l)之后，在0度下，滴加了 t-Bu0K( 224mg，2. Ommol)和在实施例1中制备的 1-(氯甲基)-4-苯基-1H-1,2,3-Ξ挫（360mg，1 .Ommol)。在室溫条件下，将反应混合液揽拌5 小时之后使用水来中断反应。利用乙酸乙醋(ethyl acetate)提取反应混合液之后，利用快 速柱色谱（5%Me0H/C此Cl2)进行分离并纯化，从而制备230mg(35%)的标记前体。1h匪R (500MHz，CDCl3)d8.71(s，lH)，8.27-8.26(m，2H)，7.66-7.56(m，甜），7.41(t，J = 8.0Hz， 2H)，7.35-7.32(m，lH)，7.28-7.25(m，2H)，7.15(d，J = 8.0Hz，lH)，7.03(t，J = 7.5Hz，lH)， 6.81(d，J = 8.0Hz，2H)，6.56(d，J = 5.5Hz，lH)，6. .46(s，2H)，4.94(dd，J = 84.0Hz，J = 14.5Hz，2H),4.28(s，3H),1.96(s，3H);Uc 醒R(125MHz，CDCl3)d 170.6,160.7,153.5, 152.8,151.2,151.0,143.8,132.1,131.6,130.5,129.9,129.8,129.6,128.8,128.4, 126.4,126.3,124.1,121.6,120.5,113.9,110.7,79.7,46.5,38.7,22.2；HRMS(FAB)m/z calcd. f or [C31 出 8 的化 OsS-OTf ] +: 506.2192; f ound: 506.2195。
[0066] 第二步骤:N-(2-氣甲氧基苯基)-N-(4-苯氧基化晚)-3-基）乙酷胺的制备
[0067] 在0.5血的乙腊中溶解Ξ挫Ξ氣甲横酸醋前体(化合物4.32mg，0.05mmol)之后，添 加四下基氣化锭（tetrabutylammoni皿 fluoride)(20mg，0.075mmol)，并在80度下揽拌1 小 时。利用二氯甲烧(me th^ene chloride)提取反应混合液之后，利用快速柱色谱化exane/ EtO Ac = 50/50)进行分离并纯化，来制备了 15mg(83%)的基准物质(化合物5)。
[0068] W下，对从在上述第一个步骤中制备的Ξ挫Ξ氣甲横酸醋前体中标记（制备）导入 有氣甲基的氣-18标记放射性示踪剂的方法进行具体说明。
[0069] 由回旋加速器生产的氣-18吸附于（Chromat'ixK'PS-HC〇3)柱体之后，利用包含四 下基碳酸氨锭的相变催化剂的甲醇/水进行洗脱。利用共沸蒸馈干燥提取的溶剂之后，在叔 下醇（*6的-扣*曰11〇1)(0.4111〇中添加了^挫^氣甲横酸醋前体（2.3111邑）。^120°0溫度将反 应混合物加热10分钟，并将混合物冷却至室溫之后，在lOmL的水中溶解反应混合物进行稀 释。使上述溶液吸附于tC18S邱-化k柱体，并利用10m L的水清洗之后，利用1.5血的C出CN进 行洗脱。经洗脱的溶液在高效液相色谱法系统(Waters，Xterra RP-18，10 X 50mm，ΙΟμΜ)中， 利用254nm的紫外线检测仪和放射性同位素伽马射线检测仪进行分离。适用如下溶剂条件： 在45:55比例下，将乙腊和水W3mL/min的流量进行移动。约13.5分钟之后，收集了导入有氣 甲基的氣-18标记放射性示踪剂。在已收集的溶液中，为了去除在临床上无法使用的高效液 相色谱法溶剂，利用tC18Sep-Pak柱体制备成5%乙醇/生理食盐水溶液。
[0070] 另一方面，在本发明的导入有氣甲基的氣-18标记放射性示踪剂的制备中，为了使 最终目的化合物在生物体内维持更稳定的形态，可制备W双氨取代的化合物。为了制备上 述化合物，W与上述技术的方法相同的方法进行，在利用二舰甲烧的辅基两个步骤标记法 或利用Ξ挫Ξ氣甲横酸醋前体的一个步骤标记法中，若利用W双氨取代的二舰甲烧-d2或 Ξ挫Ξ氣甲横酸醋前体-d2来代替二舰甲烧，则可制备导入有双氨的、导入有氣甲基的氣-18标记放射性示踪剂-d2。
[0071] 另一方面，作为导入有已制备的氣甲基的氣-18标记放射性示踪剂的神经炎症诊 断放射性示踪剂，为了比较其功效，根据公知的方法制备[11口外周型苯二氮卓受体28,并使 用正外周型苯二氮卓受体28作为前体，通过通用电气药业(GE Healthcare)公司的FXC-PR0 模块来进行合成。制备[11口外周型苯二氮卓受体28的放射化学收率为20~30%。
[0072] W下，对本发明的利用导入有脑神经炎症祀正电子发射断层扫描用氣甲基的氣-18标记放射性示踪剂的脑神经炎症有用性评价的实施例进行详细的说明。
[0073] 实施例4.外周型苯二氮卓受体28和基准物质的体外18-kDa转位蛋白结合亲和度 的测定
[0074] 使用淋己细胞分离培养器通过聚薦糖-泛影葡胺(Ficoll-Hypaque)浓度梯度离屯、 分离从50mL的肝素原血细胞分离白细胞，分离后的白细胞W冷冻的方式保存。在进行分析 的前一天解冻细胞，并W相同量的缓冲液(50mM的4-径乙基赃嗦乙横酸化EPES)，pH7.4)进 行稀释之后进行均质化，并在4°C溫度下，W20000g离屯、分离15分钟。并且，将取得的白细胞 再悬浮于2.4mL的缓冲液，来在-70°C溫度下保存，蛋白质浓度使用布拉德福德(Bra壯ord) 分析法进行测定。体外结合度测定如下:在室溫条件下，使白细胞（100化的再悬浮膜)与ImL 的反应混合物反应30分钟，上述反应混合物包含1(Κ)化的放射性配体（[化]PK11195(S.A: 83.4Ci/mmol)，in lx外周型苯二氮卓受体）和用于抑制试验的外周型苯二氮卓受体28或 FM-外周型苯二氮卓受体28(0.124-10000nM)及50化的0.07nM的放射性配体（[3H] PK11195)。使用Cell havester来清洗2次之后，利用的十数器测定结合放射性量。在分析条 件下，特定结合分馈的比率小于总化放射性的20%。体外结合度结果测定如下：为了计算 氣-19被取代的基准物质和外周型苯二氮卓受体28的IC50值，使用PRISM软件来实施非线性 回归分析。
[0075] 此时，基准物质示出8.28±1 .7化M(IC5q)，外周型苯二氮卓受体28为8.07± 1.40nM，不出类似的结合萊和度。
[0076] 实施例5.导入有[1句外周型苯二氮卓受体28和氣甲基的氣-18标记放射性示踪剂 的脂肪亲和度的测定
[0077] 脂肪亲和度测定如下:在正辛醇(5mL)和憐酸钢缓冲液(5.〇1^，0.151，抑7.4)中添 加 5%的乙醇/食盐水的导入有氣甲基的氣-18标记放射性示踪剂及[lie]外周型苯二氮卓受 体28(约0.74MBq)来混合之后测定4次。在各步骤（100化)的样品中，测定放射性，W憐酸钢 缓冲液和正辛醇的每分钟计算比率计算了脂肪亲和度。导入有氣甲基的氣-18标记放射性 示踪剂的脂肪亲和度为2.85±0.02,与[11 口外周型苯二氮卓受体28(3.01±0.01)类似。
[0078] 实施例6.在人血清(Human serum)中的体外稳定性的测定
[0079] 导入有氣甲基的氣-18标记放射性示踪剂的稳定性测定如下:混合0.5mL的人血清 和0.5mL的5 %的包含导入有氣甲基的氣-18标记放射性示踪剂的化0H/盐水(saline)之后， 在37°C溫度下，在0分钟、10分钟、30分钟、60分钟、120分钟及240分钟利用薄层层析分析了 稳定性。测定结果如下：导入有氣甲基的氣-18标记放射性示踪剂最长240分钟为止98.8% W上稳定，运呈现导入有氣甲基的氣-18标记放射性示踪剂对进行体内生物学研究的充分 的稳定性。
[0080] 实施例7.在诱导脂多糖化PS)的脑神经炎症大鼠模型中的正电子发射断层扫描影 像
[0081 ]制备诱导脂多糖的脑神经炎症模型
[0082] 制备脑神经炎症模型大鼠使用体重为200~250g的雄性斯普拉格-杜勒(Sprague-Dawley)大鼠。麻醉大鼠并使其头盖骨露出之后，利用骨钻穿出小孔。其次，利用汉密尔顿注 射器^〇.5血/111；[]1的流量（4口，0.81]1111;1^,-2.71111113]1(1?,-5.〇1]11]1化〇1111:116枯6卵日）向大鼠的 身体注入5〇4旨的脂多糖化?5，^9〇9〇173日。油日1'1(1日）。为了防止在汉密尔顿注射器中的脂多 糖的逆流，维持10分钟之后，利用蜡填充头盖骨的小孔，并缝合了剖切的头皮。
[0083] 正电子发射断层扫描图像协议
[0084] 向5只大鼠（227.98±3.8g)注射脂多糖之后，第4天取得了正电子发射断层扫描影 像。在相同个体神经炎症模型中向尾部静脉注入导入有[11口外周型苯二氮卓受体28及氣甲 基的氣-18标记放射性示踪剂之后，将正电子发射断层扫描影像拍摄了 120分钟。首先，在神 经炎症模型中，拍摄[lie]外周型苯二氮卓受体28影像，并在剩余放射性消失的六个半衰期 (约3小时)之后，取得了导入有氣甲基的氣-18标记放射性示踪剂影像。
[0085] 并且，为了在导入有氣甲基的氣-18标记放射性示踪剂的脑神经炎症模型中测定 选择性/特异性结合度，将与转位蛋白特异性结合的PK11195 (lOmg/kg)或基准物质（5mg/ kg)与导入有氣甲基的氣-18标记放射性示踪剂一同注入，来取得了抑制（inhibition)影 像，并一同注入与中枢苯二氮卓受体相结合的氣马西尼