榆白皮提取物及其制备方法以及在制备增强免疫药的应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及中药提取物领域，具体设及一种免疫增强作用的愉白皮提取物及其制 备方法，该提取物可W应用于制备增强免疫的药物。
【背景技术】
[0002] 愉白皮为为愉科植物愉树的树皮或根皮的初皮部。春季或8~9月间割下老枝条， 立即剥取内皮晒干。
[0003] 原植物愉树为落叶乔木，高达90米。树皮暗灰褐色，粗糖，有纵沟裂;小枝柔软，有 毛，谈灰黄色。单叶互生;倒卵形、楠圆状卵形或楠圆状披针形，长2~8厘米，宽2~2.5厘米。 先端锐尖或渐尖，基部圆形或模形，边缘通常单银齿，上面暗绿色，无毛，下面幼时有短柔 毛，老时仅脉蔽有白色茸毛;叶柄长2~8毫米，有毛;托叶披针形，长1厘米，有毛。花先叶开 放，簇生，有短梗;花專4~5裂;雄蕊4~5,花药紫色;子房扁平，花柱2。翅果倒卵形或近圆 形，光滑，先端有缺口。种子位于中央，与缺口相接，长1~1.5厘米。花期3~4月。果期4~6 月。生于河堤、田巧和路边；山麓、沙地上亦有生长。我国大部分地区有分布。含e-谷酱醇、植 物酱醇、豆酱醇、多种酱醇类及较质、树胶、脂肪油等化学成分。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种愉白皮提取物，并提供了一种它的制备方法，W及含 有该提取物的药物制剂及利用该提取物制备增强免疫的药物的用途。
[0005] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得W实现的：
[0006] -种愉白皮提取物，该提取物由W下方法制备：（a) W重量计，每100份药材包含干 燥的愉白皮75~85份和干燥的党参15~25份，混合粉碎，用乙醇热回流提取，合并提取液， 浓缩至无醇味；（b)将步骤(a)所得乙醇提取浓缩液用水稀释，依次用石油酸、乙酸乙醋和水 饱和的正下醇萃取，分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；（C)正下醇 萃取物用大孔树脂富集，先用5~15%乙醇冲洗8~12个柱体积除去多糖，再用65~75%乙 醇洗脱7~9个柱体积，收集65~75 %洗脱液，减压浓缩，喷雾干燥。
[0007] 进一步地，步骤(a)中所述用乙醇热回流提取所采用的乙醇浓度为85~95%。
[000引进一步地，步骤(a)中所述用乙醇热回流提取所采用的乙醇浓度为90%。
[0009] 进一步地，步骤(C)中所述大孔树脂为AB-8型大孔树脂。
[0010] 进一步地，步骤(C)为:正下醇萃取物用AB-8型大孔树脂富集，先用10%乙醇冲洗 10个柱体积除去多糖，再用70%乙醇洗脱8个柱体积，收集70%洗脱液，减压浓缩，喷雾干 燥。
[0011] 为了能够通过建立HPLC指纹图谱的方法控制不同批次制备的愉白皮提取物的批 间差异，所述提取物的液相分析方法为：
[0012] 色谱柱:Agilent TC C18柱(4.6mmX250mm，5皿）；
[001引流动化A为乙腊，B为0.1 %甲酸溶液(立乙胺调节抑值至6.0);
[0014] 梯度洗脱程序：0~5min，A35%;5~10min，A35%一70%;10~15min，A70%一 35%;
[0015] 15~20min，A 35%;
[0016] 流动相流速:1.0 mL ? min-i;
[0017]检现贩长：240nm;
[001 引柱溫：30°C;
[0019] 进样量10化。
[0020] 药物制剂，含有治疗有效量的所述提取物和药学上可接受的载体。
[0021] 所述的提取物在制备增强免疫的药物中的应用。
[0022] 所述的药物制剂在制备增强免疫的药物中的应用。
[0023] 本发明提取物用作药物时，可W直接使用，或者W药物制剂的形式使用。
[0024] 所述药物制剂含有治疗有效量的本发明愉白皮提取物，其余为药物学上可接受 的、对人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。
[0025] 所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料 W及药物制品辅剂。将本发明的药物制剂W单位体重服用量的形式使用。本发明提取物可 通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控 释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等;用于注射时，可制成灭菌的 水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。
[0026] 本发明的优点：本发明通过对干燥的愉白皮和党参进行提取、除杂、富集处理，能 得到具有增强免疫的提取物;本发明提供的液相分析方法可W用于建立该提取物的指纹图 谱，用于控制不同批次制备的提取物的批间差异。
【附图说明】
[0027] 图1为愉白皮提取物HPLC液相图谱。
【具体实施方式】
[0028] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不W此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可W对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0029 ]实施例1:愉白皮提取物①制备(80份愉白皮，20份党参）
[0030] 药材来源:愉白皮和党参购自安徽毫州中药材市场。
[0031] 主要试剂:食品级乙醇购自上海凌峰化学试剂有限公司;AB-8型大孔树脂购自天 津波鸿树脂有限公司；乙腊为HPLC级，购于TEDIA;甲酸为HPLC级，购于TEDIA;色谱用纯净水 为哇哈哈纯净水。
[0032] 制备方法:将8. Okg干燥愉白皮和2. Okg干燥党参混合粉碎，用90%乙醇热回流提 取3次，每次提取2小时，每次用95%乙醇25L，合并提取液，浓缩至无醇味(4L);浓缩液依次 用石油酸(化X3次）、乙酸乙醋(化X3次)和水饱和的正下醇(化X3次)萃取，分别得到石油 酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物;正下醇萃取物用AB-8大孔树脂富集，先用10% 乙醇冲洗10个柱体积除去多糖，再用70%乙醇洗脱8个柱体积，收集70%洗脱液，减压浓缩， 喷雾干燥(约225g)。
[0033 ]实施例2:愉白皮提取物②制备(75份愉白皮，25份党参）
[0034] 制备方法:将7 .化g干燥愉白皮和2.化g干燥党参混合粉碎，用90 %乙醇热回流提 取3次，每次提取2小时，每次用95%乙醇25L，合并提取液，浓缩至无醇味(4L);浓缩液依次 用石油酸(化X3次）、乙酸乙醋(化X3次)和水饱和的正下醇(化X3次)萃取，分别得到石油 酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物;正下醇萃取物用AB-8大孔树脂富集，先用10% 乙醇冲洗10个柱体积除去多糖，再用70%乙醇洗脱8个柱体积，收集70%洗脱液，减压浓缩， 喷雾干燥(约225邑）。
[0035] 实施例3:愉白皮提取物③制备(85份愉白皮，15份党参）
[0036] 制备方法:将8.化g干燥愉白皮和1.化g干燥党参混合粉碎，用90%乙醇热回流提 取3次，每次提取2小时，每次用95%乙醇25L，合并提取液，浓缩至无醇味(4L);浓缩液依次 用石油酸(化X3次）、乙酸乙醋(化X3次)和水饱和的正下醇(化X3次)萃取，分别得到石油 酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物;正下醇萃取物用AB-8大孔树脂富集，先用10% 乙醇冲洗10个柱体积除去多糖，再用70%乙醇洗脱8个柱体积，收集70%洗脱液，减压浓缩， 喷雾干燥(约225邑）。
[0037] 实施例4:愉白皮提取物④制备(90份愉白皮，10份党参）
[003引制备方法:将9. Okg干燥愉白皮和1. Okg干燥党参混合粉碎，用90%乙醇热回流提 取3次，每次提取2小时，每次用95%乙醇25L，合并提取液，浓缩至无醇味(4L);浓缩液依次 用石油酸(化X3次）、乙酸乙醋(化X3次)和水饱和的正下醇(化X3次)萃取，分别得到石油 酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物;正下醇萃取物用AB-8大孔树脂富集，先用10% 乙醇冲洗10个柱体积除去多糖，再用70%乙醇洗脱8个柱体积，收集70%洗脱液，减压浓缩， 喷雾干燥(约225邑）。
[0039 ]实施例5:愉白皮提取物⑤制备(70份愉白皮，30份党参）
[0040]制备方法:将7 . Okg干燥愉白皮和3. Okg干燥党参混合粉碎，用90 %乙醇热回流提 取3次，每次提取2小时，每次用95%乙醇25L，合并提取液，浓缩至无醇味(4L);浓缩液依次 用石油酸(化X3次）、乙酸乙醋(化X3次)和水饱和的正下醇(化X3次)萃取，分别得到石油 酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物;正下醇萃取物用AB-8大孔树脂富集，先用10% 乙醇冲洗10个柱体积除去多糖，再用70%乙醇洗脱8个柱体积，收集70%洗脱液，减压浓缩， 喷雾干燥(约225邑）。
[0041 ]实施例6:液相色谱分析
[0042] 供试品溶液配制：取实施例1方法制得的提取物5mg至50mL栋色容量瓶中，加30mL 10%乙腊水溶液超声溶解，冷却至室溫后，继续加10%乙腊水溶液定容。分析方法如下：
[0043] 高效液相色谱仪:Agilent 1260,二元累；
[0044] 色谱柱:Agilent TC C18柱(4.6mmX250mm，5皿）；
[0045] 流动相:A为乙腊，B为0.1%甲酸溶液(S乙胺调节pH值至6.0);
[0046] 梯度洗脱程序：0~5min，A35%;5~10min，A35%一70%;10~15min，A70%一 35%;15~20min，A 35%;
[0047] 流动相流速:1. OmL ? min-i;
[004引检测波长：240nm;
[0049]柱溫:30°C;
[(K)加]进样量10化。
[0051] 用制备的10批次的愉白皮提取物进行分析，进行色谱峰匹配，结果1~4号峰在10 批样品色谱图