专利名称：从苦丁茶中提取总三萜酸及熊果酸、齐墩果酸的方法
专利说明从苦丁茶中提取总三萜酸及熊果酸、齐墩果酸的方法 本发明属于天然药物提取技术领域，具体涉及一种从苦丁茶(Ilex kudingcha C.J.Tseng)中提取具有降脂功能的活性成分熊果酸、齐墩果酸及总三萜酸的方法。苦丁茶(Ilex kudingcha C.J.Tseng)为我国南方喜用的清凉、去毒、健身饮料，亦是常用中药。多以植物的叶入药，性味甘苦，具有清热凉血，滋养肝肾之功效。作为苦丁茶使用的市场品种隶属3科9种植物，包括冬青科3种，木樨科女贞属5种，马鞭草科桢桐属1种。其中冬青科干燥叶为苦丁茶主流品种。本品叶革质(或厚革质)，边缘具钝锯齿，主要分布于广东、广西、海南、湖南等省。苦丁茶有明显降低高血脂、动物血清总胆固醇、甘油酸三脂的功效，具有提高高密度脂蛋白/低密度脂蛋白比值的作用。药理研究证实，其主要药效成分为熊果酸和齐墩果酸。
熊果酸是一种三萜化合物，分子式C30H48O3，化学名称为3β—羟基—熊果烷—12—烯—28—羧酸，为无色晶体，熔点为289～292℃。
齐墩果酸是熊果酸的同分异构体，具有消炎、镇静、抗肿瘤等作用，是治疗急性黄疸型肝炎和迁延慢性肝炎的有效药物。
熊果酸和齐墩果酸可以从熊果、齐墩果、女贞等多种植物叶或果实中提取，在现有各种提取方法如CN1045585A，CN1358733A，CN1303850A中，主要存在以下不足(1)产品单一，或仅能获得熊果酸，或仅能获得齐墩果酸；(2)有机溶剂耗量大，有的甚至使用有毒有机溶剂，如苯、CHCl3、CH2Cl2等；(3)分离效率低，产品纯度不高。本发明提出一种从苦丁茶(Ilex kudingcha C.J.Tseng)中同时提取活性成分总三萜酸及熊果酸、齐墩果酸的方法。
具体技术方案如下将苦丁茶叶片粉碎，以5～10倍量的50％～80％的乙醇为溶剂，微波或回流浸提，采用聚糖类天然沉降剂沉降结合超滤技术去除大分子杂质，滤液经纳滤浓缩，透过液返回浸提循环使用；浓缩液注入大孔吸附树脂层析柱，采用分段洗脱，收集乙醇—醚类混合物淋洗液馏分，浓缩，回收有机溶剂，真空干燥，得到总三萜酸粗品。所得总三萜酸粗品水洗后，乙醇溶解，活性炭脱色，过滤，滤液用NaOH碱化(pH＝8.0～11.0)，滤去粘胶状物后，再用H2SO4酸化(pH＝2.0～3.5)，放置析晶。所得晶体在乙醇中重结晶，得到总三萜酸产品。
将总三萜酸产品用醚-有机酸混合物选择性溶解，液相在回收有机溶剂后得到齐墩果酸粗品，固相为熊果酸粗品。将所得齐墩果酸粗品和熊果酸粗品分别经柱层析纯化，最后得到熊果酸和齐墩果酸单体产品。
所述聚糖类天然沉降剂包括葡甘聚糖或壳聚糖类化合物。
本发明所述苦丁茶主要是指产自我国广东、广西、海南及湖南南部等地的苦丁茶。本发明所提供的方法，同时还适用于其他苦丁茶及熊果、齐墩果、女贞等多种植物叶或果实中熊果酸、齐墩果酸和总三萜酸的提取。
本发明具有以下优点本发明采用乙醇溶液微波或回流浸提，强化了有效成分的溶出，缩短了提取时间，提高了产率，减少了杂质溶出；采用聚糖类化合物等天然沉降剂沉降结合超滤技术，利于蛋白质、淀粉、果胶等大分子杂质的去除，优于目前所用醇沉等分离技术；采用纳滤浓缩，常温无相变，既节省了能源，又避免了活性成分的分解破坏，同时解决了以往浓缩时由皂甙引起的起泡问题；采用大孔吸附树脂柱分离系统，显著提高了总三萜酸的分离度和富集率；总三萜酸粗品，依次经水洗、乙醇溶解、活性炭脱色、NaOH碱化、H2SO4酸化等纯化步骤，大幅度提高了产品的纯度，总三萜酸的含量达95％以上；采用醚类和有机酸混合溶剂选择性溶解，简化了单体分离工艺，提高了分离效率，所得熊果酸和齐墩果酸单体产品的纯度达96％以上；整个分离提取过程中不使用有毒有害有机溶剂，实现全流程绿色提取；本发明所述方法可以同时提取熊果酸、齐墩果酸和总三萜酸。
图1.本发明工艺流程图。1.将苦丁茶叶片于50℃干燥，粉碎。取100g，用8倍量75％乙醇微波浸提3次，1h/次，过滤。滤液加天然沉降剂沉降，超滤。活性炭脱色，滤液经纳滤浓缩分离得到约200ml浓缩液。浓缩液注入大孔吸附树脂层析柱，分段淋洗，收集乙醇—醚类洗脱液馏分，得到约2000ml溶液。减压浓缩，真空干燥，得到总三萜酸粗品约15g。粗品水洗后，加入6倍沉淀物重量的95％乙醇溶液溶解，同时加入0.9g活性炭脱色，过滤，滤液加NaOH调pH＝8.0～11.0，过滤，滤液再用H2SO4调pH＝2.0-3.5，放置析晶。结晶物水洗后，于95％乙醇中重结晶，得到总三萜酸产品。以醚类和有机酸混合物选择性溶解总三萜酸产品，液相回收有机溶剂，得齐墩果酸粗品，固相为熊果酸粗品。分别用柱层析纯化此二粗品，最后得到熊果酸和齐墩果酸单体产品。
权利要求
1.一种从苦丁茶中提取总三萜酸及熊果酸、齐墩果酸的方法，其特征在于本发明将苦丁茶叶片粉碎后，以5～10倍量的50％～80％的乙醇为溶剂，经微波或回流浸提，提取液采用聚糖类化合物作为沉降剂沉降，结合超滤技术去除蛋白质、淀粉、果胶等大分子杂质及其他不溶性微粒，滤液再以活性炭脱色，过滤，纳滤浓缩；将所得浓缩液注入大孔吸附树脂柱分离系统，采用分段淋洗，截取有机溶液洗脱馏分，该有机溶剂为一种醚和乙醇的混合物；从所得馏分溶液制得总三萜酸粗品，然后依次经水洗、乙醇溶解、活性炭脱色、NaOH碱化至pH为8.0～11.0、H2SO4酸化至pH为2.0～3.5纯化，得到总三萜酸纯品；将所得总三萜酸纯品，用醚类和有机酸混合溶剂进行选择性溶解，经适当处理后分别注入层析柱进一步纯化，最后得到熊果酸和齐墩果酸单体产品。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述聚糖类天然沉降剂包括葡甘聚糖或壳聚糖类化合物。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于本发明所述苦丁茶主要是指产自我国广东、广西、海南及湖南南部的苦丁茶，即Ilex kudingcha C.J.Tseng。
全文摘要
本发明涉及一种从苦丁茶(Ilex kudingchaC.J.Tseng)中同时提取总三萜酸及熊果酸、齐墩果酸的方法。该法以广东、广西、海南等省区产苦丁茶为原料，以乙醇溶液为溶剂，微波或回流浸提，天然沉降剂沉降结合超滤去除大分子杂质，所得滤液经纳滤、大孔吸附树脂层析分离、浓缩，得到总三萜酸粗品。经水洗、乙醇溶解、活性炭脱色、纯化制得总三萜酸品。然后用醚类和有机酸混合物进行选择性溶解，分离，纯化得到的熊果酸和齐墩果酸单体产品。本发明所得总三萜酸纯度达95％以上的，熊果酸和齐墩果酸单体纯度大于96％，整个分离提取过程中不使用有毒有害有机溶剂，实现全流程绿色提取。
文档编号C07J63/00GK1508149SQ0213984
公开日2004年6月30日 申请日期2002年12月18日 优先权日2002年12月18日
发明者周春山, 任秀莲, 彭密军, 汤小胜, 蒋新宇, 钟世安 申请人:中南大学