3,4-二氢-3-甲基-4-氧代咪唑[5,1-d]并1,2,3,5-四嗪-8-甲酸苯磺酰基呋咱氮氧基酯类...的制作方法

专利名称：：3,4-二氢-3-甲基-4-氧代咪唑[5,1-d]并1,2,3,5-四嗪-8-甲酸苯磺酰基呋咱氮氧基酯类...的制作方法
技术领域：
：本发明涉及替莫唑胺偶联衍生物，具体为呋咱氮氧化物类一氧化氮供体(简称NO供体，下同)通过酯键或酰胺键与替莫唑胺偶联的化合物。本发明还涉及该化合物的制备方法及其在抗肿瘤药物中的应用。
背景技术：
：替莫唑胺(简称TM，下同)，英文名称为temozolomide，化学名为3,4-二氢-3-甲基-4-氧代咪唑[5，l-d]并1，2，3,5-四嗪-8-甲酰胺，由Schering-plough公司研制开发，1999年8月11日经FDA批准在美国上市，是治疗脑胶质瘤和恶性黑色素瘤的抗癌新药。这种口服细胞毒性烷化剂由于其毒性小、耐受性好而在胶质细胞瘤治疗中迈出重要的一步。其口服后可被完全吸收，生物利用度高，组织分布好，可透过血脑屏障。在中枢系统达到有效的药物浓度，在治疗脑胶质瘤上效果显著。替莫唑胺对神经胶质细胞瘤，尤其对最为常见的多形性成胶质细胞瘤作用显著，在临床前研究中发现，该药在酸性环境中稳定，可以透过血脑屏障，生物利用度高，组织分布好。此外，替莫唑胺对白血病、黑色素瘤、淋巴瘤及实体瘤也有效(RagabMH.Improvedcancertreatmentwithtemozolomide[P].AU200039244,2000-3-27)，无论是在肿瘤响应率，还是在患者存活率和耐受性都有良好的效果，更重要的是患者的生活质量均明显优于现有常用药物丙卡巴肼(马培奇.脑瘤治疗新药——替莫唑胺[.I].CW"ewJow""/O/MWd"a/GW/A,2001，3(4):298)。虽然替莫唑胺在临床治疗上有效提高了脑癌患者的生活质量，但并没有显著延长患者的生命，平均存活时间依然不足一年(陈步东，杨玉山.替莫唑胺治疗颅内恶性胶质瘤疗效观察[J].中国现代神经疾病杂志，2004，4(4):220-223)。瑞士Vaudois大学中心医院Hegi博士等人发现替莫唑胺治疗的成效与细胞内甲基鸟嘌呤化转移酵素(MGMT)的活性有关，若癌细胞的MGMT丧失活性，则替莫唑胺的治疗就有显著成效，反之，则没有明显的治疗效果。因此研究者们希望有其他治疗方法联合治疗或对其结构进行修饰从而改善替莫唑胺的疗效。NO是体内重要的信使物质和效应分子，参与了多种生理和病理反应，具有广泛的生理功能。NO供体药物在体内通过释放高浓度的NO，产生细胞毒性，诱导肿瘤细胞凋亡，阻止肿瘤细胞的扩散和转移起到抗肿瘤的作用。20世纪90年代初，Nathan等研究发现NO在免疫系统中发挥着重要的作用(C.F.Nathan,J.B.Hibbs，etal.Roleofnitricoxidesynthesisinmacrophageantimicrobialactivity[J].CwrOpZ"iwww"o/.1991,3(1):65-70.)。由于NO是气体物质，在体内半衰期比较短，在水溶液中不稳定，不方便利用，越来越多的研究集中于NO供体(M.Tsumori，J.Tanaka,K.Koshimura，etal.Cytotoxiceffectofnitricoxideonhumanhematologicalmalignantcells[J].XctaPo/，2002，49(1):139-144.)。目前为止，除硝酸酯，亚硝酸酯和硫代亚硝酸酯外，人们发现更多的化合物具有NO释放活性。呋咱氮氧化物(Furazanoxide,艮卩2,5-oxidiazole-2-oxide，简称Furoxan)是近年应用于新药研究的又一NO供体，Furoxan在体内释放NO需要巯基的参与，所有的含巯基的化合物都可以起到辅助的作用，因此不易引起耐受性(FeelischM，SchonafingerKandNoackE.Thiol-mediatedgenerationofnitricoxideaccountsforthevasodilatoractionoffuroxans.B/oc/e/w尸/uwmaco/，1992,44(6):11491157)。用呋咱氮氧化物修饰替莫唑胺形成新的抗癌化合物，从而改善目前替莫唑胺临床应用中存在的缺陷迄今没有进行过任何报道。本发明的目的之一是对替莫唑胺进行结构修饰，提供新的抗癌化合物，即3，4-二氢-3-甲基-4-氧代咪唑[5,l-d]并l，2，3,5-四嗪-8-甲酸苯磺酰基呋咱氮氧基酯类化合物。本发明的另一目的是提供该类化合物的制备方法。本发明的还一目的是提供该类化合物在制备抑制细胞凋亡或诱导肿瘤细胞凋亡药物中的应用。本发明通过以下技术方案予以实施。本发明的化合物具有以下通式通式(II)的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>其中，R代表垸烃基或芳烃基。优选地，R代表C2-20垸烃基。更优选地，R分别代表-(CH2)n-，n=3~18;p-CH2-Ph-;o-CH2-Ph-;m-CH2-Ph-;
发明内容-CH(CH3)CH2CH2-。最佳地，R分别代表-(CH2)n-,『318;p-CH2-Ph-;-CH(CH3)CH2CH2-。其对应关系如表1所示表l:IIwo与R的对应关系<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>本发明的药物通过以下方法予以制备(1)通过苯硫酚的醚化、氧化、环化制得侧链苯磺酰基呋咱氮氧化物(na);(2)以3-甲基-4-氧代咪唑[5，l-d][l,2,3，5]四嗪-8-甲酰胺为原料合成3-甲基-4-氧代咪唑[5,l-d][l，2，3，5]四嗪-8-甲酸(a)，再经酰氯化，制得3-甲基-4-氧代咪唑[5,1-d][1，2,3，5]四嗪-8-甲酰氯(b);(3)侧链苯磺酰基呋咱氮氧化物(IIa)同3-甲基-4-氧代咪唑[5,1-d][l,2,3,5]四嗪-8-甲酰氯(b)通过肖滕-鲍曼(Schotten-Baumann)法得到3，4_二氢_3-甲基4-氧代咪唑[5，l-d]并l，2，3，5-四嗪-8-甲酸苯磺酰基呋咱氮氧基酯类化合物(II)。其中，侧链苯磺酰基呋咱氮氧化物(IIa)可通过苯硫酚醚化、氧化、环化反应制备(反应式如下)，具体参见文献KenneyWJ，WalshJA，DavenportDA.Anacid-catalyzedcleavageofsulfoxides[J].JAmChemSoc,1961，83(19):4019-4022;Fa丽WV.The3,4-bisarenesulphonylfuroxans[J].JChemSoc,1964，(3):904-906;KelleyJL，McleanEW，WiiliardKF.Synthesisofbis(arylsulfonyl)ftiroxansfromarylnitromethylsulfones[J].JHeterocyclChem,1977，14(8):1415-1416;李瑞文，张奕华，季晖，等.苯磺酰基呋咱氮氧化物与双氯酚酸偶联化合物的合成及抗炎活性[J].药学学报，2001，36(11):821-826。具体反应流程如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>其中Ha卜IIa2o与R的对应关系如表2。<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>3-甲基-4-氧代咪唑[5,l-d][l,2,3，5]四嗪-8-甲酰氯(b:)的制备可通过下面的方法以3-甲基4-氧代咪唑[5，l-d][l，2，3，5]四嗪-8-甲酰胺(替莫唑胺)为原料，按照[WangYF.MalcolmFQStevens,AntitumorImidazotetrazines35.NewSyntheticRoutestotheAntitumorDrugTemozolomide[J]，JOrgChem，1997，62(21):7288-7294.]的方法合成中间体化合物3-甲基-4-氧代咪唑[5，1-(1][1，2，3，5]四嗪-8-甲酸(a)，再按照羧酸制备酰氯的方法即将3-甲基-4-氧代咪唑[5，l-d][l，2，3，5]四嗪-8-甲酸(a)溶于15ml二氯亚砜中，加入两滴DMF，搅拌加热回流2h，浓縮除去二氯亚砜后，加入15ml甲苯洗涤后浓縮得到3-甲基-4-氧代咪唑[5,l-dj[1,2,3，5]四嗪-8-甲酰氯(b)，收率68%，m.p.141.5143.8°C。具体反应流程如下媽OH<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>侧链苯磺酰基呋咱氮氧化物(IIa)与3-甲基-4-氧代咪唑[5，l-d][1，2，3,5]四嗪-8-甲酰氯(b)通过肖滕-鲍曼(Schotten-Baumann)法制得3，4-二氢-3-甲基-4-氧代咪唑[5，卜d]并1，2,3，5-四嗪-8-甲酸苯磺酰基呋咱氮氧基酯类化合物(II)，即本发明的目标化合物。具体的反应流程为<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>、OOIIaII本发明的3，4-二氢-3-甲基-4氧代咪唑[5，1-d]并l，2，3，5-四嗪-8-甲酸苯磺酰基呋咱氮氧基酯类化合物可抑制细胞凋亡或诱导肿瘤细胞凋亡。本发明基于替莫唑胺本身的抗肿瘤作用，结合NO诱导肿瘤细胞凋亡的作用，应用药物设计的基本理论，设计合成结构类型新颖的另一具有NO释放活性的NO供体化合物，即3，4-二氢-3-甲基-4-氧代咪唑[5，1-d]并l,2,3，5-四嗪-8-甲酸苯磺酰基呋咱氮氧基酯类化合物。在抗癌活性试验中，本发明化合物在同样的条件下对于六种癌细胞株的细胞毒性要大，相同剂量下对脑胶质瘤细胞株(SKMG4)的毒性均优于替莫唑胺，其中化合物113对DU145(colon)，HCT-15,Lncap，PC-3，HL-60，SKMG-4六种人体瘤细胞株的生长具有一定的抑制作用，肿瘤细胞存活率均在10%左右。化合物Il5对直肠癌细胞株(HCT-15)具有显著的抑制作用，说明此化合物具有潜在的抗直肠癌的活性，并且这些化合物还表现出一定的抗白血病的活性，其中Il2和Il3两种化合物的作用比较明显，值得深入研究。具体实施例方式以下通过具体实施例和试验例进一步阐述本发明，不以任何形式构成对本发明的限制。实施例l3,4-二氢-3-甲基-4-氧代咪唑[5，l-d併l,2，3，5-四嗪-8-甲酸3-(3-苯磺酰基-l，2，5-噁二唑-2氧化物-4-)氧丙酯(IIO的制备在干燥的单口烧瓶中加入3-甲基-4-氧代咪唑[5，1-d][1，2，3，5]四嗪-8-甲酰氯(b)2.14g(lOmmol)，加入四氢呋喃使之溶解，搅拌下将3-(3-苯磺酰基-l，2，5-噁二唑-2氧化物-4-)氧丙醇(IIa,)3g(lOmmol)溶于20ml四氢呋喃溶液，搅拌下逐滴加入2ml2mol/L的K2C03溶液，反应3hr后，过滤浓縮，加入100ml水，用3X100ml乙酸乙酯萃取，合并萃取液用2X100ml水洗，100ml饱和食盐水洗后，无水硫酸钠干燥，过滤浓縮后用200—300目硅胶柱层析[洗脱液为乙酸乙酯石油醚=1:6(v:v)]，得到白色固体2.23g,收率46.8%,mp.m.4174.5。C。ESI-MSm/z:499.6[M+23]+;IR(KBr,v(cm")):3123,1558(芳环)，1724(C=0)，1609(C=N),1453,1166(S=0),1383,1354(N=N),1250，997(C-O);'H-NMRS:2.44(m，2H，CH2),4.04(s,3H,CH3),4.70(s，2H，OCH2)，4.66(t，2H,CH20),7.58(t,2H,ArH),7.73(t,H，ArH)，8.02(d，2H,屈)，8.46(s，H，CH);ElementalAnalysisC17H15N708SFound:(%)C42.94,H2.93，N20.65;Calcd:(%)C42.77，H3.14，N20.55。实施例23，4-二氢-3-甲基-4-氧代咪唑5,l-dl并l，2,3，5-四嗪-8-甲酸4-(3-苯磺酰基-l，2，5-噁二唑-2氧化物-4-)氧丁酯(Il2)的制备在干燥的单口烧瓶中加入3-甲基-4-氧代咪唑[5，1-d][1，2,3,5]四嗪-8-甲酰氯(b)2.14g(lOmmol)，加入四氢呋喃使之溶解，搅拌下将4-G-苯磺酰基-l,2，5-噁二唑-2氧化物-4-)氧丁醇(IIa2)3g(lOmmol)溶于20ml四氢呋喃溶液，搅拌下逐滴加入2ml2mol/L的K2C03溶液，反应3hr后，过滤浓缩，加入100ml水，用3X100ml乙酸乙酯萃取，合并萃取液用2X100ml水洗，100ml饱和食盐水洗后，无水硫酸钠干燥，过滤浓縮后用2()0—300目硅胶柱层析[洗脱液为乙酸乙酯石油醚(609(TC"l:l(v:v)]，得到白色固体2.23g,收率45.7%，mp.163.8~165.5°C。ESI-MSm/z:491.6[M+l]+;IR(KBr，v(cm—')):3136，1551(芳环)，1752(C=0)，1602(C=N)，1396,1171.4(S=0)，1385，1308(N=N)，1241,997(C-O);'H-NMRS:2.09(m,4H，CH2),4.01(S,H,CH3)，4.54(t,2H，CH20)，4.58(t，2H,OCH2)，7.58(t,2H，ArH)，7.71(t，H，ArH),8.02(s，H，ArH)，8.05(d,2H，ArH),8.44(s，H，CH3);ElementalAnalysisC18H17N708SFound:(%)C43.81,H3.40,N19.85;Calcd:(%)C43.99，H3.46，N19.96。实施例33,4-二氢-3-甲基-4-氧代咪唑[5，l-d]并1，2,3，5-四嗪-8-甲酸(3-苯磺酰基-l，2，5-噁二唑-2-氧化物-4-)氧-3-丁酯(113)的制备在干燥的单口烧瓶中加入3-甲基-4-氧代咪唑[5,l-d][L,2,3,5]四嗪-8-甲酰氯(b)2.14g(lOmmol)，加入四氢呋喃使之溶解，搅拌下将3-苯磺酰基-l,2,5-噁二唑-2-氧化物4-)氧-3-丁醇(IIa3)3g(lOmmol)溶于20ml四氢呋喃溶液，搅拌下逐滴加入2ml2mol/L的K2C03溶液，反应3hr后，过滤浓縮，加入100ml水，用3X100ml乙酸乙酯萃取，合并萃取液用2X100ml水洗，100ml饱和食盐水洗后，无水硫酸钠干燥，过滤浓縮后用200—300目硅胶柱层析[洗脱液为乙酸乙酯石油醚(6090'C戶l:l(v:v)]得白色固体，收率51.2%，mp137.6139.3。C。ESI-MSm/z:491.6[M+l]+;1R(KBr，v(cm")):3113，1556(芳环)，1755(C=0),1614(C=N),1456,1166.8(S=0),1385，1352(N=N)，1240，1048(C-O);里H-醒RS:1.56(d,3H,CH3)，2.36(m，2H，CH2),4.03(s，3H,CH3)，4.64(t，2H，CH20)，5.25(m,H，CH),7.62(t，2H，ArH)，7.71(t，H，ArH)，8.02(d，2H，緒)，8.44(s，H，CH);ElementalAnalysisC18Hi7N708SFound(%):C43.69,H3.59,N19.74;Calcd(%):C43.99，H3.46，N19.96。实施例43,4-二氢-3-甲基-4-氧代咪唑[5，l-d併l，2，3，5-四嗪-8-甲酸5-(3-苯磺酰基-1,2,5-噁二唑-2氧化物-4-)氧戊酯(II4)的制备在干燥的单口烧瓶中加入3-甲基-4-氧代咪唑[5,1-d][1，2,3,5]四嗪-8-甲酰氯(b)2.14g(lOmmol)，加入四氢呋喃使之溶解，搅拌下将3g(lOmmol)5-(3-苯磺酰基-l，2，5-噁二唑-2氧化物-4-)氧戊醇(Ha4)溶于20ml四氢呋喃溶液，搅拌下逐滴加入2ml2mol/L的K2C03溶液，反应3hr后，过滤浓縮，加入100ml水，用3X100ml乙酸乙酯萃取，合并萃取液用2X100ml水洗，100ml饱和食盐水洗后，无水硫酸钠干燥，过滤浓縮后用200—300目硅胶柱层析[洗脱液为乙酸乙酯-正己烷(l:5)]，重结晶得白色絮状固体，收率51.2%，mp134.5~136.2。C。ESI-MSm/z:527.6[M+23]+;IR(KBr，v(cm")):3137，1556(芳环)，1729(C=0)，1605(C=N)，1456,1173(S=0),1360(N=N)，1241，1049(C-0);'H-NMRS:1.72(m,2H，CH2)，L91(m,2H，CH2)，L97(m,2H，CH2)，4.03(s，3H,CH3)，4.45(t,2H.CH20)，4.54(t,2H，OCH2)，7.61(t，2H,ArH),7.74(t,H,ArH)，8.00(d，2H，ArH),8.44(s,H，CH);ElementalAnalysisCi9Hl9N708S:Found(%):C45.04，H3.80，N19.62;Calcd(%):C45.15,H3.76,N19.40。实施例53，4-二氢-3-甲基-4-氧代咪唑[5，l-d併l，2，3，5-四嗪-8-甲酸3-(3-苯磺酰基-1,2,5-噁二唑-2氧化物-4-)氧苯甲酯(Hs)的制备在干燥的单口烧瓶中加入3_甲基-4-氧代咪唑[5，l-d][1，2,3,5]四嗪-8-甲酰氯(b)2.14gUOmmol)，加入四氢呋喃使之溶解，搅拌下将3-G-苯磺酰基-l，2，5-噁二唑-2氧化物-4-)氧苯甲醇(IIa5)3g(lOmmol)溶于20ml四氢呋喃溶液，搅拌下逐滴加入2ml2mol/L的K2C03溶液，反应3hr后，过滤浓縮，加入100ml水，用3X100ml乙酸乙酯萃取，合并萃取液用2X100ml水洗，100ml饱和食盐水洗后，无水硫酸钠干燥，过滤浓縮后用200_300目硅胶柱层析[洗脱液为二氯甲院:石油醚(609(rC^9:l(v:v)]得白色固体，收率51.2%,mp107.5-1IO.(TC。ESI-MSm/z:542，+23]+;IR(KBr,v(cm'))::3124,1542(芳环)，1740,1712(C=0),1626(C,，1451,1166(S=0)，1396,1350(N=N)，1258，1052(C-O);'H誦醒RS:3.89(s，3H,CH3),5.48(s,2H，CH2),7.46(d,2H,ArH)，7.63(d，2H,ArH),7.77(t,2H,ArH),7.90(t，H，ArH)，8.02(d,2H，ArH)，8.87(s，H,CH);ElementalAnalysisC21H15N708S:Found(%):C47.73，H3.05，N18.61.Calcd(%):C48.00，H2.86,N18.67。实施例63，4-二氢-3-甲基-4-氧代咪唑[5，l-d併l,2,3,5-四嗪-8-甲酸12-(3-苯磺酰基-l，2,5-噁二唑-2氧化物-4-)氧十二酯(1112)的制备在干燥的单口烧瓶中加入3_甲基-4-氧代咪唑[5,1-d][1,2，3，5]四嗪-8-甲酰氯(b)2.14g(lOmmol)，加入四氢呋喃使之溶解，搅拌下将12-(3-苯磺酰基-1,2，5-噁二唑-2氧化物-4-)氧十二醇(IIa,2)3g(10mmol)溶于20ml四氢呋喃溶液，搅拌下逐滴加入2ml2mol/L的K2C03溶液，反应3hr后，过滤浓縮，加入100ml水，用3X100ml乙酸乙酯萃取，合并萃取液用2X100ml水洗，100ml饱和食盐水洗后，无水硫酸钠干燥，过滤浓縮后用200-300目硅胶柱层析[洗脱液为二氯甲垸石油醚(609(TC"5:l(v:v)]得白色固体，收率55.8%，mp123.6.5~125.7°C。ESI-MSm/z:625.8[M+23]+;IR(KBr,v(cm—1))::3138，1557(芳环)，1720(C=0)，1603(C=N)，1456，1170(S=0)，1362(N=N)，1240，1048(C-O);'H-NMRS:1.70(m，2H，CH2)，1.89(m,2H，CH2)，1.93(m，16H,8xCH2),L97(m，2H，CH2)，4.02(s，3H，CH3)，4.44(t，2H，CH20),4.55(t，2H，OCH2),7.6l(t，2H,ArH)，7.74(t，H，ArH)，8.00(d，2H，ArH)，8.44(s，H，CH);ElementalAnalysisC26H33N708S:Found(%):C51.69,H5.27，N15.97.Calcd(%):C51.74,H5.47,N16.25。实施例73，4-二氢-3-甲基-4-氧代咪唑5,l-dl并l，2，3,5-四嗪-8-甲酸18-(3-苯磺酰基-l，2，5-噁二唑-2氧化物-4-)氧十八酯(1118)的制备在干燥的单口烧瓶中加入3-甲基-4-氧代咪唑[5，1-d][1,2,3，5]四嗪-8-甲酰氯(b)2.14g(lOmmol)，加入四氢呋喃使之溶解，搅拌下将18-(3-苯磺酰基-l，2，5-噁二唑-2氧化物-4-)氧十八醇(IIa,8)3g(10mmol)溶于20ml四氢呋喃溶液，搅拌下逐滴加入2ml2mol/L的K2C03溶液，反应3hr后，过滤浓縮，加入100ml水，用3X100ml乙酸乙酯萃取，合并萃取液用2X100ml水洗，100ml饱和食盐水洗后，无水硫酸钠干燥，过滤浓縮后用200-300目硅胶柱层析[洗脱液为三氯甲烷石油醚(609(TC)-6:l(v:v)]得白色固体，收率47.6%,mp205.3~207.1°C。ESI-MSm/z:733.4[M+23]+;IR(KBr，v(cm"))::3139，1556(芳环)，1722(C=0)，1602(C=N)，1455,1171(S=0),1361(N=N),1244，1044(C-O);'H-醒RS丄71(m,2H,CH2),1.90(m,2H,CH2),1.94(m,28H,14xCH2),1.98(m，2H,CH2)，4.02(s,3H，CH3),4.44(t,2H,CH20)，4.55(t,2H,OCH2)，7.61(t,2H,ArH)，7.74(t,H，ArH)，8.00(d,2H，ArH)，8.44(s,H，CH);ElementalAnalysisC32H45N708S:Found(%):C54.24,H6.27，N14.07.Calcd(0/0):C54.08,H6.34，N13.80。试验例1抗癌活性试验一.材料1.试验材料癌细胞株及培养基DU145(colon),HCT-15(colon)，Lncap(prostate),PC-3(prostate),HL-60(promyelocyticleukemia),SKMG-4(glioma)用RPMI1640培养液(Gibco-BRL,GrandIsland,NY,USA)配成悬液，加入10。/。经加热灭活的胎牛血清(FCS,Gibco),100IU/ml青霉素lOOIU/ml链霉素;T47D(breast),MDA-MB231(breast)(ATCC)，同样用RPMI1640培养液配成悬液，加入10%经加热灭活的胎牛血清，100IU/ml青霉素及100ng/ml链霉素，另加5吗/ml胰岛素。癌细胞株均购买于美国组织培养中心(ATCC,Rocksville，Maryland,USA).2.试布J:MTT(3-[4,5-dimethylthiazol-2陽yl]-2，5-diphenyltetrazoliumbromide;Sigma)3.仪器96孔平板(BectonDickinsonLabware，NJ，USA)，自动化分光光度平板读数计(DynatechMR5000)。4.药物按照实施例15方法制备的II,U5，其中替莫唑胺购于江苏天士力帝益药业有限公司。二.实验方法向96孔平板的每孔内加入O.lmL含有1000个细胞的由RPMI1640培养液配成的悬浮液，然后于37°C,(:02(5%)培养箱中培养24小时，加入含有不同受试化合物的培养基，于37°C,C02(5%)，空气，100%湿度培养4天，每孔加入5(^1MTT溶液(2mg/ml),37。C下培养4小时，吸出上清液，每孔加入150plDMSO，振摇15分钟，平板通过自动化分光光度平板读数计，于540nm波长处测量每个孔的光密度(OD)。以孔中细胞未加受试化合物测得的光密度作为对照品，以下式分别计算每个化合物的细胞存活率，细胞生存能力与药物浓度作曲线，细胞存活率为50%即为1(:5()值。(其中加药细胞孔OD值是孔中加入细胞、药物时测得的OD值，空白药物孔OD值是孔中加入药物，未加细胞时测得的OD值，对照细胞OD值是孔中加入细胞，未加药物时测得的OD值)。加药细胞OD值一空白药物孔OD值细胞存活率(％>=m^^m^u^xlO0%对照细胞OD值三.实验结果采用MTT法，研究了5个II类目标化合物于25pg/mL时体外对六种人体瘤细胞株的生长抑制作用，其中包括两种直肠癌细胞株(DU-145HCT-15,)，两种前列腺癌细胞株(Lnc叩,PC-3)，早幼粒白血病细胞株(HL-60),神经胶质瘤细胞株(SKMG-4),并与替莫唑胺(TM)作了对比。结果见表3。表3各癌细胞株在替莫唑胺及II类化合物的25pg/mL浓度下的细胞存活率(％)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>结论从抗癌活性试验结果可以看出，在同样的条件下，化合物I13对DU145(colon)，HCT-15.Lncap，PC-3，HL-60,SKMG-4六种人体瘤细胞株的生长均具有一定的抑制作用，肿瘤细胞存活率均在10%左右。化合物Il5对直肠癌细胞株(HCT-15)具有显著的抑制作用，说明此化合物具有潜在的抗直肠癌的活性。II类化合物与替莫唑胺相比，在抑制脑胶质瘤细胞方面有了很大的改进，并且这些化合物还表现出一定的抗白血病的活性，其中112和113两种化合物的作用比较明显。权利要求1.通式(II)的化合物id="icf0001"file="A2006101297900002C1.gif"wi="74"he="28"top="46"left="39"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="no"/>其中，R代表烷烃基或芳烃基。2.权利要求l所述的化合物，其中，R代表C2.20烷烃基。3.权利要求1所述的化合物，其中R代表-(CH2)n-,r^318,-CH(CH3)CH2CH2-。4.权利要求1所述的化合物，其中R代表p-CH2-Ph-，o-CHrPh-，m-CH2-Ph-。5.权利要求1所述化合物的制备方法，包括以下步骤(1)通过苯硫酚的醚化、氧化、环化制得側链苯磺酰基呋咱氮氧化物(na);(2)以3-甲基-4-氧代咪唑[5,l-d][l,2，3，5]四嗪-8-甲酰胺为原料合成3-甲基-4-氧代咪唑[5，l.-d][1，2，3，5]四嗪-8-甲酸(a)，再经酰氯化，制得3-甲基--4-氧代咪唑[5,卜d][1，2，3，5]四嗪_8-甲酰氯(b);(3)侧链苯磺酰基呋咱氮氧化物(IIa)同3-甲基-4-氧代咪唑[5，1-d][l,2,3,5]四嗪-8-甲酰氯(b)通过肖滕-鲍曼(Schotten-Baumann)法得到3,4_二氢-3-甲基-4-氧代咪唑[5，l-d]并l，2，3，5-四嗪-8-甲酸苯磺酰基呋咱氮氧基酯类化合物(11)。6.权利要求14任一所述化合物在制备抑制细胞凋亡或诱导肿瘤细胞凋亡药物中的应用。全文摘要本发明涉及一种替莫唑胺的衍生物，具体涉及呋咱氮氧化物类一氧化氮供体通过酯键或酰胺键与替莫唑胺偶联的化合物，即3，4-二氢-3-甲基-4-氧代咪唑[5，1-d]并1，2，3，5四嗪-8-甲酸苯磺酰基呋咱氮氧基酯类化合物。该化合物由替莫唑胺和呋咱氮氧化物类一氧化氮供体在K₂CO₃中反应制得，具有良好的抑制细胞凋亡或诱导肿瘤细胞凋亡的作用。文档编号C07D487/00GK101190917SQ200610129790公开日2008年6月4日申请日期2006年11月30日优先权日2006年11月30日发明者微周,张广明,兰王申请人:天津天士力集团有限公司