洗涤剂组合物的制作方法

专利名称：洗涤剂组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及包含提供去污性能提高的内切葡聚糖酶的洗涤剂组合物。本发明还涉及包含内切葡聚糖酶和其他酶联合的洗涤剂组合物。本发明的一个方面涉及用含内切葡聚糖酶的洗涤剂洗涤织物或硬表面的方法。
背景技术：
洗涤方法的重要目的是尽可能完全的将污物从洗涤物体转移到洗涤溶液中以便污物能随洗涤溶液丢弃。仅将洗涤物体上的污物重新分布的洗涤方法显然不尽人意。这样去污性能的评价，即洗涤方法性能的评价必须包括考虑去除洗涤物体上的污物和此污物再次沉淀到洗涤物体上或再次沉淀到用于洗涤方法的设备上。
对一些污物和一些表面来说很难获得满意的去污性能。问题污物包括微粒污物如粘土和碳。
可见的污物经常难于完全洗掉是因为这些污物通过痕量的不可见粘性物质结合或吸附到表面。问题表面包括棉纤维的表面。
为帮助解决此类有问题的污物，洗涤剂制剂可包括抗再沉淀剂。加入抗再沉淀剂以确保以上提到的问题污物一旦与织物分离可以以不再沉淀到干净织物上的方式保持溶解或悬浮于洗涤液体中。
为获得抗再沉淀作用和清洁作用，有人建议在洗涤剂中加入纤维素酶混合物，所述混合物中一种纤维素酶具有抗再沉淀作用，一种纤维素酶具有纤维素降解作用。EP 822 973涉及包含纤维素酶混合物和任选地含有其他酶的洗涤剂组合物。然而，需要具有抗再沉淀作用的酶和其他酶的改进组合，其中所述其他酶为诸如蛋白酶、淀粉酶、半纤维素酶、脂肪酶和果胶酶。
通常使用酶去除增加污物结合的粘性物质。需要污物去除和/或防止污物再沉淀方面提高的酶性能。
发明概述本发明涉及包含抗再沉淀内切葡聚糖酶，即具有抗再沉淀作用的内切葡聚糖酶的洗涤剂组合物。发明者已发现此类含有内切葡聚糖酶的洗涤剂在用于洗涤织物(尤其是洗衣店洗涤)或硬表面(尤其是自动洗盘)时提供便利。
在本发明的上下文中，具有抗再沉淀作用的内切葡聚糖酶的特征在于其在洗涤试验中防止再沉淀的能力。
发明者还发现包含具有抗再沉淀作用的某些内切葡聚糖酶和对阴离子表面活性剂如线性(直链)烷基苯磺酸盐(也称为“LAS”)具有增加的稳定性的某些内切葡聚糖酶的特定联合与现有技术EP 822 973中描述的洗涤剂组合物相比具有优势。例如，需要更少量的酶蛋白以获得需要的清洁和抗再沉淀作用。这可以节约产品。
发明者还发现在还含有其他酶的洗涤剂中包括具有抗再沉淀作用的内切葡聚糖酶具有令人惊讶的优势。
这些其他的酶包括，例如分类为蛋白酶、淀粉酶、β-葡聚糖酶、脂肪酶、半纤维素酶、角质酶(cutinase)、果胶酶和果胶酸裂解酶的酯。
这样第一方面本发明涉及包含内切葡聚糖酶的洗涤剂组合物，其中内切葡聚糖酶选自以下之一(i)具有SEQ ID NO2的1位到773位氨基酸序列的内切葡聚糖酶；(ii)与SEQ ID NO2的1位到773位氨基酸序列具有至少90％同一性的序列的内切葡聚糖酶；或其具有内切葡聚糖酶活性的片段；(iii)通过在此公开的洗涤试验方法表征的内切葡聚糖酶。
第二方面本发明涉及包含阴离子表面活性剂并包含联合有以上定义的内切葡聚糖酶和真菌纤维素酶的洗涤剂组合物，其中所述两种酶在阴离子表面活性剂存在时均稳定。
第三方面本发明涉及含有以上定义的内切葡聚糖酶和一种或多种其他酶的洗涤剂组合物，其中所述的其他酶来自如但不限于蛋白酶、淀粉酶、β-葡聚糖酶、脂肪酶、半纤维素酶、角质酶、果胶酶和果胶酸裂解酶类别。
一方面本发明涉及使用本发明洗涤剂组合物洗涤或清洁织物、硬表面或其他需要清洁的物体的方法。
发明详述本发明涉及包含具有抗再沉淀作用的内切葡聚糖酶的洗涤剂组合物。
有抗再沉淀作用的内切葡聚糖酶根据本发明的具有抗再沉淀作用的内切葡聚糖酶选自以下之一(i)具有SEQ ID NO2中1位到773位氨基酸序列的内切葡聚糖酶；(ii)具有与SEQ ID NO2的1位到773位氨基酸序列至少90％同一性的序列的内切葡聚糖酶；或其具有内切葡聚糖酶活性的片段；(iii)通过以下公开的洗涤试验方法表征的任何内切葡聚糖酶。
在一个优选的实施方案中内切葡聚糖酶来源于芽孢杆菌AA349(DSM12648)，并也在此显示为SEQ ID NO2，或者为与其具有90％同一性的序列。
根据国际承认的用于专利程序的微生物保藏而制定的布达佩斯条约，发明人将来源于希腊的土壤样品中分离的芽孢杆菌AA349菌株保藏于德意志微生物保藏中心(DeutscheSammiung von Mikroorganismen undZellkulturen GmbH)，Mascheroder Weg 1b，D-38124 Braunschweig，德国，保藏日为1999年1月25日，保藏号为DSM 12648。
该保藏物由Novo Nordisk A/S制备，后来转让给Novozymes A/S。
包含阴离子表面活性剂的洗涤剂组合物在优选的实施方案中，本发明涉及包含阴离子表面活性剂的洗涤剂组合物，并涉及以上定义的内切葡聚糖酶和真菌纤维素酶的联合，其中两种酶都在阴离子表面活性剂如LAS存在时稳定。
为本发明的目的，在LAS中稳定的酶通过LAS稳定性试验定义。认为给出至少50％LAS稳定性结果的为对LAS稳定。
洗涤剂一般含有多于一种类型的表面活性剂，例如阴离子表面活性剂和非离子表面活性剂的联合。在优选的实施方案中本发明涉及阴离子表面活性剂和非离子表面活性剂之间的比例(基于重量)＞1∶1，优选地＞1.5∶1的洗涤剂制剂。
这样，在优选的实施方案中本发明涉及这样的洗涤剂组合物，其中(a)内切葡聚糖酶选自下列之一(i)具有SEQ ID NO2的1位到773位氨基酸序列的内切葡聚糖酶；(ii)与SEQ ID NO2的1位到773位氨基酸序列具有至少90％同一性的序列的内切葡聚糖酶；或其具有内切葡聚糖酶活性的片段；(b)纤维素酶选自下列之一(i)具有SEQ ID NO4的1位到299位氨基酸序列的纤维素酶；或者(ii)与SEQ ID NO4的1位到299位氨基酸序列具有至少70％同一性的序列的纤维素酶；或其具有纤维素酶活性的片段；备选地，以上(a)(i)的内切葡聚糖酶来源于芽孢杆菌KSMS237，保藏号为FERM P-16067(专利微生物保藏，国立生命科学和人体技术研究所，Agency of Industrial Science & Industry，Tsukuba-shi，Ibaraki，305日本)，并且在JP 2000210081 A(此处引用作为参考)的SEQ ID NO1的1至824位中显示。
其他备选的纤维素酶为WO 98/12307的实施例8中公开的LAS抗性变体。本发明优选的实施方案包含这些备选纤维素酶与以上(a)的内切葡聚糖酶的联合。
在优选的实施方案中纤维素酶为Thielavia terrestris纤维素酶，优选地为WO 96/29397中SEQ ID NO9和本文中SEQ ID NO4公开的纤维素酶或与其至少70％同一性的纤维素酶。在优选的实施方案中纤维素酶为WO 98/12307的实施例1中公开的Thielavia terrestris变体。
同一性在本发明的上下文中，在两条序列间确定同一性程度，以表明第一条序列与第二条序列的差异。同一性通过GCG程序包中提供的计算机程序GAP来确定。这样，使用Gap GCGv8和下列缺省参数对于蛋白质序列，GAP创建罚分为3.0，GAP延伸罚分为0.1，使用默认得分矩阵。GAP使用Needleman/Wunsch/Sellers方法进行比对。
包含其他酶的洗涤剂组合物多种类型的酶非常常见地包括在洗涤剂制剂中用于洗衣店清洁和硬表面清洁。这些酶的目的之一为降解污物结合物质。这些物质结合或吸附污物或污点到织物或硬表面上。然后降解的物质和结合的污物和污点容易地在洗涤过程中去除。防止了通过污物结合物质而增加的污物再沉淀。
酶作用的物质称为底物。已知酶为“底物特异的”，即每一类酶只能降解一类物质。例如，蛋白酶能降解蛋白质但不能降解淀粉。淀粉酶能降解淀粉但不能降解蛋白质。
因为对洗涤剂制剂重要的污物和污点可含有多种污物结合物质，已开发了用于洗涤剂中的一系列具有不同底物特异性的不同酶。这些酶包括如蛋白酶、淀粉酶、β-葡聚糖酶、脂肪酶、半纤维素酶、角质酶、果胶酶和果胶酸裂解酶。
令人惊讶的是发现本发明的内切葡聚糖酶不为底物特异的，因为所述内切葡聚糖酶与其他酶联合使用时能对广泛的污物和污点提供去污性优势。
本发明的内切葡聚糖酶除包括通过SEQ ID NO 2而说明的酶之外，还包括具有惊人的高抗再沉淀作用的其他内切葡聚糖酶。提供两种试验以描述和鉴定这些酶1)内切葡聚糖酶活性试验和2)抗再沉淀作用试验。为本发明的目的，认为在这些试验中都提供比指定的最小性能更大的酶为具有抗再沉淀作用的内切葡聚糖酶。
这样在优选的实施方案中本发明的内切葡聚糖与淀粉酶共同使用以提供对含有淀粉的污物提高的去污性能。此类淀粉酶包含如细菌或真菌来源的α-或β-淀粉酶。就此而言，包括经化学修饰或遗传修饰的此类淀粉酶突变体。相关α-淀粉酶包括例如GB 1296839中更详细描述的可从芽孢杆菌种，尤其可从地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)的特定株系中获得的α-淀粉酶。相关的可商业购买的淀粉酶包括NatalaseTM、Stainzyme、Duramyl、Termamyl、TermamylTMUltra、Fungamyl和BAN(均可从丹麦Bagsvaerd的Novozymes A/S获得)和RapidaseTM和MaxamylTMP(可从荷兰的DSM获得)。
在优选的实施方案中α-淀粉酶来源于芽孢杆菌菌株NCIB 12289、NCIB 12512、NCIB 12513和DSM 9375。尤其优选的为WO 95/26397的SEQ ID NO 1和2中显示的α-淀粉酶。
在另一个优选的实施方案中α-淀粉酶为如WO 00/60060(于此引用作为参考)中SEQ ID NO2公开的来源于芽孢杆菌DSM 12649的AA560α-淀粉酶。尤其优选的为包括实施例7和8(于此引用作为参考)中公开的AA560变体在内的AA560α-淀粉酶变体。
其他有用的淀粉酶为CGT酶(环糊精葡糖基转移酶，EC 2.4.1.19)，例如那些可从芽孢杆菌属、高温厌氧杆菌属(Thermoanaerobactor)或者高温厌氧芽孢杆菌属(Thermoanaerobacterium)的种中获得的CGT酶。
在另一个优选的实施方案中本发明的内切葡聚糖酶与蛋白酶共同使用以提供对含蛋白质污物提高的去污性能。
此类蛋白酶包含那些动物、植物或微生物来源的蛋白酶。微生物来源的蛋白酶为优选的。就此而论，包括此类蛋白酶的经化学或遗传修饰的突变体。蛋白酶可为丝氨酸蛋白酶，优选碱性微生物蛋白酶或胰蛋白酶样蛋白酶。碱性蛋白酶的例子为枯草杆菌蛋白酶，尤其为那些来源于芽孢杆菌属的枯草杆菌蛋白酶，例如枯草杆菌蛋白酶Novo、枯草杆菌蛋白酶Carlsberg、枯草杆菌蛋白酶309、枯草杆菌蛋白酶147和枯草杆菌蛋白酶168(在WO 89/06279描述)。胰蛋白酶样蛋白酶的例子为胰蛋白酶(例如猪或牛来源的)和WO 89/06270中描述的镰刀菌属(Fusarium)蛋白酶。
相关的可商业购买的蛋白酶包括Primas、Durazym、Everlaseo、Kannasee、Alcalaseo、Savinase和Esperase(均可从丹麦Bagsvaerd的NovozymesA/S获得)，MaxataseTM、MaxacalTM、MaxapemTM和ProperaseTM(可从荷兰的DSM获得)，PurafectTM和PurafectTMOXP(可从Geneneor International，USA获得)，和OpticleanTM和OptimaseTM(可从Solvay Enzymes获得)。
在另一个优选的实施方案中本发明的内切葡聚糖酶与脂肪酶共同使用以提供对含脂肪的污物提高的去污性能。此类脂肪酶包含那些细菌或真菌来源的脂肪酶。就此而论，包括此类脂肪酶的经化学或遗传修饰的突变体。
有用的脂肪酶的例子包括柔毛腐质霉(Humicola lanuginosa)脂肪酶，例如如EP 258 068和EP 305 216中所述；米赫根毛霉(Rhizomucormiehei)脂肪酶，例如如EP 238 023中所述；假丝酵母(Candida)脂肪酶，如南极假丝酵母(C.antarctica)脂肪酶，例如EP 214 761中描述的南极假丝酵母脂肪酶A或B；假单胞菌属(Pseudomonas)脂肪酶，如EP721981中(例如可从保藏号为FERM BP-4772的一种假单胞菌SD705菌株中获得的脂肪酶)，PCT/JP96/00426中，PCT/JP96/00454中(例如青枯假单胞菌(P.solanacearum)脂肪酶)，EP 571 982中或WO 95/14783中(例如门多萨假单胞菌(P.mendocina)脂肪酶)所述假单胞菌属脂肪酶之一，产碱假单胞菌(P.alcaigenes)或类产碱假单胞菌(P.pseudoalcaligenes)脂肪酶，例如如EP 218272中所述，洋葱假单胞菌(P.cepacia)脂肪酶，例如如EP 331 376中所述，施氏假单胞菌(P.stutzeri)脂肪酶，例如如GB 1,372,034中所述，或荧光假单胞菌(P.fluorescens)脂肪酶；芽孢杆菌属脂肪酶，例如枯草芽孢杆菌(B.subtilis)脂肪酶(Dartois等，(1993)Biochemica et Biophysica Acta 1131253-260)，嗜热脂肪芽孢杆菌(B.stearothermophilus)脂肪酶(JP 64/744992)和短小芽孢杆菌(B.pumilus)脂肪酶(WO 91/16422)。
其他潜在的有用脂肪分解酶类型包括角质酶，例如如WO 88/09367中所述的来源于门多萨假单胞菌(Pseudomonas mendocina)的角质酶，或来源于豌豆腐皮镰孢(Fusarium solani f.pisi)的角质酶(例如WO 90/09446中所述)。
适当的商业购买的脂肪酶包括Lipex、Lipase和Lipolase Ultra(可从NovozymesA/S获得)、M1 LipaseTM和LipomaxTM(可从GenencorInc.获得)和Lipase P″Amano″(可从Amano Pharmaceutical Co.Ltd.获得)。商业购买的角质酶包括Genencor Inc.的LumafastTM。
在另一个优选的实施方案中本发明的内切葡聚糖酶与半纤维素酶共同使用以提供对含半纤维素和类似多糖的污物提高的去污性能。此类半纤维素酶包括木聚糖酶、木葡聚糖酶、阿拉伯呋喃糖酶、乙酰木聚糖酯酶、葡糖醛酸糖苷酶、阿魏酸酯酶、香豆酸酯酶、内切半乳聚糖酶、甘露聚糖酶(mannanase)、内切或外切阿拉伯聚糖酶、外切半乳聚糖酶。适当的甘露聚糖酶包括细菌或真菌来源的甘露聚糖酶。包括化学或遗传修饰的突变体。
在优选的实施方案中甘露聚糖酶来源于芽孢杆菌属的菌株，尤其是来源于SEQ ID NO2的31-330位中或WO 99/64619的SEQ ID NO5中公开的芽孢杆菌1633或琼脂粘附芽孢杆菌(Bacillus agaradhaerens)，例如来源于典型DSM 8721菌株。适当的甘露聚糖酶为Novozymes A/S生产的Mannawaye。
这样在优选的实施方案中本发明的内切葡聚糖酶与β-葡聚糖酶(EC3.2.1.6)共同使用以提供对含有β-葡聚糖的污物提高的去污性能。其他优选的β-葡聚糖酶包括地衣多糖酶和昆布多糖酶。
这样在优选的实施方案中本发明的内切葡聚糖酶与果胶水解酶如原果胶酶、果胶酶、多聚半乳糖醛酸酶或果胶酸裂解酶共同使用以提供对果胶污物提高的去污性能。适当的果胶水解酶包括WO 99/27083、WO99/27084、WO 00/55309和WO 02/092741中描述的果胶水解酶。适当的果胶酸裂解酶包括细菌或真菌来源的果胶酸裂解酶。包括化学或遗传修饰的突变体。
在优选的实施方案中果胶酸裂解酶来源于芽孢杆菌属菌株，尤其来源于枯草芽孢杆菌菌株，尤其来源于SEQ ID NO2中公开的枯草芽孢杆菌DSM14218或WO 02/092741的实施例6中公开的所述菌株的变体。
此外，在优选的实施方案中本发明的内切葡聚糖酶与其他酶共同使用以提高对相应污物提高的去污性能，其中所述其他酶为以下类别果胶酸裂解酶(EC 4.2.2.2)、果胶裂解酶(EC 4.2.2.10)、鼠李糖半乳糖醛酸聚糖裂解酶(EC未定义)、内切-1，4-半乳聚糖酶(EC 3.2.1.89)、木葡聚糖酶(EC未定义)、木聚糖酶(EC 3.2.1.8)、阿拉伯聚糖酶(EC 3.2.1.99)、α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶(EC 3.2.1.55)、甘露聚糖内切-1，4-甘露糖苷酶(EC 3.2.1.78)、β-甘露糖苷酶(EC 3.2.1.25)、β-1，3-1，4-葡聚糖酶(EC 3.2.1.73)、鼠李糖半乳糖醛酸聚糖水解酶、外切多聚半乳糖醛酸酶(EC 3.2.1.67)、鼠李半乳糖醛酶(EC未定义)、葡聚糖1，3-β-葡糖苷酶(EC 3.2.1.58)、葡聚糖内切-1，6-β-葡糖苷酶(EC 3.2.1.75)、甘露聚糖内切-1，4-β-甘露糖苷酶(EC 3.2.1.78)、内切-1，4-β-木聚糖酶(EC 3.2.1.8)、纤维素1，4-纤维二糖酶(EC 3.2.1.91)、纤维二糖水解酶(EC 3.2.1.91)、多聚半乳糖醛酸酶(EC 3.2.1.15)、乙酰基和甲基酯酶如鼠李糖半乳糖醛酸聚糖甲基酯酶、鼠李糖半乳糖醛酸聚糖乙酰基酯酶、果胶甲基酯酶(EC 3.1.1.11)、果胶乙酰基酯酶(EC未定义)、木聚糖甲基酯酶、乙酰基木聚糖酯酶(EC 3.1.1.72)、阿魏酰酯酶(EC 3.1.1.73)、肉桂酰基酯酶(EC 3.1.1.73)。
本发明的洗涤剂组合物根据本发明的洗涤剂组合物包含表面活性剂系统，其中表面活性剂可选自非离子和/或阴离子和/或阳离子和/或两性和/或两性离子和/或半极性表面活性剂。
表面活性剂一般以按重量计0.1-60％的水平存在。
表面活性剂优选地配制成与组合物中的酶成分相容。液体或凝胶组合物中的表面活性剂最优选地以如此方式配制使得其提高或至少不降低这些组合物中任何酶的稳定性。
根据本发明使用的优选系统包含在此描述的非离子和/或阴离子表面活性剂中的一种或多种表面活性剂。
烷基酚的聚环氧乙烷、聚环氧丙烷和聚环氧丁烷缩合物适于用作本发明表面活性剂系统的非离子表面活性剂，其中聚环氧乙烷缩合物为优选。这些化合物包括烷基酚的缩合物，其中所述烷基酚具有含有环氧烷烃直链或支链构型中约6到约14个碳原子，优选地约8到约14个碳原子的烷基。在优选的实施方案中，环氧乙烷以每摩尔烷基酚约2到约25摩尔环氧乙烷，更优选地约3到约15摩尔环氧乙烷的量存在。商业购买的此类型非离子表面活性剂包括由GAF Corporation上市的IgepalTMCO-630；和TritonTMX-45、X-114、X-100和X-102，均由Rohm & Haas Company上市。这些表面活性剂一般称为烷基酚烷氧基化合物(例如乙氧烷基酚)。
伯脂族醇和仲脂族醇与约1到约25摩尔氧化乙烯的缩合产物适于用作本发明非离子表面活性剂系统的非离子表面活性剂。脂族醇的烃链可为直的或分枝的，伯或仲并通常含有约8到约22个碳原子。优选的为具有含约8到约20个碳原子，更优选地为含约10到约18个碳原子的烷基的醇与每摩尔醇约2到约10摩尔氧化乙烯的缩合产物。所述的缩合产物中存在每摩尔醇约2到约7摩尔氧化乙烯并且最优选地存在每摩尔醇2-5摩尔氧化乙烯。商业购买的此类型非离子表面活性剂的例子包括TergitolTM15-S-9(C11-C15线性醇与9摩尔氧化乙烯的缩合产物)、TergitolTM24-L-6NMW(C12-C14伯醇与6摩尔氧化乙烯的缩合产物，具有狭窄分子量分布)，均由Union Carbide Corporation上市；Shell Chemical Company上市的NeodolTM45-9(C14-C15线性醇与9摩尔氧化乙烯的的缩合产物)、NeodolTM23-3(C12-C13线性醇与3.0摩尔氧化乙烯的缩合产物)、NeodolTM45-7(C14-C15线性醇与7摩尔氧化乙烯的缩合产物)、NeodolTM45-5(C14-C15线性醇与5摩尔氧化乙烯的缩合产物)，The Procter & Gamble Company上市的KyroTMEOB(C13-C15醇与9摩尔氧化乙烯的缩合产物)和Hoechst上市的Genapol LA 050(C12-C14醇与5摩尔氧化乙烯的缩合产物)。这些产品中优选的HLB范围为8-11并且最优选的为8-10。
同样用作本发明表面活性剂系统的非离子表面活性剂的为U S 4,565,647中公开的烷基多糖，其具有含约6到约30个碳原子，优选地为约10到约16个碳原子的疏水基团和多糖，例如多聚葡糖苷，具有约1.3到约10个，优选地1.3到约3个，最优选地约1.3到约2.7个糖单位的亲水基团。可使用含有5或6个碳原子的任一还原糖，例如葡萄糖、半乳糖和可用葡糖基部分替代的半乳糖基部分(疏水基团任选地与2位-，3位-，4位-等连接从而产生与葡糖苷或半乳糖苷相应的葡萄糖或半乳糖)。糖间键可位于例如另一个糖单位的一个位置和前面的糖单位2-、3-、4-和/或6-位之间。
优选的烷基多糖苷具有下式R2O(CnH2nO)t(糖基)x其中R2选自烷基、烷基苯基、羟烷基、羟烷基苯基和其混合物，其中烷基含有约10-约18个，优选地约12-约14个碳原子；n为2或3，优选地为2；t为0到约10，优选地为0；x为约1.3到约10，优选地为约1.3-约3，最优选地为约1.3-约2.7。糖基优选地来源于葡萄糖。为制备这些化合物，首先形成醇或烷基聚乙氧基醇然后与葡萄糖或葡萄糖来源反应形成葡糖苷(在1-位连接)。其他糖基单位然后可连接到所述糖单位的1-位和前述糖基单位2-位之间所述糖单位2-、3-、4-和/或6-位，优选主要在2-位之间。
氧化丙烯与丙二醇的缩合形成疏水碱与氧化乙烯的缩合产物也适于用作本发明的其他非离子表面活性剂系统。这些化合物的疏水部分优选地具有约1500-约1800的分子量并表现水不溶性。将聚氧乙烯部分加入此疏水部分将要增加分子整体的水溶性，并且产物的液体性质保持在聚氧乙烯含量为缩合产物总重量的约50％，其与用约40摩尔氧化乙烯缩合相对应。此类型化合物的实例包括特定商业购买的BASF上市的PluronicTM表面活性剂。
也适于用作本发明非离子表面活性剂系统的非离子表面活性剂的为氧化丙烯和乙二胺反应得到的产物与氧化乙烯的缩合产物。这些产物的疏水部分由乙二胺和过量氧化丙烯的反应产物组成，并通常具有约2500-约3000的分子量。此疏水部分与氧化乙烯缩合到缩合产物含有聚氧乙烯重量约40-约80％的程度并具有约5,000-约11,000的分子量。此类型非离子表面活性剂的实例包括特定商业购买的BASF上市的TetronicTM化合物。
优选地用作本发明表面活性剂系统的非离子表面活性剂的为烷基酚的聚氧化乙烯缩合物、伯脂肪族醇和仲脂肪族醇与约1-约25摩尔环氧乙烷、烷基多糖的缩合产物和这些缩合物的混合物。最优选的为具有3-15个乙氧基的C8-C14乙氧基化烷基酚和具有2-10个乙氧基化的C8-C18乙氧基醇(优选地平均为C10)和它们的混合物。
高度优选的非离子表面活性剂为下式的多羟基脂肪酸酰胺表面活性剂 其中R1为H或R1为C1-4烃基、2-羟乙基、2-羟丙基或其混合物，R2为C5-31烃基，Z为具有直接与链相连的至少3个羟基的线性烃基链的聚羟基烃基，或其烷氧基化衍生物。优选地，R1为甲基，R2为直C11-15烷基或C16-18烷基或烯基链如椰子烷基或其混合物，Z来源于还原酰胺化反应中的还原糖如葡萄糖、果糖、麦芽糖、或乳糖。
高度优选的阴离子表面活性剂包括硫酸烷氧基化烷基表面活性剂。其实例为式RO(A)mSO3M的水溶性盐或酸，其中R为具有C10-C24烷基组分的未经取代的C10-C24烷基或羟烷基，优选地为C12-C20烷基或羟烷基，更优选地为C12-C18烷基或羟烷基，A为乙氧基或丙氧基单位，m大于0，一般地为约0.5-约0.6之间，更优选地为约0.5-约3之间，并且M为氢或阳离子，其可为例如金属阳离子(例如钠、钾、锂、钙、镁等)、铵、取代铵阳离子。在此预期了硫酸乙氧基烷基和硫酸丙氧基烷基。取代铵阳离子的特定例子包括甲基-、二甲基-、三甲基铵阳离子和季铵阳离子如四甲基铵和二甲基哌啶鎓阳离子和衍生自烷基胺如乙胺、二乙胺、三乙胺、其混合物等等的阳离子。典型的表面活性剂为C12-C18聚乙氧基烷基(1.0)硫酸酯(C12-C18E(1.0)M)、C12-C18聚乙氧基烷基(2.25)硫酸酯(C，2-C，8(2.25)M和C12-C18聚乙氧基烷基(3.0)硫酸酯(C12-C18E(3.0)M)和C12-C18聚乙氧基烷基(4.0)硫酸酯(C12-C18E(4.0)M)，其中M便利地选自钠和钾。
使用的适当阴离子表面活性剂为包括C8-C20羧酸(例如脂肪酸)线性酯的磺酸烷基酯表面活性剂，其中所述C8-C20羧酸酯线性为根据“美国油化学家学会杂志”，52(1975)，323-329页用气态SO3磺化。适当的起始材料包括如衍生自牛羊脂、棕榈油等的天然脂肪物质。
优选的磺酸烷基酯，尤其是用于洗衣店应用的磺酸烷基酯表面活性剂包含下面结构式的磺酸烷基酯表面活性剂 其中R3为C8-C20烃基，优选地为烷基或其联合，R4为C1-C6烃基，优选地为烷基或其联合，M为与磺酸烷基酯形成水溶性盐的阳离子。适当的成盐阳离子包括金属如钠、钾和锂，和取代或未取代的铵阳离子如单乙醇胺、二乙醇胺和三乙醇胺。优选地，R3为C10-C16烷基，并且R4为甲基、乙基或异丙基。尤其优选的为磺酸甲基酯，其中R3为C10-C16烷基。
其他适当的阴离子表面活性剂包括为式ROSO3M的水溶性盐或酸的硫酸烷基表面活性剂，其中所述式ROSO3M中R优选地为C10-C24烃基，优选地为具有C10-C24组分的烷基或羟基，更优选地为C12-C18烷基或羟基，M为氢或阳离子，例如碱金属阳离子(例如钠、钾和锂)或铵或取代铵(例如甲基-、二甲基-和三甲基铵阳离子和季铵阳离子如四甲基铵阳离子和二甲基哌啶输阳离子和衍生自烷基胺如乙胺、二乙胺、三乙胺的季铵阳离子和其混合物等等)。一般地，C12-C16烷基链优选用于较低洗涤温度(例如低于约50℃)并且C16-C18烷基链优选用于较高洗涤温度(例如高于约50℃)。
对去污目的有用的其他阴离子表面活性剂也可包括在本发明的洗衣店洗涤剂组合物中。这些表面活性剂可包括盐皂(包括例如钠、钾、铵和取代铵盐如单乙醇胺盐、二乙醇胺盐和三乙醇胺盐)、C8-C22伯或仲链烷磺酸、C8-C24链烯磺酸、通过碱土金属柠檬酸盐高温分解产物制备的磺酸化多元羧酸，例如如英国专利说明书No.1,082,179中所述，C8-C24烷基聚乙二醇乙醚硫酸盐(含有10摩尔氧化乙烯)；烷基甘油磺酸盐、脂肪酰甘油磺酸盐、脂肪油酰基甘油硫酸盐、烷基酚氧化乙烯醚硫酸盐、石蜡磺酸盐、烷基磷酸盐、羟乙基磺酸盐如酰基羟乙基磺酸盐、N-酰基牛磺酸盐、烷基琥珀酰胺酸盐和磺基丁二酸盐、磺基丁二酸单酯(尤其为饱和或非饱和的C12-C18单酯)和磺基丁二酸二酯(尤其为饱和和非饱和的C6-C12二酯)、酰基肌氨酸盐、烷基多糖硫酸盐如烷基聚葡糖苷硫酸盐(下面描述的非离子非硫酸盐化合物)、分枝伯烷基硫酸盐和烷基聚乙氧基羧酸盐如式RO(CH2CH2O)k-CH2COO-M+的，其中R为C8-C22烷基，k为1-10的整数，M为成可溶性盐阳离子。树脂酸和氢化树脂酸也为适宜的，如松香、氢化松香和松浆油中存在的或衍生的树脂酸和氢化树脂酸。
高度优选的为烷基苯磺酸盐。尤其优选的为线性(直链)烷基苯磺酸盐(LAS)，其中烷基优选地含有10-18个碳原子。
其他例子为“表面活性剂和洗涤剂”(卷I和II，Schwartz、Perrry和Berch)中所述。多种此类表面活性剂也一般地公开于US 3,929,678，中(23栏，58行到29栏，23行，在此引用作为参考)。
当包括在其中时，本发明的洗涤剂组合物一般地包含按重量计约1％-约40％的此类阴离子表面活性剂，优选地包含按重量计约3％-约25％的此类阴离子表面活性剂。
本发明的洗衣店洗涤剂组合物也可含有不同于在此描述的阳离子、兼性、兼性离子和半极性表面活性剂，和非离子和/或阴离子表面活性剂。
适于用于本发明的洗衣店洗涤剂组合物中的阳离子清洁表面活性剂为那些具有一个长链烃基的阳离子清洁表面活性剂。此类阳离子表面活性剂的例子包括铵表面活性剂如卤化烷基三甲基铵和具有式[R2(OR3)y][R4(OR3)y]2R5N+X-的表面活性剂，其中R2为烷基链中具有约8-约18个碳原子的烷基或烷基苄基，每一个R3选自-CH2CH2-、-CH2CH(CH3)-、-CH2CH(CH2OH)-、-CH2CH2CH2-和其混合物；每一个R4选自C1-C4烷基、C1-C4羟基烷基、通过连接两个R4基团形成的苄基环结构、-CH2CHOHCHOHCOR6CHOHCH2OH，其中R6为任何具有低于约1000分子量的己糖或己糖多聚物，和氢(当y不为0时)；R5与R4相同或为烷基链，其中R2加上R5碳原子总数不超过约18；每一个y为0到约10，并且y值总和为0到约15；X为任何适当的阴离子。
高度优选的阳离子表面活性剂为本组合物中有用的水溶性季铵化合物，其通式为R1R2R3R4N+X-(i)其中R1为C8-C16烷基，R2、R3和R4每一个独立地为C1-C4烷基、C1-C4羟基烷基、苄基和-(C2H40)xH，其中x为2-5并且X为阴离子。R2、R3或R4中不多于一个为苄基。
R1优选的烷基链长度为C12-C25，尤其是在烷基为链长混合时，其中所述链长从椰子或棕榈仁油脂衍生或通过链烯烃装配或OXO醇合成而合成地衍生。
R2、R3和R4优选的基团为甲基和羟乙基并且阴离子X可选自卤化物、甲基硫酸盐、乙酸和磷酸离子。
在此使用的式(i)的适宜的季铵化合物的例子为椰子三甲基氯化铵或三甲基溴化铵；椰子甲基二羟乙基氯化铵或溴化铵；癸基三乙基氯化铵；癸基二甲基氯化铵或溴化铵；C12-15二甲基羟乙基氯化铵或溴化铵；椰子二甲基羟乙基氯化铵或溴化铵；豆蔻基三甲基甲基硫酸铵；月桂基二甲基苄基氯化铵或溴化铵；月桂基二甲基(氧乙烯)4氯化铵或溴化铵；胆碱酯(式(i)化合物，其中R1为 烷基且R2R3R4为甲基)二烷基咪唑啉[式(i)化合物]。
在此有用的其他阳离子表面活性剂也在US 4,228,044和EP000 224中描述。
当包括在其中时，本发明的洗涤剂组合物一般地包含按重量计0.2％到约25％的此类阳离子表面活性剂，优选地包含按重量计约1％到约8％的此类阳离子表面活性剂。
兼性表面活性剂也适于用于本发明的洗涤剂组合物中。这些表面活性剂可广义地描述为仲胺或叔胺的脂肪族衍生物，或者杂环仲胺或叔胺的脂族衍生物，其中脂肪基可为直链或支链。脂肪族取代基之一含有至少约8个碳原子，一般地含有约8-约18个碳原子，且至少一个含有阴离子增溶基团，例如羧基、磺酸根和硫酸根。兼性表面活性剂的例子见US 3,929,678(19栏，18-35行)。
当包括在其中时，本发明的洗涤剂组合物一般地包含按重量计0.2％到约15％的此类兼性表面活性剂，优选地包含按重量计约1％到约10％的此类兼性表面活性剂。
兼性离子表面活性剂也适于用于洗涤剂组合物中。这些表面活性剂可广义地描述为仲胺或叔胺的衍生物、杂环仲胺或叔胺的衍生物，或者季铵、季膦或叔锍化合物的衍生物。兼性离子表面活性剂的例子见于US 3,929,678中(19栏38行到22栏48行)。
当包括在其中时，本发明的洗涤剂组合物一般地包含按重量计0.2％到约15％的此类兼性离子表面活性剂，优选地包含按重量计约1％到约10％的此类兼性离子表面活性剂。
半极性非离子表面活性剂是非离子表面活性剂的特殊类别，其包括含有一个烷基部分和两个部分的水溶性氧化胺，其中所述的烷基部分为约10-约18个碳原子并且所述2个部分选自含有约1-约3个碳原子的烷基和羟基烷基；还包括含有一个烷基部分和两个部分的水溶性氧化膦，其中所述的烷基部分为约10-约18个碳原子并且所述2个部分选自含有约1-约3个碳原子的烷基和羟基烷基；和含有一个烷基部分和另一部分的亚砜，其中所述的烷基部分为约10-约18个碳原子并且所述另一部分选自含有约1-约3个碳原子的烷基和羟基烷基。
半极性非离子洗涤剂表面活性剂包括具有下式结构的氧化胺表面活性剂 其中R3为含有约8-约22个碳原子的烷基、羟烷基或烷苯基或其混合物；R4为含有约2-约3个碳原子的烯烃基或羟烯烃基或其混合物；x为0到约3；且每一个R5为含有约1-约3个碳原子的烷基或羟基烷基或含有约1-约3个氧化乙烯基的聚氧化乙烯基。R5基可互相连接形成环结构，例如通过氧原子或氮原子互相连接形成环结构。
这些氧化胺表面活性剂尤其包括C10-C18烷基二甲基氧化胺和C8-C12烷氧基乙基二羟基乙基氧化胺。
当包括在其中时，本发明的洗涤剂组合物一般地包含按重量计约0.2％-约15％的此类半极性非离子表面活性剂，优选地包含按重量计约1％-约10％的此类半极性非离子表面活性剂。
助洗剂系统根据本发明的组合物还可包含助洗剂系统。任何常规助洗剂系统适于在此使用，所述助洗剂包括硅酸铝材料、硅酸盐、聚羧酸和脂肪酸和如乙二胺四乙酸的材料，金属离子螯合剂如氨基聚膦酸盐，尤其是乙二胺四亚甲基膦酸和二乙烯三胺五亚甲基膦酸。虽然磷酸助洗剂由于明显的环境原因较不优选，但是也可在此使用。
适当的助洗剂可为无机离子交换材料，通常为无机水合硅酸铝材料，更尤其地为水合合成沸石如水合沸石A、X、B、HS或MAP。
另一适当的无机助洗剂材料为层状硅酸盐，例如SKS-6(Hoechst)。SKS-6为由硅酸钠(Na2Si2O5)组成的结晶层状硅酸盐。
含有一个羧基的适当聚羧酸包括如比利时专利号831,368、821,369和821,370中公开的乳酸、乙醇酸和其醚衍生物。含有两个羧基的聚羧酸包括DE 2,446,686和2,446,487、US 3,935,257中描述的琥珀酸、丙二酸、(乙二氧基)二乙酸、马来酸、二乙醇酸、酒石酸、羟基丙二酸和延胡索酸的水溶性盐，以及醚羧酸和比利时专利号840,623中描述的亚硫酰基羧酸。含有三个羧基的聚羧酸尤其包括水溶性柠檬酸、乌头酸和柠康酸以及琥珀酸衍生物如英国专利号1,379,241中描述的羧基甲氧基琥珀酸、荷兰申请号7205873中描述的乳氧基琥珀酸和氧基聚羧酸材料如英国专利号1,387,447中描述的2-氧杂-1，1，3-丙烷三羧酸。
含有四个羧基的聚羧酸包括英国专利号1,261,829中公开的氧基二琥珀酸、含硫代取代基的1，1，2，2，-乙烷四羧酸、1，1，3，3-丙烷四羧酸，其包括英国专利号1,398,421和1,398,422和美国3,936,448中公开的硫代琥珀酸衍生物和英国专利号1,082,179中描述的磺酸化热解柠檬酸，而含膦取代基的聚羧酸在英国专利号1,439,000中公开。
脂肪族和杂环聚羧酸包括环戊烷-顺，-顺-顺-四羧酸、环戊二烯五羧酸、2，3，4，5-四氢-呋喃-顺，-顺，-顺-四羧酸、2，5-四氢-呋喃-顺，二羧酸、2，2，5，5，-四氢呋喃-四羧酸、1，2，3，4，5，6-己烷-六羧酸和多元醇如山梨糖醇、甘露醇和木糖醇的羧甲基衍生物。芳香族聚羧酸包括苯六羧酸、苯均四酸和英国专利号1,425,343中公开的酞酸。
以上，优选的聚羧酸为每分子含有三个羧基的羟基羧酸，更尤其为柠檬酸。
用于本发明组合物的优选助洗剂系统包括水溶性硅酸铝助洗剂如沸石A的混合物或层状硅酸盐(SKS-6)和水溶性羧酸螯合剂如柠檬酸的混合物。
包括在根据本发明的洗涤剂组合物中的适当螯合剂为乙二胺-N，N’-二琥珀酸(EDDS)或碱金属、碱土金属、铵或其取代铵盐，或其混合物。优选的EDDS化合物为游离酸形式和其钠盐或镁盐。此类优选EDDS钠盐的例子包括Na2EDDS和Na4EDDS。此类优选EDDS镁盐的例子包括MgEDDS和Mg2EDDS。镁盐为包括在根据本发明的组合物中最优选的。
其他能形成用于颗粒组合物中的助洗剂系统部分的助洗剂材料包括无机材料如碱金属碳酸盐、重碳酸盐、硅酸盐，和有机材料如有机膦酸盐、氨基聚烯烃膦酸盐和氨基聚羧酸盐。
其他适当的水溶性有机盐为均聚或共聚酸或其盐，其中聚羧酸包含至少两个通过不超过两个碳原子相互分开的羧基。
此类型的多聚体公开在GB-A-1,596,756中。此类盐的例子为MW2000-5000的聚丙烯酸盐和其与马来酐的共聚物，此类共聚物具有20,000-70,000的分子量，尤其具有约40,000的分子量。
去污性助洗剂盐通常为组合物重量的5-80％。液体洗涤剂的助洗剂优选的水平为5-30％。
漂白剂可包括在本发明洗涤剂组合物中的其他任选的洗涤剂成分包括漂白剂如过硼酸PB1、PB4和过碳酸盐。这些漂白剂成分可包括一种或多种氧漂白剂并且依赖于所选的漂白剂包括一种或多种漂白激活剂。本氧漂白化合物一般地以约1％-约25％的水平存在。漂白化合物通常为非液体制剂中任选加入的成分，例如颗粒洗涤剂中任选加入的成分。
在此使用的漂白剂成分可为用于洗涤剂组合物中的任何漂白剂，包括氧漂白剂和本领域其他已知的漂白剂。
适于本发明的漂白剂可为活化漂白剂和未活化漂白剂。
一类可使用的氧漂白剂包含过羧酸漂白剂和其盐。此类漂白剂的适当例子包括六水合单过氧邻苯二甲酸镁、间氯过苯甲酸的镁盐、4-壬氨基-4-氧络过氧丁酸和二过氧十二烷二酸。此类漂白剂公开在US4,483,781，EP 0133 354和US 4,412,934中。高度优选的漂白剂也包括US 4,634,551中公开的6-壬氨基-6-氧络过氧己酸。
另一类漂白剂包含卤素漂白剂。低盐漂白剂的例子例如包括三氯异氰尿酸和二氯异氰脲酸钠和二氯异氰脲酸钾和N-氯和N-溴链烷磺酰胺。此类材料通常按完成产品重量的0.5-10％加入，优选地按重量的1-5％加入。此类卤素漂白剂一般较不优选用于酶促洗涤剂中。
过氧化氢释放剂可与漂白激活剂联合使用，所述漂白激活剂为如四乙酰乙二胺(TAED)、壬酰氧基苯磺酸盐(US4,412,934中描述的NOBS)、3，5-三甲基-己醇磺酸盐(EP 120 591中描述的ISONOBS)或者五乙酰葡萄糖(PAG)，其经过过水解以形成如活性漂白种类的过酸，带来提高的漂白作用。此外，非常适合的是漂白激活剂C8(6-辛酰胺-己酰)羟苯磺酸、C9(6-壬酰按己酰)羟苯磺酸和C10(6-癸酰胺己酰)羟苯磺酸或其混合物。也适合的激活剂为如欧洲专利申请号91870207.7中公开的酰化柠檬酸酯。
申请USSN 08/136,626中描述了用于清洁根据本发明的组合物的有用的漂白剂，其包括过氧酸和包含漂白激活剂和过氧漂白化合物的漂白系统。
通过加入在洗涤和/或漂洗过程的开始或进行过程中能产生过氧化氢的酶促系统(例如相应的酶和底物)也可存在过氧化氢。此类酶促系统公开在欧洲专利申请号EP 0 537 381中。
非氧漂白剂的漂白剂也为本领域已知并可在此利用。尤其值得注意的一类非氧漂白剂包括光活化漂白剂如磺代锌和/或铝酞菁。这些材料可在洗涤过程中沉淀在底物上。在氧存在下一旦用光照射，如将衣服挂在外面阳光中干燥时磺化锌酞菁得到活化并且随后底物得到漂白。US 4,033,718中描述了优选的锌酞菁和光活化过程。洗涤剂组合物一般地含有重量约0.025-约1.25％的磺化锌酞菁。
漂白剂也可包含锰催化剂。锰催化剂可为例如“低温漂白的有效锰催化剂”Nature(369)1994，637-639页中描述的化合物之一。
抑泡剂另一种任选的成分为抑泡剂，例子为硅氧烷和硅石-硅氧烷混合物。硅氧烷可一般通过烷基化聚硅氧烷材料代表，而硅石通常以细分的形式使用，例子为硅石气凝胶和干凝胶和多种疏水硅石。这些材料可作为微粒掺入，其中抑泡剂有利地可释放地掺入水溶形式或水分散形式，基本上非表面活性洗涤剂不渗透性载体。备选地抑泡剂可溶解或分散于液态载体中并通过喷洒到一种或多种其他成分上应用。
优选的硅氧烷泡沫控制剂公开在US 3,933,672中。其他尤其有用的抑泡剂为德国专利申请DTOS 2,646,126中描述的自乳化硅氧烷抑泡剂。此类化合物的例子为DC-544，可从Dow Corning购买，其为硅氧烷-乙二醇共聚物。尤其优选的泡沫控制剂为包含硅油和2-烷基-烷醇混合物的抑泡剂系统。适当的2-烷基-烷醇为2-丁基-辛醇，其可以商品名称Isofol 12 R商业购买。
此类抑泡剂系统在欧洲专利申请EP 0593841中描述。
尤其优选的硅氧烷泡沫控制剂在欧洲专利申请号92201649.8中描述。所述组合物可包含与烟状无孔硅石如Aerosile组合的硅氧烷/硅石混合物。
上述抑泡剂通常以组合物重量的0.001-2％使用，优选地以重量的0.01-1％使用。
其他成分洗涤剂组合物中使用的其他成分可以如污物悬浮或抗再沉淀剂、污物释放剂、荧光增白剂、研磨剂、杀菌剂、晦暗抑制剂、着色剂和/或胶囊的或非胶囊的香料。
尤其适当的胶囊材料为如GB1,464,616中所述由多糖和多羟基化合物组成的水溶性胶囊。
其他适当的水溶性胶囊材料如US3,455,838中所述包含来源于取代二羧酸的非胶化淀粉酸酯的糊精。这些酸酯糊精优选地为从如蜡质种玉米、蜡质种高粱、西米、木薯和马铃薯的淀粉制备。适当的所述包囊材料的例子包括National Starch生产的N-Lok。N-Lok包囊材料由改性玉米淀粉和葡萄糖组成。淀粉通过加入单功能取代基如辛烯基琥珀酸酐改性。
洗涤剂中使用的典型抗再沉淀剂包括水溶性的，一般为有机胶体，其包括例如聚合羧酸如聚丙烯酸或聚马来酸或其共聚物的水溶性盐、胶合剂、明胶、淀粉或纤维素的醚磺酸或醚羧酸盐、淀粉或纤维素的硫酸醚。含酸性基团的水溶性聚酰胺也用作抗再沉淀剂。也可使用可溶淀粉制品和以上提到的之外的淀粉产品，例如部分水解淀粉。优选使用的为羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟乙基纤维素、甲基羟乙基纤维素和其混合物。这些材料一般以组合物重量的0.05-10％的水平使用，更优选地以组合物重量的0.2-8％的水平使用，最优选地以组合物重量的0.5-6％的水平使用。
优选的荧光增白剂的特征为阴离子，其例子为4，4′-二-(2-二乙醇氨基-4-苯胺基-s-三嗪-6-基氨基)二苯乙烯-22′二磺酸二钠、4，-4′-二-(2-吗啉代-4-苯胺基-s-三嗪-6-基氨基-二苯乙烯-22′-二磺酸二钠、4，4′-二-(2，4-二苯胺基-s-三嗪-6-基氨基)二苯乙烯-22′-二磺酸二钠、4′，4″-二-(2，4-二苯胺基-s-三嗪-6-基氨基)二苯乙烯-2-磺酸钠、4，4′-二-(2-苯胺基-4-(N-甲基-N-2-羟乙基氨基)-s-三嗪-6-基氨基)二苯乙烯-2，2′-二磺酸二钠、4，4′-二-(4-苯基-2，1，3-三唑-2-基)-二苯乙烯-2，2′二磺酸二钠、4，4′-二(2-苯胺基-4-(1-甲基-2-羟乙氨基)-s-三嗪-6-基氨基)二苯乙烯-2，2′二磺酸二钠、2(stilbyl-4″-(萘并-1′，2′4，5)-1，2，3，-三唑-2″-磺酸钠和4，4′-二(2-硫代苯乙烯基)联苯。
其他有用的聚合材料为聚乙二醇，尤其为分子量1000-10000的，更尤其为分子量2000-8000并且最优选地为分子量约为4000的聚乙二醇。这些以重量计0.20-5％，更优选地以重量计0.25-2.5％的水平使用。这些聚合物和前面提到的均聚或共聚聚羧酸盐对提高过渡金属杂质存在下白度保持、织物灰分沉淀和对粘土蛋白质的和可氧化的污物的清洁性能有价值。
在本发明的组合物中有用的污物释放剂通常为对苯二甲酸与乙二醇和/或丙二醇单位以多种排列形式的共聚物或三聚物。此类聚合体的实例公开在US 4,116,885和4,711,730和EP 0 272 033中。根据EP 0 272 033尤其优选的聚合物具有下式(CH3(PEG)43)0.75(POH)0.25[T-PO]2.8(T-PEG)0.4]T(POH)0.25((PEG)43CH3)0.75其中PEG为-(OC2H4)O-，PO为(OC3H6O)且T为(pOOC6H4CO)。
同样有用的为修饰的聚酯如对苯二甲酸二甲酯、磺基异邻苯二酸二甲酯、乙二醇和1，2-丙二醇的随机共聚物，末端基主要地由磺基苯甲酸酯组成次要地由乙二醇和/或1，2-丙二醇的单酯组成。目的是获得两端均由磺基苯甲酸酯帽化的聚合物，“主要地”，在本文中大多数在此所述的共聚物会由磺基苯甲酸酯基帽化。然而，一些共聚物不完全帽化，因此其末端基可由乙二醇和/或1，2-丙二醇的单酯组成，所以“次要地”由这种种类组成。
在此所选的聚酯含有按重量计约46％的对苯二甲酸二甲酯，占重量约16％的1，2-丙二醇，占重量约10％的乙二醇，占重量约13％的磺基苯甲酸二甲酯和占重量约15％的硫代异酞酸，并且具有约3,000的分子量。聚酯和其制备方法在EP 311 342中详细描述。
柔软剂织物柔软剂也可加入根据本发明的洗衣店洗涤剂组合物中。这些制剂可为无机或有机类型。无机柔软剂的例子为GB-A-1 400898和US5,019,292中公开的绿土粘土。有机织物柔软剂包括GB-A1 514 276和EP 0011 340中公开的水不溶性叔胺，EP-B-0 026 528中公开的所述叔胺与单C12-C14季铵盐的组合和EP 0 242 919中公开的二-长链酰胺。其他织物柔软系统的有用有机成分包括EP 0 299 575和0 313 146中公开的高分子量聚氧化乙烯材料。
绿土粘土水平的范围通常为按重量计5-15％，更优选地为8-12％，其中加入的材料以干燥混合成分加入制剂的剩余物。有机织物柔软剂如水不溶性叔胺或二-长链胺材料以重量0.5-5％的水平加入，通常以重量1-3％的水平加入同时高分子量聚氧化乙烯材料和水溶性阳离子材料以重量0.1-2％的水平加入，通常以重量0.15-1.5％的水平加入。这些材料通常加到组合物的喷雾干燥部分，但是在有些情况下将其作为干燥混合微粒加入，或以熔化液体将其喷洒到组合物的其他固体成分上更加方便。
聚合染料转移抑制剂根据本发明的洗涤剂组合物也可包含重量0.001-10％，优选地包含重量0.01-2％，更优选地包含重量0.05-1％的聚合染料转移抑制剂。所述聚合染料转移抑制剂通常掺入洗涤剂组合物以抑制染料从有色织物转移到与其洗涤的织物上。
这些聚合体具有在染料有机会吸附到洗涤中其他物品上之前络合或吸附从染色织物上洗掉的易褪色染料的能力。
尤其适当的聚合染料转移抑制剂为聚N-氧化胺聚合物、N-乙烯基-吡咯烷酮和N-乙烯基咪唑的共聚物、聚乙烯基吡咯烷酮聚合体、聚乙烯噁唑烷酮和聚乙烯基咪唑或其混合物。
此类聚合体的加入也提高根据本发明的酶的性能。
酶在本发明实施例中的除了具有以上定义的抗再沉淀作用的内切葡聚糖酶，洗涤剂组合物还包含能提供清洁性能和/或织物保养好处的其他酶。
此类酶包括某些蛋白酶、脂肪酶、角质酶、纤维素酶、淀粉酶、过氧化物酶、氧化酶(例如漆酶)和半纤维素酶如甘露聚糖酶和果胶酸裂解酶。蛋白酶可使用任何适于用于碱性溶液的蛋白酶。适当的蛋白酶包括动物、植物或微生物来源的蛋白酶。微生物来源的为优选。可包括化学或遗传修饰的突变体。蛋白酶可为丝氨酸蛋白酶，优选地为碱性微生物蛋白酶或胰蛋白酶样蛋白酶。碱性蛋白酶的例子为枯草杆菌蛋白酶，尤其那些来源于芽孢杆菌属的蛋白酶，例如枯草杆菌蛋白酶Novo、枯草杆菌蛋白酶Carlsberg、枯草杆菌蛋白酶309、枯草杆菌蛋白酶147和枯草杆菌蛋白酶168(WO 89/06279中描述)。胰蛋白酶样蛋白酶的例子为胰蛋白酶(例如猪来源的和牛来源的)和WO 89/06270中描述的镰刀霉属蛋白酶。
优选的商业购买的蛋白酶包括Novozymes A/S(丹麦)以商品名Everlase、KannaseTM、AlcalaseTM、SavinaseTM、PrimaseTM、DurazymTM和EsperaseTM销售的蛋白酶，Genencor International以商品名Maxatase、Maxacal、Maxapem、Properase、Purafect和Purafect OXP销售的蛋白酶和Solvay Enzymes以商品名Opticlean和Optimase销售的蛋白酶。蛋白酶可以以组合物重量0.000001-2％的酶蛋白质的水平，优选地以组合物重量0.00001-1％的酶蛋白质的水平，更优选地以组合物重量0.0001-0.5％的酶蛋白质的水平，甚至更优选地以占组合物重量0.001-0.2％的酶蛋白质的水平掺入根据本发明的组合物。
脂肪酶可使用任何适于用于碱性溶液中的脂肪酶。适当的脂肪酶包括细菌或真菌来源的脂肪酶。也包括化学或遗传修饰的突变体。
有用的脂肪酶的例子包括柔毛腐质霉脂肪酶，例如EP 258 068和EP305 216中所述，米赫根毛霉脂肪酶，例如EP 238 023中所述，假丝酵母脂肪酶，如南极假丝酵母脂肪酶，例如EP 214 761中描述的南极假丝酵母脂肪酶A或南极假丝酵母脂肪酶B，假单胞菌脂肪酶如产碱假单胞菌或类产碱假单胞菌脂肪酶，例如如EP 218 272中所述，产碱单胞菌脂肪酶，例如如EP 331 376中所述，施氏假单胞菌脂肪酶，例如GB 1,372,034中所述，荧光假单胞菌脂肪酶，芽孢杆菌脂肪酶，例如枯草芽孢杆菌脂肪酶(Dartois等(1993)，Biochemica et Biophysica acta 1131，253-260)，嗜热脂肪芽孢杆菌脂肪酶(JP 64/744992)和短小芽孢杆菌脂肪酶(WO 91/16422)。
此外，许多克隆的脂肪酶也为有用的，其包括Yamaguchi等(1991)，Gene 103，61-67描述的沙门柏干酪青霉(Penicillium camembertii)脂肪酶、白地霉(Geotricum candidum)脂肪酶(Schimada，Y.等(1989)，J.Biochem.，106，383-388)和多种根霉属脂肪酶如R.delemar脂肪酶(Hass，M.J等(1991)，Gene 109，117-113)、雪白根霉(R.niveus)脂肪酶(Kugimiya等(1992)，Biosci.Biotech.Biochem.56，716-719)和米根霉(R.oryzae)脂肪酶。
其他类型的脂肪分解酶如角质酶也为有用的，例如WO 88/09367中所述来源于门多萨假单胞菌的角质酶或来源于豌豆腐皮镰孢的角质酶(例如WO 90/09446中所述)。
在优选的实施方案中脂肪酶为WO 00/60063中所述的柔毛腐质霉(Humicola lanuginosa)DSM 4109的变体。尤其优选的为WO 00/60063实施例中公开具有提高的初步洗涤性能的变体，即T231 R+N233R；G91A+D96W+E99K+G263Q+L264A+I265T+G266D+T267A+L269N+270AGGFSWRRYRSAESVDKRATMTDAELEKKLNSYVQMDKEYVKNNQARS；R209P+T231R+N233R；N33Q+D96S+T231 R+N233R+Q249R；E99N+N101S+T231R+N233R+Q249R；E99N+N101S+T231R+N233R+Q249R。
尤其适当的脂肪酶为如M1 LipaseTM和LipomaxTM(Genencor)、LipolaseTM和Lipolase UltraTM、LipexTM(Novozymes A/S)，和Lipase P“Amano”(Amano Pharmaceutical Co.Ltd.)。适当的角质酶包括可从Genencor Inc.购买的LumafastTM。
脂肪酶通常以组合物重量0.000001-2％的酶蛋白质水平掺入洗涤剂组合物，优选地以以组合物重量0.00001-1％的酶蛋白质水平掺入洗涤剂组合物，更优选地以组合物重量0.0001-0.5％的酶蛋白质水平掺入洗涤剂组合物，甚至更优选地以组合物重量0.001-0.2％的酶蛋白质水平掺入洗涤剂组合物。
淀粉酶可使用任何适于用于碱性溶液的淀粉酶(α和/或β淀粉酶)。
适当的淀粉酶包括细菌或真菌来源的淀粉酶。也包括化学或遗传修饰的突变体。淀粉酶包括，例如从地衣芽孢杆菌特定菌株中获得的α-淀粉酶，其在GB 1,296,839中更详细的描述。可商业购买的淀粉酶为NatalaseTM、TermamylTMUltra、DuramylTM、TermamylTM、FungamylTM和BANTM(可从Novozymes A/S购买)和RapidaseTM和Maxamyl PTM(可从GenencorInc.购买)。
在优选的实施方案中α-淀粉酶来源于芽孢杆菌NCIB 12289、NCIB12512、NCIB 12513和DSM 9375菌株。尤其优选的为WO 95/26397的SEQID NOS 1和2中显示的α-淀粉酶。
另一优选的实施方案中α-淀粉酶为来源于WO 00/60060(在此引用作为参考)中SEQ ID NO2公开的芽孢杆菌DSM 12649的AA560α-淀粉酶。尤其优选的为AA560α-淀粉酶变体，其包括实施例7和8(在此引用作为参考)中公开的AA560α-淀粉酶。
淀粉酶通常以组合物重量0.000001-2％的酶蛋白质水平掺入洗涤剂组合物，优选地以以组合物重量0.00001-1％的酶蛋白质水平掺入洗涤剂组合物，更优选地以组合物重量0.0001-0.5％的酶蛋白质水平掺入洗涤剂组合物，甚至更优选地以组合物重量0.001-0.2％的酶蛋白质水平掺入洗涤剂组合物。
纤维素酶可使用任何适于用于碱性溶液的纤维素酶。适当的纤维素酶包括细菌和真菌来源的纤维素酶。也包括化学或遗传修饰的变体。适当的纤维素酶公开在US 4,435,307中，其公开了Humicola insolens产生的真菌纤维素酶。尤其适当的纤维素酶为具有颜色保养好处的纤维素酶。此类纤维素酶的例子为欧洲专利申请号0 495 257中描述的纤维素酶。
优选的实施方案中纤维素酶为Thielavia terrestris纤维素酶，优选地为WO 96/29397的SEQ ID NO9中公开的纤维素酶和在本文SEQ ID NO9公开的纤维素酶和与其具有至少70％同一性的酶。优选的实施方案中纤维素酶为WO 98/12307的实施例1中公开的Thielavia terrestris变体。
可商业购买的酶包括Humicola insolens菌株产生的Celluzyme、Carezyme和Renozyme(Novozymes A/S)，KAC-500(B)TM(KaoCorporation)。纤维素酶通常以组合物重量0.000001-2％的酶蛋白质水平掺入洗涤剂组合物，优选地以组合物重量0.00001-1％的酶蛋白质水平掺入洗涤剂组合物，更优选地以组合物重量0.0001-0.5％的酶蛋白质水平掺入洗涤剂组合物，甚至更优选地以组合物重量0.001-0.2％的酶蛋白质水平掺入洗涤剂组合物。
甘露聚糖酶可使用任何适于用于碱性溶液的甘露聚糖酶。适当的甘露聚糖酶包括细菌或真菌来源的甘露聚糖酶。也包括化学或遗传修饰的变体。
在优选的实施方案中甘露聚糖酶来源于芽孢杆菌属菌株，尤其来源于WO 99/64619的SEQ ID NO2的31-330位置中或SEQ ID NO5中公开的芽孢杆菌属，特别是芽胞杆菌1633或者琼脂粘附芽孢杆菌，例如来源于模式株DSM 8721。此外，适当的甘露聚糖酶为可从Genencor Inc.购买的Purabrite和Novozymes A/S生产的Mannaway。
果胶酸裂解酶可使用任何适于用于碱性溶液的果胶酸裂解酶。适当的果胶酸裂解酶包括细菌或真菌来源的果胶酸裂解酶。也包括化学或遗传修饰的变体。
在优选的实施方案中，果胶酸裂解酶来源于芽孢杆菌属菌株，尤其来源于枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌株，尤其来源于SEQ ID NO2中公开的枯草芽孢杆菌DSM14218或WO 02/092741的实施例6中公开的其变体。
过氧化物酶/氧化酶过氧化物酶与过氧化氢或其过氧化氢源(例如过碳酸盐、过硼酸盐或过硫酸盐)联合使用。氧化酶与氧联合使用。两种酶都用于“溶液漂白”，例如防止所述织物在洗涤液体中一起洗涤时纺织品染料从一种染色织物转移到另一种织物上，优选地与例如WO 94/12621和WO 95/01426中所述的增强剂共同使用。适当的过氧化物酶/氧化酶包括植物、细菌或真菌来源的过氧化物酶/氧化酶。也包括化学或遗传修饰的突变体。
过氧化物酶和/或氧化酶通常以组合物重量0.000001-2％的酶蛋白质水平掺入洗涤剂组合物，优选地以组合物重量0.00001-1％的酶蛋白质水平掺入洗涤剂组合物，更优选地以组合物重量0.0001-0.5％的酶蛋白质水平掺入洗涤剂组合物，甚至更优选地以组合物重量0.001-0.2％的酶蛋白质水平掺入洗涤剂组合物。
以上提到的酶的混合物也在此包括，尤其为两种、三种、四种、五种、六种或更多不同种酶例如蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶和纤维素酶的混合物。
本发明的酶，或加入洗涤剂组合物中的任何其他酶通常以组合物重量0.000001-2％的酶蛋白质水平掺入洗涤剂组合物，优选地以组合物重量0.00001-1％的酶蛋白质水平掺入洗涤剂组合物，更优选地以组合物重量0.0001-0.5％的酶蛋白质水平掺入洗涤剂组合物，甚至更优选地以组合物重量0.001-0.2％的酶蛋白质水平掺入洗涤剂组合物。
酶可以液体溶液或颗粒形式加入。无粉末颗粒可如US 4,106,991和4,661,452(都属于Novo Industri A/S，现在属于Novozymes A/S)中公开的生产并可任选地通过本领域已知的方法包衣。蜡质包衣材料的例子为平均分子量1000-20000的聚氧化乙烯产物(聚乙二醇，PEG)；具有16-50个氧化乙烯单位的乙氧化壬苯酚；乙氧化脂肪醇，其中醇含有12-20个碳原子并且有15-80个氧化乙烯单位；脂肪醇；脂肪酸；和脂肪酸甘油单酯、脂肪酸甘油二酯或脂肪酸甘油三酯。GB 1483591提供了适于通过流化床技术应用的成膜包衣材料。
洗涤剂组合物实例根据本发明的洗涤剂组合物可为液体、糊剂、凝胶剂、棒剂、片剂或颗粒形式。
根据本发明的颗粒组合物也可为“致密形式”，例如其可具有比常规颗粒洗涤剂相对更高的密度，例如550-950g/l；在这种情况下，根据本发明的颗粒洗涤剂组合物与常规的颗粒洗涤剂相比含有较低数量的“无机填充盐”；典型的填充盐为硫酸碱土金属盐或氯化碱土金属盐，一般为硫酸钠；“致密的”洗涤剂一般包含不超过10％的填充盐。根据本发明的液体组合物也可为“浓缩形式”，在这种情况下，根据本发明的液体洗涤剂与常规的液体洗涤剂相比含有较低数量的水。浓缩液体洗涤剂的水含量一般地低于洗涤剂组合物重量的30％，更优选地低于20％，最优选地低于10％。
本发明的组合物可以例如制成手工或机器洗衣洗涤剂组合物，其包括洗衣店附加组合物和适于用于沾污织物预处理的组合物，漂洗加入的织物柔软剂组合物和用于普通家庭硬表面清洁操作或者机械或手工洗碟操作的组合物。
下列例子是作为本发明组合物的例证，但不必限制或以别的方式限定本发明的范围。
洗涤剂组合物中简写的成分符号具有下列意思LAS 直链C12烷基苯磺酸钠TAS 牛油烷基硫酸钠XYASC1x-C1y烷基硫酸钠SS 式2-丁基辛酸的仲皂化表面活性剂25EY与平均为Y摩尔的环氧乙烷缩合的主要为C12-C15的直链伯醇45EY与平均为Y摩尔的环氧乙烷缩合的主要为C14-C15的直链伯醇XYEZS 每摩尔与平均Z摩尔的环氧乙烷缩合的C1x-C1y烷基硫酸钠非离子 平均乙氧基化程度3.8而平均丙氧基化程度为4.5的C13-C15混合的乙氧基化/丙氧基化脂肪醇，由BASF GmbH售出，商品名为Plurafax LF404CFAAC12-C14烷基N-甲基葡糖酰胺TFAAC16-C18烷基N-甲基葡糖酰胺硅酸盐 无定型硅酸钠(SiO2∶Na2O比率＝2.0)NaSKS-6 分子式为δ-Na2Si2O5的晶状多层硅酸盐碳酸盐 无水碳酸钠磷酸盐 三磷酸钠MA/AA 1∶4马来酸/丙烯酸共聚物，平均分子量约为80,000
聚丙烯酸酯 平均分子量为8,000的聚丙烯酸酯均聚物，由BASFGmbH销售，商品名为PA30沸石A 基本颗粒大小在1-10微米范围内的分子式为Na12(AlO2SiO2)12·27H2O的水合硅铝酸钠柠檬酸盐 二水合三柠檬酸钠Citric 柠檬酸过硼酸盐 无水过硼酸钠一水合物漂白剂，经验式为NaBO2·H2O2PB4无水过硼酸钠四水合物过碳酸盐 经验式为2Na2CO3·3H2O2的无水过碳酸钠漂白剂TAED 四乙酰基乙二胺CMC羧甲基纤维素钠DETPMP 二亚乙基三胺五(亚甲基膦酸)，由Monsanto出售，商品名为Dequest 2060PVP聚乙烯吡咯烷酮聚合物EDDS 钠盐形式的乙二胺-N，N′-二琥珀酸[S，S]异构体抑泡剂 25％固体石蜡，熔点温度50℃，17％疏水硅石，58％石蜡油粒状抑泡剂 12％硅氧烷/硅石，18％十八烷醇，70％粒状淀粉硫酸盐 无水硫酸钠HMWPEO 高分子量聚环氧乙烷TAE 25 乙氧基化牛油醇(25)洗涤剂实施例I根据本发明的粒状织物清洁组合物可如下制备直链C12烷基苯磺酸钠 6.5硫酸钠15.0沸石A 26.0次氮基三乙酸钠5.0
酶(包括内切葡聚糖酶)0.1PVP 0.5TAED3.0硼酸4.0过硼酸盐18.0苯酚磺酸盐 0.1次要组分补充到100洗涤剂实施例II根据本发明的致密粒状织物清洁组合物(密度800g/l)可如下制备45AS 8.025E3S2.025E5 3.025E3 3.0TFAA 2.5沸石A17.0NaSKS-6 12.0柠檬酸 3.0碳酸盐 7.0MA/AA5.0CMC 0.4酶(包括内切葡聚糖酶) 0.1TAED 6.0过碳酸盐 22.0EDDS 0.3粒状抑泡剂 3.5水/次要组分 补充到100％
洗涤剂实施例III尤其在有色织物洗涤中有用的根据本发明的粒状织物清洁组合物可如下制备LAS 10.7 -TAS 2.4-TFAA - 4.045AS 3.110.045E7 4.0-25E3S- 3.068E111.8-25E5 - 8.0柠檬酸盐 15.0 7.0碳酸盐 - 10柠檬酸 2.53.0沸石A32.1 25.0Na-SKS-6 - 9.0MA/AA5.05.0DETPMP 0.20.8酶(包括内切葡聚糖酶) 0.10 0.05硅酸盐 2.5-硫酸盐 5.23.0PVP 0.5-聚(4-乙烯基吡啶)-N- - 0.2氧化物/乙烯基咪唑和乙烯基吡咯烷酮的共聚物过硼酸盐 1.0-苯酚磺酸盐 0.2-
水/次要组分 补充到100％洗涤剂实施例IV提供“通过洗涤软化”能力的根据本发明的粒状织物清洁组合物可如下制备45AS - 10.0LAS 7.6-68AS 1.3-45E7 4.0-25E3 - 5.0椰油-烷基-二甲基羟1.41.0基乙基氯化铵柠檬酸5.03.0Na-SKS-6 - 11.0沸石A 15.0 15.0MA/AA 4.04.0DETPMP0.40.4过硼酸盐 15.0 -过碳酸盐 - 15.0TAED 5.05.0绿土粘土 10.0 10.0HMWPEO- 0.1酶(包括内切葡聚糖酶) 0.10 0.05硅酸盐3.05.0碳酸盐10.0 10.0粒状抑泡剂1.04.0CMC 0.20.1水/次要组分 补充到100％
洗涤剂组合物V根据本发明的重垢液体织物清洁组合物可如下制备IIILAS酸形式-25.0柠檬酸 5.0 2.025AS酸形式 8.0 -25AE2S酸形式 3.0 -25AE78.0 -CFAA 5-DETPMP 1.0 1.0脂肪酸 8-油酸 -1.0乙醇 4.0 6.0丙二醇 2.0 6.0酶(包括内切葡聚糖酶) 0.10 0.05椰油-烷基-二甲基羟基乙基氯化铵 -3.0绿土粘土 -5.0PVP 2.0 -水/次要组分 补充到100％洗涤剂的用途本发明的酶组合物可用于家庭或工业上洗涤纺织品和服装，并且可用于在织物的机器洗涤处理方法，其中所述的方法包含在一个或多个机器洗涤过程的循环中用含有本发明的酶和酶制品的洗涤溶液处理织物。
本发明的酶组合物可用于家庭和工业盘或餐具或其他硬表面洗涤的洗涤剂组合物中，并且可用于处理盘、餐具等的方法中，其中所述的方法包括用含有本发明酶和酶制品的洗涤溶液处理。
一般地，用于洗涤方法的洗涤剂组合物包含常规成分如表面活性剂(阴离子的、非离子的、两性离子的、两性的)、助洗剂、漂白剂(过硼酸盐、过碳酸盐、或过氧化氢)和其他成分，例如WO 97/01629中所述，其在此全部引用作为参考。
本发明的内切葡聚糖酶提供这样的好处，如提高污迹去除和降低污物再沉淀。某些污迹，例如某些食物污迹含有使污迹全部去除难以实现的β-葡聚糖。此外，织物的纤维素纤维可能具有，尤其是在“非晶体”和表面区域具有此酶降解的葡聚糖聚合物。洗涤过程中污迹中或织物上此类葡聚糖的水解降低了污物结合到织物上。
家庭洗涤过程在一系列条件下进行。洗涤时间通常为5-60分钟且洗涤温度为10-60℃，最通常地为20-40℃。通常使用延长的浸泡时间。洗涤溶液通常为中性或碱性，最通常为pH5-11.5。通常使用漂白剂，尤其白色织物洗涤和硬表面的洗涤过程中使用漂白剂。这些漂白剂通常为过氧化物漂白剂，如过硼酸钠、过碳酸钠或过氧化氢。
材料和方法菌株和供体生物以上提到的芽孢杆菌DSM 12648包含SEQ ID NO1显示的内切葡聚糖酶编码DNA序列。
枯草芽孢杆菌PL2306此菌株为带有被破坏的apr和npr基因的枯草芽孢杆菌DN1885(Diderichsen，B.，Wedsted，U.，Hedegaard，L.，Jensen，B.R.，Sioholm，C.(1990)aldB的克隆，其编码来源于短芽孢杆菌(Bacillusbrevis.)的α-乙酰乳酸脱羧酶J.Bacteriol.，172，4315-4321)，其中所述基因在已知的枯草芽孢杆菌纤维素酶基因转录单位中破坏产生纤维素酶阴性细胞。破坏基本如Eds.A.L.Sonenshein，J.A.Hoch和Richard Losick(1993)枯草芽孢杆菌和其他革兰氏阳性细菌，美国微生物学学会，618页中所述进行。
Yasbin，R.E.，Wil-son，G.A.和Young，F.E.(1975)溶原性枯草芽孢杆菌菌株的转化和转染感受态细胞中原噬菌体选择性诱导的证据，J.Bacteriol，121296-304中所述制备和转化感受态细胞。
常规分子生物学方法除非另外陈述所有DNA操作和转化使用标准的分子生物学方法进行(Sambrook等(1989)Molecular cloningA laboratory manual，Cold SpringHarbor lab.，Cold Spring Harbor，NY；Ausubel，F.M.等(编者)“Currentprotocols in Molecular Biology″，John Wiley和Sons，1995；Harwood，C.R.和Cutting，S.M.(编者)”Molecular Biological Methods for Bacillus“，John Wiley和Sons，1990)。
用于DNA操作的酶根据制造商的说明书使用(例如限制性内切酶、连接酶等可从New England Biolabs，Inc.购买)。
质粒pMOL944.此质粒为pUB110衍生物，其基本含有使该质粒在枯草芽孢杆菌中繁殖的元件、卡那霉素抗性基因且具有从地衣芽孢杆菌ATCC14580的amyL基因克隆的强启动子和信号肽。信号肽含有SacII位点，这使克隆编码与信号肽融合的蛋白质成熟部分更容易。这引起了导向细胞外部的前蛋白质的表达。
质粒通过普通基因工程方法构建并在下面简述。
pMOL944的构建pUB110质粒(McKenzie，T.等，1986，Plasmid 1593-103)用单一限制性内切酶NciI消化。从质粒pDN1981上编码的amyL启动子扩增的PCR片段(P.L.Jorgensen等，1990，Gene，96，37-41页)用Ncil消化并插入NciI消化的pUB110以得到质粒pSJ2624。
所用的PCR引物具有下列序列#LWN5494(SEQ ID NO5)5′-GTCGCCGGGGCGGCCGCTATCAATTGGTAACTGTATCTCAGC-3′#LWN5495(SEQ ID NO6)
5′-GTCGCCCGGGAGCTCTGATCAGGTACCAAGCTTGTCGACCTGCAGAATGAGGCAGCAAGAAGAT-3′引物#LWN5494在质粒中插入NotI位点。
质粒pSJ2624然后用SacI和NotI消化并且pDN1981上编码的amyL启动子上扩增的新的PCR片段用SacI和NotI消化并且此DNA片段插入SacI-NotI消化的pSJ2624以产生质粒pSJ2670。
此克隆用相同的启动子但以相反的方向替代了第一个amyL启动子克隆。PCR扩增所用的两种引物具有下列序列#LWN5938(SEQ ID NO7)5′-GTCGGCGGCCGCTGATCACGTACCAAGCTTGTCGACCTGCAGAATG AGGCAGCAAGAAGAT-3′#LWN5939(SEQ ID NO8)5′-GTCGGAGCTCTATCAATTGGTAACTGTATCTCAGC-3′质粒pSJ2670用限制性内切酶PstI和BclI消化，从克隆的编码碱性淀粉酶SP722(专利#W09526397-A1)的DNA序列扩增的PCR片段用PstI和BclI消化并插入所述质粒以产生质粒pMOL944。用于PCR扩增的两种引物具有下列序列#LWN7864(SEQ ID NO9)5′-AACAGCTGATCACGACTGATCTTTTAGCTTGGCAC-3′#LWN7901(SEQ ID NO10)5′-AACTGCAGCCGCGGCACATCATAATGGGACAAATGGG-3′引物LWN7901在质粒中插入了SacII位点。
基因组DNA制备菌株DSM 12648在液体培养基2xTY中繁殖，该培养基含有1％羧甲基-纤维素+(分别高压灭菌并冷却到室温后无菌加入的0.1M Na2CO3+0.1M NaHCO3)。30℃，300转/分孵育16小时后收获细胞，通过Pitcher等[Pitcher，D.G.，Saunders，N.A.，Owen，R.J；用异硫氰酸胍快速提取细菌基因组DNA，Lett Appl Microbiol 1989，8151-156]所述方法分离基因组。
培养基TY(如Ausubel，F.M.等所述(编者)“Current protocols inMolecular Biology”，JohnWiley和Sons，1995)。
2xTY(如Ausubel，F.M.等所述(编者)“Current protocols inMolecular Biology”，JohnWiley和Sons，1995)。
LB琼脂(如Ausubel，F.M.等所述(编者)“Current protocols inMolecular Biology”，JohnWiley和Sons，1995)。
LBPG为LB琼脂中补充0.5％的葡萄糖和0.05M的磷酸钾，pH7.0。
AZCL-HE-纤维素加入LBPG-琼脂到0.5％，AZCL-HE-纤维素来源于Megazyme，澳大利亚。
BPX培养基在EP 0 506 780(WO 91/09129)中描述。
Cal 18-2培养基在专利申请WO 00/75344A1)中描述。
内切葡聚糖酶活性检测此检测与下述的“抗再沉淀作用检测”联合使用的目的为确定酶是否为根据本发明的具有抗再沉淀作用的内切葡聚糖酶。
检测通过确定40℃下30分钟的反应时间内从不溶的、有色的葡聚糖底物释放的颜色进行。
酶样品用于检测的酶样品为浓度为0.1mg/ml的酶蛋白质溶液。常规生物化学技术可用来验证纯度和确定样品的蛋白质浓度。
缓冲液从NaH2PO4.2H2O和NaOH制备pH7.0 0.05M的磷酸盐缓冲液并加入1g/l的非离子表面活性剂(例如Akzo Nobel的Berol 537)。
检测方法转移6ml缓冲液到两个试管中。一个管中加入50μl酶样品。第二个管中不加入酶。每一个管中加入一片β-glucazyme片剂(爱尔兰Megazyme提供，目录号T-BGZ)。用涡旋混合器混合管中内容物10秒，然后将管放入40℃水浴中。10分钟和20分钟后通过颠倒管混合管中内容物。30分钟后通过颠倒管混合管中内容物然后通过Whatman GF/C9cm滤器过滤管中内容物，在干净的管中收集滤过物。使用分光光度计在590nm以OD测量释放的颜色。通过从有酶的结果减去无酶的结果计算ΔOO。
如果ΔOD＞0.2那么酶为内切葡聚糖酶。
抗再沉淀作用检测此检测与上述“内切葡聚糖酶活性检测”联合使用的目的是为确定酶是否为根据本发明具有抗再沉淀作用的内切葡聚糖酶。
抗再沉淀作用通过洗涤检测测量。抗再沉淀洗涤检测通过在小规模洗涤检测设备中一起洗涤污染的棉织物样品和洁净的棉织物样品进行。洗涤之后最初洁净棉织物上的污物通过光反射能力(light reflectance)评价。
酶样品用于检测的酶溶液为0.1mg/ml浓度的酶蛋白质溶液。可使用常规的生物化学技术验证纯度和确定样品蛋白质浓度。
棉织物#2003白色机织100％棉织物由Tanigashira，4-11-15Komatsu Yodogawa-ku，Osaka，533-0004，日本提供。新的棉织物在用于洗涤检测前预洗三次。预洗使用欧洲家用前面装入式洗衣机进行，并使用常规的40℃洗涤方法。以0.5克每升的浓度加入LAS(SurfacSDBS80烷基苯磺酸钠，80％)到洗涤用水中并通过加入碳酸钠调整洗涤溶液的pH到10。预洗之后在滚动干燥机中干燥织物。预洗的棉织物样本切成5x5厘米大小，每个重约0.3g并将这些样本用于洗涤检测。
污染的棉样本以上制备的预洗#2003织物样本如下污染。在75ml四氯乙烯(Fluka，目录号86972)中通过强烈搅拌制备210mg碳黑悬浮液(“用于去污性检测的碳”，Sentakukagaku-kyokai，2-11-1ShimomarukoOhta-ku，Tokyo 146-8620，日本提供)。棉样本在水平金属表面放平。每一棉样本的中心移入300μl碳悬浮液。允许污染的棉样本室温干燥过夜。
洗涤剂溶液洗涤剂溶液如下制备。在去离子水中溶解0.5g碳酸钠，1.0g碳酸氢钠并加入2ml含117.8g/l CaCl2.2H2O和54.3g/l MgCl2的溶液制备1升溶液。此钙/镁添加物提供12°dH的水硬度。加入0.5g LAS(Surfac SDBS80烷基苯磺酸钠，80％，Surfachem，UK提供或等价材料)并调整终体积到1升。调整pH值到9.5(例如通过加入碳酸钠)。
洗涤检测三块污染样本(如所述制备)和三块洁净的样本(同样预洗的#2003棉中)在Mini-Terg-O-Tometer机器中洗涤。Mini-Terg-O-Tometer为Jay C.Harris，“Detergency Evaluation and Testing”，IntersciencePublishers Ltd.(1954)60-61页中描述的Terg-O-Tometer检测洗衣机的小规模类型。使用以下条件烧杯大小250ml洗涤溶液体积100ml洗涤温度40℃洗涤时间30分钟搅动速度150转/分洗涤剂溶液在开始检测之前预热到40℃。棉样本和100μl酶样品在30分钟洗涤时期开始时加入。不加入酶的参考检测在同一时间开始。
洗涤之后，在流动自来水下漂洗织物样本5分钟，然后展平并允许其室温下空气干燥过夜。
仪器评价最初清洁织物样本的光反射能力使用Macbeth Color Eye7000光反射能力分光光度计进行。500nm下进行测量。不使用UV滤光器。在每一样本的前部和后部进行测量。然后从六次测量中计算三块最初洁净样本的反射能力(R，500nm)平均结果。
特定酶样品的抗再沉淀作用如下计算(含酶的R，500nm)-(不加酶的R，500nm)。
如果获得的抗再沉淀作用＞7.5，并且以上测量内切葡聚糖酶检测的结果＞0.2，那么此酶为根据本发明具有抗再沉淀作用的内切葡聚糖酶。
LAS稳定性检测此检测通过比较温度40℃60分钟反应时间内在溶液含有缓冲液但不含表面活性剂时从不溶性有色纤维素底物释放的颜色和温度40℃60分钟反应时间内溶液含有缓冲液和LAS时从不溶性有色纤维素底物释放的颜色进行。如果此酶在60分钟反应时间内稳定那么释放的颜色大于此酶不稳定的情况，因为稳定的酶会持续降解底物而不稳定的酶不持续降解底物。在本发明的文中，如果有LAS的结果大于无LAS结果的50％那么此酶为LAS稳定性酶。
检测方法的详细描述如下缓冲液(不含LAS)从NaH2PO4.2H2O和NaOH制备0.05M磷酸盐缓冲液pH 7.0。
缓冲液(含LAS)在1升上述缓冲液中溶解1.0g LAS。LAS为SurfacSDBS80烷基苯磺酸钠，80％(Surfachem，UK提供)或等价材料。
检测方法在去离子水中制备待检测酶的稀释液。酶的浓度范围为0.2-0.5，如下述计算的ΔOD(无LAS)结果。
转移6ml缓冲液(无LAS)到两个试管中。在一个管中加入150μl酶稀释液。另一管中不加入酶。在两管中都加入一片CellazymeC片剂(爱尔兰Megazyme提供，目录号T-CCZ)。使用涡旋混合器强烈混合约10秒钟。将两管放入40℃水浴中。15、30和45分钟后通过颠倒管混合管中内容物60分钟后，通过颠倒混合管中内容物，然后通过9厘米直径WhatmaneGF/C滤器过滤内容物，在干净的管中收集滤过物。使用分光光度计测量590nm下滤过物的OD。通过从含酶的结果中减去不含酶的结果计算ΔOD(无LAS)。
然后使用相同浓度的酶和用6ml缓冲液(含LAS)而不是6ml缓冲液(含LAS)重复检测。通过从含酶的结果中减去不含酶的结果计算ΔOD(含LAS)。
计算LAS稳定性％(ΔOD(含LAS)/ΔOD(无LAS))*100使用联合其他酶的内切葡聚糖酶洗涤检测此过程是用来确定酶的去污性利益价值，见下面实施例6-11。
洗涤检测通过在小规模洗涤检测仪器中一起洗涤污染棉织物样品和洁净棉织物样品进行。洗涤之后通过光反射能力评价棉织物上的污物。最初污染的棉织物和最初洁净的棉织物都进行评价。
棉织物#2003白色机织100％棉织品，由Tanigashira，4-11-15 KomatsuYodogawa-ku，Osaka，533-0004，日本提供。新的棉织物在用于洗涤检测之前预洗三次。预洗使用欧洲家用前面装入式洗衣机进行，并使用常规的40℃洗涤方法。以0.5克每升的浓度加入LAS(SurfacoSDBS80烷基苯磺酸钠，80％)到洗涤用水中并通过加入碳酸钠调整洗涤溶液的pH到10。预洗之后在滚动干燥机中干燥织物。预洗的棉织物样本切成5×5厘米大小，每个重约0.3g并将这些样本用于洗涤检测。
污染的棉样本其从上述5×5厘米样本制备。
洗涤检测三块污染样本和三块洁净的样本在Mini-Terg-O-Tometer机器中洗涤。Mini-Terg-O-Tometer为Jay C.Harris，“DetergencyEvaluation and Testing”，Interscience Publishers Ltd.(1954)60-61页中描述的Terg-O-Tometer检测洗衣机的小规模类型。使用以下条件烧杯大小250ml洗涤溶液体积100ml洗涤温度40℃洗涤时间30分钟搅动速度150转/分洗涤剂溶液在开始检测之前预热到40℃。织物和酶在30分钟洗涤时期开始时加入。洗涤之后，在流动自来水下漂洗织物样本5分钟，然后展平并允许其室温下空气干燥过夜。
仪器评价织物样本的光反射能力评价使用Macbeth Color Eye 7000反射能力分光光度计进行。500nm下进行测量。不使用UV滤光器。在每一样本的前部和后部进行测量。污染的样本在污染区域的中心测量。然后从每一类型上六次测量计算污染样本和洁净样本反射能力(R，500nm)的平均结果。
洗涤剂溶液洗涤剂溶液如下制备。在去离子水中溶解0.5g碳酸钠，1.0g碳酸氢钠并加入2ml含117.8g/l CaCl2.2H2O和54.3g/l MgCl2.6H2O的溶液制备1升溶液。钙/镁的加入提供12°dH的水硬度。加入非离子表面活性剂(Berol537，Akzo Nobel)和/或LAS(SurfacSDBS80烷基苯磺酸钠，80％)并调整终体积到1升。调整pH值到9.5(通过加入碳酸钠)或7.5(通过加入10％柠檬酸溶液)。
以下详细说明了每一洗涤检测的LAS、非离子表面活性剂浓度和洗涤剂溶液pH值。
酶的加入待检测的酶在水中以已知浓度预先溶解，并在洗涤过程开始向洗涤剂溶液加入所需量的酶。
酶去污性优势(detergency benefit)的计算酶的去污性优势为在洗涤检测中使用酶能引起多大程度的提高清洁最初污染样本和最初清洁样本能力的测量。酶的去污性优势如下计算洗涤检测之后污染样本的平均R，500nm值为R，污染。
洗涤检测之后洁净样本的平均R，500nm值为R，洁净。
使用酶的洗涤检测中的酶去污性优势为酶的R，污染+R，洁净之和减去不加酶的R，污染+R，洁净之和。
以这种方式确定的酶去污性优势值是污物从织物的去除和织物上污物再沉淀的联合测量。这样酶去污性优势值可具有正值或负值。酶去污性优势值可用于比较不同酶的性能。最高正去污性优势为优选的结果。
实施例1从芽孢杆菌克隆和表达内切葡聚糖酶基因枯草芽孢杆菌中成熟内切葡聚糖酶的亚克隆和表达本发明的内切葡聚糖酶编码DNA序列为使用由下列两种寡核苷酸组成的引物对PCR扩增的#168684(SEQ ID NO11)5′-CAT TCT GCAGCC GCG GCA GCAGAA GGAAAC ACTCGTGAA GAC-3′#168685(SEQ ID NO12)
5′-GCG TTG AGA CGCGCG GCC GCT TAC TCT TCT TTC TCTTCT TTC TC-3′下划线为限制酶切位点Sac II和Not I。
寡核苷酸用于PCR反应中，反应混合物为HiFidelityTMPCR缓冲液(Boehringer Mannheim，德国)中补充200微摩尔每升的每种dNTP，2.6单位的HiFidelityTM扩展酶混合物和200pmol每一引物。使用如上所述从芽孢杆菌DSM12648分离的染色体DNA作为模板。
PCR反应使用DNA热循环仪(Landgrafe，德国)进行。94℃孵育1分钟然后使用94℃变性15秒、60℃退火60秒和72℃延伸120秒的循环方案进行10个循环，然后94℃15秒、60℃60秒和72℃120秒(在此延伸步骤每一循环增加20秒)的20个循环。通过在0.7％的琼脂糖凝胶(NuSieve，FMC)中电泳分析扩增产物的5μl等分试样。出现2.4kb DNA片段表明基因片段的正确扩增。
PCR片段的亚克隆使用QIAquickPCR纯化试剂盒(Qiagen，USA)根据制造商说明书纯化上述产生的PCR产物的45μl等分试样。纯化的DNA用pH8.5的50μl10mM Tris-HCI洗脱。
5μg pMOL944和25微升纯化的PCR片段用Sac II和Not I消化，在0.7％的琼脂糖凝胶(NuSieve，FMC)中电泳，从凝胶中切除相应的片段并使用QIAquick凝胶提取试剂盒(Qiagen，USA)根据制造商说明书纯化。然后将分离的PCR DNA片段与Sac II-Not I消化并纯化的pMOL944连接。连接使用每一种DNA片段0.5微克、1U T4 DNA连接酶和T4连接酶缓冲液(Boehringer Mannheim，德国)16℃过夜进行。
连接混合物用于转化感受态枯草芽孢杆菌PL2306。转化细胞铺于LBPG-10微克每毫升的卡那霉素琼脂平板上。37℃孵育18小时后平板上可见菌落。通过从过夜培养液中分离质粒DNA分析数个克隆。
一个这样的阳性克隆在以上所用的琼脂平板上再划线数次；此克隆称为M B1181-7。克隆M B1181-7在TY-10毫克每毫升卡那霉素中37℃培养过夜，第二天1ml细胞用于使用QiaprepSpin Plasmid MiniprepKit#27106根据制造商对枯草芽孢杆菌质粒制备的建议从细胞中分离质粒。此DNA进行测序并且显示与SEQ ID NO1的1-2322bp中编码成熟内切葡聚糖酶的内切葡聚糖酶基因的DNA序列相同。
实施例2从芽孢杆菌DSM 12648中表达和收获内切葡聚糖酶如实施例1所述获得的MB1181-7在37℃下以300转每分钟在含10毫克每毫升卡那霉素的15×200ml Cal-18-2培养基中于500mL带两个挡板的摇瓶中培养4天，由此获得约2500ml培养液。培养液通过加入50％CaCl2(每升培养液10ml)和11％铝酸钠(每升培养液10ml)絮状化，并通过加入20％的蚁酸保持pH在7.0-7.5之间。在搅动到完成絮状化的过程中加入阳离子剂SuperflocC521(每升培养液25mL10％v/v稀释液)和阴离子剂SuperflocA130(每升培养液75ml 0.1％w/v水稀释液)。絮状材料使用SorvaloRC 3B离心机6℃下10000转每分钟离心分离。得到的上清含有内切葡聚糖酶活性。
上清液使用Whatman玻璃滤器GF/D和C澄清。然后使用超滤以浓缩和降低溶液的离子强度。超滤膜为截断值为10kDa的FiltronUF。超滤之后溶液具有＜3mS/cm的导电性。pH调整为8.0。
然后使用Q-Sepharose上的离子交换层析进行进一步纯化。超滤的溶液加入300mL含有用25mmol Tris pH8.0的缓冲液平衡的Q-Sepharose(Pharmacia)的柱子上。内切葡聚糖酶与Q-Sepharose结合，然后用0.5MNaCl梯度洗脱。合并高内切葡聚糖酶活性的级分。最终合并的内切葡聚糖酶溶液的内切葡聚糖酶活性约为1000ECU每毫升。
活性单位ECU通过SM-0302方法确定，其可从Novozymes A/S索取。在ECU方法中确定酶样品降低羧甲基-纤维素溶液粘度的能力，结果以ECU给出。条件Hercules的CMC型7LFD溶于pH7.5的0.1M磷酸盐缓冲液，CMC浓度31.1克每升、40℃反应30分钟。使用振动粘度计如MIVI 3000，Sofraser，法国测量粘度。
实施例3污染去除和抗再沉淀作用检测证明实施例2获得的内切葡聚糖酶的污染去除和抗再沉淀作用。此外此检测证明酶的性能在包括过硼酸钠漂白剂时基本不改变。
棉样本用β-葡聚糖(大麦)加上碳黑污染。污染的样本和洁净的样本一起洗涤。洗涤之后漂洗和干燥样本。通过反射能力测量确定粘有污物的样本上的污物去除和再沉淀到洁净样本上的污物。比较加入和不加入内切葡聚糖酶洗涤之后的污物去除和污物再沉淀。
样本从100％棉织物，#2003型(Tanigashira，Osaka，日本)上切下，40℃预洗以作为除去任何水溶性污染的预防措施，切成大小5×5cm重约0.3g。
洗涤设备搅拌烧杯，杯容积250ml，通过水浴加热控制温度。设备为如材料和方法部分所述的Mini-Terg-O-Tometer，多杯微型搅拌洗衣机。
洗涤剂溶液通过向去离子水加入下列物质制备。
碳酸钠，0.5克每升。
碳酸氢钠，0.7克每升Ca2+/Mg2+，提供12°dH的水硬度阴离子表面活性剂，SurfaceSDBS80(烷基苯磺酸钠)，0.5克每升非离子表面活性剂，Berol537(Akzo Nobel)，1.0克每升过硼酸钠，SPB型(wfk Testgewebe)，0或1克每升溶液pH值约为9.5洗涤方法每一烧杯中加入100mL洗涤剂溶液。水浴温度为40℃。机械搅拌器以约125转每分钟操作。洗涤剂溶液预热10分钟然后加入内切葡聚糖酶和样本。每种情况下每一烧杯加入三个污染样本(如下所述制备)和三个洁净样本。洗涤30分钟之后，样本从洗涤剂溶液中取出，流动自来水漂洗5分钟，在吸水纸上平铺以干燥。
反射能力测量使用Macbeth7000 Color Eye反射分光光度计进行。在污染样本的情况下，每一样本在污染区域的中心测量一次，然后计算平均值。在洁净样本的情况下，每一样本在每一面测量一次，然后计算平均值。所有反射能力测量在500nm下进行。
污染样本使用β-葡聚糖(大麦)和碳黑(“用于去污性检测的碳”由Sentaku Kagaku Kyokai，Tokyo，日本提供)制作污染样本。在100mL自来水中搅拌并加热到＞50℃溶解约0.67g β-葡聚糖。加入0.33g碳黑。用UltraTurraxT25搅拌器4000转每分钟的速率混合2分钟。每一样本的中心加入250微升β-葡聚糖/碳。室温干燥过夜。
此实施例中所用的样本进行污染之前具有93.5的平均反射能力值且污染之后的平均反射能力值为17.5。
内切葡聚糖酶的加入加入实施例2的内切葡聚糖酶到每升洗涤剂溶液0、20或100ECU的活性浓度。活性单位ECU通过上述的SM-0302方法确定。
结果不含漂白剂的洗涤剂(洗涤之后的反射能力测量平均值)
结果含漂白剂的洗涤剂(洗涤之后的反射能力测量平均值)
如用内切葡聚糖酶洗涤之后的污染样本与不用内切葡聚糖酶的结果相比具有增加的反射能力值所见的，内切葡聚糖酶增加了污物从织物上的去除。如用内切葡聚糖酶洗涤之后的洁净样本增加的反射能力值所见的内切葡聚糖酶液还降低了污物的再沉淀。内切葡聚糖酶提供的污物去除和抗再沉淀的改善基本不为漂白剂的加入所改变。
实施例4抗再沉淀作用洁净的棉织物与污染的棉织物一起在家用洗涤剂溶液中洗涤。洗涤在Terg-O-Tometer中进行。洗涤过程中，污物从污染棉织物上释放到洗涤剂液体中。此污物可再沉淀到干净棉织物上。洗涤之后，漂洗和干燥棉织物，然后用反射能力分光光度计测量以检测污物再沉淀的程度。
洗涤剂粉末家用洗涤剂，亚洲的洗涤剂浓度4°DH的水中0.67g/l每只T-O-T烧杯1000mL洗涤剂溶液.
棉织物每只T-O-T烧杯中共33g织物，包含适当大小的白色机织棉织物，#2003(Tanigashira，Osaka，日本)，总重11g白色棉双面布，总重13g污染棉织物，EMPA101型(EMPA，瑞士)，总重9g洗涤温度25℃，洗涤时间40分钟，125转每分钟。洗涤之后#2003棉织物在流动自来水下漂洗10分钟，然后干燥。
反射能力测量。使用Macbeth7000反射能力分光光度计500nm下测量#2003机织棉织物两面的反射能力。计算每一T-O-M烧杯中测量的平均结果。
酶的加入在此试验中，如实施例2所述制备的葡聚糖酶在洗涤步骤开始之前加入洗涤剂液体中。
结果
活性单位ECU如上述SM-0302方法确定。从结果可以推出内切葡聚糖酶的加入降低了污物再沉淀。
实施例5酶样品的LAS稳定性LAS稳定性％通过上述方法确定。检测了下列酶Carezyme为Novozymes A/S酶产品的商品名，其含有(作为唯一的酶成分)WO 91/17243(SEQ ID NO2且在此引用作为参考)中公开的来源于Humicola insolens DSM 1800的43kD纤维素酶。含有此酶的洗涤剂组合物公开在EP 822 973中。
Renozyme为Novozymes A/S酶产品的商品名，其含有(作为唯一酶成分)WO 98/12307的实施例1公开的Thielavia terrestris纤维素酶变体。
内切葡聚糖酶。其为具有上述抗再沉淀作用的内切葡聚糖酶。实施例2中描述了此酶的制备方法。
结果
这些结果表明根据所用定义，Carezyme不是LAS稳定的并且Renozyme和内切葡聚糖酶均为LAS稳定的。
实施例6洗涤检测Renozyme和内切葡聚糖酶此检测的目的是测量单独的Renozyme和联合内切葡聚糖酶的Renozyme的酶去污性优势。
此检测中污染样本如下制备如上制备的预洗#2003织物样本如下污染。通过剧烈搅拌在75ml四氯乙烯(Fluka，目录号86972)中制备210mg碳黑(“用于洗涤检测的碳”，由Sentakukagaku-kyokai，2-11-1Shimomaruko Ohta-ku，Tokyo 146-8620，日本提供)悬浮液。棉样本在水平金属表面放平。在每一棉样本的中心上加入300μl碳悬浮液。污染的棉样本室温干燥过夜。
此检测中洗涤剂组合物如上所述并含有下列表面活性剂和pH值LAS0.5克每升非离子物质无pH值9.5酶去污性优势结果
酶浓度在此以涉及纯的催化活性酶蛋白质的等价浓度说明以避免活性分析方法造成的混淆。可使用常规生物化学技术纯化和表征酶。
适当的纤维素酶可从Novozymes A/S的商品样品获得或如WO98/12307A的实施例1所述得到。
内切葡聚糖酶为以上定义的具有抗再沉淀作用的内切葡聚糖酶。制备该酶的方法在实施例2中描述。
结果表明在含有LAS但不含其他表面活性剂的溶液中Renozyme和内切葡聚糖酶的联合比单独的Renozyme提供更高的酶去污性优势。
实施例7洗涤检测Stainzymes和内切葡聚糖酶此检测的目的是测量单独的Stainzymes和联合内切葡聚糖酶的Stainzymes对含淀粉污物的酶去污性优势。
Stainzymes为可商业购买的Novozymes A/S生产的α-淀粉酶产品。Stainzymes是为用于洗涤和硬表面清洁的洗涤剂。
此检测中污染样本如下制备在500ml自来水中搅拌制备4.5g马铃薯淀粉(“kartoffelmel”，KMC kartoffelmel-centralen生产，DK-7400Herning，丹麦，淀粉含量约为80％)的悬浮液，然后加热到沸腾然后冷却。100ml此溶液中加入332mg碳黑(“用于去污性检测的碳”，Sentakukagaku-kyokai，2-11-1Shimomaruko Ohtaku，Tokyo 146-8620，日本提供)，悬浮液用UltraTurrax搅拌器搅匀。棉样本在水平金属表面放平。每一棉样本中心加入250μl碳/淀粉悬浮液。污染的棉样本室温干燥过夜。
以上描述了此检测中的洗涤剂组合物并具有下列表面活性剂和pH值LAS0.4克每升非离子物质0.2克每升pH9.5酶去污性优势结果
酶浓度在此以涉及纯的催化活性酶蛋白质的等价浓度说明以避免活性分析方法造成的混淆。可使用常规生物化学技术纯化和表征酶。
适当的淀粉酶可从Novozymes A/S的商品Stainzymes的样品获得或如WO 01/66712和WO 01/64852中公开的从地衣芽孢杆菌变种得到。
内切葡聚糖酶为以上定义的具有抗再沉淀作用的内切葡聚糖酶。制备此酶的方法在实施例2中描述。
此检测中污物含有淀粉。结果表明联合内切葡聚糖酶的Stainzymes比单独的Stainzymes提供更高的酶去污性优势。
实施例8洗涤检测Savinase和内切葡聚糖酶此检测的目的是测量单独的Savinase和联合内切葡聚糖酶的Savinase对含蛋白质污物的酶去污性优势。
Savinase为枯草杆菌蛋白酶309的商品名。其为可商业购买的Novozymes A/S生产的蛋白酶产品。Savinase是为用于洗衣店和硬表面清洁的洗涤剂。
此检测中污染样本如下制备如上制备预洗#2003织物样本并如下污染。在100ml自来水中加热并搅拌制备7.2g明胶(明胶来源于猪皮，Flua，目录号04055)的溶液。10ml此溶液用水稀释到50ml并加入165mg碳黑(“用于去污性检测的碳”，Sentakukagaku-kyokai，2-11-1ShimomarukoOhta-ku，Tokyo 146-8620，日本提供)，悬浮液用UltraTurrax搅拌器匀浆。棉样本在水平金属表面放平。每一棉样本中心加入250μl碳/明胶悬浮液。污染的棉样本室温干燥过夜。
此检测中洗涤剂组合物如上所述并具有下列表面活性剂和pH值LAS0.4克每升非离子物质0.2克每升pH9.5酶去污性优势结果
酶浓度在此以涉及纯的催化活性酶蛋白质的等价浓度说明以避免活性分析方法造成的混淆。可使用常规生物化学技术纯化和表征酶。
适当的蛋白酶可从Novozymes A/S的商品Savinase样品获得或从US3,723,250中所述的迟缓芽孢杆菌(Bacillus lentus)NCIB 10309得到。
内切葡聚糖酶为以上定义的具有抗再沉淀作用的内切葡聚糖酶。制备此酶的方法在实施例2中描述。
此检测中污物含有蛋白质。结果表明联合内切葡聚糖酶的Savinase比单独的Savinase提供更高的酶去污性优势。
实施例9洗涤检测甘露聚糖酶和内切葡聚糖酶此检测的目的是测量单独的甘露聚糖酶和联合内切葡聚糖酶的甘露聚糖酶对含半乳甘露聚糖污物的酶去污性优势。
此检测中污染样本如下制备如上制备预洗#2003织物样本并如下污染。200ml自来水中加热并搅拌制备667mg瓜尔胶(Sigma，G 4129)的溶液并加入332mg碳黑(“用于去污性检测的碳”，Sentakukagaku-kyokai，2-11-1 Shimomaruko Ohta-ku，Tokyo 146-8620，日本提供)，悬浮液用UltraTurrax搅拌器匀浆。棉样本在水平金属表面放平。每一棉样本中心加入500μl碳/瓜尔胶悬浮液。污染的棉样本室温干燥过夜。
此检测中洗涤剂组合物如上所述并具有下列表面活性剂和pH值LAS0.4克每升非离子物质0.2克每升pH9.5酶去污性优势结果
酶浓度在此以涉及纯的催化活性酶蛋白质的等价浓度说明以避免活性分析方法造成的混淆。可使用常规生物化学技术纯化和表征酶。
适当的甘露聚糖酶可从WO 99/64619公开的芽孢杆菌1633中获得。优选的为WO 99/64619的SEQ ID NO2中的甘露聚糖酶。
内切葡聚糖酶为以上定义的具有抗再沉淀作用的内切葡聚糖酶。制备此酶的方法在实施例2中描述。
此检测中污物含有半乳甘露聚糖。结果表明内切葡聚糖酶和甘露聚糖酶的联合比单独的甘露聚糖酶提供更高的酶去污性优势。
实施例10洗涤检测果胶酸裂解酶和内切葡聚糖酶此检测的目的是测量单独的果胶酸裂解酶(BioPrepL)和联合内切葡聚糖酶对含果胶污物的酶去污性优势。
BioPrep为Novozymes A/S生产的可商业购买果胶酸裂解酶产品的商品名。BioPrep旨在用于清洁棉织物。
此检测中污染样本如下制备如上制备预洗#2003织物样本并如下污染。50ml自来水中加热并搅拌制备150mg果胶(Sigma，P 9311)的溶液并加入83mg碳黑(“用于去污性检测的碳”，Sentakukagaku-kyokai，2-11-1Shimomaruko Ohta-ku，Tokyo 146-8620，日本提供)，悬浮液用UltraTurrax搅拌器匀浆。棉样本在水平金属表面放平。每一棉样本中心加入500μl碳/果胶悬浮液。污染的棉样本室温干燥过夜。
此检测中洗涤剂组合物如上所述并具有下列表面活性剂和pH值LAS0.4克每升非离子物质0.2克每升pH9.5酶去污性优势结果
酶浓度在此以涉及纯的催化活性酶蛋白质的等价浓度说明以避免活性分析方法造成的混淆。可使用常规生物化学技术纯化和表征酶。
适当的果胶酸盐裂解酶可从US 6,124,127中所述的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)中获得。
内切葡聚糖酶为以上定义的具有抗再沉淀作用的内切葡聚糖酶。制备此酶的方法在实施例2中描述。
此检测中污物含有果胶。结果表明内切葡聚糖酶和果胶酸裂解酶的联合比单独的果胶酸裂解酶提供更高的酶去污性优势。
实施例11洗涤检测Lipex和内切葡聚糖酶此检测的目的是测量单独的脂肪酶(Lipex)和联合内切葡聚糖酶对含甘油三酯油的污物的酶去污性优势。
Lipex为NovozymesA/S生产的可商业购买的脂肪酶产品的商品名。Lipex用于洗涤和硬表面清洁。
此检测中污染样本如下制备如上制备预洗#2003织物样本并如下污染。500ml自来水中通过搅拌并加热到沸腾制备1.5g燕麦片(旋转烘烤的燕麦片，含有重量约7％的脂肪，例如Faellesindkb I/S，2605Brφndby，丹麦生产)的悬浮液并用UltraTurrax搅拌器匀浆。100ml此悬浮液中加入166mg碳黑(“用于去污性检测的碳”，Sentakukagaku-kyokai，2-11-1Shimomaruko Ohta-ku，Tokyo 146-8620，日本提供)，悬浮液用UltraTurrax搅拌器匀浆。加入25ml玉米油(精制玉米油，家用，按重量计100％的油)，混合物用UltraTurrax搅拌器匀浆。棉样本在水平金属表面放平。每一棉样本中心加入100μl碳/油悬浮液。污染的棉样本室温干燥过夜。
此检测中洗涤剂组合物如上所述并具有下列表面活性剂和pH值LAS0.4克每升非离子物质0.2克每升pH9.5酶去污性优势结果
酶浓度在此以涉及纯的催化活性酶蛋白质的等价浓度说明以避免活性分析方法造成的混淆。可使用常规生物化学技术纯化酶和研究和表征酶。
脂肪酶可从Novozymes A/S的商品Lipex样品获得或者从WO 00/60063中所述的适当的柔毛腐质霉变种得到。
内切葡聚糖酶为以上定义的具有抗再沉淀作用的内切葡聚糖酶。制备此酶的方法在实施例2中描述。
此检测中污物含有甘油三酯油。结果表明内切葡聚糖酶和Lipex的联合比单独的Lipex提供更高的酶去污性优势。
实施例12内切葡聚糖酶抗再沉淀作用检测通过“抗再沉淀作用的内切葡聚糖酶”检测评价了两种酶。它们是可如实施例2所述制备的酶(“实施例2酶”)和Carezyme，即来源于Humicola insolens的43kD纤维素酶。
结果
结果表明实施例2酶为抗再沉淀内切葡聚糖酶，即根据本发明的具有抗再沉淀作用的内切葡聚糖酶，而Carezyme不是。
序列表<110>诺和酶股份有限公司<120>洗涤剂组合物<130>10383<160>12<170>PatentIn版本3.2<210>1<211>2322<212>DNA<213>芽孢杆菌(Bacillus sp.)<220>
<221>CDS<222>(1)..(2322)<400>1gca gaa gga aac act cgt gaa gac aat ttt aaa cat tta tta ggt aat 48Ala Glu Gly Asn Thr Arg Glu Asp Asn Phe Lys His Leu Leu Gly Asn1 5 10 15gac aat gtt aaa cgc cct tct gag gct ggc gca tta caa tta caa gaa 96Asp Asn Val Lys Arg Pro Ser Glu Ala Gly Ala Leu Gln Leu Gln Glu20 25 30gtc gat gga caa atg aca tta gta gat caa cat gga gaa aaa att caa144Val Asp Gly Gln Met Thr Leu Val Asp Gln His Gly Glu Lys Ile Gln35 40 45tta cgt gga atg agt aca cac gga tta caa tgg ttt cct gar atc ttg192Leu Arg Gly Met Ser Thr His Gly Leu Gln Trp Phe Pro Glu Ile Leu50 55 60aat gat aac gca tac aaa gct ctt gct aac gat tgg gaa tca aat atg240Asn Asp Asn Ala Tyr Lys Ala Leu Ala Asn Asp Trp Glu Ser Asn Met65 70 75 80
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<210>2<211>773<212>PRT<213>芽孢杆菌<400>2Ala Glu Gly Asn Thr Arg Glu Asp Asn Phe Lys His Leu Leu Gly Asn1 5 10 15Asp Asn Val Lys Arg Pro Ser Glu Ala Gly Ala Leu Gln Leu Gln Glu20 25 30Val Asp Gly Gln Met Thr Leu Val Asp Gln His Gly Glu Lys Ile Gln35 40 45Leu Arg Gly Met Ser Thr His Gly Leu Gln Trp Phe Pro Glu Ile Leu50 55 60Asn Asp Asn Ala Tyr Lys Ala Leu Ala Asn Asp Trp Glu Ser Asn Met65 70 75 80Ile Arg Leu Ala Met Tyr Val Gly Glu Asn Gly Tyr Ala Ser Asn Pro85 90 95Glu Leu Ile Lys Ser Arg Val Ile Lys Gly Ile Asp Leu Ala Ile Glu100 105 110Asn Asp Met Tyr Val Ile Val Asp Trp His Val His Ala Pro Gly Asp115 120 125Pro Arg Asp Pro Val Tyr Ala Gly Ala Glu Asp Phe Phe Arg Asp Ile130 135 140
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Ala Phe Thr Pro Phe Glu Leu Gly Lys Ser Asn Ala Thr Asn Leu Asp325 330 335Pro Gly Pro Asp His Val Trp Ala Pro Glu Glu Leu Ser Leu Ser Gly340 345 350Glu Tyr Val Arg Ala Arg Ile Lys Gly Val Asn Tyr Glu Pro Ile Asp355 360 365Arg Thr Lys Tyr Thr Lys Val Leu Trp Asp Phe Asn Asp Gly Thr Lys370 375 380Gln Gly Phe Gly Val Asn Ser Asp Ser Pro Asn Lys Glu Leu Ile Ala385 390 395 400Val Asp Asn Glu Asn Asn Thr Leu Lys Val Ser Gly Leu Asp Val Ser405 410 415Asn Asp Val Ser Asp Gly Asn Phe Trp Ala Asn Ala Arg Leu Ser Ala420 425 430Asp Gly Trp Gly Lys Ser Val Asp Ile Leu Gly Ala Glu Lys Leu Thr435 440 445Met Asp Val Ile Val Asp Glu Pro Thr Thr Val Ala Ile Ala Ala Ile450 455 460Pro Gln Ser Ser Lys Ser Gly Trp Ala Asn Pro Glu Arg Ala Val Arg465 470 475 480Val Asn Ala Glu Asp Phe Val Gln Gln Thr Asp Gly Lys Tyr Lys Ala485 490 495
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Gln Cys Asp Ser Phe Pro Ala Pro Leu Lys Pro Gly Cys Gln Trp Arg180 185 190Phe Asp Trp Phe Gln Asn Ala Asp Asn Pro Thr Phe Thr Phe Gln Gln195 200 205Val Gln Cys Pro Ala Glu Ile Val Ala Arg Ser Gly Cys Lys Arg Asn210 215 220Asp Asp Ser Ser Phe Pro Val Phe Thr Pro Pro Ser Gly Gly Asn Gly225 230 235 240Gly Thr Gly Thr Pro Thr Ser Thr Ala Pro Gly Ser Gly Gln Thr Ser245 250 255Pro Gly Gly Gly Ser Gly Cys Thr Ser Gln Lys Trp Ala Gln Cys Gly260 265 270Gly Ile Gly Phe Ser Gly Cys Thr Thr Cys Val Ser Gly Thr Thr Cys275 280 285Gln Lys Leu Asn Asp Tyr Tyr Ser Gln Cys Leu290 295<210>5<211>42<212>DNA<213>人工序列<220>
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<222>(1)..(42)<223>引物LWN5494<400>5gtcgccgggg cggccgctat caattggtaa ctgtatctca gc42<210>6<211>64<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>引物<220>
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<223>引物<220>
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<223>引物<220>
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<223>引物<220>
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<220>
<223>引物<220>
<221>misc_feature<222>(1)..(37)<223>引物LWN7901<400>10aactgcagcc gcggcacatc ataatgggac aaatggg 37<210>11<211>42<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>引物<220>
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<223>引物<220>
<221>misc_feature<222>(1)..(44)<223>引物168685
<400>12gcgttgagac gcgcggccgc ttactcttct ttctcttctt tctc 4权利要求
1.包含内切葡聚糖酶的洗涤剂组合物，其中内切葡聚糖酶选自(i)具有SEQ ID NO2的1位到773位氨基酸序列的内切葡聚糖酶；(ii)当通过GCG程序包中提供的GAP，使用GAP创建罚分3.0和GAP延伸罚分0.1确定同一性时，与SEQ ID NO2的1位到773位氨基酸序列具有至少90％同一性的序列的内切葡聚糖酶；或其具有葡聚糖酶活性的片段。
2.包含内切葡聚糖酶的洗涤剂组合物，其中内切葡聚糖酶为通过内切葡聚糖酶活性测试和抗再沉淀作用测试而确定的抗再沉淀内切葡聚糖酶。
3.包含阴离子表面活性剂并包含组合有权利要求1或2所述的内切葡聚糖酶和真菌纤维素酶的洗涤剂组合物，其中所述的两种酶在阴离子表面活性剂存在时是稳定的。
4.权利要求3的洗涤剂组合物，其中(a)内切葡聚糖酶选自(i)具有SEQ ID NO2的1位到773位氨基酸序列的内切葡聚糖酶；(ii)当通过GCG程序包中提供的GAP，使用GAP创建罚分3.0和GAP延伸罚分0.1确定同一性时，与SEQ ID NO2的1位到773位的氨基酸序列具有至少90％同一性的序列的内切葡聚糖酶；或其具有葡聚糖酶活性的片段；(b)纤维素酶选自(i)具有SEQ ID NO4的1位到299位氨基酸序列的纤维素酶；或者(ii)当通过GCG程序包中提供的GAP，使用GAP创建罚分3.0和GAP延伸罚分0.1确定同一性时，与SEQ ID NO4的1位到299位氨基酸序列具有至少70％同一性的序列的纤维素酶，或其具有纤维素酶活性的片段。
5.权利要求1到4的洗涤剂组合物，其中内切葡聚糖酶在pH至少为4-11，优选地pH为5.5-10.5时有活性。
6.权利要求3到5的洗涤剂组合物，其中纤维素酶来源于梭孢壳属(Thielavia)的菌株，优选地来源于Thielavia terrestris的菌株，尤其来源于Thielavia terrestris NRRL 8126，并在SEQ ID NO4中显示。
7.权利要求1到6的组合物，其中组合物还包含一种或多种选自蛋白酶、纤维素酶、β-葡聚糖酶、半纤维素酶、脂肪酶、过氧化物酶、漆酶、α-淀粉酶、葡糖淀粉酶、角质酶、果胶酶、还原酶、氧化酶、酚氧化酶、木质素酶(ligninase)、支链淀粉酶、果胶酸裂解酶、木葡聚糖酶、木聚糖酶、果胶乙酰酯酶、聚半乳糖醛酸酶、鼠李半乳糖醛酸酶、果胶裂解酶、其他甘露聚糖酶、果胶甲酯酶、纤维素二糖水解酶(cellobiohydrolase)、转谷氨酰胺酶的酶或其混合物。
8.权利要求7的组合物，其中蛋白酶来源于芽孢杆菌属菌株，优选地其中蛋白酶为选自枯草杆菌蛋白酶Novo、枯草杆菌蛋白酶Carlsberg、枯草杆菌蛋白酶309、枯草杆菌蛋白酶147和枯草杆菌蛋白酶168的枯草杆菌蛋白酶。
9.权利要求8的组合物，其中脂肪酶来源于腐质霉属(Humicola)的菌株，优选地来源于柔毛腐质霉(Humicola lanuginose)的菌株，尤其来源于柔毛腐质霉DSM4109。
10.权利要求9的组合物，其中α-淀粉酶来源于芽孢杆菌属的菌株，优选地来源于芽孢杆菌种的菌株，尤其来源于芽孢杆菌DSM 12649、NCIB12512或NCIB 12513。
11.权利要求10的组合物，其中甘露聚糖酶来源于芽孢杆菌属的菌株，优选地来源于地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)，尤其来源于地衣芽孢杆菌1633。
12.权利要求11的组合物，其中果胶酸裂解酶来源于芽孢杆菌属的菌株，优选地来源于枯草芽孢杆菌，尤其来源于枯草芽孢杆菌DSM14218。
13.权利要求12的组合物，其中纤维素酶来源于腐质霉属的菌株，优选地来源于Humicola insolens，尤其来源于Humicola insolens DSM 1800。
14.包含抗再沉淀内切葡聚糖酶和纤维素酶的洗涤剂组合物，该组合物的特征在于来自所述酶联合的酶去污性优势高于不含抗再沉淀葡聚糖酶的相同洗涤剂组合物的酶去污性优势(通过实施例6的洗涤检测方法确定酶去污性优势)，优选地至少高5个单位。
15.包含抗再沉淀内切葡聚糖酶和淀粉酶的洗涤剂组合物，该组合物的特征在于来自所述酶联合的酶去污性优势高于不含抗再沉淀葡聚糖酶的相同洗涤剂组合物的酶去污性优势(通过实施例7的洗涤检测方法确定酶去污性优势)，优选地至少高5个单位。
16.包含抗再沉淀内切葡聚糖酶和蛋白酶的洗涤剂组合物，该组合物的特征在于来自所述酶联合的酶去污性优势高于不含抗再沉淀葡聚糖酶的相同洗涤剂组合物的酶去污性优势(通过实施例8的洗涤检测方法确定酶去污性优势)，优选地至少高5个单位。
17.包含抗再沉淀内切葡聚糖酶和半纤维素酶的洗涤剂组合物，该组合物的特征在于来自所述酶联合的酶去污性优势高于不含抗再沉淀内切葡聚糖酶的相同洗涤剂组合物的酶去污性优势(通过实施例9的洗涤检测方法确定酶去污性优势)，优选地至少高5个单位。
18.权利要求17的洗涤剂组合物，其中半纤维素酶为甘露聚糖酶。
19.包含抗再沉淀内切葡聚糖酶和脂肪酶的洗涤剂组合物，该组合物的特征在于来自所述酶联合的酶去污性优势高于不含抗再沉淀葡聚糖酶的相同洗涤剂组合物的酶去污性优势(通过实施例11的洗涤检测方法确定酶去污性优势)，优选地至少高5个单位。
20.包含抗再沉淀内切葡聚糖酶和果胶酶或果胶酸裂解酶的洗涤剂组合物，该组合物的特征在于来自所述酶联合的酶去污性优势高于不含抗再沉淀葡聚糖酶的相同洗涤剂组合物的酶去污性优势(通过实施例10的洗涤检测方法确定酶去污性优势)，优选地至少高5个单位。
21.根据权利要求14-20中任意一项所述的洗涤剂组合物，其中当通过GCG程序包中提供的GAP，使用GAP创建罚分3.0和GAP延伸罚分0.1确定同一性时，内切葡聚糖酶为包含SEQ ID NO2的氨基酸序列，或者具有与SEQ ID NO2的1位到773位氨基酸序列至少90％同一性的序列的内切葡聚糖酶；或其具有内切葡聚糖酶活性的片段。
22.洗涤织物的方法，其包括使织物与权利要求1-21的组合物水溶液接触有效的一段时间，任选地在搅拌条件下接触有效的一段时间。
23.权利要求22的方法，其中所述一段时间为2分钟到24小时，优选地为10分钟-60分钟。
24.权利要求23的方法，其中内切葡聚糖酶蛋白组分和总酶蛋白的重量比小于1∶2。
25.洗涤硬表面的方法，其包括使所述表面与权利要求1-21的组合物水溶液接触有效的一段时间。
26.权利要求22的方法，其中所述一段时间为1分钟到1小时，优选地为5分钟到30分钟。
27.权利要求22或25中任意一项所述的方法，其中内切葡聚糖酶蛋白组分与总酶蛋白的重量比小于1∶2。
全文摘要
本发明涉及包含提供去污性能提高的内切葡聚糖酶的洗涤剂组合物。本发明还涉及包含内切葡聚糖酶和其他酶联合的洗涤剂组合物。本发明的一个方面涉及用含内切葡聚糖酶的洗涤剂洗涤织物或硬表面的方法。
文档编号C11D3/386GK1738899SQ200380108616
公开日2006年2月22日 申请日期2003年12月10日 优先权日2002年12月11日
发明者K·吉布森, L·汉森 申请人:诺和酶股份有限公司