一种番茄提取物及其制备方法和应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开一种番茄提取物及制备方法和应用，所述番茄提取物，即首先将番茄洗净，破碎匀浆，得到的番茄匀浆液和水进行混合，得到的混合液在功率为60-80w下超声波辅助提取6-10min；超声辅助提取后在45℃的水浴锅中浸提30-40min，浸提完成后于8000r/min,4℃的冷冻离心机上离心15min，得到的上清液过滤，所得的滤液控制压力在0.08-0.1MPa，温度为50-65℃进行减压浓缩，浓缩后的剩余物控制温度为-20~-40℃进行冷冻干燥，即得番茄提取物。该提取物对酪氨酸酶具有抑制作用，可用于作酪氨酸酶抑制剂，应用于美白护肤品中，性能安全可靠，不会有副作用。且其制备方法简单，操作方便。
【专利说明】一种番茄提取物及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于植物活性物提取领域，具体涉及一种番茄提取物及其制备方法和作为 酪氨酸酶抑制剂的应用。
【背景技术】
[0002] 通常，人类皮肤的颜色主要取决于黑色素的含量和分布，而黑色素细胞的结构功 能和数量直接影响皮肤中黑色素的含量，是产生黑色素的决定因素。在皮肤上，黑色素细胞 位于隔开真皮和表皮的基底层。黑色素细胞属腺细胞，具有树状突起，它与角质细胞构成 表皮黑素单位。黑色素是通过一系列氧化反应形成的，酪氨酸酶催化黑色素细胞中的黑色 素生物合成途径中的3个不同的反应：在酪氨酸酶（TYR)催化下酪氨酸（Tyr)转换为多巴 (D0PA)，D0PA在酪氨酸酶的作用下转化为多巴醌（DQ)，多巴醌自动氧化转化成多巴色素， 最后生成5, 6-二羟基吲哚羧酸（DHICA)以形成优黑素。后者的反应是由多巴色素互变异 构酶（Dopachrometautomerase)和DHICA氧化酶的催化下进行的。同时，在以半胱氨酸或 谷胱甘肽的催化下，多巴醌被转化为半胱氨酰多巴或谷胱甘肽多巴，最后生成褐黑素。
[0003] 肌肤白皙是亚洲人尤其是女性共同的美丽标准之一。人们热衷追求美白，使用美 白产品。但化学合成美白剂有较大的副作用，近年来人们转而追求天然美白剂，已有一些植 物活性物如熊果苷、维生素 C和曲酸的衍生物、绿茶等提取物具有美白作用。这些提取物大 多属于酪氨酸酶抑制剂。可以抑制酪氨酸酶的活性从而达到抑制黑色素形成的功效。开 发从资源丰富的植物中提取美白剂及其方法是本发明的目的。番茄的营养价值高，含多种 维生素、果酸、番茄红素等活性物，番茄红素能够有效地清除自由基，增强机体的抗氧化能 力，具有延缓衰老的功能。维生素 C具有美白的功效。谷胱甘肽具有抗自由基和抗氧化应 激作用。果酸能提高细胞的保水能力，使皮肤保持弹性，能有效地软化表皮细胞组织，帮助 表面角化细胞脱落，促进细胞的更新，使浅色褐斑消褪。番茄有美白肌肤，抗衰老的功效。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种作为酪氨酸酶抑制剂应用的番茄提取物及其制备方法。
[0005] 本发明的技术方案 一种番茄提取物，具体通过包括以下步骤的方法得到： (1 )、将番茄洗净，破碎匀浆，得到番茄匀浆液； 将番茄匀浆液和水按质量比计算，即番茄匀浆液：水为lg :2-6ml，优选为lg:4ml的比 例进行混合，得到混合液； (2) 、将步骤（1)所得的混合液用超声波辅助进行提取，超声波辅助提取的功率为 60-80w，超声波时间为6-10min ; 超声辅助提取后在45°C的水浴锅中浸提30-40min，浸提后于8000r/min，4°C的冷冻离 心机上离心15min，得到的上清液过滤，收集所得的滤液，即为番茄提取液； (3) 、将步骤（2)所得的番茄提取液控制压力为0. 08-0. IMPa，温度在50-65°C的条件下 进行减压浓缩，浓缩后的剩余物控制温度为-20--40°C进行冷冻干燥，即得番茄提取物。
[0006] 本发明的一种番茄提取物可作为酪氨酸酶抑制剂应用，由于其具有显著抑制 的-酪氨酸酶的活性，从而防止皮肤中黑色素的形成，因此可以作为美白剂进行应用，美白 功效显著。
[0007] 本发明的有益效果 本发明的一种番茄提取物作为酪氨酸酶抑制剂应用，由于其具有显著抑制的-酪氨酸 酶的活性，从而防止皮肤中黑色素的形成，因此可将其应用于护肤品中，美白功效显著。
[0008] 进一步，本发明的一种番茄提取物的制备方法，由于制备过程仅是简单的混合，超 声、浸提、过滤、减压浓缩、冷冻干燥等步骤，即制备过程不需要有机试剂，因此其制备过程 简单，操作方便，制备过程环保，所得的产物作为酪氨酸酶抑制剂使用，性能安全可靠，不会 有副作用。
【专利附图】
【附图说明】
[0009] 图1、番茄提取物对L-酪氨酸酶的活性抑制情况； 图2、番茄提取物的还原能力测试。
【具体实施方式】
[0010] 下面通过具体实施例并结合附图对本发明进一步阐述，但并不限制本发明。
[0011] 实施例1 一种番茄提取物，具体通过包括以下步骤的方法制备而得： (1 )、将番茄洗净，破碎匀浆，得到番茄匀浆液； 将l〇〇g番茄匀浆液和400ml水按质量比计算，即番茄匀浆液：水的为1:4的比例进行 混合，得到混合液； (2) 、将步骤（1)所得的混合液用超声波辅助进行提取，超声波辅助提取的功率为80w， 时间为l〇min ; 超声辅助提取后在45°C的水浴锅中浸提35min，浸提后于8000r/min，4°C的冷冻离心 机上离心15min，得到的上清液过滤，收集所得的滤液，即为番茄提取液； (3) 、将步骤（2)所得的番茄提取滤液经旋转蒸发仪控制压力为0. 08-0. IMPa，温度 在50-65°C的条件下进行减压浓缩，浓缩后的剩余物控制温度为-20--40°C进行冷冻干燥 48h，即得番茄提取物。
[0012] 应用实施例1 测定上述所得的番茄提取物对L-酪氨酸酶的活性抑制实验 根据酪氨酸酶催化L-多巴产生多巴色素，多巴色素在475nm波长处有最大吸收，其 摩尔消光系数为ε =3700(L/mol · cm); 通过测定酶催化反应体系的〇D475nm随时间变化的直线增长趋势，从直线斜率计算出 酶活力。
[0013] 酶活力单位（U)定义为每分钟催化1 μ molL-多巴底物转变成多巴色素所需的酶 量。
[0014] 上述的测定番茄提取物对L-酪氨酸酶的活性抑制实验，具体包括如下步骤： (1 )、pH为6· 8的PBS缓冲液的配制 称取8. 96g十二水磷酸氢二钠溶于500mL蒸馏水中，得到溶液A ; 称取3g磷酸氢二钠溶于500mL蒸馏水中，得到溶液B; 将441mL溶液A和459mL溶液B混合，得到900mLpH为6. 8的PBS缓冲液； (2 )、称取0. 0049gL-多巴，先用少量pH=l的盐酸溶解，待其溶解后用上述配制的pH为 6. 8的PBS缓冲液定容至50mL，得到2mol/L的L-多巴溶液； (3) 、将实施例1所得的番茄提取物用pH为6. 8的PBS缓冲液稀释，分别得到浓度为 127. 5mg/mL、63. 75mg/mL、51mg/mL、31. 88mg/mL、25. 5mg/mL 的番爺提取物溶液； (4) 、分别取3ml步骤（1)所得的pH=6. 8的PBS缓冲液，5ml步骤（2)所得的浓度为 2mol/L L-多巴溶液，0. 5ml步骤（3)所得的不同浓度的番茄提取物溶液加入到15ml试管 中，在25°C水浴锅中恒温水浴lOmin，最后加入1. 5ml的酪氨酸酶（333U/ml)(以蒸馏水代 替酪氨酸酶，作为空白对照)，25°C反应3min，立即在475nm下测定吸光度，每个浓度做3个 平行样，最后取平均值，根据下面公式，计算提取物对L-酪氨酸酶活性的抑制率。
[0015] 抑制率（％) = X100, 其中A为没加酪氨酸酶的空白对照液的吸光度； B为番茄提取物溶液中加入酪氨酸酶的吸光度； 以番茄提取物溶液的浓度为横坐标，以不同浓度的番茄提取物溶液对L-酪氨酸酶 活性的抑制率为纵坐标作图，结果如图1所示，从图1中可以看出在番茄提取物浓度为 25. 5-52. 5mg/mL时，随着番茄提取物浓度的增大，抑制率迅速增大，在番茄提取物浓度为 52. 5-127. 5mg/mL时，抑制率增大的速度减缓，特别是番茄提取物在浓度为127. 5mg / mL时 的抑制率为99. 31%，基本可以完全抑制酪氨酸酶的活性。由此表明，本发明的番茄提取物作 为酪氨酸酶抑制剂应用。
[0016] 计算在实验条件下抑制50%酪氨酸酶活性的测试样品的浓度。即抑制率对抑制剂 浓度进行线性拟合，得出IC50,其IC50为46. 64mg/mL，由此表明了番茄水提物是一种效果 非常明显的美白剂。
[0017] 应用实施例2 番茄提取物的还原能力的测试，具体步骤如下： 首先，用应用实施例1中所得的pH=6. 8磷酸缓冲溶液加入到实施例1所得的番茄提取 物中，得到浓度分别为16. 24、10. 15、8. 12、5. 075、4. 06mg/mL的番茄提取物溶液； 然后，在每个不同浓度的番茄提取物溶液中分别加入lml质量百分比浓度为1%的铁氰 化钾水溶液，然后控制温度为50°C条件下保温20min后，急速冷却至25°C，再分别加2. 5ml 质量百分比浓度为10%的三氯乙酸水溶液，于3500r/min离心分离lOmin,再分别取上层清 液2. 5ml，再分别加2. 5ml双馏水，再分别加0. 5ml质量百分比浓度为0. 1%的FeCl3水溶 液，混合均匀后在波长700nm下测吸光度值，以番茄提取物溶液的浓度为横坐标，以番茄提 取物溶液的吸光度为纵坐标作图，结果如图2所示，从图2中可以看出在番茄水提物浓度为 4. 06-16. 24mg/mL时，随着番茄水提物浓度的增长，吸光度呈线性增长趋势。由此表明，番茄 提取物的抗氧化能力随着番茄提取物的浓度增大，吸光度增大，即抗氧化能力增强。
[0018] 综上所述，本发明提供的一种番茄提取物，具有很好的抑制酪氨酸酶的活性，也具 有很明显的抗氧化能力，因此可以作为皮肤美白剂使用。
[0019] 以上所述仅是本发明的实施方式的举例，应当指出，对于本【技术领域】的普通技术 人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和变型，这些改进和变 型也应视为本发明的保护范围。
【权利要求】
1. 一种番茄提取物，其特征在于所述的番茄提取物具体通过包括以下步骤的方法得 到： (1 )、将番茄洗净，破碎匀浆，得到番茄匀浆液； 将番茄匀浆液和水按质量比计算，即番茄匀浆液：水为lg :2-6ml的比例进行混合，得 到混合液； (2) 、将步骤（1)所得的混合液用超声波辅助进行提取，超声波辅助提取的功率为 60-80w，时间为 6-10min ; 超声辅助提取后在45°C的水浴锅中浸提30-40min，浸提后于8000r/min，4°C的冷冻离 心机上离心15min，得到的上清液过滤，收集所得的滤液，即为番茄提取液； (3) 、将步骤（2)所得的番茄提取液控制压力为0. 08-0. IMPa，温度在50-65°C的条件下 进行减压浓缩，浓缩后的剩余物控制温度为-20--40°C进行冷冻干燥，即得番茄提取物。
2. 如权利要求1所述的一种番茄提取物，其特征在于制备步骤（1)中番茄匀浆液：水为 lg:4ml〇
3. 如权利要求1或2所述的番茄提取物作为酪氨酸酶抑制剂应用。
【文档编号】A61Q19/02GK104146899SQ201410348639
【公开日】2014年11月19日 申请日期:2014年7月22日 优先权日:2014年7月22日
【发明者】龚钢明, 韩佳, 王沁, 张婉萍 申请人:上海应用技术学院