试剂盒及其在生殖道病原体扩增检测中的用图
【技术领域】
[0001] 本发明涉及微生物检测，具体地，本发明涉及包含序列的试剂盒、病原体检测方法 及装置。
【背景技术】
[0002] 2000年卫生部在15个省开展的部分城市已婚妇女妇科病常见流行病学调查研 究结果显示：生殖道感染患病率为妇科疾病之首，42. 9%已婚妇女至少患有1种生殖道感 染，19%生殖道感染患者存在2种或2种以上混合感染。慢性宫颈炎患病率最高，39. 3% ; 细菌性阴道病（BV)，5.3% ;假丝酵母菌性阴道炎（VVC)，4.8% ;生殖道CT感染，4.4% ;盆 腔炎，4. 1% ;滴虫性阴道炎，2. 6%。而生殖道病原体感染会导致以下病症：1)泌尿系统感 染、盆腔炎等；2)增加男女不孕症、孕产妇的异位妊娠、流产、早产、死产的发生率；3)淋病、 梅毒、AIDS/HIV传给孩子，影响出生孩子的素质和下一代的健康；4)生殖系统的慢性炎症 增加 HIV感染几率。
[0003] 生殖道感染导致的不孕不育比较严重，加强对妇女生殖道感染的检测，将对指导 和治疗不孕症有重大意义。
[0004] 由于引起生殖道感染的病原体复杂、多样，为临床治疗带来困难，因此迫切需要寻 求一种特异性强、敏感性高同时又快速、经济的病原学检测方法，为临床病原学治疗提供实 验依据。
[0005] 目前临床用于生殖道感染病原体检测的方法有培养技术、免疫技术和PCR技术 等，这些技术在临床诊断中已发挥了巨大的作用，但仍存在一些缺点。培养技术繁琐而费 时；免疫技术要有特异的抗血清。PCR技术本身的优越性是无可厚非的，但是使用不当很容 易引起交叉污染，出现假阳性；如果反应条件控制不好可能也会出现假阴性。这些缺点需要 应用新的技术去弥补。
[0006] 近几年发展起来的基因芯片技术为生殖道感染的病原学诊断提供了一种强有力 的手段，其快速、高效、高通量、并行化的检测特点在病原学诊断方面占有独特的优势。基 于基因芯片技术的生殖道病原体试剂盒也在不断地别研发生产出来，广泛用于生殖道病原 体的临床检测。这些试剂盒大都针对于单一的病原体设计，一次病原体检测需要用到不同 的试剂盒，工作较繁琐且对于临床样本量的需求也比较大。
[0007] 近来已有学者通过检索相关细菌的16S~23S rRNA间区基因序列，针对不同细菌 的共同序列和特异序列，设计通用引物和特异寡核苷酸探针并制成可同时检测单一样品 中多种病原体的复合基因芯片。但是由于生殖道感染的并不仅仅由于细菌而导致，这种检 测方法会将巨细胞病毒、乙型肝炎病毒、单纯疱疹病毒等比较重要的病毒类生殖道病原体 忽略，进而对临床诊断及治疗造成一定的阻碍。
【发明内容】
[0008] 依据本发明的一方面，提供一种试剂盒，其包括如SEQ ID N0:1和SEQ ID N0:2， SEQ ID NO :3 和 SEQ ID NO :4, SEQ ID NO :5 和 SEQ ID NO :6, SEQ ID NO :7 和 SEQ ID NO : 8, SEQ ID NO :9 和 SEQ ID NO :10, SEQ ID NO :11 和 SEQ ID NO :12, SEQ ID NO :13 和 SEQ ID NO : 14, SEQ ID NO :15 和 SEQ ID NO : 16, SEQ ID NO :17 和 SEQ ID NO : 18, SEQ ID NO : 19 和 SEQ ID NO :20, SEQ ID NO :21 和 SEQ ID NO :22, SEQ ID NO :23 和 SEQ ID NO :24 以 及SEQ ID NO :25和SEQ ID NO :26所示的13对引物序列中的至少2对。
[0009] 依据本发明的另一方面提供上述试剂盒在病原体扩增和/或检测中的用途，所述 病原体包括巨细胞病毒、单纯疱疹病毒、淋病奈瑟球菌、阴道毛滴虫、解脲脲原体、沙眼衣原 体、白假丝酵母菌、人型支原体、生殖支原体、阴道加德纳菌、杜克嗜血杆菌、梅毒螺旋体和B 族链球菌。
[0010] 依据本发明的再一方面，提供一种病原体检测方法，所述病原体包括巨细胞病毒、 单纯疱疹病毒、淋病奈瑟球菌、阴道毛滴虫、解脲脲原体、沙眼衣原体、白假丝酵母菌、人型 支原体、生殖支原体、阴道加德纳菌、杜克嗜血杆菌、梅毒螺旋体和B族链球菌中的至少一 种，该法包括：（1)提取待测样本核酸；（2)对（1)中的核酸中的至少一部分进行扩增，获得 扩增产物，所述扩增本发明一方面提供的试剂盒进行的；（3)对（2)中的扩增产物进行序列 测定，获得测定序列；(4)利用（3)中的测定序列，确定待测样本中包含的病原体种类。该 方法还可包括：（5)利用（4)中的结果，计算所述确定的各种病原体的丰度，将每种病原体 的丰度与该种病原体的不致病丰度进行比较，两者有显著性差异则确定宿主感染该种病原 体。
[0011] 依据本发明的又一方面还提供一种病原体检测装置，所述病原体包括巨细胞病 毒、单纯疱疹病毒、淋病奈瑟球菌、阴道毛滴虫、解脲脲原体、沙眼衣原体、白假丝酵母菌、人 型支原体、生殖支原体、阴道加德纳菌、杜克嗜血杆菌、梅毒螺旋体和B族链球菌中的至少 一种，该装置包括:A.核酸提取单元，用于提取获得待测样本核酸；B.扩增单元，与A单元 相连，用于对来自A的核酸的至少一部分进行扩增，获得扩增产物，所述扩增利用权利要求 1的试剂盒中进行；C.序列测定单元，与B单元相连，用于对接收自B单元的扩增产物进行 序列测定，获得测定序列；D.病原体种类确定单元，与C单元相连，用于利用接收自C单元 的测定序列，确定待测样本包含的病原体种类。该装置进一步包括：E.病原体感染判定单 元，与D单元相连，用于利用接收自D单元的结果，计算所述确定的各种病原体的丰度，将每 种病原体的丰度与该种病原体的不致病丰度进行比较，两者有显著性差异则判定宿主感染 该种病原体。
[0012] 本发明的试剂盒、方法和/装置旨在开发一种基于新一代测序技术的用于辅助临 床诊断的多种病原体感染筛查技术，能够一次性地将巨细胞病毒、单纯疱疹病毒、淋病奈瑟 球菌、阴道毛滴虫、解脲脲原体、沙眼衣原体、白假丝酵母菌、人型支原体、生殖支原体、阴道 加德纳菌、杜克嗜血杆菌、梅毒螺旋体和B族链球菌13种可造成生殖系统等感染的病原体 同时检出。
【附图说明】
[0013] 本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施方式的描述中将 变得明显和容易理解，其中 ：
[0014] 图1是本发明的一个【具体实施方式】中的病原体检测流程；
[0015] 图2是本发明的一个【具体实施方式】中的样本CMV检测结果示意图。
【具体实施方式】
[0016] 依据本发明的一种实施方式，提供一种试剂盒，其包括如SEQ ID N0 :1和SEQ ID N0:2，SEQ ID N0:3 和 SEQ ID N0:4，SEQ ID N0:5 和 SEQ ID N0:6，SEQ ID N0:7 和 SEQ ID NO :8, SEQ ID NO :9 和 SEQ ID NO : 10, SEQ ID NO :11 和 SEQ ID NO : 12, SEQ ID NO :13 和 SEQ ID NO : 14, SEQ ID NO :15 和 SEQ ID NO : 16, SEQ ID NO :17 和 SEQ ID NO : 18, SEQ ID NO :19 和 SEQ ID NO :20, SEQ ID NO :21 和 SEQ ID NO :22, SEQ ID NO :23 和 SEQ ID NO :24 以及SEQ ID NO :25和SEQ ID NO :26所示的13对引物序列中的至少2对。根据本发明的 一个具体的实施方式，该试剂盒包括上述13对引物序列中的至少4对。根据本发明的一个 具体的实施方式，该试剂盒包括上述13对引物序列中的至少6对。根据本发明的一个具体 的实施方式，该试剂盒包括上述13对引物序列中的至少8对。根据本发明的一个具体的实 施方式，该试剂盒包括上述13对引物序列中的至少10对。根据本发明的一个具体的实施 方式，该试剂盒包括上述13对引物序列中的至少12对。根据本发明的一个具体的实施方 式，该试剂盒包括前述13对引物序列。利用该试剂盒能够多重扩增出样本包含的病原体， 一次测定多种病原体检测多种病原体，多种病原体包括常见的生殖道感染病原体中的解脲 脲原体（UU)、