及其类似物，或它们的组合。此外，所述组合物可包含少量 的助剂例如润湿剂、悬浮剂(纤维素衍生物，包括羟丙基纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素、 各种环糊精，及其类似物)、或乳化剂(例如聚山梨酯，包括聚山梨酯80(TWEEN_0)、聚山梨酯 20 (TWEEN? 20 )、山梨糖醇酯(SpanS)、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、油酸、D-α-生育酚聚乙二 醇10 0 0琥珀酸酯（TPGS )、泊咯沙姆4 0 7、以及各种专用洗涤剂，例如L^BRASOL其、 GELUC削 C仙M紐微教、.3肋?.、SOLUTO'LS.?、LAB狀HLS:?> SOmGENS?、和它们的变体；pH 缓冲剂、及其类似物。
[0067] 针对组合物的口服给药形式，可以添加各种增稠剂、调味品、稀释液、乳化剂、分散 助剂、结合剂、与活性剂的缓释有关的成分、及其类似物。本发明的组合物可以包含任何这 种额外的成分使得能够提供适于给药的组合物形式。该组合物可以配制为食品，例如配制 为可以口服的薄片或"糖果"、饮品（treats)等;和/或配制为通过将它们添加到食品中而给 药，例如添加到调味饮料、饮用水、营养补充剂等中的粉末或结晶体。组合物可配制为用于 快速释放或缓释。配方中活性剂的最终含量可变化。然而，总体上，其在配方中的含量为大 约0.1-99%。可以发现其他适用于本发明的适当配方，例如参见Remington的"药物科学"， 费城，第19版(1995)。
[0068] 本发明的目的是为了避免给药的活性剂的系统前代谢和/或降解。因此，一般通过 口服给药，例如通过吞咽和/或咀嚼或溶解(在口腔)组合物而给药，所述组合物可以是液体 或固体。然而，可以使用任何将活性剂暴露于系统前代谢酶的给药方式。
[0069] 此外，组合物可以和下述其他治疗物质共同给药，例如提高免疫系统的物质、各种 化疗药物、抗癌药物、抗生素及其类似物。其他治疗物质可以组合物的形式给药，所述组合 物和包含类鸦片和抑制剂的组合物是分离的，但是它们能够以相互协调的方式给药，或者 它们可包含在相同的组合物中。
[0070] 本发明的组合物给药针对的个体一般是动物、通常是哺乳动物，以及可以是人类 (例如成人和中年男性和女性。然而，本发明也包含将该技术应用到兽医领域，例如用于宠 物(狗、猫、雪貂、仓鼠等）、牲畜（牛、猪、山羊、绵羊等）、其他具有商业价值的非人类哺乳动 物(马等）、以及保护区域例如动物园、保护地等的动物。本发明的组合物对于上述这些应用 的一部分是理想的，因为本发明的组合物设计为口服给药，从而可被包括在例如动物食品 中。非人类动物可以是青少年或成年期动物。
[0071] 发明人注意到，此处及所附权利要求书中使用的单数形式的"一"、"一种"和"该" 包括复数的指示物，除非上下文中另有指示。发明人进一步注意到权利要求书可以撰写成 排除任何可选的特征。因此，该声明意在作为以下的先行基础:使用与权利要求特征的引用 相关的排除性术语如"单独地"、"仅仅"及类似术语，或使用"否定"的限定。
[0072] 除非另有说明，此处所用的所有的技术和科技术语具有本领域技术人员通常理解 的含义。虽然与此处所述的相似或等同的任何方法和材料也可以用于本发明的实践或测 试，但是现在提供代表性方法和材料的例子
[0073] 应该理解的是，除非上下文另有清楚的指示，否则在本发明提供的一定范围的数 值时，本发明包括所述范围的每个居中值至下限单位的十分之一、所述范围的上限和下限 之间的值、所述范围中其他特定的值或中间值。这些更小范围的上限和下限可独立地包含 在更小的范围内，其也包含在本发明中，符合所述范围内特定排除的限值。当所述范围包括 一个或两个限值时，本发明也包括下述范围，其排除了那些已经包含的限值中的一个或两 个。
[0074] 在对本发明所述的代表性情况进行如下实施例中更细致的描述之前，应该理解本 发明不限于所描述的特定实施方式，其当然可以变型。同样应该理解，此处所用术语仅仅是 为了描述特定情况的目的，而不是意在进行任何限制，因为本发明的范围仅由所附权利要 求来限制。
[0075] 本发明中引用的所有出版物和专利均通过引用的方式包含在此处，相当于每个出 版物或专利被特别地和单独地指明通过引用而包含，以及通过引用包含在此处以公开和描 述所引用出版物相关的方法和/或材料。任何出版物的引用都是为了它在申请日之前公开 的内容，不应该被认为是承认本发明没有先于这些出版物。进一步地，此处提供的出版物日 期可能与实际出版不同。
[0076]在阅读上述公开内容后，对于本领域技术人员显而易见的是所述的每个方面(情 况)和此处的举例具有不连续的成分和特征，其可以容易地和其他方面的特征分开，或与其 他方面的特征相结合，而不背离本发明的范围或精神。任何引用的方法可以所引用的顺序 或逻辑上可行的顺序操作。
[0077]实施方式
[0078] 除非另有说明，下述章节中所述的体外实验均使用高加索人结肠癌LS180细胞进 行。这些细胞在现有技术中被视为人肠细胞培养模型。它们可以表达很宽范围内的药物代 谢酶，这与小肠中发现的那些类似。它们很容易生长并提供可复制的结果。LS180细胞也表 达ATP-结合盒(ABC)转运体(P-糖蛋白、多药耐药性相关蛋白（MRPs)等）。
[0079] 实施例1.抑制剂对丁丙诺啡-葡萄糖苷酸形成在LS180细胞中的影响
[0080] 酚醛类鸦片的口服生物利用度一般较低(例如〈50%)。此外，在不同的病人中，生 物利用度变化很大。虽然也可以观察到氧化和一些硫酸盐化作用，但该变异性主要取决于 广泛的系统前代谢例如葡萄糖苷酸化。
[0081] 人肠细胞(LS180)在微孔板中用添加了10%胎牛血清和1 %非必须氨基酸的杜尔 贝科改良伊格尔培养基(DMEM)中进行培养。在抑制剂(如之前所述（100μΜ))存在或不存在 下，在杜尔贝科磷酸缓冲盐溶液(DPBS)中制备丁丙诺啡（10μΜ)溶液。细胞用DPBS冲洗、送 气，将溶液(37°C)添加到细胞中并培养2小时。通过添加20%的乙腈停止反应并使得蛋白质 沉淀。在冰冻(-80°C)和融化之后，样品离心并通过HPLC采用梯度洗脱(流动相A:乙腈;流动 相B:10% 乙腈、90%水25mM乙酸铵；0-78%A)Alltima HP C18柱（4.6x100 mm，3ym)进行分 析，随后通过焚光（283nm激发、346nm发射)检测，以及使用Waters Empower2软件进行定量。 结果使用Dunnett的事后检验(对照样对抑制剂)通过单因素方差分析；星号表示p〈0.05; n.d.表不未检出。
[0082]图3表明丁丙诺啡-葡萄糖苷酸形成在体外（LS180细胞中）的时间过程，类鸦片丁 丙诺啡的无活性代谢产物通过UGT因丁丙诺啡葡萄糖苷酸化而形成。
[0083]图4A表明了对羟基苯甲酸丙酯、乙基香兰素、丁子香酚、和香兰素均显著降低了丁 丙诺啡葡萄糖苷酸的形成，针对槲皮素、白藜芦醇、或异丁子香酚，不能对丁丙诺啡葡萄糖 苷酸的形成进行定量，因为其未被检出。图4B表明姜油酮、胡椒碱、和乙基香兰素丙二醇缩 醛(EVPGA)均显著降低了丁丙诺啡葡萄糖苷酸的形成，针对姜黄素、紫檀芪、或没食子酸丙 酯，不能对丁丙诺啡葡萄糖苷酸的形成进行定量，因为其未被检出。可以得到对羟基苯甲酸 甲酯的测定，其表明了丁丙诺啡葡萄糖苷酸有降低的趋势。总而言之，对羟基苯甲酸丙酯、 乙基香兰素、丁子香酚、香兰素、槲皮素、白藜芦醇、异丁子香酚、姜油酮、胡椒碱、乙基香兰 素丙二醇缩醛(EVPGA)、姜黄素、紫檀芪、没食子酸丙酯、和对羟基苯甲酸甲酯均能降低丁丙 诺啡葡萄糖苷酸的形成。
[0084] 实施例2.其他抑制剂对丁丙诺啡-葡萄糖苷酸形成在LS180细胞中的影响
[0085] 在存在或不存在如图5A和B所示的抑制剂（100μΜ)的条件下，对细胞进行培养、处 理，样品通过丁丙诺啡（1〇μΜ)如实施例1中所述进行分析。图5Α表明覆盆子酮、厚朴酚、愈创 木酚、α-倒捻子素、和水飞蓟宾均显著降低了丁丙诺啡葡萄糖苷酸的形成，针对松脂醇，不 能对丁丙诺啡葡萄糖苷酸的形成进行定量，因为其未被检出。相比之下，矢车菊素-3-葡萄 糖苷没有显著影响。这些结果表明覆盆子酮、厚朴酚、愈创木酚、α-倒捻子素、水飞蓟宾和松 脂醇降低了丁丙诺啡葡萄糖苷酸的形成。
[0086 ]实施例3.抑制剂组合的协同作用
[0087] 在存在或不存在如下试剂的条件下，对细胞进行培养、处理，样品通过丁丙诺啡 (IOyM)如上所述(实施例1)进行分析:香兰素(24μΜ)、异丁子香酚(24μΜ)、没食子酸丙酯（24 μΜ)、香兰素和异丁子香酚(每种12μΜ、或总共12μΜ)、香兰素和没食子酸丙酯(每种12μΜ、或 总共12μΜ)、异丁子香酚和没食子酸丙酯（每种12μΜ、或总共12μΜ)，以及香兰素、异丁子香 酚、和没食子酸丙酯的组合(每种8μΜ、或总共8μΜ)。结果（图5Β)表明这些试剂中的每种均能 显著抑制丁丙诺啡葡萄糖苷酸的形成(Ρ〈〇.05)。虽然香兰素和没食子酸丙酯的组合仅仅是 加和的（产生与两种抑制剂的平均值相等的效果），但其他组合(异丁子香酚和没食子酸丙 酯；香兰素和异丁子香酚;香兰素和异丁子香酚以及没食子酸丙酯）则是协同的（产生比全 部抑制剂的平均值更高的效应）。这些结果表明抑制剂的特定组合在抑制丁丙诺啡葡萄糖 苷酸的形成方面产生了令人出乎意料的协同效应。
[0088] 分配系数是两种溶液之间的非离子化合物的浓度比例。为了测量可电离溶质的分 配系数，调整水相的PH值使得化合物的主要形式是非离子形式。溶剂中非离子溶质的浓度 比例的对数值称为log P:log P值也称为亲油性测量值。
[0089] 图7表明下述抑制剂的IC5q值:异丁子香酚、紫檀芪、槲皮素、白藜芦醇、香兰素、和 a-倒捻子素，相对于计算的Log P值(cLogP;美国化学学会(ACS)SciFinder)的图表。该图表 表明cLogP仅与抑制剂的IC50值低相关，因此，简单的亲油性不足以预测这些化合物抑制丁 丙诺啡的葡萄糖苷酸化的程度。
[0090] 实施例4.酚醛类鸦片:体内进行的检验
[0091]健康的颈静脉插管的雄性大鼠（280_350g)通过口腔喂食的给药丁丙诺啡的剂量 是10mg/kg、纳洛酮2.5mg/kg，该给药在存在或不存在抑制剂的组合的条件下进行。液体配 方是含有如下物质的水自发微乳液/纳米乳液配方（aqueous spontaneous micro/ nano