤维细胞或角质