症中的细胞凋亡和多种器官功能障碍。
[0105] "分离的"是指已经从其来源纯化的或已经通过重组或合成方法制备并纯化的分 子。纯化核苷酸基本上不含其它核苷酸或碱基。
[0106] 本文中"基本上不含"是指其它来源核苷酸的污染少于约5%、通常少于约2%、更 通常少于约1 %、甚至更通常少于约0.5 %、最通常少于约0.1 %。"基本上纯的"核苷酸是指 组合物包含基于组合物总重量的至少约90重量％的核苷酸、基于组合物总重量的通常至少 约95重量％、更通常至少约90重量％、甚至更通常至少约95重量％和甚至更通常至少约99 重量％的核苷酸。
[0107] 如在本文所用，"治疗"或"疗法"是指用于获得有益或期望临床结果的方法。为本 发明的目的，有益或期望临床结果包括但不限于，症状缓解、疾病程度减轻、疾病状态稳定 (例如没有恶化）、疾病进展延迟或减缓、疾病状态改善或缓和，和缓解(部分或总体上），无 论是可检测的或不可检测的。"治疗"或"疗法"还可以是指与如果不接受治疗或疗法的期望 存活率相比，存活率延长。因此，"治疗"或"疗法"是意欲改变病症的病理而进行的干预。具 体地，治疗或疗法可以直接预防、减缓或降低细胞退化或损伤的病理，例如在炎性反应中免 疫细胞的病理，或脓毒症中器官细胞的病理、或可以使细胞对其他治疗剂的治疗或疗法更 敏感。
[0108] 术语"治疗有效量"、"有效量"或"足够量"是指当向受试者，包括哺乳动物，例如人 施用时，足以获得期望结果的量，例如有效治疗脓毒症的量。本文所述的试剂的有效量可以 根据因素，例如受试者的疾病状态、年龄、性别和体重而改变。如技术人员所理解，可以调节 剂量或治疗方案以提供最佳治疗反应。
[0109] 此外，受试者治疗方案的治疗有效量可以由单次施用组成，或包括一系列应用。治 疗期的长度取决于各种因素，例如疾病严重度、受试者的年龄、试剂浓度、患者对试剂的反 应性或其组合。还将理解，用于治疗的试剂的有效剂量可以在具体的治疗方案过程中增加 或减少。剂量变化可以通过本领域已知的标准诊断分析产生并变得明显。一方面，本发明的 试剂可以在用常规疗法治疗之前、期间或之后施用，所述常规疗法用于讨论的疾病或病症， 例如脓毒症。
[0110] 如在本文所用，术语"受试者"是指动物界的任何成员，通常是哺乳动物。术语"哺 乳动物"是指分类为哺乳动物的任何动物，包括人、其他高等灵长类、家畜和农畜以及动物 园、运动或宠物动物，例如狗、猫、牛、马、绵羊、猪、山羊、兔等。通常，哺乳动物是人。
[0111] 与一种或多种进一步的治疗剂"组合"施用包括同时（同时发生)施用和任何顺序 的连续施用。
[0112] 如在本文所用，"载体"包括药学上可接受的、在使用的剂量和浓度下对暴露其下 的细胞或哺乳动物无毒的载体、赋形剂或稳定剂。药学上可接受的载体一般是水性PH缓冲 液。药学上可接受的载体的实例包括缓冲液、例如磷酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸;抗氧化 剂，包括抗坏血酸;低分子量(小于约10个残基)多肽;蛋白质，例如血清白蛋白、明胶或免疫 球蛋白；亲水性聚合物，例如聚乙烯吡咯烷酮;氨基酸，例如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、精 氨酸和赖氨酸；单糖、二糖和其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖和糊精；螯合剂，例如 EDTA;糖醇，例如甘露醇和山梨醇；成盐抗衡离子，例如钠;和/或非离子表面活性剂，例如 TWEEN?、聚乙二醇(PEG)和 PLURONICS?。
[0113] "脂质体"是由各种类型的脂质、磷脂和/或表面活性剂组成的小囊泡，其用于将药 物递送至受试者，例如哺乳动物。脂质体的成分一般以双层形式排列，与生物膜的脂质排列 相似。
[0114] 如在本文所用，在理解本申请的范围中，术语"包含"及其衍生体意欲是开放性术 语，其指定所说明的特征、因素、成分、组、整数、和/或步骤的存在，但不排除其他未说明的 特征、因素、成分、组、整数、和/或步骤的存在。以上对具有相似含义的词语同样适用，例如 术语"包括"、"具有"及其衍生体。将理解描述为"包含"某些成分的任何方面也可以"由…… 组成"或"基本上由……组成"，其中"由……组成"具有封闭或限制性含义，"基本上由…… 组成"是指包括指定的成分但除以下之外不包括其他成分:作为杂质存在的物质、作为用来 提供成分的方法结果而存在的不可避免的物质和不是为获得本发明的技术效果的目的而 添加的成分。例如，用短语"基本上由……组成"定义的组合物涵盖任何已知的药学上可接 受的添加剂、赋形剂、稀释剂、载体等。通常，基本上由一组成分组成的组合物将包含少于5 重量％、通常少于3重量％、更通常少于1重量％的非指定成分。
[0115] 将理解，本文定义的包括的任何成分或序列可以通过限制性条款或负面限制明确 地从要求保护的发明中排除。同样，待治疗的受试者或患者可以定义为患有或不患有本文 所述的或技术人员已知的脓毒症的任何症状或结果。
[0116]最后，本文所用的程度术语，例如"基本上"、"约"和"大约"是指该修饰术语的合理 的偏差量，以使最终结果没有明显改变。这些程度术语应当理解为包括至少±5%的该修饰 术语的偏差，如果该偏差没有否定其修饰的词语的含义。
[0117] 越
[0118] "炎性病症"通常由炎性细胞因子级联介导，在本文中炎性细胞因子级联被定义为 受试者中至少一种促炎细胞因子从细胞的体内释放，其中细胞因子释放影响受试者的生理 状况。产生促炎细胞因子的细胞的非限制性实例是单核细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、上 皮细胞、成骨细胞、成纤维细胞、平滑肌细胞和神经元。
[0119] "细胞因子"是哺乳动物细胞天然产生的可溶性蛋白或肽，并且在微摩尔至皮摩尔 浓度下在体内作为体液调节物。无论在正常条件或病理条件下，细胞因子可以调节个体细 胞和组织的功能活性。促炎细胞因子是能引起任何下述炎症相关生理反应的细胞因子:血 管舒张、充血、血管透过性增加伴有相关水肿、粒细胞和单核吞噬细胞的积聚或纤维蛋白的 沉积。促炎细胞因子的非限制性实例是肿瘤坏死因子a(TNF)、白细胞介素(IL)-la、IL-1-i3、 IL-6、IL-8、IL-18、干扰素-γ、HMG-1、血小板活化因子（PAF)和巨噬细胞迀移抑制因子 (MIF)。促炎细胞因子可以介导多种炎性病症的不利状况，例如内毒素性休克、哮喘、风湿性 关节炎、炎性胆汁病、心力衰竭和同种移植物排斥。
[0120]促炎细胞因子应当与不是炎症调节物的诸如IL-4、IL-10和IL-13的抗炎细胞因子 区分开。在某些实例中，本文所述的治疗不抑制抗炎细胞因子的释放。
[0121]在某些实例中，本文所述的治疗抑制TNF的促炎性效应。TNF作为各种炎性病症中 的调节物。几种这类实例包括:脓毒性休克、癌症、AIDS、移植排斥、多发性硬化、糖尿病、风 湿性关节炎、外伤、疟疾、脑膜炎、缺血再灌注损伤和成人呼吸窘迫综合征。
[0122] TNF在数种炎性病症中发挥作用，并且因此进行了关于TNF疗法和抗TNF疗法的研 究。研究集中于在炎性病症以及预防同种异体反应性和移植排斥中抑制TNF活性，所述炎性 病症例如风湿性关节炎、克罗恩氏病、AIDS、细菌脓毒性休克（由某些革兰氏阴性菌引起)和 细菌中毒性休克（由超抗原引起）。缺少TNF的突变小鼠对革兰氏阴性菌诱导的脓毒症具有 抗性（Janeway，C.，Travers，P.，Walport，M.，Capra，J. Immunobiology:The Immune System in Health and Disease.New York，N.Y:Garland Publishers. 1999)，并且抗TNF单克隆抗 体已用于抑制TNF活性和治疗内毒素血症(Beutler等，Science 229;867-871)。控制TNF活 性的治疗的一个优势来自它在多种炎症中的作用。例如，通常难于确定烧伤和外伤受害者 中的炎症是否为感染性病因学的以及抗生素治疗是否合理；因此抑制TNF活性的治疗可能 是有利的。抑制TNF活性的策略包括通过抗TNF抗体、可溶性受体或受体融合蛋白来中和细 胞因子;通过诸如环孢霉素 A、糖皮质激素或细胞因子IL-10的药物来抑制TNF-A合成;通过 重复的低剂量刺激来降低对TNF的反应性;或通过抑制诸如IL-I、IL-6或一氧化氮的次级调 节物。本文所述的试剂可用来抑制TNF活性。
[0123] 炎性病症可以是其中炎性细胞因子级联引起全身性反应，例如全身炎症反应综合 征(SIRS)或脓毒性休克。或者，病症可以由局部炎性细胞因子级联介导，正如在风湿性关节 炎中。可用本文所述的试剂有效治疗的病症的非限制性实例包括阑尾炎、消化性溃疡、胃溃 疡、十二指肠溃疡、腹膜炎、胰腺炎、溃疡性结肠炎、假膜性结肠炎、急性结肠炎、缺血性结肠 炎、憩室炎、会厌炎、失弛缓症、胆管炎、胆囊炎、肝炎、克罗恩氏病、小肠炎、惠普尔氏病、过 敏症、过敏性休克、免疫复合物病、多器官功能障碍综合征(MODS)、器官缺血、再灌注损伤、 器官坏死、枯草热、全身炎症反应综合征(SIRS)、脓毒症、脓毒症、内毒素性休克、恶病质、高 热、嗜酸粒细胞肉芽肿、肉芽肿病、结节病、脓毒性流产、附睾炎、阴道炎、前列腺炎、尿道炎、 支气管炎、肺气肿、鼻炎、肺炎、肺泡炎、细支气管炎、咽炎、胸膜炎、鼻窦炎、流感、呼吸道合 胞体病毒感染、HIV感染、AIDS、乙肝病毒感染、丙肝病毒感染、疱疹病毒感染、弥散性菌血 症、登革热、念珠菌病、疟疾、丝虫病、阿米巴病、棘球囊肿病、烧伤、皮炎、皮肌炎、晒伤、风 疹、疣、风团、血管炎、脉管炎、心内膜炎、动脉炎、动脉粥样硬化、心包炎、心肌炎、心肌缺血、 结节性动脉周围炎、风湿热、阿尔察默病、乳糜泄、充血性心力衰竭、成人呼吸窘迫综合征、 脑膜炎、脑炎、多发性硬化、脑梗死、脑栓塞、格林-巴利综合征、神经炎、神经痛、脊髓损伤、 麻痹、葡萄膜炎、关节炎性疹、关节痛、骨髓炎、筋膜炎、帕哲病、痛风、牙周病、风湿性关节 炎、滑膜炎、重症肌无力、甲状腺炎、系统性红斑狼疮、古德帕斯丘综合征、贝赫切特综合征、 同种异体移植排斥、移植物抗宿主病、I型糖尿病、肥胖症、强直性脊柱炎、伯格氏病、瑞特氏 综合征和何杰金氏病。
[0124] 在某些非限制性实例中，所述炎性病症选自哮喘、过敏症、过敏性休克、多器官功 能障碍综合征(MODS )、器官缺血、缺血-再灌注损伤、器官坏死、SIRS、脓毒症、脓毒症、内毒 素性休克、恶病质、脓毒性流产、弥散性菌血症、烧伤、乳糜泄、充血性心力衰竭、心肌炎、心 肌缺血、成人呼吸窘迫综合征、脑梗死、脑栓塞、脊髓损伤、麻痹、同种异体移植排斥或移植 物抗宿主病。
[0125] 在一个实例中，所述炎性病症是内毒素性休克。在另一个实例中，所述炎性病症是 SIRS。另一个实例中，所述炎性病症是脓毒症。另一个实例中，所述炎性病症是多器官功能 障碍综合征(MODS)。
[0126] 脓毒症
[0127] 脓毒症是对感染的全身炎性反应，并且是重症监护病房中最常见的死因。脓毒症 的死亡率为20-30%，败血性休克的死亡率为40-80% (Angus等，Crit Care Med 2001; 29: 1303-1310)。心肌功能障碍是脓毒性休克的常见并发症(Parrillo等，Ann Intern Med 1990; 113:227-242)。该全身炎性病症是对感染的失调的宿主反应的结果，并且特征为过量 的促炎细胞因子产生。宿主固有免疫反应的起始通过在识别病原相关的分子模式(PAMP)中 细胞膜toll样受体_4(TLR4)的活化所介导。脂多糖（IPS)是革兰氏阴性菌外膜中最主要的 PAMP，并且以CD-14和LPS结合蛋白（LBP)依赖性方式与TLR4结合。通过LPS结合的TLR4活化 起始导致丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的激活和TNF产生的信号通路，其中TNF是重要的细胞 因子并且是脓毒症中器官功能障碍（例如，心脏功能障碍）中起主要作用的因子 (Suffredini等，N Enl J Med 1989;321:280-287;Natanson等，J Exp Med 1989; 169:823-832) 〇
[0128] 如果高度怀疑有感染或已证实有感染并满足下述全身炎症反应综合征（SIRS)标 准中的两条或更多条，则考虑存在脓毒症（Bone RC，Balk RA，Cerra FB，et al(June 1992)·"Definitions for sepsis and organ failure and guidelines for the use of innovative therapies in sepsis.The ACCP/SCCM Consensus Conference Committee.American College of Chest Physicians/Society of Critical Care Medicine".Chest 101(6):1644-55·):
[0129] ?心率>每分钟90次跳动（心动过速）；
[0130] ?体温<36°C(96.8° F)或>38°C(100.4° F)(低体温或发烧）；
[0131] ?呼吸速率>每分钟20次呼吸，或血气Pa⑶2小于32mm Hg(4.3kPa)(由于过度换 气的呼吸急促或低碳酸血症）；
[0132] #白细胞计数<4000个细胞/mm3或>12000个细胞/mm 3( <4 X IO9或>12 X IO9个 细胞/L)，或大于10%带形(未成熟白细胞）；（白细胞减少症、白细胞增多症或杆状核粒细胞 增多症）。
[0133] 发烧和白细增多症是急性期反应的特征，而心动过速通常是血液动力不足的初始 体征。呼吸急促可与由于感染和炎症的增加的代谢应激有关，但是也可以是导致厌氧菌细 胞代谢的开始的灌注不足的体征。
[0134] 对于儿童，按照以下方式修改了SIRS标准(Goldstein B，Giroir B，Randolph A (2005)·〃International pediatric sepsis corsensus conference：definitions for sepsis and organ dysfunction in pediatrics77 .Pediatr Crit Care Med 6(1)：2-8)：
[0135] ?心率 >不存在诸如疼痛和药物施用的刺激的情况下的年龄正常值2倍标准差、 或者不明原因持续升高30分钟至4小时。婴儿中还包括心率 < 不存在迷走神经刺激物、β-受 体阻滞剂或先天性心脏病的情况下的年龄正常值的10个百分点，或不明原因的持续降低超 过30分钟；
[0136] ?经口或经直肠、从Foley导管探头或从中央静脉导管探头获得的体温>38.5°C 或<36°C。在儿科患者中，温度必须异常才能确定为SIRS;
[0137] ?呼吸速率 > 年龄正常值2倍标准差，或需要人工呼吸，但与神经肌肉疾病或施用 麻醉无关；
[0138] ?与化疗无关的白细胞计数相对于年龄升高或降低，或大于10%杆状白细胞+其 它未成熟形式。
[0139] 本领域技术人员应当意识到，在临床环境中必须谨慎解释SIRS标准。存在这些标 准的主要目的是更客观地对危重患者进行分类，以便将来的临床研究可以更严谨且更容易 重复。
[0140] 随着反映临床经验的脓毒症体征和症状的最新列表，一致性定义也在不断演变。 [0141]为了确定为脓毒症，必须有怀疑的或被证实（通过培养、染色或聚合酶链式反应 (PCR))的感染，或具有感染特定的临床综合征。感染的特定证据包括正常情况下无菌液体 (例如尿液或脑脊髓液(CSF))中的WBC、内脏穿孔的证据(腹部X-射线或CT扫描上的游离空 气、急性腹膜炎体征）、符合肺炎的异常的胸部X-射线(CXR)(病灶处混浊)或瘀点、紫癜或爆 发性紫癜。脓毒症更危重的亚类是重度脓毒症(伴有急性器官功能障碍的脓毒症)和脓毒性 休克(伴有难治性低动脉压的脓毒症）。或者，当满足两条或更多条全身炎症反应综合征标 准而没有感染证据时，可将患者简单地诊断为"SIRS"。患有SIRS和急性器官功能障碍患者 可以称为"重度SIRS"。
[0142] 如果患者患有脓毒症并伴有全身灌注不足（器官功能障碍或血清乳酸盐大于 4mmol/dL)的体征，则将他们确定为"重度脓毒症"。其它体征包括少尿和改变的精神状态。 如果患者患有脓毒症并伴有积极液体复苏(通常多至6升或40ml/kg的晶体)之后的血压过 低，则也将他们确定为患有脓毒性休克。
[0143] 终末器官功能障碍的实例包括以下（Abraham E，Singer M(2007) ."Mechanisms of sepsis-induced organ dysfunction77 .Crit.Care Med.35(10)：2408-16)：
[0144] ?肺-急性肺损伤(ALI)(Pa02/Fi02<300)或急性呼吸窘迫综合征(ARDS)(Pa02/ Fi02<200)；
[0145] ?脑-脑病(症状:焦虑、混乱、昏迷）；（病因：缺血、出血、微血栓、微脓疡、多病灶坏 死脑白质病）；
[0146] ?肝脏-蛋白合成功能的破坏：由于不能合成凝血因子而表现为急性进行性凝血 病;代谢功能的破坏:表现为胆红素代谢停止，导致非结合血清胆红素水平(间接胆红素)上 升；
[0147] ?肾脏-少尿和无尿;电解质异常;容量过度负荷；
[0148] ?心脏一收缩性和舒张性心力衰竭，至少部分原因是降低肌细胞功能的细胞因 子;细胞损伤，表现为肌钙蛋白泄露(但实际上未必缺血）。
[0149] microRNA
[0150] 本发明涵盖与miRNA序列相互作用从而调节miRNA的功能和/或活性的试剂。通常， 本文所述的试剂靶向的miRNA序列包括靶向并抑制抗细胞凋亡蛋白表达的任何miRNA，包括 miRNA-15家族的成员，例如mir-15a，、mir-15b、miR-16、miR-195、mir-322/42^PmiR-497 〇 这些miR-15家族成员的序列如下：
[0151] miR-15a：5