培养基80mL，接入20mL菌丝悬浮液，以未添加天然底物或硫酸铜 的试样为对照，在摇床中150rpm，28°C恒温震荡培养。培养过程中定时提取发酵液，离心后 上清液即为粗酶液，用于酶活的测定。
[0033] 产酶培养基的组成为：NaN032. 5g，KH2PO4Ig, CaCl2 · 6H20 0· lg，MgSO4O. 3g，NaCl 0· lg，FeCl3O. Olg，油菜秸杆粉(λ 5g，蒸馏水1000mL，pH用稀盐酸调至6. 0-7. 0。
[0034] 实施例2
[0035] 由热带假丝酵母DK2菌株制备漆酶与双氧水联合用于亚麻原茎脱胶的工艺如下：
[0036] 将5g亚麻原茎置于250ml锥形瓶，以亚麻原茎与粗酶液和双氧水混合液按I : 20 (w/v)分装于锥形瓶中，装液量为100ml，混合液pH值为6. 0,亚麻原茎与双氧水质量比为 1:5,与粗酶液质量比为1:15。在40°C，200rpm摇床中分别脱胶1天、2天和4天，时间到设 定时间后加入10%氢氧化钠，设定温度75°C，升温速度1°C /min，时间为5小时，脱胶时间 到，除去脱胶液，用自来水冲洗数次，以除去亚麻原茎上的细菌和非纤维素物质，完成脱胶。
[0037] 通过对亚麻脱胶观察发现，脱胶后，原本成束的亚麻分散成纤维状，发酵液明显变 稠；经过双氧水氧化脱胶后，亚麻白度增加，脱胶率增加。
[0038] 实施例3
[0039] 由热带假丝酵母DK2与双氧水联合用于苎麻纱线的工艺如下：
[0040] 将5g苎麻灭菌纱线（苎麻粗纱或苎麻细纱）置入250ml锥形瓶，以苎麻纱线与粗 酶液和双氧水混合液按I :20 (w/v)分装于锥形瓶中，装液量为100ml，混合液pH值为7. 0， 苎麻纱线与双氧水质量比为1:1，与粗酶液质量比为1:19。在10°C，IOrpm摇床中分别脱胶 1011^11，时间到设定时间后加入0.5%氢氧化钠，设定温度50°0，升温速度10°〇111，时间为 lOmin，脱胶时间到时，除去脱胶液，用自来水冲洗数次，以除去苎麻纱线上的细菌和非纤维 素物质，完成脱胶。
[0041] 通过苎麻纱线脱胶观察发现，脱胶后，苎麻纱线柔软度提高，白度增加，纱线强度 未发生明显变化。
[0042] 实施例4
[0043] 由热带假丝酵母DK2与双氧水联合用于竹脱胶的工艺如下：
[0044] 以竹与粗酶液和双氧水混合液按I :20 (w/v)分装于锥形瓶中，装液量为100mL，混 合液pH值为4.0,竹与双氧水质量比为1:19,与粗酶液质量比为1:1。在60°C，300rpm摇 床中分别脱胶5d，时间到设定时间后加入30%氢氧化钠，设定温度80°C，升温速度0. 1°C / min，时间为24h，脱胶时间到时，除去脱胶液，用自来水冲洗数次，以除去竹上的细菌和非纤 维素物质，完成脱胶。
[0045] 通过对脱胶竹观察发现，脱胶后竹分散度显著改善，柔软度提高。
[0046] 实施例5
[0047] 由热带假丝酵母DK2与双氧水联合用于黄麻脱胶的工艺如下：
[0048] 以黄麻与粗酶液和双氧水混合液按1 :20 (w/v)分装于锥形瓶中，装液量为100mL， 混合液pH值为5. 0,黄麻与双氧水质量比为1:10,与粗酶液质量比为1:10。在50°C，250rpm 摇床中分别脱胶4d，时间到设定时间后加入20%氢氧化钠，设定温度70°C，升温速度2°C / min，时间为12h，脱胶时间到时，除去脱胶液，用自来水冲洗数次，以除去黄麻上的细菌和非 纤维素物质，完成脱胶。
[0049] 通过对脱胶黄麻观察发现，脱胶后黄麻白度、柔软度显著改善，刺痒感显著减低。
[0050] 实施例6
[0051] 由热带假丝酵母DK2与双氧水联合用于红麻织物脱胶的工艺如下：
[0052] 以红麻织物与粗酶液和双氧水混合液按1 :20分装于锥形瓶中，装液量为100ml， 混合液pH值为5. 5,红麻织物与双氧水质量比为1:15,与粗酶液质量比为1:5。在55°C， 150印111摇床中分别脱胶1(1，时间到设定时间后加入5%氢氧化钠，设定温度60°0，升温速度 5°C /min，时间为2h，脱胶时间到时，除去脱胶液，用自来水冲洗数次，以除去红麻织物上的 细菌和非纤维素物质，完成脱胶。
[0053] 通过对脱胶红麻织物观察发现，脱胶后红麻织物白度增加、柔软度提高，刺痒感减 低。
【主权项】
1. 一种热带假丝酵母DK2菌株与双氧水联合工序制备麻纤维的方法，包括： (1) 将热带假丝酵母DK2菌株保存于PDA培养基培养，添加冻存缓冲液；经由PDA斜面 培养基转接入装有基础液体培养基的三角瓶中，接入所得的菌一环，在摇床中25~30°C恒 温震荡培养3~4d后，培养基接种入亚麻发酵培养基，摇瓶培养得到发酵菌液，发酵菌液经 过滤得到菌丝体，菌丝体用无菌水洗净打散，随后收集于无菌水中制成菌丝悬浮液，保存备 用； (2) 在基础液体培养基中分别加入1~2% w/v的天然底物和不同浓度的CuSO4 · 5H20 作为产酶培养基，在三角瓶中装入产酶培养基，接入上述菌丝悬浮液，在摇床中25~30°C 恒温震荡培养，培养过程中定时提取发酵液，离心后取上清液即为粗酶液； (3) 将灭菌后的麻类原料与上述粗酶液和双氧水的混合液按质量体积比1:10~30混 合，调节PH值，然后放在摇床中进行处理，最后加入氢氧化钠，并升高温度进行脱胶，除去 脱胶液，冲洗，当PH值为自然时，停止冲洗，完成脱胶。
2. 根据权利要求1所述的一种热带假丝酵母DK2菌株与双氧水联合工序制备麻纤维 的方法，其特征在于：所述步骤（1)中的热带假丝酵母DK2菌株的ITS序列如SEQ ID NO: 1 所示。
3. 根据权利要求1所述的一种热带假丝酵母DK2菌株与双氧水联合工序制备麻纤维 的方法，其特征在于：所述步骤（1)中的冻存缓冲液每100mL的配方为：磷酸二氢钾0. lg， 磷酸氢二钾〇. 〇2g，柠檬酸钠0. 06g，七水合硫酸镁0. 03g，甘油12ml，加水定容至100ml，制 得。
4. 根据权利要求1所述的一种热带假丝酵母DK2菌株与双氧水联合工序制备麻纤维的 方法，其特征在于：所述步骤（1)中的基础液体培养基的组成为：马铃薯200g，葡萄糖20g， 蒸馏水1000mL，pH自然；亚麻发酵培养基的组成为：每1000ml培养基包括亚麻皮200g，麸 皮50g，麦芽汁50ml和水950ml。
5. 根据权利要求1所述的一种热带假丝酵母DK2菌株与双氧水联合工序制备麻纤维的 方法，其特征在于：所述步骤（1)中的保存温度为40°C。
6. 根据权利要求1所述的一种热带假丝酵母DK2菌株与双氧水联合工序制备麻纤维的 方法，其特征在于：所述步骤（2)中的天然底物为茶叶、稻草、麦草、花生壳、豆柏、蔗渣、桔 皮、玉米杆或麦鼓；CuSO 4 · 5H20的浓度范围为0-4mM。
7. 根据权利要求1所述的一种热带假丝酵母DK2菌株与双氧水联合工序制备麻纤 维的方法，其特征在于：所述步骤（2)中的产酶培养基的组成为：NaN0 32.5g，KH2PO4Ig, CaCl2 · 6Η200· lg，MgSO4O. 3g，NaCl 0· lg，FeCl3O. Olg，油菜秸杆粉 0· 5g，蒸馏水 lOOOmL，pH 用稀盐酸调至6.0-7. 0。
8. 根据权利要求1所述的一种热带假丝酵母DK2菌株与双氧水联合工序制备麻纤维的 方法，其特征在于：所述步骤（3)中的麻类原料为亚麻、苎麻、黄麻、红麻或竹的原茎、纤维、 纱线或织物。
9. 根据权利要求1所述的一种热带假丝酵母DK2菌株与双氧水联合工序制备麻纤维的 方法，其特征在于：所述步骤（3)中的粗酶液和双氧水之间的体积比为1:10 ;所述调节pH 值至 4. 0-7.0。
10. 根据权利要求1所述的一种热带假丝酵母DK2菌株与双氧水联合工序制备麻 纤维的方法，其特征在于：所述步骤（3)中的摇床处理工艺参数为：温度10-60°C，转速 10-300rpm，处理时间10min-5d ;脱胶工艺参数为：脱胶时间10min-24h，脱胶温度50-80°C， 升温速度0. l-l〇°C /min，氢氧化钠用量为麻类原料质量的0. 5% -30%。
【专利摘要】本发明涉及一种热带假丝酵母DK2菌株与双氧水联合工序制备麻纤维的方法，包括：(1)培养菌株；(2)制备粗酶液；(3)将灭菌后的麻类原料与粗酶液和双氧水的混合液按质量体积比1:10～30混合，调节pH值，然后放在摇床中进行处理，最后加入氢氧化钠，并升高温度进行脱胶，除去脱胶液，冲洗，当pH值为自然时，停止冲洗，完成脱胶。本发明采用的菌株生长周期短，菌种不易被污染，处理成本低，脱胶条件温和；脱胶方法流程简单，时间缩短，能耗减少，排污量减少，有利环境保护。CGMCC No.1018620141215
【IPC分类】C12R1-74, C12N9-02, D01C1-04
【公开号】CN104630910
【申请号】CN201510080793
【发明人】丁若垚, 刘国亮, 郁崇文, 张兴群
【申请人】东华大学, 盐城工学院
【公开日】2015年5月20日
【申请日】2015年2月15日