治疗糖尿病的新的3－苯基丙酸衍生物的制作方法

专利名称：治疗糖尿病的新的3－苯基丙酸衍生物的制作方法
技术领域：
本发明涉及为3-苯基丙酸衍生物的新化合物，包含这些化合物的药物组合物及其在治疗和/或预防过氧化物酶体增殖子激活受体γ(PPARγ)介导的疾病和病症中的应用。这些化合物表现出结合PPARγ受体和改变其活性的能力。
本领域的状态20多年前，发现了噻唑烷二酮类化合物，它们在2型糖尿病和胰岛素抵抗啮齿动物模型中表现出活性。尽管对其作用机制尚不了解，但是这些化合物已经成功地应用于2型糖尿病疗法。证实它们通过核PPAR γ受体发挥其作用的公开文献仅在上世纪90年代中期公布。目前，众所周知PPAR家族的胞内受体蛋白控制涉及调节脂质-碳水化合物代谢的基因表达。
诸如高脂血症、动脉粥样硬化、肥胖和2型糖尿病这类疾病不仅受到发达工业化国家的密切关注。据估计世界上有超过1亿5000万人患有2型糖尿病，并且预计这一数字到2025年会加倍。在波兰，目前约2百万人患有该病，并且相同数量的人处于发生该病的风险中。在糖尿病患者中的医疗保健成本达到总医疗保健预算的6-8％。在初期阶段，糖尿病可能是无症状的并且可能在任意年龄时开始；然而，最常见的是在中年和老年人中发生。2型糖尿病的进展是生理紊乱，诸如组织胰岛素抵抗、胰腺胰岛素产生不足、葡萄糖异生强化后升高的胰岛素产生重叠的结果。最常见的糖尿病并发症为视网膜、肾和神经系统中的微血管改变，导致失明的风险增加，肾功能不全和神经病变。糖尿病也为心脏梗死和脑中风的主要诱发因素。
属于核受体家族的PPARγ受体在调节脂质代谢和贮存中起作用。它们在脂肪组织和大肠中表达并且涉及脂肪形成过程。活化PPARγ受体的配体可以促进胰岛素作用并且降低血糖水平。它们还可以用于控制和治疗脂质代谢和能量平衡紊乱。
存在许多已知的为酪氨酸衍生物或类似物的化合物，它们通过调节PPARγ受体反应发挥其作用，由此对葡萄糖代谢、脂质稳态(hemostasis)和能量平衡起作用。
在国际专利申请号WO03/011834和WO03/011814中披露了N-(2-苯甲酰基苯基)-L-酪氨酸衍生物，它们具有部分PPARγ激动剂活性并且可以特别用于治疗和预防葡萄糖耐量受损；1和2型糖尿病；血脂障碍；与X综合征相关的障碍，诸如高血压、肥胖、胰岛素抵抗、高血糖、动脉粥样硬化、心肌缺血、冠心病、肾脏病；并且用于改善认知功能和治疗糖尿病并发症。所披露的化合物代表了L-酪氨酸衍生物，其中酪氨酸羟基被乙烯基取代且酪氨酸氨基上的氮被2-苯甲酰基苯基取代。
在国际专利申请WO01/17994中披露了作为PPARγ拮抗剂的唑化合物，它们可以用于治疗糖尿病、肥胖、代谢综合征、葡萄糖耐量受损、X综合征和心血管疾病，包括血脂障碍。这些化合物代表了L-酪氨酸衍生物，其中酪氨酸羧基被5-元杂环取代，酪氨酸羟基被(5-甲基-2-苯基唑-4-基)乙基取代且酪氨酸氨基上的氮被2-苯甲酰基苯基取代。
在国际专利申请WO97/31907中披露了具有对PPARγ的激动剂活性的4-羟基苯基链烷酸衍生物。其中披露了L-酪氨酸衍生物，其中酪氨酸羟基被5-元杂环取代，5-元杂环自身可以被取代，且酪氨酸氨基上的氮被2-取代的苯基，包括2-苯甲酰基苯基取代。
本领域仍然存在对新化合物-PPARγ配体的需求，它们可以用于治疗和/或预防糖尿病和因糖尿病导致或与糖尿病相关的并发症，尤其是脂质代谢障碍和心血管疾病。
发明概述本发明涉及新化合物，即式(I)的3-苯基丙酸衍生物及其药学上可接受的盐 其中W表示COOH基团或其生物电子等排体或-COO-C1-C4-烷基；Y表示NH、N-C1-C10-烷基、O或S；Z表示NH、N-C1-C10-烷基、N-芳基、N-杂芳基、S或O；X表示O、S、NH、N-C1-C10-烷基、N-芳基、NSO2-C1-C10-烷基、N-SO2-芳基或N-SO2-杂芳基；R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8各自独立地表示氢原子或选自下列的取代基C1-C4-烷基、C1-C4-烷氧基、C3-C7-环烷基、C3-C7-环烷氧基、C1-C4-硫代烷氧基、C3-C7-环硫代烷氧基、卤原子、卤素取代的C3-C7-环烷基、芳基、杂芳基、-NO2、-CN、-SO2-NH2、-SO2-NH-C1-C4-烷基、-SO2-N(C1-C4-烷基)2、-CO-C1-C4-烷基、-O-CO-C1-C4-烷基、-CO-O-C1-C4-烷基、-CO-芳基；-CO-NH2、-CO-NH-C1-C4-烷基、-CO-N(C1-C4-烷基)2；A表示C1-C4-烷基、C3-C7-环烷基、卤素取代的C3-C7-环烷基、芳基、杂芳基、杂环基、-NH-CO-C1-C4-烷基、-N(C1-C4-烷基)-CO-C1-C4-烷基、-NH-CO-芳基、-N(C1-C4-烷基)-CO-芳基、-N(C1-C4-烷基)-CO-C3-C7-环烷基、-NH-CO-NH2、-NH-CO-NH-C1-C4-烷基、-NH-CS-NH-C1-C4-烷基、-NH-CO-NH-芳基、-NH-CS-NH-芳基、-SO2-C1-C4-烷基、-SO2-芳基或-SO2-杂芳基；其中芳基、杂芳基和杂环基任选被一个或多个取代基取代，所述的取代基独立地选自C1-C4-烷基、C1-C4-烷氧基、C1-C4-硫代烷氧基、亚乙二氧基、CN、卤素或苯基，所述的苯基任选被一个或多个取代基取代，所述的取代基独立地选自C1-C4-烷基、C1-C4-烷氧基和卤原子；且n表示0-4的整数，包括端值。
本发明的一组化合物包括那些化合物，其中W表示COOH。
本发明的另一组化合物包括那些化合物，其中Y表示NH。
本发明的另一组化合物包括那些化合物，其中Y表示O。
本发明的另一组化合物包括那些化合物，其中Y表示N-C1-C4-烷基，尤其是N-CH3。
本发明的另一组化合物包括那些化合物，其中Z表示O。
本发明的另一组化合物包括那些化合物，其中Z表示S。
本发明的另一组化合物包括那些化合物，其中Z表示N-C1-C4-烷基，尤其是N-CH3。
本发明的另一组化合物包括那些化合物，其中Z表示N-苯基。
本发明的另一组化合物包括那些化合物，其中X表示O。
本发明的另一组化合物包括那些化合物，其中X表示S。
本发明的另一组化合物包括那些化合物，其中X表示NSO2-C1-C4-烷基，尤其是NS2-CH3。
本发明的另一组化合物包括那些化合物，其中W表示COOH，Y表示NH，Z表示O且X表示O。
本发明的另一组化合物包括那些化合物，其中W表示COOH，Y表示O，Z表示O且X表示O。
本发明的另一组化合物包括那些化合物，其中W表示COOH，Y表示NH，Z表示O且X表示NSO2-C1-C4-烷基，尤其是NSO2-CH3。
本发明的另一组化合物包括那些化合物，其中W表示COOH，Y表示NH，Z表示S且X表示NSO2-C1-C4-烷基，尤其是NSO2-CH3。
如上述定义的式(I)的化合物的具体实施方案为那些化合物，其中R1-R8各自表示氢原子。
如上述定义的式(I)的化合物的另一具体实施方案为那些化合物，其中n等于1或2。
本发明的另一组化合物包括那些化合物，其中A表示杂环基，所述的杂环基任选被一个或多个取代基取代，所述的取代基独立地选自C1-C4-烷基、C1-C4-烷氧基、C1-C4-硫代烷氧基、CN、卤原子和苯基。
在上述基团中，A优选表示任选被一个或多个取代基取代的异唑基，所述的取代基独立地选自C1-C4-烷基、尤其是-CH3。
本发明的另一组化合物包括那些化合物，其中A表示苯基，所述的苯基任选被取代，尤其是被亚乙二氧基取代。
本发明的另一组化合物包括那些化合物，其中A表示-N(C1-C4-烷基)-CO-C3-C7-环烷基，尤其是-N(CH3)-CO-环己基。
本发明的另一组化合物包括那些化合物，其中A表示-N(C1-C4-烷基)-CO-杂芳基，其中杂芳基任选被一个或多个取代基取代，所述的取代基独立地选自C1-C4-烷基、C1-C4-烷氧基、C1-C4-硫代烷氧基、CN、卤原子、苯基和任选被一个或多个独立地选自C1-C4-烷基、C1-C4-烷氧基和卤原子的取代基取代的苯基。
优选的杂芳基为嘧啶基，其任选被一个或多个取代基取代，所述的取代基独立地选自C1-C4-烷基、C1-C4-烷氧基、卤原子、苯基和任选被一个或多个独立地选自C1-C4-烷基、C1-C4-烷氧基和卤原子的取代基取代的苯基。
作为本发明具体化合物的实例，可以提及下列化合物1.(2 S)-2-(1，3-苯并唑-2-基氨基)-3-[4-(2，3-二氢-1，4-苯并二英-6-基甲氧基)苯基]丙酸；2.(2S)-2-(1，3-苯并唑-2-基氨基)-3-[4-((3，5-二甲基异唑-4-基)甲氧基)苯基]丙酸；3.(2S)-2-(1，3-苯并唑-2-基氨基)-3-[4-(2-[(环己基羰基)(甲基)氨基]乙氧基)苯基]丙酸；4.(2S)-2-(1，3-苯并唑-2-基氨基)-3-[4-(2-[5-甲基-2-(3，4，5-三甲氧基苯基)-1，3-唑-4-基]乙氧基)苯基]丙酸；
5.(2S)-2-(1，3-苯并唑-2-基氨基)-3-[4-(4-{2-[[6-(2-氯苯基)-5-氰基-2-(甲硫基)嘧啶-4-基](甲基)氨基]乙氧基})苯基]-丙酸；6.(2S)-2-(1，3-苯并唑-2-基氨基)-3-[4-(2-(2-叔丁基-5-甲基-1，3-唑-4-基)乙氧基)苯基]丙酸；7.(2S)-2-(1，3-苯并唑-2-基氨基)-3-[4-(2-(2-叔丁基-5-甲基-1，3-唑-4-基)乙氧基)苯基]丙酸；8.(2S)-2-(1，3-苯并唑-2-基氨基)-3-[4-(2-[(环己基羰基)(甲基)氨基]硫代乙氧基)苯基]丙酸；9.(2S)-2-(1，3-苯并唑-2-基氨基)-3-[4-(2-[(环己基羰基)(甲基)氨基]乙基甲磺酰基氨基)苯基]丙酸；和10.(2 S)-2-(1，3-苯并唑-2-基氧基)-3-[4-(2-[(环己基羰基)(甲基)氨基]乙氧基)苯基]丙酸；及其药学上可接受的盐。
本发明的化合物具有对过氧化物酶体增殖子激活受体γ(PPARγ)具有高度亲和力。因此，这些化合物表现出结合PPARγ和调节其活性的能力。
本发明还涉及药物组合物，它包含至少一种如上述所定义的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，任选与其它药理学活性组分和一种或多种药学可接受的载体和/或赋形剂。
本发明还涉及如上述所定义的式(I)的化合物作为药物的应用。
本发明进一步涉及如上述所定义的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗和/或预防过氧化物酶体增殖子激活受体γ(PPARγ)介导的疾病和病症的药物中的应用。
本发明进一步涉及对有需要的哺乳动物受试者治疗和/或预防过氧化物酶体增殖子激活受体γ(PPARγ)介导的疾病和病症的方法，该方法包括对所述的哺乳动物给予治疗或预防有效量的如上述所定义的式(I)的化合物。
这类PPARγ-介导的疾病和病症特别包括胰岛素耐量受损；胰岛素抵抗；1和2型糖尿病；因糖尿病导致或与糖尿病相关的并发症，诸如周围神经病、肾功能不全、视网膜病、血脂障碍；X综合征相关病症，诸如高血压、肥胖、高血糖、动脉粥样硬化、心肌缺血、冠心病和其它心血管疾病；和肾脏病。
本发明的化合物还可以用于改善认知功能。
发明详述定义本文所用的术语“生物电子等排体”意指一种化学部分，它取代活性化合物分子中的另一部分而不会显著影响其生物活性。活性化合物的其它特性，诸如，例如其作为药物的稳定性在这种方式中可能受影响。
作为羧基(COOH)的生物电子等排体，可以提及的尤其是带有1-4个选自氮、氧和硫的杂原子的5-元杂环基，诸如，例如1，3，4-二唑基、1，2，3-二唑基、1，2，5-二唑基、1，2，4-二唑基、1，3，4-噻二唑基、1，2，4-噻二唑基、1，2，3-噻二唑基、1，2，5-噻二唑基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、异唑基、异噻唑基和N-取代的四唑基。5-元杂环基可以任选被1或2个取代基取代，所述的取代基选自苯基、吡啶基、直链或支链烷基、氨基、羟基、氟、氯、溴、碘、三氟甲基、三氟甲氧基、三氟硫代甲氧基、烷氧基和硫代烷氧基。
作为羧基(COOH)的生物电子等排体，可以提及的还有苯基和带有1-4个选自氮、氧和硫的杂原子的6-元杂环基，诸如，例如吡啶基、吡嗪基、哒嗪基、嘧啶基、三嗪基、四嗪基等。苯基和6-元杂环基可以任选被1或2个取代基取代，所述的取代基选自苯基、吡啶基、直链或支链烷基，氨基、羟基、氟、氯、溴、碘、三氟甲基、三氟甲氧基、三氟硫代甲氧基、烷氧基和硫代烷氧基。
术语″卤素″意指选自F、Cl、Br和I的原子。
术语″烷基″意指带有指定数量的碳原子的饱和直链或支链烃基。作为具体的烷基取代基，可以提及下列基团甲基、乙基、丙基、1-甲基乙基、丁基、1-甲基丙基、2-甲基丙基、1，1-二甲基乙基、戊基、1-甲基丁基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、1，1-二甲基丙基、1，2-二甲基丙基、2，2-二甲基丙基、1-乙基丙基、己基、1-甲基戊基、2-甲基戊基、1-乙基丁基、2-乙基丁基、3，3-二甲基丁基、庚基、1-乙基戊基、辛基、壬基和癸基。
术语″芳基″意指带有6-14个碳原子的单-或双环芳族基团。芳基的实例为苯基、甲苯基、二甲苯基、萘基，诸如萘-1-基、萘-2-基、1，2，3，4-四氢萘-5-基和1，2，3，4-四氢萘-6-基。
术语″杂芳基″意指带有5-13个碳原子和1-4个选自N、O和S的杂原子的单-或双环杂芳族基团。杂芳基的实例为吡咯-1-基、吡咯-2-基、吡咯-3-基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、唑基、噻唑基、异唑基、1，2，4-三唑基、二唑基、噻二唑基、四唑基、吡啶基、嘧啶基、1，3，5-三嗪基、吲哚基、苯并[b]呋喃基、苯并[b]噻吩基、吲唑基、苯并咪唑基、氮杂吲哚基、cynnolyl、异喹啉基和咔唑基。
术语″环烷基″意指带有3-7个碳原子的饱和或部分不饱和环烃基。环烷基的实例为环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环戊二烯基、环己基、环己烯基和环庚基。
术语″杂环基″意指带有1-4个选自N、O和S的杂原子的饱和或部分不饱和5-6-元环烃基。优选的饱和或部分不饱和环烃基为单环的并且包括4或5个碳原子和1-3个杂原子。杂环基的实例为哌啶基、哌嗪基、吗啉基和吡咯烷基。
本发明的化合物在具有W基团的碳原子上带有手性中心并且可以以相应的对映体、对映体混合物和外消旋混合物的形式存在。
因此，式(I)化合物的R和S对映体、对映体化合物和外消旋混合物形成本发明的组成部分。
因此，在一个具体的实施方案中，本发明涉及具有诸如式(IA)中所示立体化学构型的式(I)的化合物及其药学上可接受的盐
其中W、X、Y、Z、A、n和R1-R8具有如上述对式(I)所定义的相同的含义。
在第二个具体的实施方案中，本发明涉及具有诸如式(IB)中所示立体化学构型的式(I)的化合物及其药学上可接受的盐 其中W、X、Y、Z、A、n和R1-R8具有如上述对式(I)所定义的相同的含义。
可以，按照常规和已知方式通过用合适的酸在有机溶剂，诸如醇、酮、醚或氯化溶剂中处理，将带有碱性基团的式(I)的化合物转化成与无机酸或有机酸的盐，并且按照常规方式回收盐。这类盐的实例为那些与药学可接收的无机酸或有机酸形成的盐。作为无机酸盐的实例可以提及盐酸盐、氢溴酸盐、硝酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、焦硫酸盐、亚硫酸盐、焦亚硫酸盐、磷酸盐、磷酸一氢盐、磷酸二氢盐、偏磷酸盐和焦磷酸盐。作为有机酸盐的实例可以提及的是乙酸盐、丙酸盐、丙烯酸盐、4-羟基丁酸盐、辛酸盐、己酸盐、癸酸盐、草酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、戊二酸盐、己二酸盐、庚二酸盐、马来酸盐、富马酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、乳酸盐、苯基乙酸盐、扁桃酸盐、癸二酸盐、辛二酸盐、苯甲酸盐、邻苯二甲酸盐、烷基-和芳基磺酸盐，诸如甲磺酸盐、丙磺酸盐、对甲苯磺酸盐、二甲苯磺酸盐、水杨酸盐、肉桂酸盐、谷氨酸盐、天冬氨酸盐、葡萄糖醛酸盐和半乳糖醛酸盐。
可以按照常规和已知方式，通过使式(I)的化合物与合适的有机或无机碱反应，将带有酸性基团的式(I)的化合物转化成与无机碱或有机碱形成的盐。与药学上可接受的碱形成的盐包括碱金属或碱土金属盐，诸如Li、Na、K、Mg或Ca、铵盐和与碱性有机化合物，例如精氨酸、组氨酸、哌啶、吗啉、哌嗪、乙二胺或三乙胺形成的盐以及季铵盐。
本发明还涉及药物组合物，其包含式(I)的化合物与依赖于所选给药途径而不同的药用赋形剂。
本发明的实施方案之一为适合于口服给药的药物组合物。适合于口服给药的药物组合物可以为片剂、胶囊、丸剂、锭剂、粉剂或颗粒或在液体中的溶液或分散液或类似物的形式。所述的剂型各自包含预定量的本发明化合物作为活性组分。可以使用本领域中已知用于该目的和常用于制备固体药物组合物的任意药用赋形剂制备片剂形式的组合物。这类赋形剂的实例为淀粉、乳糖、微晶纤维素、硬脂酸镁和粘合剂，例如聚乙烯吡咯烷酮。此外，可以将活性化合物配制成控释制剂，诸如包含亲水性或疏水性基质的片剂。
可以使用常规操作步骤，例如通过将活性化合物与赋形剂的混合物掺入硬胶囊配制胶囊形式的药物组合物。或者，可以形成活性化合物和高分子量聚乙二醇的半固体基体并且将其填充入硬胶囊，或可以给软胶囊填充活性化合物在聚乙二醇中的溶液或其在食用油中的分散体。还关注使用前再溶解的粉末(例如冻干粉)。或者，还可以使用注射制剂用油媒介物。
可以配制通过注射或连续输注给药的非肠道给药用液体剂型。
可接受的通过注射的给药途径为静脉内、腹膜内、肌内和皮下，通常优选静脉内注射。静脉内注射用典型组合物包括例如包括活性化合物和葡萄糖或氯化钠的无菌等渗水溶液或分散液。其它合适的赋形剂的实例为注射用乳酸盐林格溶液，具有葡萄糖的注射用乳酸盐林格溶液、具有葡萄糖的Normosol-M、注射用酰化林格溶液。注射剂可以任选包括共溶剂，例如聚乙二醇；螯合剂，例如乙二胺四乙酸；稳定剂，例如环糊精；和抗氧化剂，例如焦硫酸钠。
给药剂量取决于患者病情和给药途径并且由临床医师调整。
可以使用下述并且在实施例中示例的方法制备本发明的化合物。
可以通过用A(CH2)n-基团取代式(II)化合物中的X上的氢原子制备式(I)的化合物，其中W具有非-COOH或-COO-C1-C4-烷基的含义 其中X、Y、Z、A、n和R1-R8具有如上述对式(I)所定义的含义，并且W具有非-COOH或-COO-C1-C4-烷基的含义。
所述的取代可以按照方案1，通过如上所述定义的式(II)的化合物与式A(CH2)n-OH的化合物的Mitsunobu反应进行，其中A和n具有如上述所定义的含义方案1
Mitsunobu反应一般可以在-20-20℃下在有重氮化合物，诸如DEAD、DIAD、ADDP和三苯膦存在下的无水溶剂，诸如乙醚或卤化烷中进行。
或者，按照方案2，所述的X上氢原子的取代可以通过下列步骤进行在有能够由化合物(II)产生阴离子的强碱，诸如，例如氢化钠存在下用式A(CH2)n-V的化合物使式(II)的化合物烷基化，从而形成式(I)的化合物，在式(II)的化合物中，X、Y、Z和R1-R8具有上述对式(I)所定义的含义，且W具有非-COOH或-COO-C1-C4-烷基的含义，在式A(CH2)n-V的化合物中，A和n具有上述对式(I)所定义的含义，且V表示选自卤素和烷基磺酰基或芳基磺酰基的离去基方案2 烷基化反应可以在惰性有机溶剂，诸如无水DMF、THF、DMSO中进行。能够产生阴离子的强碱可以为氢化钠。可以使用干燥的氢化钠或将其作为在矿物油中的混悬液使用。产生阴离子可以在室温下进行，直到氢气放出完全。然后在第二阶段中，加入纯净或作为在惰性有机溶剂，诸如DMF、THF、DMSO中的溶液形式的烷基化试剂A(CH2)n-V。烷基化的第二个步骤在0-100℃下进行。
可以通过下列步骤制备本发明式(I)的化合物，其中W表示-COOH或-COO-C1-C4-烷基，并且X、Y、Z、A、n和R1-R8具有上述对式(I)所定义的含义a)用A(CH2)n-基团取代式(III)化合物的X上的氢原子 其中R表示C1-C4烷基，并且X、Y、Z和R1-R8具有上述对式(I)所定义的含义，从而形成式(I)的化合物，其中W表示酯基-COOR，其中R表示C1-C4烷基，并且X、Y、Z、A、n和R1-R8具有上述对式(I)所定义的含义；随后b)任选将酯基-COOR碱性水解成-COOH基团而形成式(I)的化合物，其中W表示-COOH。
按照方案3，可以通过式(III)的化合物与式A(CH2)n-OH的化合物的Mitsunobu反应进行步骤a)中所述的取代，从而形成式(IV)的化合物，在A(CH2)n-OH的化合物中A和n具有上述对式(I)所定义的含义方案3 Mitsunobu反应可以如上所述通常在-20-20℃下，在有重氮化合物，诸如DEAD、DIAD、ADDP和三苯膦存在下的无水溶剂，诸如乙醚或卤化烷中进行。
或者，按照方案4，所述的X上氢原子的取代可以通过下列步骤进行在有能够由化合物(III)产生阴离子的强碱，诸如，例如氢化钠存在下通过使式(III)的化合物与式A(CH2)n-V的化合物反应，从而形成式(IV)的化合物，在式(III)的化合物中，R表示C1-C4烷基且X、Y、Z和R1-R8具有上述对式(I)所定义的含义，在式A(CH2)n-V的化合物中，A(CH2)n-具有如上述对式(I)所定义的含义，且V表示选自卤素和烷基磺酰基或芳基磺酰基的离去基方案4 如上述对制备式(I)的化合物所述进行反应，其中W具有非COOH或-COO-C1-C4-烷基的含义。
可以在碱性条件下，按照本领域公知的方式进行步骤b)中酯基的水解。作为碱的实例，可以提及碱金属氢氧化物，诸如氢氧化钠、氢氧化钾和氢氧化锂。为了制备式(I)化合物的单一对映体，优选使用氢氧化锂进行水解，以便保留构型。
按照下示方案5，例如，可以在由THF(四氢呋喃)、甲醇和水组成的三-溶剂系统中进行步骤b)中的碱性水解，以便获得均匀的反应混合物。在水解结束时，可以使用盐酸中和该反应混合物，且如果需要，例如，可以使用乙酸乙酯萃取游离酸产物
方案5 按照方案6，可以在有于醇溶液中的碱存在下，通过使式(V)的化合物与式(VI)的化合物反应制备式(I)的化合物，在式(I)的化合物中，Y＝S，且X、W、Z、A、n和R1-R8具有如上述对式(I)所定义的含义，在式(V)的化合物中，W、X、A、n和R1-R4具有上述对式(I)所定义的含义，在式(VI)的化合物中，Z和R5-R8具有上述对式(I)所定义的含义。
方案6 就制备其中W表示COOH基团的式(I)的化合物而言，上述过程中的起始化合物为式(V)的化合物，其中W为酯保护的COOH基团，如方案7中例示。在该反应结束时，通过碱性水解使COOH基团脱保护。
按照方案7，根据Y.Kawamatsu、H.Asakawa、T.Saraie、E.Imamiya、K.Nishikawa、Y.Hamuro、Arzneim.For sch./Drug Res./，30(I)，4，1980，585-589所述的方法进行第一步反应步骤，得到2-氯-3-苯基丙酸乙酯衍生物。使Meerwein反应中获得的氯酯与1，3-苯并唑-2-硫醇在有在醇溶液中的碱存在下反应，而得到相应的乙基α-(1，3-苯并唑-2-基硫基)酯。使酯在NaOH或KOH水-醇溶液中水解。用稀盐酸使游离酸从盐中释放。
方案7 按照类似方式，获得下列典型化合物。

当以旋光物质为起始原料时，可制备外消旋形式和单一对映体形式的式(I)的化合物。或者，可以使用本领域中公知的常规技术将式(I)的外消旋化合物拆分成对映体。
按照Shyam B.Advani，Joseph Sam，Journal of PharmaceuticalSciences，Vol.57，10，1968获得式(III)的酪氨酸衍生物，其中X＝O，Y＝NH，且Z＝O。例如，按照方案8，通过在有亚硫酰氯存在下用甲醇酯化L-酪氨酸，随后使L-酪氨酸甲酯盐酸盐与2-氯-1，3-苯并异唑在有三乙胺存在的苯中反应而获得L-酪氨酸甲酯盐酸盐。就D-酪氨酸和D，L-酪氨酸而言，使用类似的操作步骤。
方案8 可以通过采用上述Shyam B.Advani，Joseph Sam，Journal ofPharmaceutical Sciences，Vol.57，10，1968的方法制备式(III)的酪氨酸化合物，其中X＝O，Y＝NH，且Z＝NH、N-烷基、N-芳基、N-杂芳基或S。
按照方案9，可以根据Edward S.Lazer，Clara K.Miao，Hin-ChorWong，Rondla Sorcek，Denice M.Spero，Alex Galman，Kollol Pal，Mark Behnke，Anne G.Graham，Jane M.Watrous，Carol A.Homon，Juergen Nagle，Arvind Shah，Yvan Guindon，Peter R.Farina，Julian Adams，J.Med.Chem.，1994，37，913-923所述的方法制备式(III)的酪氨酸衍生物，其中X＝O，Y＝NH，且Z＝S。
方案9 按照方案10，由按照Helen S.M.Lu，Martin Volk，YuriyKholodenko，Edward Gooding，Robin M.Hochstrasser，William F.DeGrado，Journal of the American Chemical Society，119，31，1997，7173-7180获得的4-巯基苯丙氨酸制备式(III)的4-巯基苯丙氨酸衍生物，其中Y＝NH，Z＝O，且X＝S。用三苯甲基保护4-巯基苯丙氨酸上的巯基(SH)，随后用2-苯并唑基取代α-氨基氮原子上的一个氢原子。合成的最终步骤为SH基团的脱保护。
方案10 如方案11所例示的，对X＝NSO2-CH3的化合物，由4-硝基-N-邻苯二甲酰基苯丙氨酸甲酯获得式(III)的4-氨基苯丙氨酸衍生物，其中Y＝NH，Z＝O，且X＝NSO2-CH3。按照F.Bergel，J.A.Stock，Journalof Organic Chemistry，1956，90-96进行合成的第一个步骤。在有催化量的DMAP存在下的吡啶中用甲磺酰氯使由此获得的4-氨基-N-邻苯二甲酰基苯丙氨酸甲酯甲磺酰化。随后的步骤为通过与6M HCl水溶液一起加热除去邻苯二甲酰基。通过在有亚硫酰氯存在下的甲醇中酯化将如此获得的4-甲磺酰氨基苯丙氨酸转化成甲酯盐酸盐。随后的步骤为在有三乙胺存在的苯中使4-甲磺酰氨基苯丙氨酸甲酯盐酸盐与2-氯苯并唑反应。
方案11
如方案12所例示的，在式(VII)化合物的反应中，可以按照RogerLok，Rondla E.Leone，Antony J.Williams，J.Org.Chem.，61，3289-3297获得式(VI)的起始化合物，其中Z＝O，即取代的2-巯基苯并唑，在式(VII)化合物中，R5-R8具有上述对式(I)所定义的含义。
方案12
可以通过使用或采用Fortuna Haviv，James D.Ratajczyk，Robert W.DeNet，Francis A.Kerdesky，Rolad L.Walters，StevenP.Schmidt，James H.Holmes，Patrick R.Young，George W.Carter，J.Med.Chem.，1988，31，1719-1728中所述的操作步骤，按照方案13，通过使式(VI)的化合物与五氧化二磷反应获得式(VIII)的起始化合物，即取代的2-氯苯并唑，在式(VI)的化合物中，R5-R8具有上述对式(I)所定义的含义。
方案13 按照Takamura Makoto，Yanagisawa Hiroaki，Kanai Motoru，Shibasaki Masakatsu，Efficient Synthesis of Antihyperglycemic(S)-α-Aryloxy-β-phenylpropionic Amides Using a BifunctionalAsymmetric Catalyst，Chem.Pharm.Bull.，50，8，2002，1118-1121获得3-[4-(苄氧基)苯基]-2-羟基丙酸乙酯。随后按照方案14用氢化钠且然后用2-氯苯并唑处理该酯。
方案14
本文使用下列缩写DIAD偶氮二羧酸二异丙酯DEAD偶氮二羧酸二乙酯ADDP偶氮二羰基二哌啶实施例实施例1(2S)-2-(1，3-苯并唑-2-基氨基)-3-[4-(2，3-二氢-1，4-苯并二英-6-基甲氧基)苯基]丙酸及其甲酯R1-R8＝H，W＝COOH/COOCH3，X＝O，Z＝O，Y＝NH，n＝1，A＝下式的2，3-二氢-1，4-苯并二英-6-基
将2，3-二氢-1，4-苯并二英-6-基甲醇(0.25g，1.5mmol)、(2S)-2-(1，3-苯并唑-2-基氨基)-3-(4-羟基苯基)丙酸甲酯(0.31g，1mmol)和三苯膦(0.26g，1mmol)溶于5ml四氢呋喃(THF)。将该反应混合物冷却至5℃。然后加入DIAD(0.61g，3mmol)并且将该反应体系在室温下搅拌18-24小时。随后蒸发THF而得到产物，为标题的酸性甲酯。
将该粗产物溶于THF/MeOH/H2O混合物(6∶0.1∶1，2ml)。加入1MLiOH(1.6ml)并且在室温下将该反应体系搅拌3天。然后用1M HCl中和该反应混合物，加入少量水并且用乙酸乙酯萃取该混合物。蒸发溶剂。通过色谱法进行纯化。产率为50％。MS(ES)446(M+，100％)实施例2(2S)-2-(1，3-苯并唑-2-基氨基)-3-[4-((3，5-二甲基异唑-4-基)甲氧基)苯基]丙酸及其甲酯R1-R8＝H，W＝COOH/COOCH3，Y＝NH，X＝O，Z＝O，n＝1，A＝下式的3，5-二甲基异唑-4-基 将(3，5-二甲基异唑-4-基)甲醇(0.28g，1.5mmol)、(2S)-2-(1，3-苯并唑-2-基氨基)-3-(4-羟基苯基)丙酸甲酯(0.31g，1mmol)和三苯膦(0.26g，1mmol)溶于5ml四氢呋喃(THF)。将该反应混合物冷却至5℃。然后加入DEAD(0.52g，3mmol)并且将该反应体系在室温下搅拌18-24小时。随后蒸发THF而得到产物，为标题的酸性甲酯。
将该粗产物溶于THF/MeOH/H2O混合物(6∶0.1∶1，2ml)。加入1MLiOH(1.6ml)并且在室温下将该反应体系搅拌3天。然后用1M HCl中和该反应混合物，加入少量水并且用乙酸乙酯萃取该混合物。蒸发溶剂。通过色谱法进行纯化。产率为60％。MS(ES)407(M+，100％)实施例3(2S)-2-(1，3-苯并唑-2-基氨基)-3-[4-(2-[(环己基羰基)(甲基)氨基]乙氧基)苯基]丙酸及其甲酯R1-R8＝H，W＝COOH/COOCH3，X＝O，Z＝O，Y＝NH，n＝2，A＝下式的(环己基羰基)甲氨基 将N-(2-羟乙基)-N-甲基环己烷羧基酰胺(0.19g，1.5mmol)、(2S)-2-(1，3-苯并唑-2-基氨基)-3-(4-羟基苯基)丙酸甲酯(0.31g，1mmol)和三苯膦(0.26g，1mmol)溶于5ml四氢呋喃(THF)。将该反应混合物冷却至5℃。然后加入ADDP(0.76g，3mmol)并且将该反应体系在室温下搅拌18-24小时。随后蒸发THF而得到产物，为标题的酸性甲酯。
将该粗产物溶于THF/MeOH/H2O混合物(6∶0.1∶1，2ml)。加入1MLiOH水溶液(1.6ml)并且在室温下将该反应体系搅拌3天。然后用1MHCl中和该反应混合物，加入少量水并且用乙酸乙酯萃取该混合物。蒸发溶剂。通过色谱法进行纯化。产率为40％。MS(ES)465(M+，100％)实施例4(2S)-2-(1，3-苯并唑-2-基氨基)-3-[4-(2-[5-甲基-2-(3，4，5-三甲氧基苯基)-1，3-唑-4-基]乙氧基)苯基]丙酸及其甲酯R1-R8＝H，W＝COOH/COOCH3，X＝O，Z＝O，Y＝NH，n＝2，A＝下式的[5-甲基-2-(3，4，5-三甲氧基苯基)-1，3-唑-4-基] 在室温下向2-[4-甲基-2-(3，4，5-三甲氧基苯基)-1，3-唑-5-基]乙醇(2.93g，10mmol)于30ml吡啶中的溶液中分批加入4-甲苯磺酰氯(1.9g，10mmol)。随后将该反应混合物在室温下搅拌5小时，且然后倾入200ml水并且用50ml二氯甲烷萃取(3x)。用1M HCl、碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤合并的萃取物。用硫酸镁干燥有机相并且蒸发溶剂而得到具有约95％纯度的产物4-甲苯磺酸2-[4-甲基-2-(3，4，5-三甲氧基苯基)-1，3-唑-5-基]乙酯。
在室温下和氩气环境中向3.12g(2S)-2-(1，3-苯并唑-2-基氨基)-3-(4-羟基苯基)丙酸甲酯在50ml二甲基甲酰胺中的溶液中分批加入NaH在矿物油(0，4g)中的60％的混悬液。当气体停止放出时，滴加4-甲苯磺酸2-[4-甲基-2-(3，4，5-三甲氧基苯基)-1，3-唑-5-基]乙酯(4.47g，10mmol)在二甲基甲酰胺中的溶液。在搅拌的同时在80℃下加热该混合物。冷却后，将该混合物倾入11的水并且用乙酸乙酯萃取几次。用盐水洗涤合并的萃取物，用硫酸镁干燥并且蒸发溶剂而得到(2S)-2-(1，3-苯并唑-2-基氨基)-3-[4-(2-[5-甲基-2-(3，4，5-三甲氧基苯基)-1，3-唑-4-基]乙氧基)苯基]丙酸甲酯粗品。
将上述获得的2.9g粗反应产物溶于THF/MeOH/H2O混合物(6∶0.1∶1，20ml)。加入1M LiOH(8ml)并且在室温下将该反应体系搅拌3天。然后用1M HC1中和该反应混合物，加入少量水并且用乙酸乙酯萃取该混合物。蒸发溶剂。通过色谱法进行纯化。产率为40％。MS(ES)573(M+，100％)实施例5
(2S)-2-(1，3-苯并唑-2-基氨基)-3-[4-(4-{2-[[6-(2-氯苯基)-5-氰基-2-(甲硫基)嘧啶-4-基](甲基)氨基]乙氧基})苯基]丙酸及其甲酯R1-R8＝H，W＝COOH/COOCH3，X＝O，Z＝O，Y＝NH，n＝2，A＝下式的[6-(2-氯苯基)-5-氰基-2-(甲硫基)嘧啶-4-基](甲基)氨基 将4-(2-氯苯基)-6-[(2-羟乙基)(甲基)氨基]-2-(甲硫基)嘧啶-5-腈(0.50g，1.5mmol)、(2S)-2-(1，3-苯并唑-2-基氨基)-3-(4-羟基苯基)丙酸甲酯(0.31g，1mmol)和三苯膦(0.26g，1mmol)溶于5ml四氢呋喃(THF)。将该反应混合物冷却至5℃。加入DEAD(0.52g，3mmol)并且将该反应体系在室温下搅拌18-24h。随后蒸发THF而得到产物，为标题的酸性甲酯。
将该粗产物溶于THF/MeOH/H2O混合物(6∶0.1∶1，2ml)。加入1MLiOH(1.6ml)并且在室温下将该反应体系搅拌3天。然后用1M HCl中和该反应混合物，加入少量水并且用乙酸乙酯萃取该混合物。蒸发溶剂。通过色谱法进行纯化。产率为58％。MS(ES)614(M+，100％)实施例6(2S)-2-(1，3-苯并唑-2-基氨基)-3-[4-(2-(2-叔丁基-5-甲基-1，3-唑-4-基)乙氧基)苯基]丙酸及其甲酯R1-R8＝H，W＝COOH/COOCH3，X＝O，Z＝O，Y＝NH，n＝2，A＝下式的2-叔丁基-5-甲基-1，3-唑-4-基
将2-(2-叔丁基-4-甲基-1，3-唑-5-基)乙醇(0.27g，1.5mmol)、(2S)-2-(1，3-苯并唑-2-基氨基)-3-(4-羟基苯基)丙酸甲酯(0.31g，1mmol)和三苯膦(0.26g，1mmol)溶于5ml四氢呋喃(THF)。将该反应混合物冷却至5℃。然后加入DEAD(0.52g，3mmol)并且将该反应体系在室温下搅拌18-24h。随后蒸发THF而得到产物，为标题的酸性甲酯。
将该粗产物溶于THF/MeOH/H2O混合物(6∶0.1∶1，2ml)。加入1MLiOH(1.6ml)并且在室温下将该反应体系搅拌3天。然后用1M HCl中和该反应混合物，加入少量水并且用乙酸乙酯萃取该混合物。蒸发溶剂。通过色谱法进行纯化。产率为55％。MS(ES)463(M+，100％)实施例7(2S)-2-(1，3-苯并唑-2-基氨基)-3-[4-(2-[(环己基羰基)(甲基)氨基]硫代乙氧基)苯基]丙酸及其甲酯R1-R8＝H，W＝COOH/COOCH3，X＝S，Z＝O，Y＝NH，n＝2，A＝下式的(环己基羰基)(甲基)氨基 将N-(2-羟乙基)-N-甲基环己烷羧基酰胺(0.19g，1.5mmol)、(2S)-2-(1，3-苯并唑-2-基氨基)-3-(4-巯基苯基)丙酸甲酯(0.33g，1mmol)和三苯膦(0.26g，1mmol)溶于5ml四氢呋喃(THF)。将该反应混合物冷却至5℃。然后加入DEAD(0.52g，3mmol)并且将该反应体系在室温下搅拌18-24h。随后蒸发THF而得到产物，为标题的酸性甲酯。
将该粗产物溶于THF/MeOH/H2O混合物(6∶0.1∶1，2ml)。加入1MLiOH(1.6ml)并且在室温下将该反应体系搅拌3天。然后用1M HCl中和该反应混合物，加入少量水并且用乙酸乙酯萃取该混合物。蒸发溶剂。通过色谱法进行纯化。产率为46％。MS(ES)481(M+，100％)实施例8(2S)-2-(1，3-苯并唑-2-基氨基)-3-[4-(2-[(环己基羰基)(甲基)氨基]乙基甲磺酰氨基)苯基]丙酸及其甲酯R1-R8＝H，W＝COOH/COOCH3，X＝CH3SO2N，Z＝O，Y＝NH，n＝2，A＝下式的(环己基羰基)(甲基)氨基 将N-(2-羟乙基)-N-甲基环己烷羧基酰胺(0.19g，1.5mmol)、(2S)-2-(1，3-苯并唑-2-基氨基)-3-(4-甲磺酰氨基苯基)丙酸甲酯(0.39g，1mmol)和三苯膦(0.26g，1mmol)溶于5ml四氢呋喃(THF)。将该反应混合物冷却至5℃。然后加入DEAD(0.52g，3mmol)并且将该反应体系在室温下搅拌18-24h。随后蒸发THF而得到产物，为标题的酸性甲酯。
将该粗产物溶于THF/MeOH/H2O混合物(6∶0.1∶1，2ml)。加入1MLiOH(1.6ml)并且在室温下将该反应体系搅拌3天。然后用1M HCl中和该反应混合物，加入少量水并且用乙酸乙酯萃取该混合物。蒸发溶剂。通过色谱法进行纯化。产率为35％。MS(ES)542(M+，100％)实施例9
(2S)-2-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基)-3-[4-(2-[(环己基羰基)(甲基)氨基]乙氧基)苯基]丙酸及其甲酯R1-R8＝H，W＝COOH/COOCH3，X＝O，Z＝S，Y＝NH，n＝2，A＝下式的(环己基羰基)(甲基)氨基 将N-(2-羟乙基)-N-甲基环己烷羧基酰胺(0.19g，1.5mmol)、(2S)-2-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基)-3-(4-羟基苯基)丙酸甲酯(0.33g，1mmol)和三苯膦(0.26g，1mmol)溶于5ml四氢呋喃(THF)。将该反应混合物冷却至5℃。然后加入DEAD(0.52g，3mmol)并且将该反应体系在室温下搅拌18-24h。随后蒸发THF而得到产物，为标题的酸性甲酯。
将该粗产物溶于THF/MeOH/H2O混合物(6∶0.1∶1，2ml)。加入1MLiOH(1.6ml)并且在室温下将该反应体系搅拌3天。然后用1M HCl中和该反应混合物，加入少量水并且用乙酸乙酯萃取该混合物。蒸发溶剂。通过色谱法进行纯化。产率为48％。MS(ES)481(M+，100％)实施例10(2S)-2-(1，3-苯并唑-2-基氧基)-3-[4-(2-[(环己基羰基)(甲基)氨基]乙氧基)苯基]丙酸及其甲酯R1-R8＝H，W＝COOH/COOCH3，X＝O，Z＝O，Y＝O，n＝2A＝下式的(环己基羰基)甲基氨基乙基 将N-(2-羟乙基)-N-甲基环己烷羧基酰胺(0.19g，1.5mmol)、2-(1，3-苯并唑-2-基氧基)-3-(4-羟基苯基)丙酸乙酯(0.33g，1mmol)和三苯膦(0.26g，1mmol)溶于5ml四氢呋喃(THF)。将该反应混合物冷却至5℃。然后加入DEAD(0.52g，3mmol)并且将该反应体系在室温下搅拌18-24h。随后蒸发THF而得到产物，为标题的酸性甲酯。
将该粗产物溶于THF/MeOH/H2O混合物(6∶0.1∶1，2ml)。加入1MLiOH(1.6ml)并且在室温下将该反应体系搅拌3天。然后用1M HCl中和该反应混合物，加入少量水并且用乙酸乙酯萃取该混合物。蒸发溶剂。通过色谱法进行纯化。产率为40％。MS(ES)466(M+，100％)生物试验使用下列方法测定本发明化合物结合PPAR γ受体和改变其活性的能力。
体外结合使用从配体-受体复合物的竞争性放射性配体取代方法，按照下述操作步骤测定所述化合物结合PPAR γ受体的能力(体外)。将终浓度为10nM的PPAR激动剂3H-罗西格列酮用作放射性配体。另外将终浓度为20μM的过量的未标记的测试化合物加入到该反应体系中。本试验中的受体源为含有PPAR γ的LBD(配体结合域)的人重组蛋白。通过葡聚糖包被的活性炭技术进行未结合受体的放射性配体的分离。使用LS6500-Beckman Coulter闪烁计数器测定放射性。将获得的闪烁计数值与从和放射性配体一起孵育的样品获得的值(推定为0％取代)并且与从含有放射性配体和过量未放射性标记的罗西格列酮(推定为100％取代)的样品获得的值进行比较。获得的值包含在0-130％范围中。
参考文献1.ADDl/SREBP1 activates PPAR gamma through the productionof endogenous ligand.Proc.Natl.Acad.Sci.USA.1998 Apr14；95(8)4333-7。
2.An antidiabetic thiazolidinedione is a high affinityligand for peroxisome proliferator-activated受体gamma(PPARgamma).J.Biol.Chem.1995 Jun 2；270(22)12953-6。
3.Fatty acids and eicosanoids regulate gene expressionthrough direct interactions with peroxisomeproliferator-activated受体alpha and gamma.Proc.Natl.Acad.Sci.USA.1997 Apr.29；94(9)4318-23。
脂肪细胞中的结合为了证实测试分子在体内结合的能力，使用分化成脂肪细胞的鼠成纤维细胞3T3-L1细胞系进行类似的实验。在10天期限过程中在12-孔平板上进行成纤维细胞分化。在实验的当天，在37℃下，在含有30pM浓度的氚标记的参比化合物(罗西格列酮)和不同浓度的测试化合物(在100pM-20μM浓度范围)的DMEM培养基中进行1小时孵育前，用PBS溶液将细胞洗涤两次。然后用PBS溶液将细胞洗涤三次并且在1M NaOH溶液中增溶。在如上所述制备的溶解产物中，测定放射性(使用LS 6500 Beckman Coulter闪烁计数器)和蛋白质浓度(使用Bradford方法)。在有未标记的参比化合物(20μM浓度下)存在下评估非特异性结合。
将获得的闪烁计数值与从和放射性配体一起孵育的样品获得的值(推定为0％取代)以及与从含有放射性配体和过量未放射性标记的(推定为100％取代)的样品获得的值进行比较。获得的值包含在0-130％范围中。
参考文献1.Identification of high-affinity binding sites for theinsulin sensitizer rosiglitazone (BRL-49653) in rodent andhuman adipocytes using a radioiodinated ligand for peroxisomalproliferator-activated受体gamma.J.Pharmacol.Exp.Ther.1998 Feb；284(2)751-9。
2.Differential regulation of the stearoyl-CoA desaturasegenes by thiazolidinediones in 3T3-L1 adipocytes.J.Lipid Res.2000 Aug；.41(8)1310-6。
3.Distinct stages in adipogenesis revealed by retinoidinhibition of differentiation after induction of PPARgamma.MolCell Biol.1996 Apr；16(4)1567-75。
4.Differentiation Kinetics of in vitro 3T3-L1 PreadipocyteCultures.Tissue Eng.2002 Dec；8(6)1071-1081。
5.Role of PPARgamma in regulating a cascade expression ofcyclin-dependent kinase inhibitors，p18(INK4c)andp21(Waf1/Cip1)，during a dipogenesis.J.Biol.Chem.1999 Jun11；274(24)17088-97。
脂肪形成将3T3-L1细胞系细胞(来自ATCC)维持在补充了10％胎牛血清和抗生素的Dulbecco改进的Eagle培养基中。在本实验前2天，使细胞传代入12-孔微量培养板(30×104个细胞/孔)并且维持随后的2天至融合。此后，用DMEM+FBS+抗生素更换培养基并且将50μM终浓度的测试化合物加入到细胞中。在这些条件下，将细胞维持14天，每隔2天改变一次含有测试化合物的培养基。在10-14天后，用油红O染色分化的细胞，此后进行摄影。
参考文献1.Differential regulation of the stearoyl-CoA desaturasegenes by thiazolidinediones in 3T3-L1 adipocytes.J.Lipid Res.2000 Aug；41(8)1310-6。
葡萄糖摄取将分化的3T3-L1成纤维细胞在补充了10％FBS和抗生素的DMEM中与测试化合物(在20μM浓度下)一起孵育48小时。此后，用PBS洗涤细胞且然后向细胞中加入不含血清的DMEM。将细胞保持在孵育器中3小时(37℃/5％CO2)且然后用KHR缓冲液(25mM HEPES-NaOH；pH7.4；125mM NaCl；5mM KCl；1.2mM MgSO4；1.3mM CaCl2；1.3mM KH2PO4)更换培养基，并且在37℃下将细胞孵育30分钟。通过向各测试孔中加入含有0，5mM 2脱氧-D-[1，2-3H]葡萄糖(0，5μCi)和100nM胰岛素的50μl KRH缓冲液启动葡萄糖摄取。在37℃下孵育10分钟后，抽吸培养基并且用冰冷的KRH缓冲液将细胞洗涤三次。然后将细胞溶于1M NaOH。在如上所述制备的溶解产物中，测定放射性(使用LS6500 Beckman Coulter闪烁计数器)和蛋白质浓度(使用Bradford方法)。在有未标记的参比化合物(20μM浓度下)存在下评估非特异性结合。
参考文献1.Role of peroxisome proliferator-activatedreceptor-gamma in maintenance of the characteristics of mature3T3-L1 adipocytes.Diabetes.2002 Ju1；51(7)204 5-55。
2.Identification of high-affinity binding sites for theinsulin sensitizer rosiglitazone(BRL-49653)in rodent andhuman adipocytes using a radioiodinated ligand for peroxisomalproliferator-activated receptor gamma.J.Pharmacol.Exp.Ther.1998 Feb；284(2)751-9。
3.Identification of bioactive molecules by adipogenesisprofiling of organic compounds.J.Biol.Chem.2003 Feb28；278(9)7320-4.Epub 2002 Dec 19.
4.Evidence for the involvement of vicinal sulfhydrylgroups in insulin-activated hexose transport by 3T3-L1adipocytes.J.Biol.Chem.1985 Mar 10；260(5)2646-52。
权利要求
1.式(I)的新3-苯基丙酸衍生物及其药学上可接受的盐 其中W表示COOH基团或其生物电子等排体或-COO-C1-C4-烷基；Y表示NH、N-C1-C10-烷基、O或S；Z表示NH、N-C1-C10-烷基、N-芳基、N-杂芳基、S或O；X表示O、S、NH、N-C1-C10烷基、N-芳基、NSO2-C1-C10-烷基、N-S2-芳基或N-S2-杂芳基；R2-R8各自独立地表示氢原子或选自下列的取代基C1-C4-烷基、C1-C4-烷氧基、C3-C7-环烷基、C3-C7-环烷氧基、C1-C4-硫代烷氧基、C3-C7-环硫代烷氧基、卤原子、卤素取代的C3-C7-环烷基、芳基、杂芳基、-NO2、-CN、-SO2-NH2、-SO2-NH-C1-C4-烷基、-SO2-N(C1-C4-烷基)2、-CO-C1-C4-烷基、-O-CO-C1-C4-烷基、-CO-O-C1-C4-烷基、-CO-芳基、-CO-NH2、-CO-NH-C1-C4-烷基、-CO-N(C1-C4-烷基)2；A表示C1-C4-烷基、C3-C7-环烷基、卤素取代的C3-C7-环烷基、芳基、杂芳基、杂环基、-NH-CO-C1-C4-烷基、-N(C1-C4-烷基)-CO-C1-C4-烷基、-NH-CO-芳基、-N(C1-C4-烷基)-CO-芳基、-N(C1-C4-烷基)-CO-C3-C7-环烷基、-NH-CO-NH2、-NH-CO-NH-C1-C4-烷基、-NH-CS-NH-C1-C4-烷基、-NH-CO-NH-芳基、-NH-CS-NH-芳基、-SO2-C1-C4-烷基、-SO2-芳基或-SO2-杂芳基；其中芳基、杂芳基和杂环基任选被一个或多个取代基取代，所述的取代基独立地选自C1-C4-烷基、C1-C4-烷氧基、C1-C4-硫代烷氧基、亚乙二氧基、CN、卤素或苯基，所述的苯基任选被一个或多个取代基取代，所述的取代基独立地选自C1-C4-烷基、C1-C4-烷氧基和卤原子；且n表示0-4的整数，包括端值。
2.权利要求1所述的化合物，其中W表示COOH。
3.权利要求1或2中任意一项所述的化合物，其中Y表示NH。
4.权利要求1或2中任意一项所述的化合物，其中Y表示O。
5.权利要求1或2中任意一项所述的化合物，其中Y表示N-C1-C4-烷基，尤其是N-CH3。
6.权利要求1-5中任意一项所述的化合物，其中Z表示O。
7.权利要求1-5中任意一项所述的化合物，其中Z表示S。
8.权利要求1-5中任意一项所述的化合物，其中Z表示N-C1-C4-烷基、尤其是N-CH3。
9.权利要求1-5中任意一项所述的化合物，其中Z表示N-苯基。
10.权利要求1-9中任意一项所述的化合物，其中X表示O。
11.权利要求1-9中任意一项所述的化合物，其中X表示S。
12.权利要求1-9中任意一项所述的化合物，其中X表示NSO2-C1-C4-烷基，尤其是NSO2-CH3。
13.权利要求1所述的化合物，其中W表示COOH，Y表示NH，Z表示O，且X表示O。
14.权利要求1所述的化合物，其中W表示COOH，Y表示O、Z表示O，且X表示O。
15.权利要求1所述的化合物，其中W表示COOH，Y表示NH，Z表示O，和X表示NSO2-C1-C4-烷基、尤其是NSO2-CH3。
16.权利要求1所述的化合物，其中W表示COOH，Y表示NH，Z表示S，且X表示NSO2-C1-C4-烷基，尤其是NSO2-CH3。
17.如权利要求1-16中任意一项所述的化合物，其中R1-R8各自表示氢原子。
18.如权利要求1-17中任意一项所述的化合物，其中n等于1或2。
19.如权利要求1-18中任意一项所述的化合物，其中A表示杂环基，所述的杂环基任选被一个或多个取代基取代，所述的取代基独立地选自C1-C4-烷基、C1-C4-烷氧基、C1-C4-硫代烷氧基、CN、卤原子和苯基。
20.如权利要求19所述的化合物，其中A表示任选被一个或多个取代基取代的异唑基，所述的取代基独立地选自C1-C4-烷基，尤其是-CH3。
21.如权利要求1-18中任意一项所述的化合物，其中A表示苯基，所述的苯基任选被亚乙二氧基取代。
22.如权利要求1-18中任意一项所述的化合物，其中A表示-N(C1-C4-烷基)-CO-C3-C7-环烷基。
23.如权利要求22所述的化合物，其中A表示-N(CH3)-CO-环己基。
24.如权利要求1-18中任意一项所述的化合物，其中A表示-N(C1-C4-烷基)-CO-杂芳基，所述的杂芳基任选被一个或多个取代基取代，所述的取代基独立地选自C1-C4-烷基、C1-C4-烷氧基，C1-C4-硫代烷氧基、CN、卤原子或苯基，所述的苯基任选被一个或多个取代基取代，所述的取代基独立地选自C1-C4-烷基、C1-C4-烷氧基和卤素。
25.如权利要求24所述的化合物，其中杂芳基为嘧啶基，其任选被一个或多个取代基取代，所述的取代基独立地选自C1-C4-烷基、C1-C4-烷氧基、卤原子和苯基，所述的苯基任选被一个或多个取代基取代，所述的取代基独立地选自C1-C4-烷基、C1-C4-烷氧基和卤原子。
26.如权利要求1-25中任意一项所述的化合物及其药学上可接受的盐，具有如式(IA)中所示的立体化学构型
27.如权利要求1-25中任意一项所述的化合物及其药学上可接受的盐，具有如式(IB)中所示的立体化学构型
28.权利要求1所述的化合物，所述的化合物选自下列化合物-(2S)-2-(1，3-苯并唑-2-基氨基)-3-[4-(2，3-二氢-1，4-苯并二英-6-基甲氧基)苯基]丙酸；-(2 S)-2-(1，3-苯并唑-2-基氨基)-3-[4-((3，5-二甲基异唑-4-基)甲氧基)苯基]丙酸；-(2S)-2-(1，3-苯并唑-2-基氨基)-3-[4-(2-[(环己基羰基)(甲基)氨基]乙氧基)苯基]丙酸；-(2S)-2-(1，3-苯并唑-2-基氨基)-3-[4-(2-[5-甲基-2-(3，4，5-三甲氧基苯基)-1，3-唑-4-基]乙氧基)苯基]丙酸；-(2S)-2-(1，3-苯并唑-2-基氨基)-3-[4-(4-{2-[[6-(2-氯苯基)-5-氰基-2-(甲硫基)嘧啶-4-基](甲基)氨基]乙氧基})苯基]丙酸；-(2S)-2-(1，3-苯并唑-2-基氨基)-3-[4-(2-(2-叔丁基-5-甲基-1，3-唑-4-基)乙氧基)苯基]丙酸；-(2S)-2-(1，3-苯并唑-2-基氨基)-3-[4-(2-(2-叔丁基-5-甲基-1，3-唑-4-基)乙氧基)苯基]丙酸；-(2S)-2-(1，3-苯并唑-2-基氨基)-3-[4-(2-[(环己基羰基)(甲基)氨基]硫代乙氧基)苯基]丙酸；-(2S)-2-(1，3-苯并唑-2-基氨基)-3-[4-(2-[(环己基羰基)(甲基)氨基]乙基甲磺酰基氨基)苯基]丙酸；和-(2S)-2-(1，3-苯并唑-2-基氧基)-3-[4-(2-[(环己基羰基)(甲基)氨基]乙氧基)苯基]丙酸；及其药学上可接受的盐。
29.药物组合物，包含如权利要求1-28中任意一项所定义的化合物或其药学上可接受的盐与药学上可接受的载体和/或赋形剂。
30.如权利要求1-28中任意一项所定义的化合物作为药物的应用。
31.如权利要求1-28中任意一项所定义的化合物在制备用于治疗和/或预防过氧化物酶体增殖子激活受体γ(PPARγ)介导的疾病和病症中的应用。
32.权利要求31所述的应用，其中所述的疾病或病症选自1型糖尿病、2型糖尿病、胰岛素抵抗、代谢综合征、因糖尿病导致或与糖尿病相关的并发症、心血管病症、动脉粥样硬化、肥胖、认知障碍和脂质代谢障碍。
33.对需要的哺乳动物受试者治疗和/或预防过氧化物酶体增殖子激活受体γ(PPARγ)介导的疾病和病症的方法，该方法包括对所述的哺乳动物给予治疗或预防有效量的如权利要求1-28中任意一项所定义的化合物。
34.权利要求33所述的方法，其中所述的疾病或病症选自1型糖尿病、2型糖尿病、胰岛素抵抗、代谢综合征、因糖尿病导致或与糖尿病相关的并发症、心血管病症、动脉粥样硬化、肥胖、认知障碍和脂质代谢障碍。
全文摘要
本发明涉及为式I的3－苯基丙酸衍生物的新化合物及其药学上可接受的盐，其中W表示COOH基团或其生物电子等排体或－COO－C
文档编号C07D413/12GK101084203SQ200580043841
公开日2007年12月5日 申请日期2005年12月16日 优先权日2004年12月20日
发明者Z·马伊卡, T·斯塔文斯基, K·鲁辛, A·萨维茨基, K·库罗夫斯基, K·毛图斯维琴, D·苏利维斯基, P·科瓦尔奇克 申请人:阿达梅德公司