用于治疗高眼压的眼用组合物的制作方法

专利名称：用于治疗高眼压的眼用组合物的制作方法
本申请要求根据35 U.S.C.119(e)享受于9/4/2003提出的临时申请号为60/500,090的美国专利的权益。
背景技术：
青光眼是眼睛的眼内压过高而不能实现正常眼睛功能的变性疾病。结果，可以对于视神经顶端造成损害，并导致不可逆的视觉功能丧失。如果未经治疗，青光眼最后可能导致失明。高眼压症，即没有视神经顶端损害或不以青光眼的视野缺损为特征的眼内压升高的病症，现在大部分眼科医师认为其仅仅代表青光眼发病的最早阶段。
有一些治疗青光眼和眼内压升高的疗法，但是这些药剂的效果和副作用的特性不理想。近来发现钾离子通道阻断剂可以降低眼睛的眼内压，并因此又提供了另一种治疗高眼压症和与其相关的退化性眼病的方法。阻断钾离子通道可以减少液体分泌，并且在一些情况下，可以增加平滑肌收缩并预计会降低IOP并且在眼睛中具有神经保护作用。(见美国专利Nos.5,573,758和5,925,342；Moore，等人，Invest.Ophthalmol.Vis.Sci 38，1997；WO 89/10757、WO94/28900和WO96/33719)。
发明概述本发明涉及有效的钾离子通道阻断剂或其制剂在治疗患者眼睛的青光眼及其它与眼内压升高有关的病症中的用途。本发明也涉及这种化合物对于哺乳动物特别是人类眼睛提供神经保护作用的用途。更具体地说，本发明涉及使用含有具有下列结构式I的吲唑化合物的磷酸酯
式I或其药学上可接受的盐、在活的有机体内可水解的酯、对映体、非对映体或其混合物来治疗青光眼和/或高眼压症(眼内压升高)，其中，R代表氢或C1-6烷基；Rc和Rd独立地代表氢或卤素；Re代表N或O；X代表-(CHR7)p-、-(CHR7)pCO-；Y代表-CO(CH2)n-、CH2或-CH(OR)-；Q代表N或O，其中当Q是O时，R2不存在；Rw代表H、C1-6烷基、-C(O)C1-6烷基、-C(O)OC1-6烷基、-SO2N(R)2、-SO2C1-6烷基、-SO2C6-10芳基、NO2、CN或-C(O)N(R)2；R2代表氢、C1-10烷基、OH、C2-6烯基、C1-6烷基SR、-(CH2)nO(CH2)mOR、-(CH2)nC1-6烷氧基、-(CH2)nC3-8环烷基、-(CH2)nC3-10杂环基、-N(R)2、-COOR或-(CH2)nC6-10芳基，所述烷基、杂环基或芳基任选地被1-3个选自Ra的基团取代；R3代表氢、C1-10烷基、-(CH2)nC3-8环烷基、-(CH2)nC3-10杂环基、-(CH2)nCOOR、-(CH2)nC6-10芳基、-(CH2)nNHR8、-(CH2)nN(R)2、-(CH2)nN(R8)2、-(CH2)nNHCOOR、-(CH2)nN(R8)CO2R、-(CH2)nN(R8)COR、-(CH2)nNHCOR、-(CH2)nCONH(R8)、芳基、-(CH2)nC1-6烷氧基、CF3、-(CH2)nSO2R、-(CH2)nSO2N(R)2、-(CH2)nCON(R)2、-(CH2)nCONHC(R)3、-(CH2)nCONHC(R)2CO2R、-(CH2)nCOR8、硝基、氰基或卤素，所述烷基、烷氧基、杂环基或芳基任选地被1-3个Ra的基团取代；或，R2和R3与位于两者之间的Q一起形成3-10元碳环或杂环，其任选地被1-2个O、S、C(O)或NR原子所间隔并且任选地具有1-4个双键并任选地被1-3个选自Ra的基团取代；R4和R5独立地代表氢、C1-6烷氧基、OH、C1-6烷基、COOR、SO3H、-O(CH2)nN(R)2、-O(CH2)nCO2R、-OPO(OH)2、CF3、OCF3、-N(R)2、硝基、氰基、C1-6烷基氨基或卤素； 代表C6-10芳基或C3-10杂环基，所述芳基或杂环基任选地被1-3个选自Ra的基团取代；Z代表(CH2)nPO(OR)(OR*)；R*代表氢或C1-6烷基；R7代表氢、C1-6烷基、-(CH2)nCOOR或-(CH2)nN(R)2，R8代表-(CH2)nC3-8环烷基、-(CH2)n3-10杂环基、C1-6烷氧基或-(CH2)nC5-10杂芳基、-(CH2)nC6-10芳基，所述杂环基、芳基或杂芳基任选地被1-3个选自Ra的基团取代；Ra代表F、Cl、Br、I、CF3、N(R)2、NO2、CN、-COR8、-CONHR8、-CON(R8)2、-O(CH2)nCOOR、-NH(CH2)nOR、-COOR、-OCF3、-NHCOR、-SO2R、-SO2NR2、-SR、(C1-C6烷基)O-、-(CH2)nO(CH2)mOR、-(CH2)nC1-6烷氧基、(芳基)O-、-(CH2)nOH、(C1-C6烷基)S(O)m-、H2N-C(NH)-、(C1-C6烷基)C(O)-、(C1-C6烷基)OC(O)NH-、-(C1-C6烷基)NRw(CH2)nC3-10杂环基-Rw、-(C1-C6烷基)O(CH2)nC3-10杂环基-Rw、-(C1-C6烷基)S(CH2)nC3-10杂环基-Rw、-(C1-C6烷基)-C3-10杂环基-Rw、-(CH2)n-Z1-C(＝Z2)N(R)2、-(C2-6烯基)NRw(CH2)nC3-10杂环基-Rw、-(C2-6烯基)O(CH2)nC3-10杂环基-Rw、-(C2-6烯基)S(CH2)nC3-10杂环基-Rw、-(C2-6烯基)-C3-10杂环基-Rw、-(C2-6烯基)-Z1-C(＝Z2)N(R)2、-(CH2)nSO2R、-(CH2)nSO3H、-(CH2)nPO(OR)2、C3-10环烷基、C6-10芳基、C3-10杂环基、C2-6烯基和C1-10烷基，所述烷基、烯基、烷氧基、杂环基和芳基任选地被1-3个选自C1-C6烷基、CN、NO2、OH、-CON(R)2和COOR的基团取代；Z1和Z2独立地代表NRw、O、CH2或S；g是0-1；m是0-3；n是0-3；和p是0-3。
从本发明的总体来看，本发明的这个及其它方面将会被实现。
发明详述本发明涉及式I的新颖钾离子通道阻断剂。它也涉及一种方法，其用于通过用含有上文描述的式I的钾离子通道阻断剂和药学上可接受的载体的组合物给药，优选局部或脑穹窿内给药来降低眼内压升高或治疗青光眼。本发明还涉及使用式I化合物制备用于治疗眼内压升高或青光眼的药物的用途。
本发明化合物的一个实施方式是其中p为1-3的化合物。
当Q是N，且所有其它变量如最初所描述时，获得本发明的另一个实施方式。
当Q是O，且R2不存在，且所有其它变量如最初所描述时，获得本发明的另一个实施方式。
当Y是-CO(CH2)n，且所有其它变量如最初所描述时，获得本发明的另一个实施方式。当n是0时，还获得本发明的子实施方式。
当Y是CH(OR)，且所有其它变量如最初所描述时，获得本发明的另一个实施方式。
当Z是PO(OR)(OR*)，且R和R*是H时，获得本发明的另一个实施方式。当R和R*是C1-C6烷基时，还获得本发明的子实施方式。
在另一个实施方式中，Rw选自H、C1-6烷基、-C(O)C1-6烷基和-CO2N(R)2且所有其它变量如最初所描述。
在另一个实施方式中，X是-(CHR7)p-，p是1-3且所有其它变量如最初所描述。
在另一个实施方式中，X是-(CHR7)pCO-，p是1-3且所有其它变量如最初所描述。
在另一个实施方式中， 是任选地被1-3个选自Ra的基团取代的6元杂芳基或苯基。当杂芳基是吡啶基时，还获得本发明的子当R7是氢或C1-6烷基，且所有其它变量如最初所描述时，获得本发明的另一个实施方式。
当Z是PO(OR)(OR*)，R2和R3独立地是H、C1-10烷基或C1-6烷基OH，且Y是-CO(CH2)n时，获得本发明的另一个实施方式。
当Ra选自F、Cl、Br、I、CF3、N(R)2、NO2、CN、-CONHR8、-CON(R8)2、-O(CH2)nCOOR、-NH(CH2)nOR、-COOR、-OCF3、-NHCOR、-SO2R、-SO2NR2、-SR、(C1-C6烷基)O-、-(CH2)nO(CH2)mOR、-(CH2)nC1-6烷氧基、(芳基)O-、-(CH2)nOH、(C1-C6烷基)S(O)m-、H2N-C(NH)-、(C1-C6烷基)C(O)-、-(CH2)nPO(OR)2、C2-6烯基和C1-10烷基，所述烷基和烯基任选地被1-3个选自C1-C6烷基和COOR的基团取代；结构式I化合物的例子列在表1中
表1 或其药学上可接受的盐、对映体、非对映体或其混合物。当化合物以一钠盐或二钠盐的形式存在时，还获得本发明的子实施方式。
本文使用下面所定义的术语详细地描述本发明，除非另作说明。
本发明的化合物可以具有不对称中心、手性轴和手性面，并以消旋体、外消旋混合物和单一非对映体的形式出现，所有可能的异构体，包括旋光异构体，都包括在本发明范围内。(参见E.L.Eliel和S.H.Wilen的Stereochemistry of Carbon Compounds(John Wiley和Sons，New York 1994)，具体是1119-1190页)当任一变量(例如芳基、杂环、R1、R6等等)在任一组成中出现超过一次时，每次出现时其定义与在每个其它出现处的定义是相互独立的。同样，只要这种组合产生稳定化合物，取代基/或变量的组合是允许的。
术语“烷基”是指单价烷(烃)衍生的含有1至10个碳原子的基团，除非另外定义。其可以是直链、支链或环状的。优选的烷基包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、叔丁基、环丙基、环戊基和环己基。当烷基被说成是被烷基基团取代时，可与“支链烷基基团”互换使用。
环烷基是一种含有3至15个碳原子的烷基，除非另外定义，在碳原子之间没有交替或共振的双键。它可以含有1至4个稠合的环。这种环烷基部分的实例包括但不局限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基和环庚基。
烯基是C2-C6烯基。
烷氧基是指一种通过氧桥连接的具有指定数目碳原子的烷基，如在此所述的，烷基是任选取代的。所述基团是具有直链或支链构型的指定长度的那些基团，且如果长度为两个或多个碳原子，则它们可能包括双键或三键。典型的上述烷氧基是甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、异戊氧基、己氧基、异己氧基烯丙氧基、丙炔基氧基等。
卤素(卤)是指氯、氟、碘或溴。
芳基是指芳香环例如，苯基、取代苯基等，以及稠合的环，例如，萘基，菲基等。这样，芳基基团含有至少一个具有至少6个原子的环，至多出现五个这样的环，其中含有最高达22个原子，并且在相邻碳原子或合适的杂原子之间具有交替的(共振的)双键。芳基基团的例子是苯基、萘基、四氢萘基、二氢化茚基、联苯基、菲基(phenanthryl)、蒽基或苊基和菲基(phenanthrenyl)，优选苯基、萘基或菲基(phenanthrenyl)。芳基基团可能同样是如所定义被取代的。优选的取代的芳基包括苯基和萘基。
术语杂环基或杂环，如在此所使用的，代表稳定的3-至7-元单环或稳定的8-至11-元双环杂环，其是饱和的或不饱和的，并且由碳原子和一至四个选自N、O和S的杂原子构成，并且包括任何双环基团，其中以上定义的任何杂环与苯环稠合。杂环可以在产生稳定结构的任何杂原子或碳原子处连接。稠合的杂环系统可以包括碳环且需要包括仅仅一个杂环。术语杂环或杂环的包括杂芳基部分。这样的杂环部分的例子包括，但不限制于，氮杂基、苯并咪唑基、苯并异唑基、苯并呋咱基、苯并吡喃基、苯并噻喃基、苯并呋喃基、苯并噻唑基、苯并噻吩基、苯并唑基、苯并二氢吡喃基、噌琳基、二氢苯并呋喃基、二氢苯并噻吩基、二氢苯并噻喃基、二氢苯并噻喃基砜、二氢吡咯基、1，3-二氧杂环戊烷基、呋喃基、咪唑烷基、咪唑啉基、咪唑基、二氢吲哚基、吲哚基、异苯并二氢吡喃基、异二氢氮茚基、异喹啉基、异噻唑烷基、异噻唑基、异噻唑烷基、吗啉基、二氮杂萘基、二唑基、2-氧代氮杂基、唑基、2-氧代哌嗪基、2-氧代哌啶基、2-氧代吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吡啶基、吡嗪基、吡唑烷基、吡唑基、哒嗪基、嘧啶基、吡咯烷基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、喹喔啉基、四氢呋喃基、四氢异喹啉基、四氢喹啉基、硫代吗啉基、硫代吗啉基亚砜、噻唑基、噻唑啉基、噻吩并呋喃基、噻吩并噻吩基和噻吩基。优选地，杂环选自2-氮杂酮基、苯并咪唑基、2-二氮杂酮基、二氢咪唑基、二氢吡咯基、咪唑基、2-咪唑啉酮基、吲哚基、异喹啉基、吗啉基、哌啶基、哌嗪基、吡啶基、吡咯烷基、2-哌啶酮基、2-嘧啶酮基、2-吡咯啉酮基、喹啉基、四氢呋喃基，四氢异喹啉基和噻吩基。
术语“杂原子”是指O、S或N，在独立的基础上进行选择。
术语“杂芳基”是指具有5或6个环原子的单环芳香族烃基团，或具有8至10个原子的双环芳香基，含有至少一个杂原子O、S或N，其中碳或氮原子是联结点，并且其中一个或两个另外的碳原子任选地被选自O或S的杂原子替代，其中1至3个另外的碳原子任选地被氮杂原子替代，所述杂芳基基团是任选地被取代的，如在此所描述。这样的杂环部分的例子包括，但不局限于，苯并咪唑基、苯并异唑基、苯并呋咱基、苯并吡喃基、苯并噻喃基、苯并呋喃基、苯并噻唑基、苯并噻吩基、苯并唑基、苯并二氢吡喃基、噌琳基、二氢苯并呋喃基、二氢苯并噻吩基、二氢苯并噻喃基、二氢苯并噻喃基砜、呋喃基、咪唑基、二氢吲哚基、吲哚基、异苯并二氢吡喃基、异二氢氮茚基、异喹啉基、异噻唑基、二氮杂萘基、二唑基、吡啶基、吡嗪基、吡唑基、哒嗪基、嘧啶基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、喹喔啉基、四氢异喹啉基、四氢喹啉基、噻唑基、噻吩并呋喃基、噻吩并噻吩基、噻吩基和三唑基。另外的氮原子可以与第一个氮和氧或硫一起存在而得到例如，噻二唑。
本发明还涉及组合物和通过向需要这种治疗的患者给药下列之一来治疗高眼压症或青光眼的方法单独的式I的化合物，或以与一个或多个下列活性组分的组合形式，与α，β-肾上腺素能阻断剂，例如噻吗心安、倍他索洛尔、左倍他洛尔、卡替洛尔、左布诺洛尔，拟副交感神经功能剂例如肾上腺素、艾普罗里定、溴莫尼定、可乐宁、对氨基可乐定，碳酸酐酶抑制剂例如杜塞酰胺、乙酰唑胺、甲醋唑胺(metazolamide)或布林佐胺，EP4激动剂(例如在WO 02/24647、WO02/42268、EP 1114816、WO 01/46140、PCT申请号CA2004000471，和WO 01/72268中公开的那些)，前列腺素例如拉坦前列素、travaprost、乌诺前列酮、异丙基乌诺前列酮、S1033(在美国专利号5,889,052；5,296,504；5,422,368；和5,151,444中提出的化合物)；降血压的脂质例如lumigan和在美国专利US5,352,708中提出的化合物；在美国专利US4,690,931中公开的神经保护剂，尤其是依利罗地和R-依利罗地，如在WO 94/13275中提出的，包括美满町；如PCT/US00/31247中提出的5-HT2受体激动剂，尤其是富马酸1-(2-氨基丙基)-3-甲基-1H-咪唑-6-醇酯和2-(3-氯-6-甲氧基-吲唑-1-基)-1-甲基-乙胺或其混合物的组合。降血压的脂质的例子(在基本前列腺素结构的α-链节上的羧基被电化学中性的取代基替换)为那些其中羧基被C1-6烷氧基例如OCH3(PGF2a1-OCH3)，或羟基(PGF2a1-OH)替换的。
优选的钾离子通道阻断剂是钙活化的钾离子通道阻断剂。更优选的钾离子通道阻断剂是高电导率、钙活化的钾(Maxi-K)通道阻断剂。Maxi-K通道是在神经元、平滑肌和上皮组织中广泛存在的一族离子通道，其通过膜电位和细胞内Ca2+开启。
本发明基于以下发现即如果阻断maxi-K通道，则通过抑制网溶质和水流出物而抑制水样液产生，并因此降低IOP。该发现提出了maxi-K通道阻断剂可有效地用于治疗其它眼科机能障碍例如斑点水肿和黄斑变性。众所周知，降低IOP可促进血液流至视网膜和视神经。相应地，本发明的化合物可有效地用于治疗斑点水肿和/或黄斑变性。本发明还涉及式I化合物在制备用于治疗斑点水肿和/或黄斑变性的药物中的用途。
人们相信降低IOP的maxi-K通道阻断剂可有效地用于提供神经保护作用。当它们与有益视神经健康联系在一起时，还被认为通过降低IOP而有效地增加视网膜和视神经顶端的血液速度和增加视网膜和视神经氧气。结果，本发明还涉及增加视网膜和视神经顶端的血液速度、增加视网膜和视神经氧压以及提供神经保护作用或其组合的方法。本发明还涉及式I化合物在制备用于治疗上述疾病的药物中的用途。
大量市售的药物可以具有钾离子通道拮抗剂的作用。这些中最重要的包括化合物优降糖、格列甲嗪和甲苯磺丁脲。这些钾离子通道拮抗剂可用作抗糖尿病药剂。本发明的化合物可以与一种或多种上述化合物相结合来治疗糖尿病。
钾离子通道拮抗剂还可用作如3级抗心律失常药剂和用于治疗人类急性梗死。已知大量天然存在的毒素可阻断钾离子通道，包括蜜蜂神经毒素、Iberiotoxin、卡律蝎毒素、诺克休斯毒素(Noxiustoxin)、Kaliotoxin、树眼镜蛇毒素(s)、柱状细胞脱粒(MCD)肽和-银环蛇毒素(-BTX)。本发明的化合物可以与一种或多种上述化合物相结合来治疗心律失常。本发明还涉及式I化合物在制备用于治疗上述疾病的药物中的用途。
抑郁症与神经传递介质释放的减少有关。现在的抑郁症治疗包括神经传递介质吸收的阻断剂和与起延长神经传递介质寿命作用的在神经传递介质降解有关的酶抑制剂。
阿尔茨海默氏病还以减弱的神经传递介质释放为特征。正在研究三类药物用作治疗阿尔茨海默氏病的胆碱能增效剂，例如抗胆碱脂酶药(例如，毒扁豆碱(依色林)和他克林(四氢氨基吖啶))；影响神经元代谢而在别处很少作用的亲精神药(例如，吡乙酰胺，奥拉西坦)；和影响脑部血管系统的药物例如二氢麦角碱甲磺酸盐和钙通道阻断药物，包括尼莫地平的混合物。司来吉兰，一种可提高脑部多巴胺和去甲肾上腺素的单胺氧化酶B抑制剂，据报道可引起一些阿尔茨海默病患者轻微的改善。铝螯合剂引起了认为阿尔茨海默氏病是铝中毒而导致的人的兴趣。已经使用可影响行为的药物，包括抗精神病药和抗焦虑药。抗焦虑药，是温和的镇静剂，比抗精神病药的效果小。本发明涉及可有效用作钾离子通道拮抗剂的新颖的化合物。本发明还涉及使用式I化合物制备用于治疗抑郁症和/或阿尔茨海默氏病的药物。
本发明的化合物可以与如下物质相结合来治疗阿尔茨海默氏病抗胆碱脂酶药例如毒扁豆碱(依色林)和他克林(四氢氨基吖啶)、亲精神药例如吡乙酰胺、奥拉西坦、甲磺酸二氢麦角碱、选择性钙通道阻断剂例如尼莫地平，或单胺氧化酶B抑制剂例如司来吉兰(Selegiline)。本发明的化合物还可以与蜜蜂神经毒素、Iberiotoxin、卡律蝎毒素、诺克休斯毒素(Noxiustoxin)、Kaliotoxin、树眼镜蛇毒素(s)、柱状细胞脱粒(MCD)肽和β-银环蛇毒素(β-BTX)或其组合结合来治疗心律不齐。本发明的化合物可以进一步与优降糖、格列甲嗪、甲苯磺丁脲或其组合结合来治疗糖尿病。本发明还涉及式I化合物在制备用于治疗尿病的药物中的用途。
本文中的实施例举例说明但不限制所要求保护的发明。每个要求保护的化合物是钾离子通道拮抗剂，因此可有效地用于所描述的神经系统紊乱，其中保持细胞处在去极化状态以达到最大的神经传递介质释放是合乎需要的。在本发明中制备的化合物可容易地与合适的并已知的药学上可接受的赋形剂相结合，制造可以向哺乳动物包括人类给药的组合物，以实现有效的钾离子通道阻断。
为了用于药物中，式I的化合物的盐可以是药学上可接受的盐。然而其它盐也可以用于制备按照本发明的化合物或它们的药学上可接受的盐。当本发明的化合物是酸性的时，合适的“药学上可接受的盐”是指由药学上可接受的包括无机碱和有机碱的无毒碱所制备的盐。衍生自无机碱的盐包括铝盐、铵盐、钙盐、铜盐、铁盐、亚铁盐、锂盐、镁盐、三价锰盐、二价锰盐、钾盐、钠盐、锌盐等。特别优选的是铵盐、钙盐、镁盐、钾盐和钠盐。由药学上可接受的有机无毒碱衍生的盐包括伯-、仲-和叔-胺的盐，取代的胺包括天然存在的取代胺、环胺和碱性离子交换树脂，例如精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、N，N1-二苄基乙二胺、二乙胺、2-二乙氨基乙醇、2-二甲氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基吗啉、N-乙基哌啶、葡糖胺(glucamine)、葡萄糖胺(glucosamine)、组氨酸、海巴胺、异丙胺、赖氨酸、葡甲胺、吗啉、哌嗪、哌啶、聚胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨基丁三醇等。优选的药学上可接受的盐是钠或钾盐。然而，为了有助于在制备过程中分离盐，优选在选定溶剂中溶解较少的盐，而不管其是否是药学上可接受的盐。
当本发明的化合物是碱时，盐可以由药学上可接受的包括无机酸和有机酸的无毒酸制备。这样的酸包括乙酸、苯磺酸、安息香酸、樟脑磺酸、柠檬酸、乙磺酸、富马酸、葡糖酸、谷氨酸、氢溴酸、盐酸、羟乙磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘酸、硝酸、双羟萘酸、泛酸、磷酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、对甲苯磺酸等。特别优选的是柠檬酸、氢溴酸、盐酸、马来酸、磷酸、硫酸和酒石酸。
上面描述的药学上可接受的盐及其它一般的药学上可接受的盐的制备由Berg等人在″Pharmaceutical Salts，″J.Pharm.Sci.，1977661-19中更充分地描述。
在生物体内可水解的酯是那些在人体内水解产生母体化合物的药学上可接受的酯。可以通过使用试验中的化合物向试验动物进行如静脉内用药，并且随后检查试验动物的体液，从而确定上述的酯。
本文中使用的术语“组合物”是用来涵盖一种包括特定数量的特定成分的产品，以及直接或间接地由特定数量的特定成分的组合得到的产品。
当对人类患者给予按照本发明的化合物时，每日给药量通常将由处方医师确定，同时剂量通常根据个体患者的年龄、体重、性别和响应值以及患者症状的严重程度而改变。
可以在静脉内、皮下、局部、透皮、胃肠外或以本领域技术人员已知的任何其它方法以治疗有效量给予所使用的maxi-K通道阻断剂。
眼用药物组合物优选以溶液、悬浮液、油膏、乳膏或固体嵌入物形式适合于眼睛局部给药。该化合物的眼用制剂可以含有0.01ppm至1％，尤其是0.1ppm至1％的药物。可以使用更高的剂量如大约10％，或更低的剂量，前提是该剂量在降低眼内压、治疗青光眼、增加血流速度或氧压方面是有效的。对于单一剂量，可以给人眼施用在0.1ng至5000μg之间，优选1ng至500μg，特别是10ng至100μg的化合物。
含有化合物的药物制剂可以方便地与无毒的药学上的有机载体，或与无毒的药学上的无机载体混合。一般的药学上可接受的载体是，例如水、水和水-可混溶的溶剂例如低级烷醇或芳醇的混合物、植物油、聚亚烷基二醇、石油基凝胶、乙基纤维素、油酸乙酯、羧甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、十四烷酸异丙酯及其它通常使用的可接受的载体。药物制剂也可以包含无毒的助剂物质例如乳化剂、防腐剂、润湿剂、增稠剂等，例如，聚乙二醇200、300、400和600，聚乙二醇(Carbowax)1,000、1,500、4,000、6,000和10,000，抗菌组分例如季铵化合物，已知具有冷灭菌性能和使用中无害的苯汞基盐、硫汞撒、对羟苯甲酸甲酯和对羟苯甲酸丙酯、苯甲醇、苯乙醇，缓冲液组分例如硼酸钠、乙酸钠、葡糖酸盐缓冲液，及其它通常的组分例如单月桂酸脱水山梨醇酯、三乙醇胺、油酸酯、单棕榈酸聚氧亚乙基脱水山梨醇酯、磺基琥珀酸辛酯钠盐、单硫代甘油、硫代山梨醇、乙二胺四乙酸等。
另外，为此目的可使用合适的眼用赋形剂作为载体介质，包括通常的磷酸盐缓冲液赋形剂系统、等渗硼酸赋形剂、等渗氯化钠赋形剂、等渗硼酸钠赋形剂等。药物制剂还以微粒制剂的形式存在。药物制剂还以固体嵌入物的形式存在。例如，可以使用固体水可溶性聚合物作为药物载体。所使用的形成嵌入物的聚合物可以是任何水溶性的无毒聚合物，例如，纤维素衍生物例如甲基纤维素、羧甲基纤维素钠盐、(羟基低级烷基纤维素)、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟基丙基甲基纤维素；丙烯酸酯例如聚丙烯酸盐、丙烯酸乙酯、聚乙酰胺；天然产物例如凝胶、藻朊酸盐、果胶、黄芪胶、刺梧桐、角叉菜属、琼脂、阿拉伯胶；淀粉衍生物例如淀粉醋酸酯、羟甲基淀粉醚、羟丙基淀粉，以及其它合成衍生物例如聚乙烯醇、聚乙烯基吡咯烷酮、聚乙烯基甲基醚、聚氧化乙烯、中和的聚羧乙烯和黄原胶、结冷胶和所述聚合物的混合物。
本发明制剂合适的给药对象包括灵长类、人及其它动物，特别是人和家养动物例如猫和狗。
药物制剂可以含有无毒的助剂物质例如使用中无害的抗菌组分，例如，硫汞撒、苯扎氯铵、对羟基苯甲酸甲酯和丙酯、苄基十二烷基溴化铵(benzyl dodecinium bromide)、苯甲醇或苯乙醇；缓冲液组分例如氯化钠、硼酸钠、乙酸钠、柠檬酸钠，或葡糖酸盐缓冲液；及其它通常的组分例如单月桂酸山梨醇酐酯、三乙醇胺、单棕榈酸聚氧乙烯脱水山梨醇酯、乙二胺四乙酸等。
眼用溶液或悬浮液可以在每当需要保持眼中可接受的IOP水平时给药。预计向哺乳动物的眼睛给药大约每天一或两次。
对于局部眼给药，本发明的新制剂可以采取溶液、凝胶剂、油膏、悬浮液或固体嵌入物的形式，配制成包含治疗有效量的活性组分的单位剂量或在联合治疗的情况下它们的一些多重剂量。
通过下面给出的实施例说明本发明。
实施例中的术语的定义列在下面SM-起始原料，DMSO-二甲基亚砜，TLC-薄层色谱SGC-硅胶色谱，PhMgBr-苯基溴化镁h＝hr＝小时，THF-四氢呋喃，DMF-二甲基甲酰胺，min-分钟，LC/MS-液相色谱/质谱，HPLC-高效液相色谱，PyBOP-苯并三唑-1-基氧基三-(二甲氨基)膦六氟磷酸盐，equiv＝eq＝等量，NBS-N-溴代琥珀酰胺和AIBN-2，2-偶氮二异丁腈。
本发明的化合物可以根据方案1到3制备，合适时作些变化。
方案1 方案2
方案3 步骤A 向二溴化物(23.2克，实施例1，步骤-3的副产品)的乙酸溶液中加入乙酸钠(22.5克)。将混合物放在油浴中并且回流几个小时，中加入乙酸钠(22.5克)。将混合物放在油浴中并且回流几个小时，直到反应结束。将混合物冷却至室温，然后倾倒入冰/水中得到乳白色固体形式的需要的化合物。将固体过滤分离并且在氮气氛中干燥。
1H NMR(CDCl3)δ10.23(1H，s)；8.19(1H，d)；7.02(1H，dd)；6.96(1H，d)；3.90(3H，s)。
步骤B 向步骤A的中间体中加入原甲酸三乙酯(40毫升)并且在130℃加热几个小时。浓缩得到的混合物至干，得到褐色固体的标题化合物(11.9克)。
1H NMR(DMSO)δ10.08(1H，s)；7.98(1H，d)；7.25(1H，d)；7.02(1H，dd)；6.81(1H，s)；3.82(3H，s)；3.52(4H，q)；1.11(6H，t)。
中间体2 将1.99克(10毫摩尔)的溴乙酸溴在20毫升二氯甲烷中形成的溶液冷却至-78℃并且逐滴加入TEA(1.21克，12毫摩尔)。搅拌反应混合物20分钟，然后逐滴加入二丁基胺(1.54克，12毫摩尔)。反应结束之后，用1N HCl、水和盐水洗涤混合物，并在硫酸镁上干燥，并真空干燥得到褐色的液体。使用该材料而不需要进一步纯化。
1H NMR(CDCl3)δ0.95(6H，m)，1.35(4H，m)，1.55(4H，m)，3.30(4H，m)，3.85(2H，s)。
中间体3 除了用二丙基胺代替二丁基外，如中间体2中所描述的方式制备该中间体。
1H NMR(CDCl3)δ0.95(6H，m)，1.60(4H，m)，3.25(4H，m)，3.82(2H，s)。
中间体4 除了用二异戊基胺代替二丁基胺，如中间体2中所描述的方法合成该中间体。
1H NMR(CDCl3)δ0.95(12H，m)，1.40(2H，m)，1.60(4H，m)，3.30(4H，m)，3.82(2H，s)。
中间体5
除了用N，N-乙基丁基胺代替二丁基胺外如中间体2中所描述的方法合成，该中间体。
1H NMR(CDCl3)δ0.95-0.99(3H，m)，1.15-1.26(3H，m)，1.35(2H，m)，3.59(2H，m)，3.30-3.40(4H，m)，3.86(2H，s)。
中间体6 在-78℃，将异丙基溴化镁逐滴加入到5-碘-2-氯嘧啶(2.56克，10.78毫摩尔)在THF(10毫升)中的溶液中。将中间体1(1.71克，6.10毫摩尔)作为在THF(5毫升)中的溶液加入之前，搅拌反应1个小时。两个小时之后，用1N的NaOH淬灭反应并且用乙酸乙酯提取。用盐水洗涤化合的有机层，在硫酸镁上干燥，并且真空浓缩。向粗产品在甲苯(50毫升)中形成的溶液中加入二氧化锰(2.173克，25.0毫摩尔)并且将反应混合物加热到130℃。一个小时后，反应结束，通过硅藻土垫过滤，并且真空浓缩。将粗产品溶解在THF(10毫升)中并且逐滴加入4毫升1N盐酸。在室温下搅拌，直到TLC分析显示反应完成。将反应混合物冷却至0℃并且收集固体沉淀(1.131克，64％)。1H NMR(CD3OD)δ3.900(3H，s)，7.013(1H，d)，7.062(1H，s)，7.627(1H，d)，8.672(1H，d)，9.306(1H，s)。
中间体7 在-78℃，将正丁基锂(2.156毫升，5.39毫摩尔，2.5M在己烷中的溶液)逐滴加入到5-溴-2-甲基吡啶(736毫克，4.31毫摩尔)在THF(15毫升)中形成的溶液中。将中间体1(1.00克，3.59毫摩尔)作为THF(5毫升)中的溶液加入之前，搅拌反应1个小时。两个小时之后，起始原料被消耗完，用1N的NaOH淬灭反应并且用乙酸乙酯提取。用盐水洗涤合并的有机层，在硫酸镁上干燥，并且真空浓缩。向粗产品在甲苯(20毫升)中形成的溶液中加入二氧化锰(0.414克，4.77毫摩尔)并且将反应混合物加热到130℃。一个小时后，反应完成，通过硅藻土垫过滤，并且真空浓缩。将粗产品溶解在THF中并且逐滴加入4毫升1N盐酸。一个小时后，将反应混合物冷却至0℃并且收集固体沉淀(380毫克，40.0％)。1H NMR(DMSO)δ2.553(3H，s)，3.832(3H，s)，7.000(1H，d)，7.089(1H，s)，7.451(1H，d)，8.100(1H，d)，8.430(1H，d)，9.220(1H，s)。
中间体8
步骤A 在0℃向2-嘧啶乙酸-5-溴-α，α-二氟-乙酯(13.4克；根据“Ero，H.；Haneko，Y.；Sakamoto，T.Chem Pharm.Bull.2000年第48卷，第982页”制备)在乙醇中形成的溶液中分批加入硼氢化钠(2.3克)。在0℃搅拌一个小时，将混合物倾倒入水中并且用乙酸乙酯萃取。用1N的NaOH溶液、盐水洗涤有机层，干燥(硫酸镁)并减压浓缩得到粗醇。在0℃将咪唑(4.1克)和TBS-Cl(8.3克)加入到在二氯甲烷中的粗醇中。搅拌混合物一个小时。将反应混合物倾倒入0.1N盐酸溶液中，用二氯甲烷提取。用盐水洗涤有机层，干燥(硫酸镁)并蒸发。用硅胶(100％二氯甲烷)纯化剩余物，得到无色油形式的需要的化合物(13.5克)。
1H NMR(CDCl3)δ8.75(1H，d)；7.95(1H，dd)；7.57(1H，d)；4.20(2H，t)；0.82(9H，s)；0.02(6H，s)。
步骤B 通过所描述的与中间体7类似的方法制备所需要的化合物。
1H NMR(DMSO)δ9.35(1H，d)；8.65(1H，dd)；8.14(1H，d)；7.88(1H，d)；7.10(1H，d)；；7.03(1H，dd)；4.05(2H，t)；3.85(3H，s)。
LC-MS(M+H)＝334.2。
步骤C
向来自步骤B的中间体(200毫克，0.602毫摩尔)和Cs2CO3(586毫克，1.806毫摩尔)在DMF(4毫升)中形成的溶液中加入溴代乙酸乙酯(0.134毫升，1.204毫摩尔)。四十分钟之后反应结束并且用水淬灭。用乙酸乙酯提取反应混合物并且用水、盐水洗涤合并后的有机层，在硫酸镁上干燥，并且真空浓缩。使用该材料而不需要进一步纯化。
1H NMR(CDCl3)δ1.286(3H，m)，3.915(3H，s)，4.296(4H，m)，5.209(2H，s)，6.738(1H，s)，7.063(1H，d)，7.871(1H，d)，8.310(1H，d)，8.708(1H，d)，9.527(1H，s)。
步骤D 向来自步骤C的中间体溶液中加入12毫升THF/EtOH/H2O(1∶1∶1)，随后加入150毫克NaOH。一个小时之后，反应结束，真空除去THF和乙酸乙酯。用醚提取水层，并酸化到pH为2，用乙酸乙酯稀释，用水洗涤，在硫酸镁上干燥，并且真空浓缩。使用该粗产品而不需要进一步纯化。
1H NMR(CD3OD)δ3.909(3H，s)，4.157(2H，t)，5.374(2H，s)，7.027(1H，d)，7.103(1H，s)，7.881(1H，d)，8.201(1H，d)，8.764(1H，d)，9.462(1H，s)。
中间体9 在搅拌下，向中间体7(275毫克，1.02毫摩尔)在CH3N中形成的溶液中加入TEA(0.169毫升，1.22毫摩尔)、DMAP(12毫克，0.102毫摩尔)和叔丁氧基羰基酐(265毫克，1.22毫摩尔)。三十分钟之后，用乙酸乙酯稀释反应物并且用水、盐水提取，在硫酸镁上干燥，并且真空浓缩。在0℃，向粗材料中加入过乙酸(0.159毫升，1.278毫摩尔)。1.5小时之后，TLC显示反应结束并且真空浓缩反应混合物。用硅胶色谱纯化粗产品。将N-氧化物溶解在CH2Cl2中，并在0℃逐滴加入TFAA。将反应混合物加热到室温并搅拌过夜。用水和乙酸乙酯稀释完成的反应，并且用1N的NaOH将pH调节为13-14。用乙酸乙酯洗涤水层并且用水、盐水洗涤合并的有机层，在硫酸镁上干燥，并且真空浓缩得到需要的产品(52毫克，18％)。
1H NMR(CDCl3)δ3.90(3H，s)，4.95(2H，s)，6.85(1H，s)，7.05(1H，d)，7.50(1H，d)，8.30(1H，d)，8.68(1H，d)，9.64(1H，s)。
中间体10
步骤A 在氮气气氛下，向2，5-二溴吡啶(2.4克)在甲苯中形成的溶液中加入三丁基烯丙基锡(3.4毫升)和二氯二(三苯基膦)钯(0.7克)。将混合物回流几个小时并减压浓缩。将剩余物再次溶解在“湿醚”中并缓慢加入DBU(3毫升)而得到浑浊的溶液。在硅胶的衬垫上过滤混合物并且浓缩。将残留物溶解在二氯甲烷/甲醇＝1/1的溶液中并冷却至-78℃。用臭氧使溶液起泡直到反应混合物变成蓝色。将反应混合物加热到0℃并且分批加入硼氢化钠(0.5克)。在0℃搅拌一个小时之后，将混合物倾倒在水中，并用乙酸乙酯提取。用1N的NaOH溶液、盐水洗涤有机层，干燥(硫酸镁)，并且减压浓缩得到粗醇。用硅胶(二氯甲烷/乙酸乙酯＝1/1)纯化，得到需要的醇。在0℃，将醇在二氯甲烷中形成的溶液中加入咪唑(0.4克)和TBS-Cl(0.8克)。搅拌混合物1个小时。将反应混合物倾倒在0.1N的盐酸溶液中，用二氯甲烷提取。用盐水洗涤有机层，干燥(硫酸镁)，并且蒸发。用硅胶(100％二氯甲烷)纯化剩余物，得到需要的化合物(1.05克)。
1H NMR(CDCl3)δ8.61(1H，d)；7.73(1H，dd)；7.14(1H，d)；3.97(2H，t)；2.96(2H，t)；0.86(9H，s)；0.02(6H，s)。
步骤B 通过所描述的与中间体7类似的过程制备中间体10。需要的中间体10在pH＞10时沉淀出来。
1H NMR(DMSO)δ9.23(1H，d)；8.43(1H，dd)；8.11(1H，d)；7.46(1H，d)；7.04(1H，dd)；；6.99(1H，d)；4.85(2H，t)；3.83(3H，s)；2.97(2H，t)。
实施例1
步骤A 向中间体6(600毫克，2.08毫摩尔)和Cs2CO3(2.028克，6.24毫摩尔)在DMF(14毫升)中形成的溶液中加入中间体2(809毫克，3.24毫摩尔)。35分钟之后，反应完成并且将反应物倾倒在冰水中。收集固体沉淀，得到950毫克需要的产品(定量的)。
1H NMR(CDCl3)δ0.919(3H，t)，0.975(3H，t)，1.327(4H，m)，1.596(4H，m)，3.408(4H，m)，3.926(3H，s)，5.275(2H，s)，6.864(1H，s)，7.053(1H，d)，7.491(1H，d)，8.321(1H，d)，8.563(1H，d)，9.425(1H，d)。
步骤B
用己烷洗涤800毫克(20.0毫摩尔)的NaH(60％分散在矿物油中)三遍并在氮气下干燥。将乙二醇(14毫升)加入到干燥的NaH中并且在50℃搅拌反应混合物20分钟。向反应混合物中加入来自前一步骤的中间体(916毫克，2.0毫摩尔)在THF(12毫升)中形成的溶液。在50℃搅拌反应过夜。将反应混合物倾倒在冰水中并且收集固体沉淀。用硅胶色谱纯化粗产品，得到需要的产品(688毫克，71.1％)。
1H NMR(CDCl3)δ0.903(3H，m)，0.987(3H，m)，1.372(4H，m)，1.584(4H，m)，3.405(4H，m)，3.922(3H，s)，4.028(2H，m)，4.640(2H，m)，5.288(2H，s)，6.858(1H，s)，6.953(1H，d)，7.050(1H，d)，8.302(1H，d)，8.579(1H，d)，9.360(1H，s)。
实施例2 在室温下，向来自实施例1的步骤B的中间体(438毫克，0.908毫摩尔)在三氯甲烷中形成的溶液中加入四唑(3.02毫升，1.362毫摩尔，0.45M/CH3CN)和二乙基氨基亚磷酸二叔丁基酯(0.302毫升，1.09毫摩尔)。0.5个小时之后反应结束并且在0℃在0.5个小时中加入过乙酸(0.227毫升，1.816毫摩尔)。用饱和的亚硫酸氢钠淬灭反应混合物，用乙酸乙酯稀释，用饱和的碳酸氢钠、水和饱和的氯化钠洗涤，在硫酸镁上干燥，并且真空蒸发至干。将粗剩余物在二氧化硅上进行色谱分离，得到396毫克纯产品。在0℃用99％HCl(g)向溶解于乙酸乙酯的磷酸酯中鼓泡，直至饱和。收集固体沉淀得到170毫克最终产品。从甲醇/乙酸乙酯/己烷的母液中进一步重结晶，又得到140毫克的最终产品。收集到310毫克(82％的产率)。
1H NMR(CD3OD)δ0.922(3H，t)，1.004(3H，t)，1.312(2H，m)，1.408(2H，m)，1.554(2H，m)，1.651(2H，m)，3.386(2H，t)，3.516(2H，t)，3.904(3H，s)，4.335(2H，m)，4.629(2H，m)，5.487(2H，s)，6.933(1H，d)，6.998(1H，d)，7.040(1H，s)，8.196(1H，d)，8.566(1H，d)，9.215(1H，s)。
实施例3 步骤A
如实施例1的步骤A所描述的方式，但是用中间体3代替中间体2来制备该化合物。
1H NMR(CDCl3)δ0.832(3H，t)，0.992(3H，t)，1.667(4H，m)，3.384(4H，m)，3.866(3H，s)，5.218(2H，s)，6.777(1H，s)，6.937(1H，d)，7.365(1H，m)，8.178(1H，d)，8.495(1H，d)，9.377(1H，s)。
步骤B 如实施例1的步骤B所描述的方式制备该化合物。通过二氧化硅制备板(1∶2的己烷/乙酸乙酯)纯化。
1H NMR(CDCl3)δ0.843(3H，t)，0.975(3H，t)，1.619(4H，m)，3.400(4H，m)，3.917(3H，s)，4.010(2H，m)，4.109(2H，m)，5.291(2H，s)，6.858(1H，s)，6.927(1H，d)，7.046(1H，d)，8.318(1H，d)，8.569(1H，d)，9.330(1H，s)。
实施例4
如实施例2所描述的方法制备该化合物。通过反相液相色谱(10-90％的乙腈水溶液)纯化。
1H NMR(CD3OD)δ0.876(3H，m)，1.003(3H，m)，1.599(2H，m)，1.705(2H，m)，3.028(2H，bs)，3.460(2H，bs)，3.882(3H，s)，4.286(2H，bs)，4.585(2H，bs)，5.441(2H，s)，6.990(3H，m)，8.143(1H，d)，8.520(1H，d)，9.146(1H，s)。
实施例5 步骤A
如实施例1的步骤A中所描述的方式，但用中间体3代替中间体2来制备该化合物。
1H NMR(CDCl3)δ0.857(6H，d)，0.943(6H，d)，1.380-1.604(6H，m)，3.338(4H，m)，3.834(3H，s)，5.196(2H，s)，6.748(1H，s)，6.974(1H，d)，7.400(1H，d)，8.208(1H，d)，8.503(1H，d)，9.336(1H，s)。
步骤B 如实施例1的步骤B中所描述的方法制备该化合物。使用二氧化硅制备板(1∶1己烷/乙酸乙酯)纯化。
1H NMR(CDCl3)δ0.909(6H，d)，0.975(6H，d)，1.503-1.624(6H，m)，3.441(4H，m)，3.925(3H，s)，4.032(2H，m)，4.610(2H，m)，5.282(2H，s)，6.863(1H，s)，6.954(1H，d)，7.054(1H，d)，8.324(1H，d)，8.585(1H，d)，9.354(1H，s)。
实施例6 如实施例2中所描述的方法制备该化合物。用反相液相色谱(10-90％的乙腈水溶液)纯化。
1H NMR(CD3OD)δ0.922(6H，d)，0.971(6H，d)，1.462(2H，m)，1.563(4H，m)，3.414(2H，m)，3.503(2H，m)，3.907(3H，s)，4.340(2H，bs)，4.629(2H，bs)，5.474(2H，s)，6.952(1H，d)，7.000(1H，d)，7.058(1H，s)，8.197(1H，d)，8.546(1H，d)，，9.211(1H，s)。
实施例7 步骤A
如实施例1的步骤A所描述的方式，但用中间体4代替中间体2来制备该化合物。
步骤B 如实施例1的步骤B中所描述的方式制备该化合物。用二氧化硅制备板(1∶1己烷/乙酸乙酯)纯化。
1H NMR(CDCl3)δ0.919(m，3H)，1.148-1.370(5H，m)，1.572(2H，m)，3.445(4H，m)，3.914(3H，s)，4.008(2H，m)，4.603(2H，m)，5.275(2H，s)，6.848(1H，d)，6.916(1H，d)，7.019(1H，d)， 8.290(1H，d)，8.542(1H，m)，9.316(1H，s)。
实施例8
用中间体9，该化合物是按照实施例1的步骤A所描述的方式制备的，但是用中间体5代替中间体2。用二氧化硅制备板色谱进行纯化。
1H NMR(CDCl3)δ0.924(3H，m)，1.158-1.440(7H，m)，3.442(4H，m)，3.932(3H，s)，4.956(2H，s)，5.310(2H，s)，6.871(1H，s)，7.081(1H，d)，7.559(1H，d)，8.314(1H，d)，8.712(1H，d)，9.673(1H，s)。
实施例9 用中间体9，该化合物是按照实施例1的步骤A中所描述的方式制备的，但是用中间体3代替中间体2。用二氧化硅制备板色谱进行纯化。
1H NMR(CDCl3)δ0.895(3H，t)，0.993(3H，t)，1.653(4H，m)，3.335(4H，m)，3.926(3H，s)，4.942(s，2H)，5.310(2H，s)，6.859(1H，s)，7.077(1H，d)，7.519(1H，d)，8.312(1H，d)，8.694(1H，d)，9.651(1H，s).
实施例10
用中间体9，该化合物是按照实施例1的步骤A中所描述的方式制备的。用二氧化硅制备板色谱进行纯化。
1H NMR(CDCl3)δ0.916(3H，t)，0.965(3H，t)，1.379(4H，m)，1.589(4H，m)，3.414(4H，m)，3.925(3H，s)，4.896(2H，m)，5.285(2H，s)，6.865(1H，s)，7.045(1H，d)，7.443(1H，d)，8.311(1H，d)，8.615(1H，d)，9.578(1H，s)。
实施例11 用中间体9，该化合物是按照实施例1的步骤A中所描述的方式制备的，但是用中间体4代替中间体2。用二氧化硅制备板色谱进行纯化。
1H NMR(CDCl3)δ0.910(6H，d)，0.992(6H，d)，1.450-1.700(6H，m)，3.411(4H，m)，3.933(3H，s)，4.973(2H，s)，5.297(2H，s)，6.847(1H，s)，7.082(1H，d)，7.568(1H，bs)，8.332(1H，d)，8.744(1H，bs)，9.701(1H，s)。
实施例12
向中间体8(21毫克，0.053毫摩尔)、HOBt(14.3毫克，0.106毫摩尔)和EDC(30.3毫克，0.159毫摩尔)中加入NMP(1毫升)和DIPEA(0.027毫升，0.159毫摩尔)。10分钟之后，将二丙基胺(0.014毫升，0.106毫摩尔)加入到反应中并且在室温下搅拌混合物过夜。反应一完成，就用水稀释反应并用乙酸乙酯提取。用1N盐酸、水、盐水洗涤合并的有机层，在硫酸镁上干燥，并且真空浓缩。用反相液相色谱(25-100％的乙腈水溶液)纯化最终产品。
1H NMR(CDCl3)δ0.882(3H，t)，1.01(3H，t)，1.654(4H，m)，3.368(4H，m)，3.925(3H，s)，4.311(2H，t)，5.292(2H，s)，6.858(1H，s)，7.068(1H，d)，7.866(1H，d)，8.318(1H，d)，8.724(1H，d)，9.539(1H，s)。
实施例13 如实施例12所描述的方式制备该化合物，但用N-N-乙基丁基胺代替二丙基胺。用硅胶制备板色谱(乙酸乙酯/己烷＝1/1)纯化。
1H NMR(CDCl3)δ0.924(3H，m)，1.152-1.593(7H，m)，3.451(4H，m)，3.928(3H，s)，4.306(2H，t)，5.277(2H，s)，6.877(1H，d)，7.081(1H，d)，7.881(1H，d)，8.316(1H，d)，8.732(1H，d)，9.539(1H，s)。
实施例14 如实施例12所描述的方式制备该化合物，但是用二丁基胺代替二丙基胺。用硅胶色谱(乙酸乙酯/己烷＝1/1)纯化。
1H NMR(CHCl3)δ9.55(1H，d)；8.73(1H，dd)；8.32(1H，d)；7.88(1H，d)；7.07(1H，dd)；6.86(1H，d)；5.29(2H，s)；4.32(2H，t)；3.93(3H，s)；3.38(4H，m)；1.60(4H，m)；1.40-1.28(4H，m)；0.97(3H，t)；0.92(3H，t).
LC-MS(M+H)＝503.7.
实施例15 如实施例12所描述的方式制备该化合物，但是用二异戊基胺代替二丙基胺。用硅胶色谱(乙酸乙酯/己烷＝1/1)纯化。
1H NMR(CHCl3)δ9.55(1H，d)；8.73(1H，dd)；8.33(1H，d)；7.88(1H，d)；7.07(1H，dd)；6.87(1H，d)；5.27(2H，s)；4.32(2H，t)；3.94(3H，s)；3.40(4H，m)；1.67-1.43(6H，m)；0.97(6H，d)；0.92(6H，d)。LC-MS(M+H)＝531.3实施例16 向中间体10(150毫克)和Cs2CO3(500毫克)在DMF中形成的溶液中加入中间体3(150毫克)。反应结束后，将混合物倾倒在冰/水中而得到沉淀。用硅胶(二氯甲烷/乙酸乙酯＝1/1)纯化该化合物。
1H NMR(CHCl3)δ9.53(1H，d)；8.54(1H，dd)；8.31(1H，d)；7.36(1H，d)；7.05(1H，dd)；6.86(1H，d)；5.30(2H，s)；4.11(2H，t)；3.92(3H，s)；3.40(2H，t)；3.35(2H，t)；3.17(2H，m)；1.61(4H，m)；0.98(3H，t)；0.89(3H，t)。
LC-MS(M+H)＝439.2。
实施例17
用中间体2代替中间体3，通过实施例16所描述的方法制备所需要的化合物。用硅胶(二氯甲烷/乙酸乙酯＝1/1)纯化该化合物。
1H NMR(CHCl3)δ9.57(1H，d)；8.57(1H，dd)；8.32(1H，d)；7.39(1H，d)；7.06(1H，dd)；6.86(1H，d)；5.30(2H，s)；4.11(2H，t)；3.93(3H，s)；3.42(2H，t)；3.38(2H，t)；3.20(2H，m)；1.57(4H，m)；1.40-1.28(4H，m)；0.98(3H，t)；0.92(3H，t)。
LC-MS(M+H)＝467.4。
实施例18 用中间体4代替中间体3，通过实施例16所描述的方法制备需要的化合物。用硅胶(己烷/乙酸乙酯＝1/3)纯化该化合物。
1H NMR(CHCl3)δ9.58(1H，d)；8.58(1H，dd)；8.32(1H，d)；7.41(1H，d)；7.06(1H，dd)；6.86(1H，d)；5.29(2H，s)；4.11(2H，t)；3.93(3H，s)；3.40(4H，m)；3.22(2H，m)；1.74-1.40(6H，m)；0.98(6H，t)；0.92(6H，t)。
LC-MS(M+H)＝495.4.
实施例19
用中间体5代替中间体3，通过实施例16所描述的方法制备需要的化合物。用硅胶(二氯甲烷/乙酸乙酯＝3/5)纯化该化合物。
1H NMR(CHCl3)δ9.51(1H，d)；8.51(1H，dd)；8.32(1H，d)；7.33(1H，d)；7.05(1H，dd)；6.86(1H，d)；5.29(2H，s)；4.11(2H，t)；3.93(3H，s)；3.53-3.36(4H，m)；3.14(2H，m)；1.56(2H，m)；1.32(2H，m)；1.22(3/2H，t)；1.17(3/2H，t)；0.96(3/2H，t)；0.92(3/2H，t).LC-MS(M+H)＝439.4。
实施例20 从实施例18中合成的化合物按照实施例2的描述制备该化合物。从异丙醇中重结晶该化合物。
1H NMR(CD30D)δ0.909(6H，d)，0.998(6H，d)，1.477(2H，m)，1.591(4H，m)，3.383(2H，m)，3.487(2H，m)，3.520(2H，m)，3.915(3H，s)，4.386(2H，m)，5.516(2H，s)，7.033(2H，m)，7.761(1H，d)，8.211(1H，d)，8.824(1H，d)，9.470(1H，s)。
实施例21
从实施例17中合成的化合物按照实施例2的描述制备该化合物。从异丙醇中重结晶该化合物。
1H NMR(CD3OD)δ0.910(3H，t)，1.000(3H，t)，1.345(2H，m)，1.431(2H，m)，1.584(2H，m)，1.708(2H，m)，3.403(4H，m)，3.519(2H，t)，3.914(3H，s)，4.402(2H，m)，5.544(2H，s)，7.065(2H，m)，7.971(1H，d)，8.232(1H，d)，9.079(1H，d)，9.555(1H，s)。
功能性试验A.Maxi-K通道还可以通过下列试验来定量测定化合物的活性。
Maxi-K通道抑制剂的鉴别基于所表达的Maxi-K通道在转染了HEK-293细胞中的通道的α和β1亚基两者之后以及在选择性地消除HEK-293细胞的内源性钾电导的钾通道阻断剂一起温育之后设定细胞静息电位的能力。在缺少Maxi-K通道抑制剂的情况下，转染的HEK-293细胞显示超极化的膜电位，其内部是负性的，接近于Ek(-80毫伏)，这是Maxi-K通道活性的结果。通过与Maxi-K通道阻断剂一起培养来封阻Maxi-K通道将导致细胞去极化。膜电位方面的变化可以用电压敏感的荧光能量共振转移(FRET)染料对来进行测定，该染料对使用两个组分，给予体香豆素(CC2DMPE)和受体氧杂环丙醇(oxanol)(DiSBAC2(3))。
氧杂环丙醇(Oxanol)是一种亲脂性阴离子并可根据膜电位跨膜分布。在正常情况下，当细胞内部相对于外面是负性的时，氧杂环丙醇(oxanol)积聚在膜的外部小叶状体上，而香豆素的激发将导致FRET发生。导致膜去极化的条件将导致氧杂环丙醇(oxanol)再分布到细胞内部，并由此导致FRET的减少。由此，在膜去极化后比例变化(给予体/受体)增加了，该比例变化可测定试验化合物是否积极地阻断Maxi-K通道。
HEK-293细胞从美国典型培养物保藏所(American Type CultureCollection，12301 Parklawn Drive，Rockville，Maryland，20852)处获得，登记号码为ATCC CRL-1573。任何与公众得到该微生物有关的限制在专利颁布后将被不可废止地除去。
转染HEK-293细胞中Maxi-K通道的α和β1亚基的如下进行将HEK-293细胞以每皿3×106细胞的密度铺在100mm组织培养操作皿中，并且总共制备五个皿。在37℃，10％CO2的条件下使细胞在由补充了10％胎儿牛血清、1X L-谷酰胺和1X青霉素/链霉素的Dulbecco的改进的Eagle培养基(DMEM)组成的培养基中生长。对于用Maxi-Khα(pCIneo)和Maxi-K hβl(pIRESpuro)DNAs转染，将150μLFuGENE6TM滴加入到10毫升无血清/无苯酚红的DMEM中，并使其在室温下培养5分钟。然后，将FuGENE6TM溶液滴加到包含25μg各个质粒DNA的DNA溶液中，并在室温下培养30分钟。在培养期后，向每个细胞板中滴加2毫升FuGENE6TM/DNA溶液，并使细胞在如上所述的相同条件下生长两天。在第二天结束时，将细胞放在选择介质下，该选择介质由补充了600μg/ml G418和0.75μg/ml嘌呤霉素的DMEM组成。使细胞生长直到形成分离的菌落。收集五个菌落，并将其转移到6孔组织培养物处理的皿中。总共收集了75个菌落。使细胞生长直到获得融合的单层细胞。然后使用监测125I-iberiotoxin-D19Y/Y36F与通道结合的试验，来测试细胞的maxi K通道α和β1亚基的存在。然后在功能性试验中评价表达125I-iberiotoxin-D19Y/Y36F的结合活性的细胞，该试验使用荧光能量共振转移(FRET)ABS技术利用VIPR仪器来监测Maxi-K通道控制所转染的HEK-293细胞的膜电位的能力。对给出最大信噪比的菌落进行有限地稀释。为此，将细胞以大约5细胞/毫升再悬浮，并将200μL铺板在96孔组织培养物处理的培养皿中的单独的孔中，以便在每个孔中加入大约一个细胞。总共制备两个96孔培养皿。当形成融合的单层细胞时，将细胞转移到6孔组织培养物处理的培养皿。总共转移62个孔。当获得融合的单层细胞时，使用FRET-功能性试验测试细胞。鉴定给出最佳信噪比的转染细胞，并用于随后的功能性试验。
关于功能性试验然后将转染细胞(2E+06细胞/毫升)以约100,000细胞/孔的密度铺板在96-孔聚D-赖氨酸板中，并培养约16到约24小时。从介质中吸出细胞，并将细胞用100μL Dulbecco′s磷酸盐缓冲盐水(D-PBS)洗涤一次。每孔加入一百微升在D-PBS中的约9μM香豆素(CC2DMPE)-0.02％聚丙二醇与环氧乙烷的加聚物-127，并将孔在黑暗中培养约30分钟。将细胞用100μLDulbecco′s磷酸缓冲的盐水洗涤两次，加入100μL在(mM)140 NaCl、0.1 KCl、2CaCl2、1MgCl2、20Hepes-NaOH、pH值7.4、10葡萄糖中的约4.5μM的氧杂环丙醇(DiSBAC2(3))。加入三微摩尔的HEK-293细胞的内源性钾电导的抑制剂。加入Maxi-K通道阻断剂(约0.01微摩尔到约10微摩尔)，并将细胞在室温下在黑暗中培养约30分钟。
将板装载在电压/离子探针读出器(VIPR)中，并记录10秒的CC2DMPE和DiSBAC2(3)的荧光发射。在此时，加入100μL的高-钾溶液(mM)140 KCl、2CaCl2、1MgCl2、20 Hepes-KOH、pH值7.4、10葡萄糖，并再记录10秒两种染料的荧光发射。在加入高-钾溶液之前CC2DMPE/DiSBAC2(3)的比例等于1。在没有Maxi-K通道抑制剂存在的情况下，在加入高-钾溶液后该比例在1.65-2.0之间变化。当Maxi-K通道已经被已知的标准物或试验化合物完全抑制时，该比例保持为1。因此，可以通过监测浓度依赖性的荧光比例变化，来滴定Maxi-K通道抑制剂的活性。
发现本发明的化合物可导致浓度-依赖性的荧光比例的抑制作用，IC50’s在约1nM到约20μM的范围，更优选在约10nM到约500nM的范围。
B.化合物对高电导钙-活化的钾通道作用的电生理学试验方法使用传统方法(Hamill等人，1981，Pflüges Archiv.391，85-100)在室温下获得流经导电率大的钙-活化钾(Maxi-K)通道电流的膜片钳记录，其是由组成型表达Maxi-K通道的α-亚基的CHO细胞或组成型表达α-和β-亚基的HEK293细胞切除得到的膜片制得的。以两步拉制玻璃毛细管(Garner #7052或Drummond常规硼硅酸盐玻璃1-014-1320)，得到尖端直径大约为1-2微米的微量移液管。将微量吸量管典型地充满包含(mM)150 KCl、10 Hepes(4-(2-羟乙基)-1-哌嗪甲磺酸)、1毫克、0.01 Ca的溶液，并且用KOH调节pH值为7.20。在质膜和微量移液管之间形成高电阻(＞109欧姆)密封后，将微量移液管从细胞抽出，形成了切除的外翻的膜贴片。将贴片切除放到包含(mM)150 KCl、10 Hepes、5 EGTA(乙二醇双(β-氨基乙基醚)-N，N，N′，N′-四乙酸)的电解液中，加入足够的Ca以得到大约1-5μM的游离Ca浓度，并用KOH将pH值调节至7.2。例如，加入4.193mM Ca得到在22℃下1μM的游离浓度。使用EPC9放大器(HEKAElektronic，Lambrect，德国)来控制电压和测定流经膜贴片的电流。将顶部的输入端与微量移液管溶液用Ag/AgCl金属丝连接，并将放大器地线与电解液用Ag/AgCl金属丝连接，用被溶解在0.2M KCl中的琼脂充满的管覆盖该金属丝。通过通道打开的概率对膜电位和胞内钙浓度的敏感性来证实maxi-K电流。
数据的获取通过PULSE软件(HEKA Elektronic)控制，并存储在MacIntosh电脑(苹果计算机)的硬盘驱动器上，用于随后使用PULSEFIT(HEKA Elektronic)和Igor(Wavemetrics，Oswego，OR)软件的分析中。
结果在切除的外翻膜贴片上用浴液的恒定溢出考察本发明的化合物对maxi-K通道的影响。将膜电位保持在-80毫伏，且每15秒施加一次短暂的(100-200毫秒)电压步骤至正膜电位(一般+50毫伏)，以短暂地打开Maxi-K通道。在每个实验中作为阳性对照，在通过向标准电解液中加入1mM EGTA而不加入钙而将贴片短暂地暴露于低浓度钙(＜10nM)后，在脉冲电位下消除Maxi-K电流。可由峰值电流的减少来计算每个实验中被阻断的通道的分数，该峰值电流的减少是通过向膜贴片内侧施用特定化合物而引起的。施用化合物直到达到一种稳态的阻断水平。通过将在每个化合物浓度下获得的阻断分数用Hill方程式进行拟合来计算通道阻断的KI值。本发明中描述的化合物的通道阻断KI值为0.01nM到大于10μM。
权利要求
1.结构式I的化合物 式I或其药学上可接受的盐、在活的有机体内可水解的酯、对映体、非对映体或其混合物；其中，R代表氢或C1-6烷基；Rc和Rd独立地代表氢或卤素；Re代表N或O；X代表-(CHR7)p-、-(CHR7)pCO-；Y代表-CO(CH2)n-、CH2或-CH(OR)-；Q代表N或O，其中当Q是O时，R2不存在；Rw代表H、C1-6烷基、-C(O)C1-6烷基、-C(O)OC1-6烷基、-SO2N(R)2、-SO2C1-6烷基、-SO2C6-10芳基、NO2、CN或-C(O)N(R)2；R2代表氢、C1-10烷基、OH、C2-6烯基、C1-6烷基SR、-(CH2)nO(CH2)mOR、-(CH2)nC1-6烷氧基、-(CH2)nC3-8环烷基、-(CH2)nC3-10杂环基、-N(R)2、-COOR或-(CH2)nC6-10芳基，所述烷基、杂环基或芳基任选地被1-3个选自Ra的基团取代；R3代表氢、C1-10烷基、-(CH2)nC3-8环烷基、-(CH2)nC3-10杂环基、-(CH2)nCOOR、-(CH2)nC6-10芳基、-(CH2)nNHR8、-(CH2)nN(R)2、-(CH2)nN(R8)2、-(CH2)nNHCOOR、-(CH2)nN(R8)CO2R、-(CH2)nN(R8)COR、-(CH2)nNHCOR、-(CH2)nCONH(R8)、芳基、-(CH2)nC1-6烷氧基、CF3、-(CH2)nSO2R、-(CH2)nSO2N(R)2、-(CH2)nCON(R)2、-(CH2)nCONHC(R)3、-(CH2)nCONHC(R)2CO2R、-(CH2)nCOR8、硝基、氰基或卤素，所述烷基、烷氧基、杂环基或芳基任选地被1-3个Ra的基团取代；或，R2和R3与位于两者之间的Q一起形成3-10元碳环或杂环的碳环，其任选地被1-2个O、S、C(O)或NR原子所间隔并且任选地具有1-4个双键并任选地被1-3个选自Ra的基团取代；R4和R5独立地代表氢、C1-6烷氧基、OH、C1-6烷基、COOR、SO3H、-O(CH2)nN(R)2、-O(CH2)nCO2R、-OPO(OH)2、CF3、OCF3、-N(R)2、硝基、氰基、C1-6烷基氨基或卤素； 代表C6-10芳基或C3-10杂环基，所述芳基或杂环基任选地被1-3个选自Ra的基团取代；Z代表(CH2)nPO(OR)(OR*)；R*代表氢或C1-6烷基；R7代表氢、C1-6烷基、-(CH2)nCOOR或-(CH2)nN(R)2，R8代表-(CH2)nC3-8环烷基、-(CH2)n3-10杂环基、C1-6烷氧基或-(CH2)nC5-10杂芳基、-(CH2)nC6-10芳基，所述杂环基、芳基或杂芳基任选地被1-3个选自Ra的基团取代；Ra代表F、Cl、Br、I、CF3、N(R)2、NO2、CN、-COR8、-CONHR8、-CON(R8)2、-O(CH2)nCOOR、-NH(CH2)nOR、-COOR、-OCF3、-NHCOR、-SO2R、-SO2NR2、-SR、(C1-C6烷基)O-、-(CH2)nO(CH2)mOR、-(CH2)nC1-6烷氧基、(芳基)O-、-(CH2)nOH、(C1-C6烷基)S(O)m-、H2N-C(NH)-、(C1-C6烷基)C(O)-、(C1-C6烷基)OC(O)NH-、-(C1-C6烷基)NRw(CH2)nC3-10杂环基-Rw、-(C1-C6烷基)O(CH2)nC3-10杂环基-Rw、-(C1-C6烷基)S(CH2)nC3-10杂环基-Rw、-(C1-C6烷基)-C3-10杂环基-Rw、-(CH2)n-Z1-C(＝Z2)N(R)2、-(C2-6烯基)NRw(CH2)nC3-10杂环基-Rw、-(C2-6烯基)O(CH2)nC3-10杂环基-Rw、-(C2-6烯基)S(CH2)nC3-10杂环基-Rw、-(C2-6烯基)-C3-10杂环基-Rw、-(C2-6烯基)-Z1-C(＝Z2)N(R)2、-(CH2)nSO2R、-(CH2)nSO3H、-(CH2)nPO(OR)2、C3-10环烷基、C6-10芳基、C3-10杂环基、C2-6烯基和C1-10烷基，所述烷基、烯基、烷氧基、杂环基和芳基任选地被1-3个选自C1-C6烷基、CN、NO2、OH、-CON(R)2和COOR的基团取代；Z1和Z2独立地代表NRw、O、CH2或S；g是0-1；m是0-3；n是0-3；和p是0-3。
2.根据权利要求1的化合物，其中p是1-3，Y是-CO(CH2)n-，Q是N，X是-(CHR7)p-或-(CHR7)pCO-。
3.根据权利要求1的化合物，其中Q是O并且R2不存在。
4.根据权利要求2的化合物，其中Z是PO(OR)(OR*)，R2是C1-10烷基或C1-6烷基OH，Y是-CO(CH2)n并且R3是-(CH2)nC3-10杂环基，所述的杂环基和烷基任选地被1-3个Ra的基团取代。
5.根据权利要求4的化合物，其中 是任选地被1-3个选自Ra的基团取代的6元杂芳基或苯基。
6.根据权利要求5的化合物，其中 是任选地被1-3个选自Ra的基团取代的吡啶基。
7.根据权利要求1的化合物，其以钠或二钠盐的形式存在。
8.一种化合物，它是 或其药学上可接受的盐、在活的有机体内可水解的酯、对映体、非对映体或其混合物。
9.权利要求1的式I化合物在制备用于治疗高眼压症或青光眼的药物中的用途。
10.权利要求1的式I化合物在制备用于治疗斑点水肿、黄斑变性，用于增加视网膜和视神经顶端血液速度，用于增加视网膜和视神经的氧压和/或用于提供神经保护作用的药物中的用途。
11.权利要求1的式I化合物在制备用于预防包含钾通道的哺乳动物细胞再极化或超极化或用于治疗阿尔茨海默氏病、抑郁症、认知障碍和/或心律失常的药物中的用途。
12.权利要求1的式I化合物在制备用于治疗糖尿病的药物中的用途。
13.含有权利要求1的式I化合物和药学上可接受的载体的组合物。
14.根据权利要求13的组合物，其中式I化合物是以局部制剂施用的，所述局部制剂是以溶液或悬浮液给药的并且任选地包含黄原胶或结冷胶。
15.根据权利要求14的组合物，其中任选地加入一种或多种活性组分属于以下β-肾上腺素能阻断剂、拟副交感神经功能剂、拟交感神经功能剂、碳酸酐酶抑制剂、EP4激动剂、前列腺素或其衍生物、降血压的脂质、神经保护剂和/或5-HT2受体激动剂。
16.根据权利要求15的组合物，其中β-肾上腺素能阻断剂是噻吗洛尔、倍他索洛尔、左倍他洛尔、卡替洛尔、或左布诺洛尔；拟副交感神经功能剂是毛果芸香碱；拟交感神经功能剂是肾上腺素、溴莫尼定、艾普罗里定、可乐宁或对氨基可乐定，碳酸酐酶抑制剂是杜塞酰胺、乙酰唑胺、甲醋唑胺或布林佐胺；前列腺素是拉坦前列素、travaprost、乌诺前列酮、异丙基乌诺前列酮，或S 1033，降血压的脂质是lumigan，神经保护剂是依利罗地、R-依利罗地或美满町；和5-HT2受体激动剂是富马酸1-(2-氨基丙基)-3-甲基-1H-咪唑-6-醇酯或2-(3-氯-6-甲氧基-吲唑-1-基)-1-甲基-乙胺。
全文摘要
本发明涉及结构式I的有效的钾离子通道阻断剂化合物或其制剂，它们用于治疗患者眼睛的青光眼及其它导致眼内压升高的病症。本发明也涉及这种化合物对于哺乳动物特别是人类眼睛提供神经保护作用的用途。
文档编号C07D211/20GK1842335SQ200480024337
公开日2006年10月4日 申请日期2004年8月31日 优先权日2003年9月4日
发明者M·H·陈, J·B·多赫尔蒂, L·刘, S·纳塔拉彦, R·M·泰内博尔 申请人:默克公司