本发明属于生物有机肥材料
技术领域：
，具体涉及一种基于猕猴桃根部内生放线菌及其在烟草有机肥中的应用。
背景技术：
：全元生物有机肥料指的是集有机肥、化肥、氨基酸肥和功能微生物为一体的新型生物有机肥料，属于第三代微生物肥料，具有营养、调理、植保三效合一的肥药兼效型复合微生物肥料。全元生物有机肥料与微生物菌剂、复合微生物肥料和生物有机肥相比，微生物菌剂过分强调微生物菌种，没有有机质和养分指标，难以使外源功能微生物在土壤中定殖；复合微生物肥料，有机质含量太低，无机养分上不封顶，养分含量容易做到20％甚至30％以上，不利于产品中功能菌的活力保存，田间效果实际上由无机养分即无机复混肥产生生物有机肥过分强调有机质而没有无机养分指标，对当季作物尤其是作物生长早期的效果不明显。因此，全元生物有机肥料是一种低碳绿色环保性产品，可持续供给养分、增多土壤有机质、改善土壤结构和提高土壤肥力，尤其在控制和克服因长期过量使用化肥和农药引起的土壤连作障碍，降低农药残留方面具有独特的效果。烤烟新品种云烟87是中国烟草育种研究(南方)中心、云南烟草科学研究院农业研究所选用国内自育品种云烟2号作母本，美国引进品种K326为父本杂交，经系谱选育而成，得到原烟多金黄色，色度强，油分多，结构疏松，叶片厚度适中的优质、抗病、易烤，适应性强、香气和吃味好的新品种。烤烟新品种云烟87抗黑胫病，中抗男方根结线虫病，耐普通花叶病，抗叶斑病，中抗青枯病，云烟87移栽至旺长期烟株生长缓慢，后期生长迅速，生长整齐，品种较耐肥，在栽培过程中，需肥量大。中国专利CN105367169A公开的一种专用于云烟87的考烟有机-无机复混肥，该考烟有机-无机复混肥包括饼肥、厩肥、微生物菌剂、硝铵磷、硫酸钾、硝酸钾和普钙，通过将多种肥料混合，提高烤烟对氮素的利用率，降低化肥的使用率，提高烤烟的品质和经济效应。由此可知，将肥力持久且能抑制土壤酸化的肥料对云烟87进行施肥，才能促进云烟87的可持续发展，因此将全元生物有机肥用于云烟87的栽培中十分必要。技术实现要素：本发明要解决的技术问题是提供一种基于猕猴桃根部内生放线菌及其在烟草有机肥中的应用，包括烟草复合肥、酒糟复合肥和猕猴桃根部内生放线菌，制备的烟草有机肥可作为烟草的基肥或者追加肥，也可以与其他复合肥、杀菌剂、杀虫剂复合使用，提供均衡全面的影响，持久性提高土壤的肥力，进而提高烟草的产量和品质，经济效益好，且对环境负担小，资源利用率高。为解决上述技术问题，本发明的技术方案是：一种基于猕猴桃根部内生放线菌的烟草有机肥，其特征在于，所述基于猕猴桃根部内生放线菌的烟草有机肥包括烟草复合肥、酒糟复合肥和猕猴桃根部内生放线菌，所述猕猴桃根部内生放线菌是由患溃疡病的猕猴桃根部作为原料制备的球孢链霉菌，所述烟草复合肥中氮、五氧化二磷、氧化钾的质量百分比含量为10:20:20，所述酒糟复合肥中氮、五氧化二磷、氧化钾的质量百分比含量为2:1:2。作为上述技术方案的优选，所述基于猕猴桃根部内生放线菌的烟草有机肥可以与其他复合肥、杀菌剂、杀虫剂复合使用，所述基于猕猴桃根部内生放线菌的烟草有机肥的组分，按重量百分比计，包括：无机养分10-15％、氨基酸2-3％、有机质40-45％和水分25％，所述放线菌菌的含量为2×107个/g，pH为6-8。作为上述技术方案的优选，所述烟草复合肥中包括亚磷酸钾盐、亚磷酸铵盐、硼肥和速效氮磷肥。作为上述技术方案的优选，所述酒糟复合肥是以酒糟固形物作为原料，经微生物有氧发酵、内质调配、烘干杀菌得到，所谓微生物有氧发酵的发酵剂为纤维素、降解酶、蛋白分解酶或者根酶，所述内质调配的内质调配剂为氨基酸溶液。本发明还提供一种基于猕猴桃根部内生放线菌的烟草有机肥的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)采集患溃疡病的猕猴桃根部样品，用质量百分比为0.1％的Tween-20溶液清洗30s，无菌水冲洗3次，75％乙醇浸泡5min，无菌水冲洗3次，有效氯含量2％的氯酸钠溶液浸泡3-5min，无菌水冲洗3次，质量分数为10％的碳酸氢钠溶液浸泡10min，无菌水冲洗3次，然后研磨成匀浆，接于TSA培养基平板中，在28℃下培养30d，形成猕猴桃根部的培养基；(2)将步骤(1)制备的猕猴桃根部的培养基中套取单菌落进行划线纯化，分离，得到基于猕猴桃根部内生放线菌；(3)将步骤(2)制备的基于猕猴桃根部内生放线菌活化后接种于高氏一号培养液中，30℃，120r/min的恒温摇床中培养96h，作为种子液以1:1比例加入高氏一号培养基，30℃，120r/min的恒温摇床中培养96h，使其活菌数达到10亿以上，得到猕猴桃根部内生放线菌发酵液；(4)将步骤(3)制备的猕猴桃根部内生放线菌发酵液稀释50-200倍得到放线菌稀释液，加入烟草复合肥、酒糟复合肥，混合均匀，形成基于猕猴桃根部内生放线菌的烟草有机肥。作为上述技术方案的优选，其特征在于，所述步骤(1)的接种比例为0.5％。作为上述技术方案的优选，其特征在于，所述步骤(2)的划线纯化的标准为根据菌落大小、形态和色泽等表现特征挑取单菌落。作为上述技术方案的优选，其特征在于，所述步骤(2)的猕猴桃根部内生放线菌对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、丁香假单胞菌、玉米纹枯病菌、西瓜枯黄病菌和番茄早疫病菌具有抑制作用，IAA产量大于40mg/L，可产生纤维素酶。作为上述技术方案的优选，所述步骤(4)的基于猕猴桃根部内生放线菌的烟草有机肥中烟草复合肥、酒糟复合肥和放线菌稀释液的质量比为20:50-100:1。作为上述技术方案的优选，所述步骤(4)的基于猕猴桃根部内生放线菌的烟草有机肥可作为烟草的基肥或者追加肥，使用量为50-100kg/亩。与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：(1)本发明制备的基于猕猴桃根部内生放线菌的烟草有机肥为全元生物有机肥，包括烟草复合肥、酒糟复合肥和猕猴桃根部内生放线菌，避免出现微生物菌剂、复合微生物肥料和生物有机肥过于强调单一成分的弊端，能从作物生长的早期开始提供均衡全面的影响，保证作物生长良好所需要的营养元素，可在使用少量有机肥的基础上，满足艾纳香作物养分需求，显著抑制土壤酸化，有效调控土壤微生物体系，持久性提高土壤的肥力，进而提高烟草的产量和品质，经济效益好，且对环境负担小，资源利用率高。(2)本发明制备的基于猕猴桃根部内生放线菌的烟草有机肥中含有的猕猴桃根部内生放线菌为球孢链霉菌，球孢链霉菌不仅可以促进烟草的生长，还可以一直烟草植物病原真菌和细菌的生长，具有高效纤维素降解能力，还可以改善土壤理化性质，可见识减少化学肥料和农药的使用率，且不用担心土壤酸化，继而可以长久的提高土壤的肥力，绿色安全环保。(3)本发明制备的基于猕猴桃根部内生放线菌的烟草有机肥中含有的烟草复合肥包括亚磷酸钾盐、亚磷酸铵盐、硼肥和速效氮磷肥，可以防治烟草种植过程中的土传病害，补充硼、氮、磷和钾养分，对烟草的产量和品质的提高具有积极的作用。(4)本发明制备的基于猕猴桃根部内生放线菌的烟草有机肥中含有的酒糟复合肥为含氨基酸的有机肥，有机质含量高，营养丰富，有利于改善土壤结构，且肥力见效快。(5)本发明制备的基于猕猴桃根部内生放线菌的烟草有机肥可作为烟草基肥，也可作为追加肥使用，也可以与其他复合肥、杀菌剂、杀虫剂复合使用，使用方法简单，可操控性强。具体实施方式下面将结合具体实施例来详细说明本发明，在此本发明的示意性实施例以及说明用来解释本发明，但并不作为对本发明的限定。在中热带湿润季风气候，全年气候温和，雨量充沛，光照适宜，无霜期长，四季分明，雨热同季的地区进行试验。在田间采用随机区组配料，每个小区种植40株烤烟云烟87，每个小区之间用2行使用常规底肥的烤烟云烟87作为隔离带。同时根据光照和风向进行定向开厢，开厢方向一致，宽窄一致，按统一方向、统一高度、行距1.2米，梗高0.3米，做到厢体饱满，呈梯形，同时开好排水沟，确保排水畅通。实施例1：(1)采集患溃疡病的猕猴桃根部样品，用质量百分比为0.1％的Tween-20溶液清洗30s，无菌水冲洗3次，75％乙醇浸泡5min，无菌水冲洗3次，有效氯含量2％的氯酸钠溶液浸泡3min，无菌水冲洗3次，质量分数为10％的碳酸氢钠溶液浸泡10min，无菌水冲洗3次，然后研磨成匀浆，按照0.5％的接种比例接于TSA培养基平板中，在28℃下培养30d，形成猕猴桃根部的培养基。(2)将猕猴桃根部的培养基中根据菌落大小、形态和色泽等表现特征挑取单菌落进行划线纯化，分离，得到基于猕猴桃根部内生放线菌。(3)将基于猕猴桃根部内生放线菌活化后接种于高氏一号培养液中，30℃，120r/min的恒温摇床中培养96h，作为种子液以1:1比例加入高氏一号培养基，30℃，120r/min的恒温摇床中培养96h，使其活菌数达到10亿以上，得到猕猴桃根部内生放线菌发酵液。(4)将猕猴桃根部内生放线菌发酵液稀释50倍得到放线菌稀释液，烟草复合肥中包括5％的亚磷酸钾盐、3％的亚磷酸铵盐、3％的硼肥和速效氮磷肥，其中氮、五氧化二磷、氧化钾的质量百分比含量为10:20:20，总养分含量≥55％，酒糟复合肥中氮、五氧化二磷、氧化钾的质量百分比含量为2:1:2，有机质含量≥45％，氮磷钾含量≥5％，按照质量比为20:50:1，将加入的烟草复合肥、酒糟复合肥和放线菌稀释液，混合均匀，形成基于猕猴桃根部内生放线菌的烟草有机肥，基于猕猴桃根部内生放线菌的烟草有机肥的组分，按重量百分比计，包括：无机养分10％、氨基酸2％、有机质40％和水分25％，放线菌菌的含量≥2×109cfu/g，pH为6。(5)施用方法：将基于猕猴桃根部内生放线菌的烟草有机肥50公斤/亩为底肥施入并与窝土充分搅匀，再将基于猕猴桃根部内生放线菌的烟草有机肥25公斤/亩作为追肥在揭膜上厢时施完，移栽后20天内，将25公斤基于猕猴桃根部内生放线菌的烟草有机肥兑水500公斤灌根，每株罐400ml，地膜选用厚度0.14s(mm)的PE薄膜为最佳。实施例2：(1)采集患溃疡病的猕猴桃根部样品，用质量百分比为0.1％的Tween-20溶液清洗30s，无菌水冲洗3次，75％乙醇浸泡5min，无菌水冲洗3次，有效氯含量2％的氯酸钠溶液浸泡5min，无菌水冲洗3次，质量分数为10％的碳酸氢钠溶液浸泡10min，无菌水冲洗3次，然后研磨成匀浆，按照0.5％的接种比例接于TSA培养基平板中，在28℃下培养30d，形成猕猴桃根部的培养基。(2)将猕猴桃根部的培养基中根据菌落大小、形态和色泽等表现特征挑取单菌落进行划线纯化，分离，得到基于猕猴桃根部内生放线菌。(3)将基于猕猴桃根部内生放线菌活化后接种于高氏一号培养液中，30℃，120r/min的恒温摇床中培养96h，作为种子液以1:1比例加入高氏一号培养基，30℃，120r/min的恒温摇床中培养96h，使其活菌数达到10亿以上，得到猕猴桃根部内生放线菌发酵液。(4)将猕猴桃根部内生放线菌发酵液稀释200倍得到放线菌稀释液，烟草复合肥中包括5％的亚磷酸钾盐、3％的亚磷酸铵盐、3％的硼肥和速效氮磷肥，其中氮、五氧化二磷、氧化钾的质量百分比含量为10:20:20，总养分含量≥55％，酒糟复合肥中氮、五氧化二磷、氧化钾的质量百分比含量为2:1:2，有机质含量≥45％，氮磷钾含量≥5％，按照质量比为20:100:1，将加入的烟草复合肥、酒糟复合肥和放线菌稀释液，混合均匀，形成基于猕猴桃根部内生放线菌的烟草有机肥，基于猕猴桃根部内生放线菌的烟草有机肥的组分，按重量百分比计，包括：无机养分15％、氨基酸3％、有机质45％和水分25％，放线菌菌的含量≥2×109cfu/g，pH为8。(5)施用方法：将基于猕猴桃根部内生放线菌的烟草有机肥100公斤/亩为底肥施入并与窝土充分搅匀，再将基于猕猴桃根部内生放线菌的烟草有机肥25公斤/亩作为追肥在揭膜上厢时施完，移栽后25天内，将25公斤基于猕猴桃根部内生放线菌的烟草有机肥兑水500公斤灌根，每株罐400ml，地膜选用厚度0.14s(mm)的PE薄膜为最佳。实施例3：(1)采集患溃疡病的猕猴桃根部样品，用质量百分比为0.1％的Tween-20溶液清洗30s，无菌水冲洗3次，75％乙醇浸泡5min，无菌水冲洗3次，有效氯含量2％的氯酸钠溶液浸泡4min，无菌水冲洗3次，质量分数为10％的碳酸氢钠溶液浸泡10min，无菌水冲洗3次，然后研磨成匀浆，按照0.5％的接种比例接于TSA培养基平板中，在28℃下培养30d，形成猕猴桃根部的培养基。(2)将猕猴桃根部的培养基中根据菌落大小、形态和色泽等表现特征挑取单菌落进行划线纯化，分离，得到基于猕猴桃根部内生放线菌。(3)将基于猕猴桃根部内生放线菌活化后接种于高氏一号培养液中，30℃，120r/min的恒温摇床中培养96h，作为种子液以1:1比例加入高氏一号培养基，30℃，120r/min的恒温摇床中培养96h，使其活菌数达到10亿以上，得到猕猴桃根部内生放线菌发酵液。(4)将猕猴桃根部内生放线菌发酵液稀释100倍得到放线菌稀释液，烟草复合肥中包括5％的亚磷酸钾盐、3％的亚磷酸铵盐、3％的硼肥和速效氮磷肥，其中氮、五氧化二磷、氧化钾的质量百分比含量为10:20:20，总养分含量≥55％，酒糟复合肥中氮、五氧化二磷、氧化钾的质量百分比含量为2:1:2，有机质含量≥45％，氮磷钾含量≥5％，按照质量比为20:80:1，将加入的烟草复合肥、酒糟复合肥和放线菌稀释液，混合均匀，形成基于猕猴桃根部内生放线菌的烟草有机肥，基于猕猴桃根部内生放线菌的烟草有机肥的组分，按重量百分比计，包括：无机养分13％、氨基酸2.5％、有机质43％和水分25％，放线菌菌的含量≥2×109cfu/g，pH为7。(5)施用方法：将基于猕猴桃根部内生放线菌的烟草有机肥80公斤/亩为底肥施入并与窝土充分搅匀，再将基于猕猴桃根部内生放线菌的烟草有机肥25公斤/亩作为追肥在揭膜上厢时施完，移栽后22天内，将25公斤基于猕猴桃根部内生放线菌的烟草有机肥兑水500公斤灌根，每株罐400ml，地膜选用厚度0.14s(mm)的PE薄膜为最佳。对比例1：将烟草复合肥50公斤/亩为底肥施入并与窝土充分搅匀，再将烟草复合肥25公斤/亩作为追肥在揭膜上厢时施完，移栽后20-25天内，将25公斤烟草复合肥兑水500公斤灌根，每株罐400ml，地膜选用厚度0.14s(mm)的PE薄膜为最佳。对比例2：将酒糟复合肥50公斤/亩为底肥施入并与窝土充分搅匀，再将酒糟复合肥25公斤/亩作为追肥在揭膜上厢时施完，移栽后20-25天内，将25公斤酒糟复合肥兑水500公斤灌根，每株罐400ml，地膜选用厚度0.14s(mm)的PE薄膜为最佳。对比例3：将烟草复合肥50公斤/亩、酒糟复合肥50公斤/亩为底肥施入并与窝土充分搅匀，再将酒糟复合肥25公斤/亩作为追肥在揭膜上厢时施完，移栽后20-25天内，将25公斤酒糟复合肥兑水500公斤灌根，每株罐400ml，地膜选用厚度0.14s(mm)的PE薄膜为最佳。对比例4：将烟草复合肥50公斤/亩、酒糟复合肥50公斤/亩为底肥施入并与窝土充分搅匀，再将烟草复合肥25公斤/亩作为追肥在揭膜上厢时施完，移栽后20-25天内，将25公斤烟草复合肥兑水500公斤灌根，每株罐400ml，地膜选用厚度0.14s(mm)的PE薄膜为最佳。对比例5：不施肥。经检测，实施例1-3以及对比例1-5制备的云烟87的打顶株高、有效叶数、产量和烟碱平均含量的结果如下所示：实施例1实施例2实施例3对比例1对比例2对比例3对比例4对比例5打顶株高(cm)118119.5119116115116.5117113有效叶数(片)2829292626272825烟碱平均含量(％)2.452.562.512.22.252.32.42.1产量(kg/hm2)29362993296527162774279628122516由上表可见，本发明制备的云烟87的打顶株高、有效叶数、产量和烟碱平均含量均明显提高。上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属
技术领域：
中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。当前第1页1 2 3