基纤维素、羟乙基纤维素和羟丙基 纤维素;合成的基于水溶性纤维素的层状成形体，如甲基纤维素和它的羟烷基甲基纤维素 纤维素衍生物，如选自羟乙基甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素和羟丁基甲基纤维素的成员； 其他的纤维素聚合物如羧甲基纤维素钠；以及本领域普通技术人员已知的其他材料。可用 于该目的的其他层压成形材料包括，但不限于聚（乙烯吡咯烷酮）、聚乙烯醇、聚氧化乙烯、 明胶和聚乙烯-吡咯烷酮的混合物、明胶、葡萄糖、糖类、聚维酮、共聚维酮、聚（乙烯吡咯烷 酮)_聚（乙酸乙烯酯)共聚物。
[0162] 尽管针对人类在本文描述了组合物和方法，但它们也适用于动物，例如兽医用途。 因此某些优选的生物体包括，但不限于人、非人灵长类动物、犬、马、猫、猪、有蹄类动物、兔 类动物等。
[0163] 前述的制剂和给药方法意图是说明性的，而不是限制性的。应了解的是，使用本文 提供的教导，可容易地设计出其他合适的制剂和给药模式。
[0164] 为了治疗具有以细胞因子级联为特征的病理(例如，如甲型流感感染的病毒性感 染）的患者，包含贝前列素异构体(例如，贝前列素异构体A(BPS_314d))的组合物的剂量为 有效治疗诸如病毒性疾病的病理的量（"有效量"）和/或有效部分或完全地抑制例如通过诸 如INF-γ和/或CCL2和/或IL-6的促炎性细胞因子的产生而指示的细胞因子级联的量。治疗 剂的有效量可根据给药途径、患者的年龄和重量、被治疗的病症的性质和严重性以及类似 的因素而变化。通过本领域技术人员已知的方法测定有效量，而无需过度实验。在某些实施 方案中，日剂量通常为约〇· 1至约300yg/kg/天或至约200yg/k/天，或者约1至约300yg/k/ 天，当施用于人类患者时，可以将该剂量以单次剂量形式给予，或者一次施用或分为两次或 更多次的日剂量施用。
[0165] 在某些实施方案中，贝前列素可连同其他抗病毒或抗炎症化合物，诸如但不限于 奥司他韦(特敏福?)和扎那米韦(瑞乐沙?)，以共同治疗的形式一起递送。化合物可以以分 开的制剂形式同时或依次地递送至患者，或者它们可被组合并以单一制剂形式递送。
[0166] 无需进一步详述，据信本领域技术人员可使用前面的说明最大程度地利用本发 明。因此，以下具体的实施方案可被理解为说明性的，而不是限制性的。 实施例
[0167] 提供以下的实施例来举例说明，而不是限制所要求保护的发明。
[0168] 实施例1
[0169] 异构体分离
[0170] 原理:
[0171 ]通过使用手性分离方法可实现包含贝前列素的异构体的分离。通过标准色谱方法 可分离贝前列素的两种非对映体，但是将非对映体之一从其相对应的光学异构体分离通常 需要异构体拆分和手性柱。
[0172] 程序:
[0173] 确定没有单根柱能允许所有四种异构体的制备分离，因此确定两步法。在 RegisPack柱上，峰1、峰2和3，以及峰4被拆分。在AD-H柱上，峰2和3被拆分。峰编号基于从用 磷酸钠缓冲液(20mM，pH=7.0)和乙腈的混合物(98:2)的混合物洗脱的手性AGP柱的洗脱顺 序。
[0174] 在手性柱上使用超临界流体色谱法(SFC)实施制备分离。在以下的两步过程中实 施Ig的四种组分混合物形式的贝前列素的分离：（DRegisPack柱(5μηι，30 X 250mm)，用甲醇 和二氧化碳(20:80)的混合物在8(^/111；[11的流速下洗脱并在210111]1下检测 ；（2)40-!1柱（54111， 30 X 250mm)，用甲醇和二氧化碳(20:80)的混合物在80g/min的流速下洗脱并在2IOnm下检 测。异构体A、B、C和D从Ig贝前列素分离为以下的量:分别为23〇11^、20911^、19511^和24〇11^的 A、B、C和D。通过NMR光谱法分析化合物，但是分配基于主要文献（Wakita等人，（2000) Heterocycles，53(5):1085-1110)。
[0175] 实施例2
[0176] NMR分析-基于所分离的异构体的峰分配
[0177] 原理:
[0178] 使用匪R光谱技术实施不同异构体的结构。每个碳上的氢被分配在化合物B和D的 NMR光谱的峰上。
[0179] 程序:
[0180] 使用氘化甲醇作为溶剂对每个异构体获得NMR光谱。所述结果与使用氘化甲醇和 氯仿对异构体A和D以及异构体B和C的非对映混合物获得的NMR光谱有关。氘化氯仿中的光 谱允许与异构体BPS-314和BPS-315报导的相应光谱(Wakita等人，同上)直接比较。
[0181] 结果:
[0182] 基于它们同一的NMR光谱，进行异构体A和D作为对映异构体的分配以及异构体B和 C作为对映异构体的分配。特别重要的峰为与C-18上的氢原子相对应的峰（参见，例如，表 2)。基于与对C-18上的氢原子的峰所公开的数据的相关性，异构体A和D以及异构体B和C对 应于BPS-314 和BPS-315。
[0183]表2贝前列素异构体B和D的峰分配
[0184]
[0185] 实施例3
[0186] 贝前列素异构体在细胞因子释放分析中的相对活性
[0187] 原理:
[0188] 探索化合物抑制促炎性细胞因子从激活的人免疫细胞释放的能力。能抑制细胞因 子释放的化合物在流感的动物模型中应该是有活性的。
[0189] 程序
[0190] 通过IRB批准的捐赠计划从AlICelIs(Emeryvilie ,CA)获得人供体正常外周血单 核细胞(PBMC)。将贝前列素异构体和Po I y r (I: C) (I Omml 2mmg/mL溶液)的溶液加入到96孔 培养微板的孔中。加入新鲜的细胞（I X IO6个细胞)并且在37°C，97%的相对湿度和5%的二 氧化碳下孵育18个小时。分离上清液，并且使用商品化的ELI SA试剂盒测定人TNF-α浓度。使 用Prism用4参数逻辑非线性模型进行统计学分析。
[0191] 结果:
[0192] 通过逻辑模型拟合使用贝前列素和贝前列素异构体A至D于被Poly r(I:C)激活的 人PBMC中对TNF-α产生的抑制(表3)。
[0193] 表3.由贝前列素的个别异构体和贝前列素降低来自人PBMC的细胞因子释放的EC50 值
[0195] 实施例4
[0196] 在小鼠致死攻击流感模型中贝前列素的异构体A优越性的证明-增加存活
[0197] 原理:
[0198] 在小鼠致死攻击流感模型中，将小鼠暴露于流感病毒的致死剂量。通常受感染的 动物4-8天死亡，在该剂量下第8天实现90-100%的死亡率。肺部严重地发炎并且显示出极 度的肺实变。调整免疫系统将减少发炎，限制肺实变并增加存活。
[0199] 程序:
[0200] 在鼠致死攻击流感模型中，小鼠接种病毒并且大约4小时后开始治疗。每日监测小 鼠并记录存活动物的数量。
[0201] 病毒:
[0202] 从St · Jude Hospital ,Memphis，TN的Robert Webster博士处获得甲型流感/鸭/ MN/1525/81(H5N1)。通过小鼠传代病毒，直至能够在动物中诱导肺炎相关的死亡的程度 (Barnard(2009)Antiviral Res .82(2) :A110-122·)。经鼻施用的病毒剂量为IX IO5CCID5O0
[0203] 动物:
[0204] 从Charles River Laboratories(Wilmington，MA)获得 17_20g雌性BALB/c小鼠用 于该项研究。将它们饲养在Wayne Lab Blox并且任意饮水。在使用之前将它们隔离24小时。
[0205] 实验设计:
[0206] 在即将病毒暴露之前的0小时处，一天两次对15只小鼠的组以1.6mg/kg/天施用 GP-1001，或以0.8mg/kg/天腹膜内（i .p.)施用于PSS中稀释的四种异构体之一，持续10天 (bid X 10)。在即将病毒暴露之前，一天两次(bid)对15只小鼠以75mg/kg/天腹膜内给予利 巴韦林，持续5天。间隔8小时给予剂量。此外，使用上文所述的治疗方案，20只小鼠通过腹膜 内途径接受PSS。
[0207] 存活分析:
[0208] 使用Kaplan-Meier方法和Logrank检验进行存活分析。该分析揭示了治疗组之间 的显著差异。因此，通过Gehan-Breslow-Wi Icoxon检验分析存活曲线的成对比较(PSS相对 于任何治疗），并且将相对显著性调节至Bonferroni修正的所完成的治疗比较数目的显著 性阈值。
[0209] 实验室动物的伦理规范
[0210]依据犹他州立大学的动物保护和利用管理委员会并依据其批准来进行该研究。该 工作在犹他州立大学的AAALAC认证的实验室动物研究中心进行。于1986年2月10日授予最 初认证并且维持至今(最近更新时间：2011年9月24日）。动物福利保证号为A3801-01，并且 国立卫生研究院于2011年6月8日根据实验室动物保护和使用的国立卫生研究院指南(2010 版本)最后审核并于2014年2月28日期满。
[0211] 结果:
[0212] 表4中显示存活数据和平均死亡天数(MDD)
[0213]表4.贝前列素的个别异构体和贝前列素的存活数据和平均死亡天数(MDD)。
[0215] 实施例5
[0216] 在小鼠致死攻击流感模型中贝前列素的异构体A优越性的证明-感染后6天的小鼠 重量的降低
[0217] 原理:
[0218] 个别小鼠的重量是动物整体健康的指示，并且用作鼠致死攻击流感模型的端点。
[0219] 程序:
[0220] 在治疗之前并且其后每天分别称重小鼠，直到病毒暴露后21天或直到动物死亡以 评估各治疗对减缓由于病毒性感染而重量减轻的效果。
[0221] 结果:
[0222]表5中总结了数据。
[0223]表5.病毒性感染后并用贝前列素异构体A-D、贝前列素和安慰剂处理后第6天的按 照起始重量(约19g)百分比的动物重量减轻。
[0225] NS =不显著
[0226] 实施例6
[0227] 在小鼠致死攻击流感模型中贝前列素的异构体A优越性的证明-第6天的肺重量和 分数
[0228] 原理:
[0229] 肺重量和肺分数是测定肺当前病况的灵敏方法。一旦感染，细胞进入肺部并且肺 部充满液体。因此，可使用肺重量测定肺的炎症状态。重量越大，炎症越严重。
[0230] 程序:
[0231] 第6天，使来自各组的5只小鼠人道地安乐死以收集肺，用于肺重量和肺分数的测 定。取每只鼠的肺叶，称重，放入有盖培养皿中，然后分配给从〇(正常表现的肺)至4(100% 的肺中的最大紫红色着色）的分数。
[0232] 使用Kruskal-Wal