吐鲁番锦鸡儿提取物在作为制备治疗肿瘤药物的应用
【专利摘要】本发明涉及中药技术领域，是一种吐鲁番锦鸡儿提取物在作为制备治疗肿瘤药物的应用；该吐鲁番锦鸡儿提取物按下述制备方法得到：第一步，选取吐鲁番锦鸡儿，粉碎后投入提取罐，在温度为70℃至90℃条件下回流提取2次至3次，提取后合并提取液并浓缩至含水量不大于10%，得到吐鲁番锦鸡儿总浸膏；第二步，将吐鲁番锦鸡儿总浸膏加水稀释得稀释液，稀释液用大孔树脂柱吸附。本发明首次公开了吐鲁番锦鸡儿提取物具有显著抗肿瘤细胞的活性，对人类肺腺癌细胞和人类宫颈癌细胞具有较强的抑制作用，说明吐鲁番锦鸡儿提取物对肿瘤有较好的治疗作用，并且本发明为纯中药，无激素，毒副作用小，因此可以安全的用于制备抗肿瘤药物或食品。
【专利说明】
吐鲁番锦鸡儿提取物在作为制备治疗肿瘤药物的应用
技术领域
[0001]本发明涉及中药技术领域，是一种吐鲁番锦鸡儿提取物在作为制备治疗肿瘤药物的应用。
【背景技术】
[0002]恶性肿瘤是严重危害人民生命健康的主要疾病之一，在我国各类疾病死因中已跃居第一位，在我国肿瘤死亡占全部死因的四分之一，被称为“新世纪人类的第一杀手”。为此，恶性肿瘤的预防及诊治研究已成为医学工作者关注的焦点问题。肿瘤的发生和发展与多种因素有关，与机体免疫系统的关系尤为密切，特别是当机体的整体功能低下时，免疫监视减弱，导致肿瘤细胞迅猛增殖和扩散侵害。而当机体免疫功能增强时，肿瘤细胞的生长则受到限制，消除肿瘤与增强机体免疫功能二者同等重要。目前对于恶性肿瘤的治疗，主要以外科手术、放射线治疗、化学治疗等为主。但外科手术只能切除可见肿瘤，对分散的、不可见的癌细胞无法消除;放射疗法在杀死癌细胞的同时也会对正常的细胞造成伤害，不能根除病因，易产生局部复发和远处转移;化疗药物主要是抑制核苷酸生成、干扰基因复制的一些生物免疫制剂，具有严重的毒副作用，选择性差，且严重损害机体免疫功能。因此，目前恶性肿瘤的疗效仍未达到令人满意的效果。近年来，随着肿瘤综合治疗意识的不断提高，中医药在肿瘤治疗中的作用已受到医学界的广泛关注，从天然植物中发掘具有抗肿瘤作用的中药活性成分已成为寻找创新药物的源泉。
[0003]吐鲁番锦鸡儿Caraga/ja为豆科(Leguminosae)锦鸡儿属(CaraganaFabr.)植物，产新疆(伊犁地区、塔里木盆地、吐鲁番盆地)，生于海拔2100米的山坡、河流阶地、峭壁(潘兰，贾新岳，石明辉，贾晓光，力瓦衣丁.买合苏提，郑承剑，陈刚.新疆产四种锦鸡儿的民族植物学调查.中国现代中药，2013，7:578-579.)。吐鲁番锦鸡儿的根具有活血、祛风、利尿、消肿的功效(中国药材公司.《中国中药资源志要》，科学出版社，1994，559.)，但有关吐鲁番锦鸡儿化学成分及药理作用未见报道，并且至今也未见吐鲁番锦鸡儿提取物用于制备治疗肿瘤方面的报道。
【发明内容】
[0004]本发明提供了一种吐鲁番锦鸡儿提取物在作为制备治疗肿瘤药物的应用，克服了上述现有技术之不足，其能有效解决现行治疗肿瘤方法副作用大以及至今也未见吐鲁番锦鸡儿提取物用于治疗肿瘤方面的报道的问题。
[0005]本发明的技术方案是通过以下措施来实现的:一种吐鲁番锦鸡儿提取物在作为制备治疗肿瘤药物的应用。
[0006]下面是对上述发明技术方案的进一步优化或/和改进:
上述吐鲁番锦鸡儿提取物按下述制备方法得到:第一步，选取干燥的吐鲁番锦鸡儿原料，粉碎后投入提取罐，在温度为70°C至90°C条件下用乙醇水溶液回流提取2次至3次，提取后合并提取液并浓缩至含水量不大于10%，得到吐鲁番锦鸡儿总浸膏；第二步，将吐鲁番锦鸡儿总浸膏加水稀释得稀释液，稀释液上样大孔吸附树脂，上样后依次用水和体积百分比为30%至80%的乙醇水溶液洗脱，收集体积百分比为30%至80%乙醇水溶液洗脱液，将其浓缩干燥至含水量不大于10%，得到吐鲁番锦鸡儿提取物。
[0007]上述第一步中，每次回流提取时乙醇水溶液的加入量的体积为吐鲁番锦鸡儿原料质量的8倍至10倍;或/和，每次提取时间为Ih至2h，每次回流提取时乙醇水溶液为体积百分比为40%至90%的乙醇水溶液。
[0008]上述第一步中用乙醇加热提取的温度为80°C。
[0009]上述第一步中回流提取时所用的乙醇溶液的体积浓度为80%。
[0010]上述第二步中，吐鲁番锦鸡儿总浸膏和水按质量比为1:1.5至1:3稀释后得到稀释液。
[0011 ]上述第二步中，水的上样量为稀释液体积的2倍至4倍。
[0012]上述第二步中，体积百分比为30%至80%的乙醇水溶液的上样量为稀释液体积的3
倍至5倍。
[0013]上述大孔吸附树脂为AB-8大孔吸附树脂或D-101大孔吸附树脂或ZTC-1大孔吸附树脂或HPD-100大孔吸附树脂或DA201大孔吸附树脂。
[0014]本发明首次公开了吐鲁番锦鸡儿提取物具有显著抗肿瘤细胞的活性，对人类肺腺癌细胞和人类宫颈癌细胞具有较强的抑制作用，说明吐鲁番锦鸡儿提取物对肿瘤有较好的治疗作用，并且本发明为纯中药，无激素，毒副作用小，因此可以安全的用于制备抗肿瘤药物或食品。
【附图说明】
[0015]附图1为实施例10得到的吐鲁番锦鸡儿提取物对A549、Hela细胞的影响0.001;**Ρ<0.01;*Ρ<0.05)。
[0016]附图2为实施例11得到的吐鲁番锦鸡儿提取物对Α549、HeIa细胞的影响(***Ρ<0.001;**Ρ<0.01;*Ρ<0.05)。
[0017]附图3为实施例12得到的吐鲁番锦鸡儿提取物对A549、Hela细胞的影响0.001;**Ρ<0.01;*Ρ<0.05)。
【具体实施方式】
[0018]本发明不受下述实施例的限制，可根据本发明的技术方案与实际情况来确定具体的实施方式。本发明中所提到各种化学试剂和化学用品如无特殊说明，均为现技术中公知公用的化学试剂和化学用品;本发明中的百分数如没有特殊说明，均为质量百分数;本发明中的水如没有特殊说明，为自来水或纯净水;本发明中的溶液若没有特殊说明，均为溶剂为水的水溶液，例如，盐酸溶液即为盐酸水溶液。本实施例所用的吐鲁番锦鸡儿Caraganaturfanensis为豆科(Leguminosae)锦鸡儿属(Caragana Fabr.)植物，植物采集于新疆乌恰县，晒干备用，作为本发明中的吐鲁番锦鸡儿原料;本发明中的体积质量比的标准为2升配比一公斤的固体物质。
[0019]下面结合实施例及附图对本发明作进一步描述:
实施例1，吐鲁番锦鸡儿提取物在作为制备治疗肿瘤药物的应用。
[0020]实施例2，作为上述实施例的优化，该吐鲁番锦鸡儿提取物按下述制备方法得到:第一步，选取干燥的吐鲁番锦鸡儿原料，粉碎后投入提取罐，在温度为70°C至90°C条件下用乙醇水溶液回流提取2次至3次，提取后合并提取液并浓缩至含水量不大于10%，得到吐鲁番锦鸡儿总浸膏;第二步，将吐鲁番锦鸡儿总浸膏加水稀释得稀释液，稀释液上样大孔吸附树脂，上样后依次用水和体积百分比为30%至80%的乙醇水溶液洗脱，收集体积百分比为30%至80%乙醇水溶液洗脱液，将其浓缩干燥至含水量不大于10%，得到吐鲁番锦鸡儿提取物。
[0021 ]实施例3，作为上述实施例的优化，第一步中，每次回流提取时乙醇水溶液的加入量的体积为吐鲁番锦鸡儿原料质量的8倍至10倍;或/和，每次提取时间为Ih至2h，每次回流提取时乙醇水溶液为体积百分比为40%至90%的乙醇水溶液。
[0022]实施例4，作为上述实施例的优化，第一步中用乙醇加热提取的温度为80°C。
[0023]实施例5，作为上述实施例的优化，第一步中回流提取时所用的乙醇溶液的体积浓度为80%。
[0024]实施例6，作为上述实施例的优化，第二步中，吐鲁番锦鸡儿总浸膏和水按质量比为1: 1.5至1:3稀释后得到稀释液。
[0025]实施例7，作为上述实施例的优化，第二步中，水的上样量为稀释液体积的2倍至4倍。
[0026]实施例8，作为上述实施例的优化，第二步中，体积百分比为30%至80%的乙醇水溶液的上样量为稀释液体积的3倍至5倍。
[0027]实施例9，作为上述实施例的优化，大孔吸附树脂为AB-8大孔吸附树脂或D-101大孔吸附树脂或ZTC-1大孔吸附树脂或HPD-100大孔吸附树脂或DA201大孔吸附树脂。
[0028]实施例10，该吐鲁番锦鸡儿提取物按下述制备方法得到:第一步，选取干燥的吐鲁番锦鸡儿，粉碎后投入提取罐，在温度为80°C条件下用体积浓度为80%乙醇水溶液回流提取3次，乙醇水溶液加入量的体积为吐鲁番锦鸡儿质量的10倍，每次回流提取2h，提取后合并提取液并浓缩至含水量不大于10%，得到吐鲁番锦鸡儿总浸膏;第二步，将吐鲁番锦鸡儿总浸膏和水按质量比为I: 1.5稀释后得到稀释液，稀释液上样AB-8大孔吸附树脂，上样后用稀释液体积3倍的水进行洗脱，然后用稀释液体积4倍的体积百分比为30%、50%和80%的乙醇水溶液洗脱，收集体积百分比为50%乙醇水溶液和80%乙醇水溶液洗脱液，将其混合后浓缩干燥至含水量不大于10%，得到吐鲁番锦鸡儿提取物。
[0029]实施例11，该吐鲁番锦鸡儿提取物按下述制备方法得到:第一步，选取干燥的吐鲁番锦鸡儿，粉碎后投入提取罐，在温度为80°C条件下用体积浓度为80%乙醇水溶液回流提取3次，乙醇水溶液加入量的体积为吐鲁番锦鸡儿质量的10倍，每次回流提取2h，提取后合并提取液并浓缩至含水量不大于10%，得到吐鲁番锦鸡儿总浸膏;第二步，将吐鲁番锦鸡儿总浸膏和水按质量比为1:2稀释后得到稀释液，稀释液上样HPD-100大孔吸附树脂，上样后用稀释液体积2倍的水进行洗脱，然后用稀释液体积5倍的体积百分比为30%、50%和80%的乙醇水溶液洗脱，收集体积百分比为50%乙醇水溶液和80%乙醇水溶液洗脱液，将其混合后浓缩干燥至含水量不大于10%，得到吐鲁番锦鸡儿提取物。
[0030]实施例12，该吐鲁番锦鸡儿提取物按下述制备方法得到:第一步，选取干燥的吐鲁番锦鸡儿，粉碎后投入提取罐，在温度为80°C条件下用体积浓度为80%乙醇水溶液回流提取3次，乙醇水溶液加入量的体积为吐鲁番锦鸡儿质量的10倍，每次回流提取2h，提取后合并提取液并浓缩至含水量不大于10%，得到吐鲁番锦鸡儿总浸膏;第二步，将吐鲁番锦鸡儿总浸膏和水按质量比为1:3稀释后得到稀释液，稀释液上样AB-8大孔吸附树脂，上样后用稀释液体积4倍的水进行洗脱，然后用稀释液体积3倍的体积百分比为30%、50%和80%的乙醇水溶液洗脱，收集体积百分比为50%乙醇水溶液和80%乙醇水溶液洗脱液，将其混合后浓缩干燥至含水量不大于10%，得到吐鲁番锦鸡儿提取物。
[0031 ]吐鲁番锦鸡儿提取物的抗肿瘤药效学实验
1、实验材料
细胞系A549(人类肺腺癌细胞)、Hela(人类宫颈癌细胞)均采购于美国菌种保藏中心(ATCF,Manassas,VA1USA)0
[0032]主要仪器:细胞培养箱、酶标仪(Thermo Scientific)，净化工作台(上海新苗医疗器械)，倒置生物显微镜(厦门Motic公司)。
[0033]DMSO (美国S i gma公司)、乙醇、甲醇、石油醚、乙酸乙酯、二氯甲烷(试剂均为国产分析纯);胎牛血清、0.25%胰蛋白酶、青霉素100U/mL，链霉素100yg/mL(美国Gibco公司产品)，DMEM培养液(Themor公司产品)，MTT(美国Sigma公司)，阿霉素(doxorubicinHOyMC上海源叶生物科技有限公司)。
[0034]2、实验方法
MTT法测试吐鲁番锦鸡儿提取物的活性。
[0035]上述实施例10、实施例11和实施例12得到的吐鲁番锦鸡儿提取物用DMSO溶解，用DMEM培养液稀释至终浓度为12.5、25、50、100、200yg/ml得到待测样品，采用待测样品进行实验。阳性对照物为阿霉素(doxorubicin)，浓度为10μΜ。取对数生长期的A549、Hela细胞，调整细胞悬液浓度为5 X 14个/mL，接种于96孔培养板中，200yL/孔，培养于37°C、5%C02的培养箱内，24h后加入待测样品和阿霉素。分别设空白组、给药组和阳性对照组，每组设3个复孔，待测样品和阿霉素干预24h后每孔加MTT溶液(终浓度为0.5mg/ml)，继续培养4h后吸弃上清液，振摇10 min充分溶解紫色甲臜结晶，经酶标检测仪在570nm波长处测定吸光度OD值，以空白组为细胞存活率100%，抑制率为0，计算各组细胞的抑制率。
[0036]细胞抑制率=(1-药物组OD值/正常对照组OD值)X 100%
实施例10得到的吐鲁番锦鸡儿提取物对A549、Hela细胞显示较强的抑制，如图1所示，10μΜ阿霉素对A549、Hela细胞抑制率分别为84.61%、76.36%，与对照组相比具有显著性差异(**仲<0.001)。10如8/1111的吐鲁番锦鸡儿提取物对4549、拖1&细胞抑制率分别为53.69%、58.52%，与对照组相比具有显著性差异(扑<0.05;*仲<0.01);而50此/1111的吐鲁番锦鸡儿提取物即可显著抑制Hela细胞生长(*P<0.05)。
[0037]实施例11得到的吐鲁番锦鸡儿提取物对A549、Hela细胞显示较强的抑制，如图2所示，1yM阿霉素对A549、Hela细胞抑制率分别为84.61%、76.36%，与对照组相比具有显著性差异(***?<0.001)。100 yg/ml的吐鲁番锦鸡儿提取物对A549、Hela细胞抑制率分别为50.53%、53.27%，与对照组相比具有显著性差异(*P<0.05; #P<0.01)。
[0038]实施例12得到的吐鲁番锦鸡儿提取物对A549、Hela细胞显示较强的抑制，如图3所示。1yM阿霉素对A549、Hela细胞抑制率分别为84.61%、76.36%，与对照组相比具有显著性差异(***?<0.001)。100 yg/ml的吐鲁番锦鸡儿提取物对A549、Hela细胞抑制率分别为42.73%、39.64%，与对照组相比具有显著性差异(*P < 0.05; #P < 0.0I)。
[0039]综上所述，本发明得到的吐鲁番锦鸡儿提取物对A549、Hela细胞有较强的抑制作用，具有显著抗肿瘤细胞的活性，进一步说明吐鲁番锦鸡儿提取物对肿瘤有较好的治疗作用，且本发明为纯中药，无毒副作用，可作为制备抗肿瘤药物或食品。
[0040]以上技术特征构成了本发明的实施例，其具有较强的适应性和实施效果，可根据实际需要增减非必要的技术特征，来满足不同情况的需求。
【主权项】
1.一种吐鲁番锦鸡儿提取物在作为制备治疗肿瘤药物的应用。2.根据权利要求1所述的吐鲁番锦鸡儿提取物在作为制备治疗肿瘤药物的应用，其特征在于吐鲁番锦鸡儿提取物按下述制备方法得到:第一步，选取干燥的吐鲁番锦鸡儿原料，粉碎后投入提取罐，在温度为70°C至90°C条件下用乙醇水溶液回流提取2次至3次，提取后合并提取液并浓缩至含水量不大于10%，得到吐鲁番锦鸡儿总浸膏;第二步，将吐鲁番锦鸡儿总浸膏加水稀释得稀释液，稀释液上样大孔吸附树脂，上样后依次用水和体积百分比为30%至80%的乙醇水溶液洗脱，收集体积百分比为30%至80%乙醇水溶液洗脱液，将其浓缩干燥至含水量不大于10%，得到吐鲁番锦鸡儿提取物。3.根据权利要求2所述的吐鲁番锦鸡儿提取物在作为制备治疗肿瘤药物的应用，其特征在于第一步中，每次回流提取时乙醇水溶液的加入量的体积为吐鲁番锦鸡儿原料质量的8倍至10倍；或/和，每次提取时间为Ih至2h，每次回流提取时乙醇水溶液为体积百分比为40%至90%的乙醇水溶液。4.根据权利要求2或3所述的吐鲁番锦鸡儿提取物在作为制备治疗肿瘤药物的应用，其特征在于第一步中用乙醇加热提取的温度为80°C。5.根据权利要求2或3或4所述的吐鲁番锦鸡儿提取物在作为制备治疗肿瘤药物的应用，其特征在于第一步中回流提取时所用的乙醇溶液的体积浓度为80%。6.根据权利要求2或3或4或5所述的吐鲁番锦鸡儿提取物在作为制备治疗肿瘤药物的应用，其特征在于第二步中，吐鲁番锦鸡儿总浸膏和水按质量比为1: 1.5至1:3稀释后得到稀释液。7.根据权利要求2或3或4或5或6所述的吐鲁番锦鸡儿提取物在作为制备治疗肿瘤药物的应用，其特征在于第二步中，水的上样量为稀释液体积的2倍至4倍。8.根据权利要求2或3或4或5或6或7所述的吐鲁番锦鸡儿提取物在作为制备治疗肿瘤药物的应用，其特征在于第二步中，体积百分比为30%至80%的乙醇水溶液的上样量为稀释液体积的3倍至5倍。9.根据权利要求2或3或4或5或6或7或8所述的吐鲁番锦鸡儿提取物在作为制备治疗肿瘤药物的应用，其特征在于大孔吸附树脂为AB-8大孔吸附树脂或D-101大孔吸附树脂或ZTC-1大孔吸附树脂或HPD-100大孔吸附树脂或DA201大孔吸附树脂。
【文档编号】A61K36/48GK105943593SQ201610457873
【公开日】2016年9月21日
【申请日】2016年6月22日
【发明人】贾晓光, 潘兰, 贾新岳, 石明辉, 秦路平, 李雪征, 贾月梅
【申请人】新疆维吾尔自治区中药民族药研究所