白胡椒抗肿瘤提取物及其组合物的制备方法和医药应用
【专利摘要】本发明属医药技术领域，具体涉及一种维吾尔药白胡椒抗肿瘤有效部位及其组合物的制备方法和其在制备预防及治疗乳腺癌、肝癌、肺癌、胃癌、肠癌、胰腺癌等恶性肿瘤药物中的应用。所述的提取物通过如下方法得到，维吾尔药白胡椒经有机溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用体积比100:2-100:8的石油醚：乙酸乙酯混合溶剂洗脱，继用体积比100：3-100：10的石油醚-乙酸乙酯混合溶剂洗脱，体积比100：3-100：10的石油醚-乙酸乙酯混合溶剂洗脱液干燥即得。
【专利说明】
白胡椒抗肿瘤提取物及其组合物的制备方法和医药应用
技术领域
[0001] 本发明属医药技术领域，具体涉及一种维吾尔药白胡椒抗肿瘤提取物及其组合物 的制备方法和其在制备预防及治疗乳腺癌、肝癌、肺癌、胃癌、肠癌、胰腺癌等恶性肿瘤药物 中的应用。
【背景技术】
[0002] 本品白胡椒为胡椒科植物胡椒Piper nigrum L.的干燥近成熟的果实Fructus Piperis。白胡椒别名有昧履支、浮椒、玉椒，白胡椒有温中下气、消痰解毒的功效。白胡椒主 治寒痰食积、脘腹冷痛、反胃、呕吐清水、泄泻、冷痢、解食物毒，阴虚有火者忌服白胡椒。胡 椒治心下大痛，五脏风冷，风虫牙痛等。现在药理学研究证明白胡椒具有肝癌、肺癌、胃癌、 肠癌、胰腺癌等恶性肿瘤的预防及治疗。
[0003] 但是，对其抗肿瘤的有效成分一直不清楚，本发明通过系统地筛选研究，出人意料 地发现了白胡椒的有效提取部位，可以应用于肿瘤的预防和治疗。
【发明内容】
[0004] 本发明所解决的技术问题是提供一种白胡椒提取物。
[0005] 本发明还提供了以白胡椒提取物为主要活性成分的组合物。
[0006] 本发明同时提供了白胡椒提取物及其组合物的制备和应用。
[0007] 本发明是通过如下技术方案实现的：
[0008] 维吾尔药白胡椒经甲醇或/和水超声提取，提取液浓缩后，用硅胶（SiO2)柱分 离，上样后的硅胶柱，用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂梯度洗脱（石油醚：乙酸乙酯，比例 见表1)，各石油醚：乙酸乙酯比例混合溶剂洗脱液，浓缩，干燥后，利用体外抗肿瘤活性 筛选体系测试其抗肿瘤活性，意外地发现先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙 酸乙酯，100:0-100:8，体积比）洗脱，继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸 乙酯，100:3-100:10，体积比）洗脱，石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯， 100:3-100:10,体积比）洗脱液干燥后，具有显著地抗肿瘤活性；
[0009] 优选地，先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:2,体积比）洗 脱，继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:8,体积比）洗脱，石油醚：乙 酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:8,体积比）洗脱液干燥；，其TLC分析表征如图 1，TLC分析条件：GF 254硅胶板；展开系统：石油醚：乙酸乙酯：丙酮=6 :1 :1(体积比）；显色 方法：香草醛-浓硫酸加热显色。
[0010] 或先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:8,体积比）洗脱，继 用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:10,体积比）洗脱，石油醚：乙酸乙 酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:10,体积比）洗脱液干燥后，具有显著地抗肿瘤活性。 即，抗肿瘤活性的化合物，可以通过以上方法，得到富集，从而与其他杂质类成分分离开。该 活性提取物从未见文献报道，其TLC分析表征如图2, TLC分析条件：GF254硅胶板；展开系 统：石油醚：乙酸乙酯：丙酮=6 :1 :1 (体积比）；显色方法：香草醛-浓硫酸加热显色。
[0011] 具体，发现过程如下：
[0012] 1、白胡椒经甲醇超声提取物的制备
[0013] 取维吾尔药白胡椒20g，经100mL甲醇超声提取15min，提取液浓缩后，得提取物 SN0230A ;再经100mL水超声提取15min，提取液浓缩后SN0230B ;SN0230A和SN0230B共 0· 6696g，留样 0· 0755g。
[0014] 2、石油醚：乙酸乙酯混合溶剂梯度洗脱方法和结果
[0015] 取维吾尔药白胡椒20g，经100mL甲醇超声提取15min，提取液浓缩后，得提取物 SN0230A ;再经100mL水超声提取15min，提取液浓缩后SN0230B ;SN0230A和SN0230B共 0. 6696g，留样0. 0755g。剩余05941g上柱，甲醇溶解，共用甲醇15ml。上硅胶柱色谱，拌样 硅胶lg，空白硅胶5g，玻璃柱内径I. 6cm，石油醚：乙酸乙酯系统梯度洗脱（条件见表1)，柱 体积12. 5ml，每个梯度洗脱100ml，得到，各个浓度提取洗脱液的洗脱物，回收溶剂，即得， 石油醚：乙酸乙酯梯度洗脱提取物，收率见表1，TLC分析结果见图3, TLC分析条件：GF254硅 胶板；展开系统：石油醚：乙酸乙酯：丙酮-6 :1 :1 (体积比）；石油醚：乙酸乙酯：丙酮=3 : 1 :1 (体积比）；显色方法：香草醛-浓硫酸加热显色。
[0016] 表 1
[0019] 3、抗肿瘤活性筛选方法和结果
[0020] 1)实验条件
[0021] a)细胞株信息
[0022] 人乳腺癌细胞株MCF7,购于中国典型培养物保藏中心细胞库。
[0023] b)药品及试剂
[0024] 样品无菌条件下，DMSO溶解配置成母液浓度为100mg/mL，使用时用DMEM培养液稀 释至所需浓度（DMSO < 1%。）。
[0025] RPMI Medium DMEM培养基干粉购于美国GIBCO公司。胎牛血清购于北京元亨圣马 生物技术研究所。Trypsin 1:250、二甲基二苯基四氮唑溴盐（MTT)。
[0026] c)仪器
[0027] CO2培养箱（SANYO,日本）
[0028] 垂直层流洁净工作台（上海上净净化设备有限公司）
[0029] 倒置生物显微镜（重庆光电仪器有限公司）
[0030] 低/高速台式离心机（上海安亭科学仪器厂）
[0031] 电子天平（奥豪斯仪器有限公司）
[0032] 酶标仪（伯乐生命医学产品有限公司）
[0033] 立式压力蒸汽灭菌器（上海申安医疗器械厂）
[0034] 鼓风干燥箱（上海跃进医疗器械厂）
[0035] PH 计（SART0RIUS，德国）
[0036] 2)实验方法和过程
[0037] 人乳腺癌细胞株MCF7以4000/孔的密度铺于96孔板，每孔IOOul，12h后使用。 各组分以DMSO溶解为lOOmg/mL储存液，保存于-20°C待用。铺板后12h，观察细胞汇合率 约为40%，加药，浓度均为100 μ g/mL，每个组分3个复孔。每板细胞设立二个对照组（培 养基+细胞；含〇. 1 % DMSO培养基+细胞），3个空白孔（只有培养基）。加入药物24小 时后，加入20 μ 1四甲基偶氮唑盐化学名为3-(4, 5-二甲基噻唑）-2, 5-二苯基四氮唑溴盐 (3_(4, 5-dimethyl_2thiazolyl)-2, 5-diphenyl-tetrazolium bromide，ΜΤΤ)，继续培养 4 小时。完全弃去上清液，加入100 μ I DMS0,混匀使MTT完全溶解，去气泡。490nm测定OD 值。
[0038]
[0039] 3)实验结果
[0040] 表 2 [0041 ]
[0045] 结果发现：较优的技术方案为：维吾尔药白胡椒经有机溶剂超声提取，提取液浓 缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙 酯，100:2,体积比）洗脱，继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100 :8,体 积比）洗脱，石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100 :8,体积比）洗脱液干燥 后，具有显著地抗肿瘤活性，而其他比例的洗脱部位没有抗肿瘤活性；即，抗肿瘤活性的化 合物，可以通过以上方法，得到富集，从而与其他杂质类成分分离开。该活性提取物从未见 文献报道，该活性提取物从未见文献报道，其TLC分析表征如图1。
[0046] 或维吾尔药白胡椒经有机溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的 硅胶柱，先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:8,体积比）洗脱，继用石 油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:10,体积比）洗脱，石油醚：乙酸乙酯混 合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:10,体积比）100:10洗脱液干燥后，具有显著地抗肿瘤活 性，而其他比例的洗脱部位没有抗肿瘤活性。即，抗肿瘤活性的化合物，可以通过以上方法， 得到富集，从而与其他杂质类成分分离开。该活性提取物从未见文献报道，该活性提取物从 未见文献报道，其TLC分析表征如图2。
[0047] 4、抗肿瘤有效提取物的提取方法研究
[0048] 1)提取溶剂的种类研究
[0049] 分别用甲醇、乙醇、水、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂、乙醇水混合溶剂等 有机溶剂提取，并测试提取物的抗肿瘤活性，结果如下：
[0050] 表 3
[0052] 研究结果表明：提取用有机溶剂可以为甲醇、乙醇、水、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇 水混合溶剂、乙醇水混合溶剂。
[0053] 2)提取溶剂的用量研究
[0054] 分别用1、2、5、10、20、30、40、50倍（重量/体积比）有机溶剂提取，并测试提取物 的抗肿瘤活性，结果如下：
[0055] 表 4
[0056]
[0058] 提取物提取用有机溶剂用量为药材重量的2-50倍（重量/体积比）。
[0059] 3)干燥方法的研究
[0060] 分别用真空干燥法、冷冻干燥法、鼓风干燥、离心干燥、旋蒸干燥法等方法，对得到 的抗肿瘤活性提取物进行干燥，以含水量、TLC、活性测试为指标，发现真空干燥法、冷冻干 燥法、鼓风干燥、离心干燥、旋蒸干燥法适用于对抗肿瘤活性提取物进行干燥，其中，最优为 真空干燥法、冷冻干燥法。
[0061] 维吾尔药白胡椒经有机溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅 胶柱，先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:2,体积比）洗脱，继用石油 醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:8，体积比）洗脱，石油醚：乙酸乙酯混合溶 剂（石油醚：乙酸乙酯，100:8,体积比）洗脱液干燥后，具有显著地抗肿瘤活性，而其他比例 的洗脱部位没有抗肿瘤活性。以上条件最优为先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙 酸乙酯，100:2,体积比）洗脱10倍柱体积，继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸 乙酯，100:8，体积比）洗脱15倍柱体积。
[0062] 维吾尔药白胡椒经有机溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅 胶柱，先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:8,体积比）洗脱，继用石油 醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:10,体积比）洗脱，石油醚：乙酸乙酯混合 溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:10,体积比）洗脱液干燥后，具有显著地抗肿瘤活性，而其他 比例的洗脱部位没有抗肿瘤活性。以上条件最优为先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油 醚：乙酸乙酯，100:8,体积比）洗脱10倍柱体积，继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚： 乙酸乙酯，100:10,体积比）洗脱15倍柱体积其中，
[0063] 1)提取物提取用有机溶剂可以为甲醇、乙醇、水、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混 合溶剂、乙醇水混合溶剂，最优条件为甲醇和95%乙醇。提取物提取用有机溶剂用量为药材 重量的2-40倍（重量/体积比）。
[0064] 2)提取物干燥方法可以为真空干燥法、冷冻干燥法、鼓风干燥、离心干燥、旋蒸干 燥法等，最优为真空干燥法、冷冻干燥法。
[0065] 5.白胡椒抗肿瘤总有效提取物的抗肿瘤活性研究
[0066] 利用各种肿瘤细胞，如肝癌、肺癌、乳腺癌、肠癌、胰腺癌等恶性肿瘤细胞株，分别 测试白胡椒抗肿瘤提取物的抗肿瘤活性，IC 5。结果如下：
[0067] 表5白胡椒抗肿瘤提取物对各种肿瘤细胞的抑制活性
[0069] 因此，我们发现，白胡椒抗肿瘤提取物具备抗肿瘤活性，可望用于各种肿瘤如肝 癌、肺癌、胃癌、肠癌、胰腺癌等恶性肿瘤的预防及治疗。
[0070] 6、白胡椒抗肿瘤有效提取物的组合物及其制备方法研究
[0071] 1)固体分散体
[0073] 制备方法：
[0074] 称取白胡椒提取物和载体聚乙烯吡咯烷酮（PVP)按比例、1:2、1:4、1:6的质量比 分别放入烧杯中，加入无水乙醇，磁力搅拌器搅拌至白胡椒提取物和载体完全溶解，转入旋 蒸仪中出去有机溶剂，干燥，粉碎过80目筛，即得白胡椒提取物PVP包合物。
[0075] 2)环糊精包合物
[0077] 制备方法：
[0078] 将β -环糊精与1~5倍水研匀，加白胡椒提取物（水难溶性的应先溶于少量有 机溶剂中）充分研磨至成糊状物，低温干燥即得。
[0079] 3)分散片处方：
[0081] 制备方法：
[0082] 1.白胡椒提取物淀粉分散体的制备，精密称取白胡椒提取物提取物，加入适量的 十二烷基硫酸钠，用70%的乙醇溶解加入等比例的可溶性淀粉混合均匀后，在70°C的温度 下蒸干，粉碎，过100目筛；
[0083] 2.称取处方量，白胡椒提取物淀粉分散体，交联聚维酮，预胶化淀粉，用70 %乙 醇做湿润剂，边加入边搅拌，制成湿颗粒过14目筛，室温下放置15min后，60°C烘箱烘干 45min，16目筛整粒，加入滑石粉和微分硅胶，混合均匀后，压片。
[0084] 7、白胡椒抗肿瘤有效提取物的检测方法研究
[0085] 我们发现，可以用薄层色谱的方法，很好地检测和标示白胡椒抗肿瘤有效提取物 的特征。见图1
【附图说明】：
[0086] 图1白胡椒MCF7抑制活性提取物的TLC色谱图
[0087] 图2白胡椒MCF7抑制活性提取物的TLC色谱图
[0088] 图3白胡椒得到的化学组分的TLC色谱图
[0089] 色谱条件：GF254硅胶板；展开系统：石油醚：乙酸乙酯：丙酮-6 :1 :1 (体积比）；石 油醚：乙酸乙酯：丙酮=3 :1 :1 (体积比）；显色方法：香草醛-浓硫酸加热显色。
【具体实施方式】
[0090] 以下实施例表示本发明的实用性，本发明不受此限制。
[0091] 实施例1 :
[0092] 取维吾尔药白胡椒20g，经100mL甲醇超声提取15min，再经100mL水超声提取 15min，提取液浓缩合并后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（I. 6cm内径小柱），先用石油 醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:2,体积比）洗脱10倍柱体积，继用石油醚： 乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:8,体积比）洗脱15倍柱体积，石油醚：乙酸乙 酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:8,体积比）洗脱液经回收有机溶剂，真空干燥，即为该 提取物，收率1.22%。
[0093] 实施例2 :
[0094] 取维吾尔药白胡椒20g，经100mL乙醇超声提取15min，再经100mL水超声提取 15min，提取液浓缩合并后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（I. 6cm内径小柱），先用石油 醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:2,体积比）洗脱10倍柱体积，继用石油醚： 乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:8,体积比）洗脱15倍柱体积，石油醚：乙酸乙 酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:8,体积比）洗脱液经回收有机溶剂，冷冻干燥，即为该 提取物，收率1.03%。
[0095] 实施例3 :
[0096] 取维吾尔药白胡椒20g，经100mL丙酮超声提取15min，再经100mL水超声提取 15min，提取液浓缩合并后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（I. 6cm内径小柱），先用石油 醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:2,体积比）洗脱10倍柱体积，继用石油醚： 乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:8,体积比）洗脱15倍柱体积，石油醚：乙酸乙 酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:8,体积比）洗脱液经回收有机溶剂，鼓风干燥，即为该 提取物，收率0.99%。
[0097] 实施例4 :
[0098] 取维吾尔药白胡椒20g，经100mL氯仿超声提取15min，再经100mL水超声提取 15min，提取液浓缩合并后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（I. 6cm内径小柱），先用石油 醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:2,体积比）洗脱10倍柱体积，继用石油醚： 乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:8,体积比）洗脱15倍柱体积，石油醚：乙酸乙 酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:8,体积比）洗脱液经回收有机溶剂，离心干燥，即为该 提取物，收率0.87%。
[0099] 实施例5 :
[0100] 取维吾尔药白胡椒20g，经100mL乙酸乙酯超声提取15min，再经100mL水超声提 取15min，提取液浓缩合并后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（I. 6cm内径小柱），先用石油 醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:2,体积比）洗脱10倍柱体积，继用石油醚： 乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:8,体积比）洗脱15倍柱体积，石油醚：乙酸乙 酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:8,体积比）洗脱液经回收有机溶剂，旋蒸干燥，即为该 提取物，收率0.90%。
[0101] 实施例6:
[0102] 取维吾尔药白胡椒20g，经100mL甲醇水混合溶剂（甲醇：水=1:1)超声提取 15min，再经100ml水超声提取15min，提取液浓缩合并后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱 (I. 6cm内径小柱），先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:2,体积比）洗 脱10倍柱体积，继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:8,体积比）洗脱 15倍柱体积，石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:8,体积比）洗脱液经回 收有机溶剂，冷冻干燥，即为该提取物，收率1. 06%。
[0103] 实施例7 :
[0104] 取维吾尔药白胡椒20g，经100mL乙醇水混合溶剂（乙醇：水=1:1)超声提取 15min，再经100ml水超声提取15min，提取液浓缩合并后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱 (I. 6cm内径小柱），先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:2,体积比）洗 脱10倍柱体积，继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:8,体积比）洗脱 15倍柱体积，石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:8,体积比）洗脱液经回 收有机溶剂，真空干燥，即为该提取物，收率0. 98%。
[0105] 实施例8 :
[0106] 取维吾尔药白胡椒20g，经100mL乙醇水混合溶剂（乙醇：水=90:10)超声提取 15min，再经100ml水超声提取15min，提取液浓缩合并后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱 (I. 6cm内径小柱），先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:2,体积比）洗 脱10倍柱体积，继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:8,体积比）洗脱 15倍柱体积，石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:8,体积比）洗脱液经回 收有机溶剂，冷冻干燥，即为该提取物，收率1. 12%。
[0107] 实施例9 :
[0108] 取维吾尔药白胡椒20g，经100mL甲醇超声提取15min，再经100mL水超声提取 15min，提取液浓缩合并后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（I. 6cm内径小柱），先用石油 醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:8，体积比）洗脱20倍柱体积，继用石油醚： 乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:10，体积比）洗脱30倍柱体积，石油醚：乙酸乙 酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:10,体积比）洗脱液经回收有机溶剂，真空干燥，即为 该提取物，收率0.018%。
[0109] 实施例10 :
[0110] 取维吾尔药白胡椒20g，经100mL乙醇超声提取15min，再经100mL水超声提取 15min，提取液浓缩合并后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（I. 6cm内径小柱），先用石油 醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:8，体积比）洗脱20倍柱体积，继用石油醚： 乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:10，体积比）洗脱30倍柱体积，石油醚：乙酸乙 酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:10,体积比）洗脱液经回收有机溶剂，冷冻干燥，即为 该提取物，收率0.010%。
[0111] 实施例11 :
[0112] 取维吾尔药白胡椒20g，经100mL丙酮超声提取15min，再经100mL水超声提取 15min，提取液浓缩合并后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（I. 6cm内径小柱），先用石油 醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:8，体积比）洗脱20倍柱体积，继用石油醚： 乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:10，体积比）洗脱30倍柱体积，石油醚：乙酸乙 酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:10,体积比）洗脱液经回收有机溶剂，鼓风干燥，即为 该提取物，收率0.008%。
[0113] 实施例12 :
[0114] 取维吾尔药白胡椒20g，经100mL氯仿超声提取15min，再经100mL水超声提取 15min，提取液浓缩合并后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（I. 6cm内径小柱），先用石油 醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:8，体积比）洗脱20倍柱体积，继用石油醚： 乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:10，体积比）洗脱30倍柱体积，石油醚：乙酸乙 酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:10,体积比）洗脱液经回收有机溶剂，离心干燥，即为 该提取物，收率0.007%。
[0115] 实施例13 :
[0116] 取维吾尔药白胡椒20g，经100mL乙酸乙酯超声提取15min，再经100mL水超声提 取15min，提取液浓缩合并后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（I. 6cm内径小柱），先用石油 醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:8，体积比）洗脱20倍柱体积，继用石油醚： 乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:10，体积比）洗脱30倍柱体积，石油醚：乙酸乙 酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:10,体积比）洗脱液经回收有机溶剂，旋蒸干燥，即为 该提取物，收率0.008%。
[0117] 实施例14:
[0118] 取维吾尔药白胡椒20g，经100mL甲醇水混合溶剂（甲醇：水=1:1)超声提取 15min，再经100ml水超声提取15min，提取液浓缩合并后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱 (I. 6cm内径小柱），先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:8,体积比）洗 脱20倍柱体积，继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:10,体积比）洗脱 30倍柱体积，石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:10,体积比）洗脱液经回 收有机溶剂，冷冻干燥，即为该提取物，收率0. 011 %。
[0119] 实施例15 :
[0120] 取维吾尔药白胡椒20g，经100mL乙醇水混合溶剂（乙醇：水=1:1)超声提取 15min，再经100ml水超声提取15min，提取液浓缩合并后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱 (I. 6cm内径小柱），先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:8,体积比）洗 脱20倍柱体积，继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:10,体积比）洗脱 30倍柱体积，石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:10,体积比）洗脱液经回 收有机溶剂，真空干燥，即为该提取物，收率0. 010%。
[0121] 实施例16 :
[0122] 取维吾尔药白胡椒20g，经100mL乙醇水混合溶剂（乙醇：水=90:10)超声提取 15min，再经100ml水超声提取15min，提取液浓缩合并后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱 (I. 6cm内径小柱），先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:8,体积比）洗 脱20倍柱体积，继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:10,体积比）洗脱 30倍柱体积，石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:10,体积比）洗脱液经回 收有机溶剂，冷冻干燥，即为该提取物，收率0. 013%。
[0123] 实施例17 :
[0124] 取维吾尔药白胡椒20g，经100mL甲醇超声提取15min，再经100mL水超声提取 15min，提取液浓缩合并后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（I. 6cm内径小柱），先用石油 醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:2，体积比）洗脱20倍柱体积，继用石油醚： 乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:8,体积比）洗脱40倍柱体积，石油醚：乙酸乙 酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:8,体积比）洗脱液经回收有机溶剂，真空干燥，即为该 提取物，收率1.29%。
[0125] 实施例18 :
[0126] 取维吾尔药白胡椒20g，经100mL乙醇超声提取15min，再经100mL水超声提取 15min，提取液浓缩合并后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（I. 6cm内径小柱），先用石油 醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:2，体积比）洗脱20倍柱体积，继用石油醚： 乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:8,体积比）洗脱40倍柱体积，石油醚：乙酸乙 酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:8,体积比）洗脱液经回收有机溶剂，冷冻干燥，即为该 提取物，收率1. 18%。
[0127] 实施例19 :
[0128] 取维吾尔药白胡椒20g，经100mL丙酮超声提取15min，再经100mL水超声提取 15min，提取液浓缩合并后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（I. 6cm内径小柱），先用石油 醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:2，体积比）洗脱20倍柱体积，继用石油醚： 乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:8,体积比）洗脱40倍柱体积，石油醚：乙酸乙 酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:8,体积比）洗脱液经回收有机溶剂，鼓风干燥，即为该 提取物，收率1.09%。
[0129] 实施例20:
[0130] 取维吾尔药白胡椒20g，经100mL氯仿超声提取15min，再经100mL水超声提取 15min，提取液浓缩合并后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（I. 6cm内径小柱），先用石油 醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:2，体积比）洗脱20倍柱体积，继用石油醚： 乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:8,体积比）洗脱40倍柱体积，石油醚：乙酸乙 酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:8,体积比）洗脱液经回收有机溶剂，离心干燥，即为该 提取物，收率1.06%。
[0131] 实施例21:
[0132] 取维吾尔药白胡椒20g，经100mL乙酸乙酯超声提取15min，再经100mL水超声提 取15min，提取液浓缩合并后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（I. 6cm内径小柱），先用石油 醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:2，体积比）洗脱20倍柱体积，继用石油醚： 乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:8,体积比）洗脱40倍柱体积，石油醚：乙酸乙 酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:8,体积比）洗脱液经回收有机溶剂，旋蒸干燥，即为该 提取物，收率1.08%。
[0133] 实施例22:
[0134] 取维吾尔药白胡椒20g，经100mL甲醇水混合溶剂（甲醇：水=1:1)超声提取 15min，再经100ml水超声提取15min，提取液浓缩合并后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱 (I. 6cm内径小柱），先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:2,体积比）洗 脱20倍柱体积，继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:8,体积比）洗脱 40倍柱体积，石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:8,体积比）洗脱液经回 收有机溶剂，冷冻干燥，即为该提取物，收率1. 11 %。
[0135] 实施例23:
[0136] 取维吾尔药白胡椒20g，经100mL乙醇水混合溶剂（乙醇：水=1:1)超声提取 15min，再经100ml水超声提取15min，提取液浓缩合并后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱 (I. 6cm内径小柱），先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:2,体积比）洗 脱20倍柱体积，继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:8,体积比）洗脱 40倍柱体积，石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:8,体积比）洗脱液经回 收有机溶剂，真空干燥，即为该提取物，收率1. 11 %。
[0137] 实施例24:
[0138] 取维吾尔药白胡椒20g，经100mL乙醇水混合溶剂（乙醇：水=90:10)超声提取 15min，再经100ml水超声提取15min，提取液浓缩合并后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱 (I. 6cm内径小柱），先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:2,体积比）洗 脱20倍柱体积，继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:8,体积比）洗脱 40倍柱体积，石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:8,体积比）洗脱液经回 收有机溶剂，冷冻干燥，即为该提取物，收率1. 14%。
[0139] 实施例25 :固体分散体
[0140] 称取白胡椒提取物和载体聚乙烯吡咯烷酮（PVP)按比例、1:2、1:4、1:6的质量比 分别放入烧杯中，加入无水乙醇，磁力搅拌器搅拌至白胡椒提取物和载体完全溶解，转入旋 蒸仪中除去有机溶剂，干燥，粉碎过80目筛，即得白胡椒提取物PVP包合物。
[0141] 实施例26:环糊精包合物
[0142] 将β-环糊精与1~5倍水研匀，加白胡椒提取物（水难溶性的应先溶于少量有 机溶剂中）充分研磨至成糊状物，低温干燥即得。
[0143] 实施例27 :分散片
[0144] 1.称取干燥的白胡椒提取物，加入适量的十二烷基硫酸钠，使用70 %的乙醇充分 溶解，加入水溶性淀粉与白胡椒提取物（1 :1)，搅拌混合均匀，在70°c下干燥，粉碎，过100 目筛，得白胡椒提取物分散体。
[0145] 2.精密称取处方量，白胡椒提取物分散体，交联聚维酮，可压性淀粉，用70%乙醇 做湿润剂，边加入边搅拌，14目筛制成湿颗粒，室温下放置15min后，70°C烘箱烘干45min， 16目筛整粒，加入滑石粉和微分硅胶，混合均匀后，压片。
【主权项】
1. 一种维吾尔药白胡椒提取物，其特征为，维吾尔药白胡椒经有机溶剂超声提取，提 取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用体积比100:2-100:8的石油醚：乙酸乙 酯混合溶剂洗脱，继用体积比100 :3-100 :10的石油醚-乙酸乙酯混合溶剂洗脱，体积比 100 :3-100 :10的石油醚-乙酸乙酯混合溶剂洗脱液干燥即得。2. 如权利要求1所述的维吾尔药白胡椒提取物，其特征为，维吾尔药白胡椒经有机溶 剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用体积比100:2的石油醚： 乙酸乙酯混合溶剂洗脱，继用体积比100 :8的石油醚-乙酸乙酯混合溶剂洗脱； 或先用体积比100:8的石油醚：乙酸乙酯混合溶剂洗脱，继用体积比100 :10的石油 醚-乙酸乙酯混合溶剂洗脱体积比100 :1〇的石油醚-乙酸乙酯混合溶剂洗脱。3. 如权利要求1或2所述的维吾尔药白胡椒提取物，其特征为，提取用溶剂为甲醇、乙 醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂或乙醇水混合溶剂，优选甲醇或95%乙醇。4. 如权利要求1-3任何一项所述的维吾尔药白胡椒提取物，其特征为，洗脱剂为2-50 倍柱体积。5. 如权利要求1-4任何一项所述的吾尔药白胡椒提取物，其特征为，先洗脱的石油醚： 乙酸乙酯混合溶剂为10倍柱体积，后洗脱的石油醚：乙酸乙酯混合溶剂为15倍柱体积。6. -种药物组合物，其特征在于，包含权利要求1-5任何一项所述的白胡椒提取物和 药学上可接受的载体。7. -种药物制剂，其特征在于，包含权利要求1-5任何一项所述的白胡椒提取物或权 利要求6所述的药物组合物。8. 权利要求1-5任何一项所述的提取物或权利要求6所述的组合物或权利要求7所述 的药物制剂在制备抗肿瘤药物中的应用。9. 如权利要求8所述的应用，其特征为，所述的肿瘤为宫颈癌、乳腺癌、肝癌、肺癌、结 肠癌、胃癌、肠癌或脑胶质瘤。10. 如权利要求1-5任何一项所述的维吾尔药白胡椒提取物，其特征为，用TLC法检测， 其色谱条件为：GF254硅胶板，展开系统：石油醚：乙酸乙酯：丙酮=6 :1 :1，显色方法：香草 醛-浓硫酸加热显色。
【文档编号】A61K36/67GK105982968SQ201510079822
【公开日】2016年10月5日
【申请日】2015年2月15日
【发明人】王金辉, 黄健, 张瑾
【申请人】沈阳药科大学