专利名称：中药黄精中的甾体皂苷及其医药用途和制备方法
技术领域：
本发明涉及医药技术领域中西洋参茎叶中的三萜皂苷类化合物的制备，确切地说它是一种中药黄精中的甾体皂苷及其医药用途和制备方法。
背景技术：
中药黄精为百合科黄精属多年生草本植物黄精(Polygonatumsibiricum)的根茎，分布于全国各地，其中主要分布于东北三省、内蒙、河北、陕西、山东等地。中国药典(1995年版)一部收载的黄精原植物有3种，即黄精Polygonatum sibiricum、囊丝黄精(多花黄精)Polygonatum cyrtonema及滇黄精Polygonatum kingianum。始载于《名医别录》，列为上品，性平、味甘、无毒、归脾、肺、肾经，能补气养阴、健脾、润肺、益肾，是中医常用药物之一。中药黄精(Polygonatum sibiricum)的化学成分研究很少，仅见有关生物碱和多糖的报道，尚未见对其甾体皂苷类成分的研究文献报道。药理研究表明，黄精具有1、对心血管系统的改善作用；2、对免疫系统的调节作用；3、抗衰老作用；4、抗肿瘤作用；5、其它抑菌、抗真菌等药理作用。中国专利号93106042.7公开了一种名称为“黄精饮料及其制造方法”的发明专利，它只是一种保健饮品，中国专利号98121819.9公开了一种名称为“黄精多糖魔芋糖甘聚糖胶囊”的发明专利，它虽然也具有延缓衰老，改善记忆，调节血脂的作用，但它也只是利用黄精多糖，中国专利号02102167.8公开了一种名称为“中药黄精中提取黄精多糖的方法”的发明专利，它是一种提取黄精多糖的新工艺。
发明内容
本发明的目的在于提供中药黄精中的甾体皂苷类成分及其制备方法，并明确提出了其改善脑功能障碍所致的学习记忆损伤(包括早期老年性痴呆病人改善学习记忆)和降低血糖的医药用途，而且提供了一种科学稳定的，适用于工业化生产的制备总甾体皂苷类成分的方法。
本发明提供的甾体皂苷类成分是指具有下述通式(1)、通式(2)或通式(3)所示的1β，12α-羟基螺甾皂苷，通式(4)所示的呋甾皂甙，通式(5)所示的胆甾皂甙，和通式(6)所示的新甾体皂甙类化合物。 式中R1是氢或糖基(含1～5个糖基)，R2和R3是氢、羟基或糖基(含1～2个糖基)，以上所指糖基是指吡喃葡萄糖基、吡喃木粮基、吡喃阿拉伯糖基、呋喃阿拉伯糖基、吡喃鼠李糖基、吡喃半乳糖、吡喃呋糖基，糖链可为直链或支链，连接方式可为(1-2)、(1-3)、(1-4)或(1-6)连接。
上述总甾体皂苷和单一化合物的医药用途是改善脑功能障碍所致的学习记忆损伤(包括早期老年性痴呆病人改善学习记忆)和降低血糖作用。上述化合物毒副作用小，适合于医药用途。
上述总甾体皂苷或单一化合物的提取方法是黄精粉末经水(稀醇)煎煮(或渗滤)、大孔树脂及离子交换树脂脱糖脱色得总皂苷、再经柱层析和HPLC法而分别制得。
上述总甾体皂苷和单一化合物的制备方法，其特征是包括如下四步骤a黄精根粉末用水提取加水浸泡，药材与水的比例为1∶2～10，加热于(室温至所用液体沸点)条件下，每次0.5～10小时，提取1～10次，合并各次提取液，浓缩至药材的2～100倍；b黄精提取液浓缩，浓缩水溶液经氯仿萃取除去低极性杂质后，用正丁醇萃取，回收正丁醇得正丁醇萃取物；c提取液经大孔树脂吸附，用稀醇(0～40％)洗去杂质，再用20％～100％醇液洗脱得醇溶液，回收溶剂得总甾体皂苷；d经硅胶色谱分离，流动相1)氯仿/甲醇(0～100％)梯度洗脱；2)氯仿-甲醇-水(65∶35∶10)，下相)；3)正丁醇-乙酸乙酯-水(4∶1∶5上相)e所得流份经重结晶，HPLC色谱十八烷基键合硅胶(ODS)为固定相，甲醇(乙睛、四氢呋喃)/水(10～95％)为流动相，紫外192～350nm检测，得各三萜皂苷类成分单体。
黄精的改善脑功能障碍所致的学习记忆损伤(包括早期老年性痴呆病人改善学习记忆)作用，迄今未见文献报道，在药理跟踪下，经对黄精化学成分的系统研究，发现黄精总甾体皂苷和单体甾体皂苷具有改善脑功能障碍所致的学习记忆损伤(包括早期老年性痴呆病人改善学习记忆)的作用。其结果如下1、400mg/kg黄精总甾体皂苷和单体甾体皂苷可明显提高正常小鼠学习能力；2、400mg/kg黄精总甾体皂苷和单体甾体皂苷对东莨菪碱所致的小鼠记忆获得障碍有明显改善作用。
3、100mg/kg、400mg/kg黄总甾体皂苷和单体甾体皂苷可明显延长双侧颈总动脉结扎致急性脑缺血小鼠的生存时间。
4、0.5mg/ml、2.5mg/ml黄精总甾体皂苷和单体甾体皂苷可显著抑制大鼠脑组织MDA的生成。
5、400mg/kg黄精总甾体皂苷和单体甾体皂苷可明显抑制肾上腺素诱发的高血糖小鼠的血糖值。
本发明的优点是，提供了中药黄精中的甾体皂苷类成分及其制备方法，并且有改善脑功能障碍所致的学习记忆损伤(包括早期老年性痴呆病人改善学习记忆)和降低血糖的医药用途，而且提供了一种科学稳定的，适用于工业化生产的制备总甾体皂苷成分的方法。应用本发明的提取方法，可以得到除去大量蛋白、糖类、淀粉等杂质的高纯度三萜总皂苷和单体三萜皂苷。
图1为本发明中11个单体化合物的分离流程图。
具体实施例方式实施例黄精根茎(30kg)粉碎后，以水提取3次，每次2小时，提取浓缩得水浸膏，然后加水稀释，依次用氯仿、正丁醇分别萃取得到极性不同的部分。将正丁醇部分以大孔树脂柱色谱处理后得黄精总甾体皂苷。黄精总甾体皂苷利用硅胶柱色谱，重结晶以及Rp18-HPLC等方法，从中得到11个单体化合物。
部分化合物的鉴定化合物2黄精皂苷A(huangjinoside A)，白色粉末，mp250-252℃(MeOH)。
化合物3黄精皂苷B(huangjinoside B)，白色粉末，mp256-259℃(MeOH)。
化合物4黄精皂苷C(huangjinoside C)，白色粉末，mp291-293℃(MeOH)。
权利要求
1.中药黄精中的甾体皂苷及其医药用途和制备方法，其特征在于中药黄精中甾体皂苷的结构式为a通式(1)、通式(2)或通式(3)所示的1β，12α-羟基螺甾皂苷 式中R1是氢或糖基(含1～5个糖基)，R2和R3是氢、羟基或糖基(含1～2个糖基)，以上所指糖基是指吡喃葡萄糖基、吡喃木糖基、吡喃阿拉伯糖基、呋喃阿拉伯糖基、吡喃鼠李糖基、吡喃半乳糖、吡喃呋糖基、糖链可为直链或支链，连接方式可为(1-2)、(1-3)、(1-4)或(1-6)连接；b通式(4)所示的呋甾皂甙 式中R1是氢或糖基(含1～5个糖基)，以上所指糖基是指吡喃葡萄糖基、吡喃木糖基、吡喃阿拉伯糖基、呋喃阿拉伯糖基、吡喃鼠李糖基、吡喃半乳糖、吡喃呋糖基、糖链可为直链或支链，连接方式可为(1-2)、(1-3)、(1-4)或(1-6)连接；c通式(5)所示的胆甾皂甙 式中R1是氢或糖基(含1～5个糖基)，以上所指糖基是指吡喃葡萄糖基、吡喃木糖基、吡喃阿拉伯糖基、呋喃阿拉伯糖基、吡喃鼠李糖基、吡喃半乳糖、吡喃呋糖基、糖链可为直链或支链，连接方式可为(1-2)、(1-3)、(1-4)或(1-6)连接；d通式(6)所示的甾体皂甙类化合物 R1是氢或糖基(含1～5个糖基)，以上所指糖基是指吡喃葡萄糖基、吡喃木糖基、吡喃阿拉伯糖基、呋喃阿拉伯糖基、吡喃鼠李糖基、吡喃半乳糖、吡喃呋糖基、糖链可为直链或支链，连接方式可为(1-2)、(1-3)、(1-4)或(1-6)连接。
2.根据权利要求1所述的中药黄精中的甾体皂苷及其医药用途和制备方法，其特征在于制备方法包括如下步骤a、黄精根粉末用水提取加水浸泡，药材与水的比例为1∶2～10，加热于(室温至所用液体沸点)条件下，每次0.5～10小时，提取1～10次，合并各次提取液，浓缩至药材的2～100倍；b、黄精提取液浓缩，浓缩水溶液经氯仿萃取除去低极性杂质后，用正丁醇萃取，回收正丁醇得正丁醇萃取物；c、提取液经大孔树脂吸附，用稀醇(0～40％)洗去杂质，再用20％～100％醇液洗脱得醇溶液，回收溶剂得总甾体皂苷；d、经硅胶色谱分离，流动相1)氯仿/甲醇(0～100％)梯度洗脱；2)氯仿-甲醇-水(65∶35∶10，下相)；3)正丁醇-乙酸乙酯-水(4∶1∶5上相)e、所得流份经重结晶，HPLC色谱十八烷基键合硅胶(ODS)为固定相，甲醇(乙睛、四氢呋喃)/水(10～95％)为流动相，紫外192～350nm检测，得各三萜皂苷类成分单体。
3.根据权利要求2所述的中药黄精中的甾体皂苷及其医药用途和制备方法，其特征在于步骤a中的提取液可以是不同浓度的乙醇或甲醇，浓度0～95％；提取方法可以是煎煮或渗滤；步骤b中可先用乙醇乙酯萃取除杂质；步骤c中吸附用大孔树脂，可用阴(或阳)离子交换树脂；步骤d中固定相可用氧化铝、活性炭、Sephaelex LH-20等；步骤e可用正相HPLC，以硅胶为固定相，流动相1)氯仿-甲醇-水，2)氯仿-甲醇，3)乙酸乙酯-丙酮，及其他有机溶剂。
4.根据权利要求1所述的中药黄精中的甾体皂苷及其医药用途和制备方法，其特征在于通式(1)、通式(2)或通式(3)所示的1β，12α-羟基螺甾皂苷，通式(4)所示的呋甾皂甙，通式(5)所示的胆甾皂甙，和通式(6)所示的甾体皂甙类化合物改善脑功能障碍所致的学习记忆损伤(包括早期老年性痴呆病人改善学习记忆)和降低血糖作用的医药用途。
全文摘要
中药黄精中的甾体皂苷及其医药用途和制备方法，它具有改善脑功能障碍和降低血糖的作用，它是用黄精根粉末用水提取浓缩后，再经氯仿萃取经大孔树脂吸附，用稀醇洗去杂质，再用醇液洗脱得醇溶液，回收溶剂得总甾体皂苷；经硅胶色谱分离，所得流份经重结晶，HPLC色谱得各三萜皂苷类成分单体。本发明适合工业化生产，对早期老年痴呆病人改善学习记忆有一定作用。
文档编号C07J71/00GK1440979SQ0311135
公开日2003年9月10日 申请日期2003年4月4日 优先权日2003年4月4日
发明者李铣, 孙隆儒, 王金辉 申请人:沈阳药科大学