专利名称：：含有来自金合欢属树皮的物质的肿瘤的预防和/或治疗用组合物的制作方法
技术领域：
：本发明涉及来自属于金合欢属(Acacia)的树木的肿瘤的预防和/或治疗用组合物以及该组合物作为食品、动物词料和药品的用途。
背景技术：
：我国在第二次世界大战后，由于公共卫生的改善和抗生素的发现等，感染症导致的死亡大幅减少，但取而代之的是生活习惯病、特别是癌症的发生率不断增加，在1981年位居国民死亡原因的第一位。如今，癌症死亡人数的比例为约3人中有1人。另外，癌症不仅在我国，在其他国家也急剧增加，该疾病应称为人类共同的敌人。因此，以癌症为代表的肿瘤的预防或治疗方法的开发是重要而迫切的课题。实际上作为药剂，一直在开发、使用各种抗癌剂，但是存在会产生严重的副作用等诸多问题。关于金合欢，已知金合欢蜂蜜以及从其树皮提取的丹宁可以用作鞣皮剂和木材用胶粘剂，而且最近公开了金合欢属的提取物具有COX-2的选择性抑制效果(专利文献1)、金合欢属的树皮具有活泼氧清除效果(专利文献2)以及酪氨酸酶活性抑制效果产生的美白效果(专利文献3)。但是，并不知道金合欢属的树皮和来自树皮的多酚具有抗肿瘤活性。专利文献l:日本专利特表2004-532811号公报专利文献2:日本专利特开2004-352639号公报专利文献3:日本专利特开平10-025238号公报
发明内容本发明提供安全性高的、对肿瘤的预防和/或治疗有用的组合物。本发明人等为了解决上述技术问题，进行了潜心研究，结果发现来自3金合欢属树皮的物质具有优异的抗肿瘤活性，对肿瘤的预防或治疗有用，从而完成了本发明。艮P，本发明涉及肿瘤的预防和/或治疗用组合物，其特征在于，含有来自金合欢属树皮的物质。本发明还涉及使用来自金合欢属树皮的物质的、肿瘤的预防或治疗方法。此外，本发明还涉及用于制造肿瘤的预防或治疗用组合物的、来自金合欢属树皮的物质的使用方法。本发明的组合物具有抗肿瘤活性，特别是具有优异的抗恶性肿瘤活性。本发明的组合物即使长期服用也不必太担心副作用等，安全性高。图1是表示YAC-1细胞的存活细胞数的变化的图。图2是表示小鼠的肿瘤增殖抑制试验的时间表的图。图3是表示小鼠的移植后第28天的平均肿瘤重量的图。具体实施例方式本发明可使用的来自金合欢属树皮的物质，只要是以属于金合欢属(Acacia)的树木(以下称为"金合欢"或"金合欢属")的树皮为原料而得到的物质即可，没有特殊限制，例如可以列举金合欢属的树皮的碎片、粉末及它们的悬浮液、金合欢属的树皮的提取液、浓縮提取液、及提取粉末等提取物以及将该提取物精制得到的精制物。从能得到优异的抗肿瘤活性的观点出发，优选金合欢属树皮的提取物，特别优选金合欢树皮多酚。在本发明中，可以只使用l种上述来自金合欢属树皮的物质，也可以并用2种以上。本发明能使用的金合欢，只要是属于金合欢属的树木即可，没有特殊限制，从得到具有优异的抗肿瘤活性的来自金合欢属树皮的物质的观点出发，优选从由学名AcaciameamsiiDeWild.(俗名黑荆树)、学名AcaciamangiumWilld.(俗名马占相思)、学名AcaciadealbataLink、学名AcaciadecurrensWilld.、以及学名AcaciapycnanthaBenth.构成的组中选择的金合欢属的树皮，特别优选AcaciameamsiiDeWild.以及AcaciamangiumWilld.。在本发明中，可以只使用l种上述金合欢属的树皮，也可以并用2种以上。上述金合欢属的树皮，通常可通过将树木采伐后只剥离树皮并采取干燥来得到，优选进一步在阳光下干燥得到的树皮。金合欢属的树皮由外皮和略有纤维性的内皮构成，干燥至含水率为20%左右以下时，在锤式粉碎机等粉碎机中易微粉化。在本发明中，作为金合欢属的树皮，可以将该金合欢属的内皮和外皮两者一起使用，也可以只使用任一方。上述金合欢属的树皮的碎片，可以通过用常法将金合欢属的树皮粉碎成合适的大小来获得。上述金合欢属的树皮的粉末，可以通过将金合欢属的树皮用常法粉碎而粉末化来获得，特别优选粒径为100pm以下、尤其是50pm7(^m的粉末。关于粉末的区分，将干燥至含水率为20%以下的树皮粉碎成合适的大小例如粒径为1.6mm以下左右，将得到的粉末用振动筛等分级，即可得到所需的粉末。上述金合欢属的树皮的提取物，可以通过将金合欢属的树皮用常法提取来获得。为了得到具有优异的抗肿瘤活性的金合欢属树皮的提取物，优选用醇或极性溶剂对金合欢属的树皮进行提取。作为上述醇，可以使用乙醇等，作为极性溶剂，可以使用水等，还可以根据需要单独使用这些溶剂或并用2种以上。特别是为了得到优异的抗肿瘤活性，优选水和乙醇等醇的混合溶剂。此外，也可以用相同或不同的溶剂进行多次提取操作。为了得到具有优异的抗肿瘤活性的提取物，也可以使用通过将来自金合欢属树皮的经水或热水得到的提取物进一步用乙醇提取得到的提取物。关于提取，在金合欢属树皮的碎片或粉末等中加入溶剂并根据需要搅拌来提取，对温度和时间或固液比没有特殊限制。当溶剂采用水时，可以用热水来提取。得到的提取液可以直接冷冻干燥或喷雾干燥，或者也可以5在减压浓縮后冷冻干燥或喷雾干燥。得到的提取物可以为提取液、溶液、粉末、浓縮液、糊状物等各种形态，可以根据需要广泛使用。此外，以上述形态得到的本发明的金合欢属树皮提取物可以直接用于肿瘤的预防或治疗，还可以根据需要精制，该精制物也可以作为抗肿瘤活性成分使用。在本发明中，作为来自金合欢属树皮的物质，还可以例示在金合欢属的树皮中含有的成分。作为这样的成分，可以例示金合欢树皮多酚等。特别是金合欢树皮多酚具有优异的抗肿瘤活性，因而为优选的成分。本发明的金合欢树皮多酚是指(0-非瑟酮醇、(-)-刺槐亭醇、(+)-儿茶素以及(+)-没食子儿茶素等以黄烷-3-醇为基本骨架的黄垸醇类以C4-C8、C4-C6结合得到的聚合物即縮合型丹宁的一种。这里，作为这种縮合型丹宁，优选分子量为3003000，特别优选5003000。本发明使用的金合欢树皮多酚可以通过将上述金合欢属树皮的粉末等进行热水提取来获得。作为金合欢树皮多酚产品，可以例示MIMOSACentralCo-operativeLtd.制的注册商标为MIMOSAMEPOWDER、MIMOSAMSPOWDER、MIMOSAGSPOWDER、MIMOSAFSPOWDER、MIMOSAWSPOWDER、MIMOSARGPOWDER、MIMOSARNPOWDER、MIMOSADKPOWDER、MIMOSAALPOWDER、MIMOSACRPOWDER、GOLDENMIMOSAPOWDER的产品等。本发明的组合物可以是来自金合欢属树皮的物质，例如金合欢属的树皮、其提取物、其精制物、或金合欢树皮多酚，也可以含有其他具有抗肿瘤活性的物质，例如对肿瘤的预防和域治疗有用的物质等。例如鲨鱼软膏、药用人参、冬虫夏草、几丁质、壳聚糖、姬松茸、灰树花、桑黄、雌株、海蕴以及马尾藻等。本发明的组合物可以是来自金合欢属树皮的物质，例如金合欢属的树皮、其提取物、其精制物、或金合欢树皮多酚，在不损坏本发明效果的前提下，可以含有赋形剂、甜味剂、酸味剂、增粘剂、香料、色素、乳化剂及其他在药品及食品中常用的添加剂及材料。作为能用本发明的组合物预防或治疗的肿瘤，可以列举例如良性肿瘤6或恶性肿瘤(癌)等。作为良性肿瘤，可以例示色素性母斑、形成异常母斑、悬垂状纤维瘤、脂肪瘤、淋巴管瘤、脂溢性角化症、皮肤纤维瘤、角化棘皮瘤、瘢痕瘤等软组织肿瘤、或者大肠息肉或若声带息肉等息肉，作为恶性肿瘤，可以例示急性或慢性白血病、恶性淋巴瘤、骨髓瘤、或巨球蛋白血症等造血器官的恶性肿瘤；脑肿瘤、头颈部癌(例如喉癌、咽癌、舌癌等)、乳癌、肺癌、食道癌、胃癌、大肠癌、肝癌、胆囊'胆管癌、胰癌、肾癌、肾上腺皮质癌、膀胱癌、前列腺癌、睾丸肿瘤、卵巢癌、子宫癌、绒毛癌、甲状腺癌、恶性类癌肿瘤、皮肤癌、恶性黑素瘤、骨肉瘤、软骨肉瘤、软组织肉瘤、横纹肌肉瘤、平滑肌肉瘤、纤维肉瘤、脂肪肉瘤、或血管肉瘤等固体肿瘤；或由这些肿瘤引起的或与这些肿瘤相关的癌。本发明的组合物对白血病、乳癌、胃癌、大肠癌、肝癌、肾癌以及血管肉瘤尤其是白血病和乳癌的预防或治疗特别有用。另外，在本发明中，治疗包括縮小肿瘤、治愈、抑制肿瘤的生长、转移、恶化等。本发明的组合物的摄取量没有特殊限制，可以根据剂型以及使用者或患者等摄取者或摄取动物的年龄、体重及症状来适当选择。例如，相对于摄取者的体重或摄取动物的体重lkg，作为有效成分量而每日经口摄取0.001glg、优选为0.001g0.5g、更优选为0.005g0.1g的金合欢树皮多酚量，能得到优异的抗肿瘤活性，因而优选。摄取时间可以根据使用者或患者的年龄、症状来任意设定。本发明的组合物作为食品或动物饲料而言，可以作为例如健康食品、功能性食品、健康补助食品、特定保健用食品、美容食品以及营养补助食品(营养补充剂)来使用。这些食品和动物饲料例如可以是茶、果汁等饮料；冰激淋、果冻、糖果、巧克力以及口香糖等的形态。另外，也可以是液体制剂、粉剂、颗粒剂、胶囊剂或片剂的形态。这里，动物饲料的动物包含包括宠物动物、畜产动物或动物园等中词养的动物在内的需要预防或治疗肿瘤的所有动物。本发明的组合物可以作为药品或非药品使用。这些药品或非药品可以以例如散剂、片剂、包衣剂、糖衣剂、硬明胶胶囊或软明胶胶囊剂、液体制剂、乳浊剂或悬浮剂的形态口服给药，也可以非口服给药，例如以栓剂7的形态直肠给药；例如以软膏、霜剂、凝胶剂或液体制剂的形态局部或经皮给药。优选口服给药。[实施例]以下，列举制造例、试验例、惨和例来更详细地具体说明本发明，但本发明不限于这些。特别是这里未将本发明的金合欢属树皮分为外皮和内皮来示出实施例，也可以将外皮从内皮分离而分别使用。在以下的制造例、试验例等中，将本发明的各金合欢用各自学名后的括号内所示的号来表示。例如，将学名AcaciamearnsiiDeWild.的金合欢记作金合欢No.l。学名AcaciamearnsiiDeWild.(No.l)、学名Acaciamangium(No.2)、学名AcaciadealbataLink(No.3)、学名AcaciadecurrensWilld.(No.4)、学名AcaciapycnanthaBenth.(No.5)。另外，％在没有特殊说明的情况下表示重量％。金合欢树皮粉末的制造例1将金合欢No.l的树皮干燥至含水率为20%以下，将该干燥树皮用锤式粉碎机粉碎成1.6mm以下(过10目筛(泰勒Tyler))的粉末，然后再用振动筛分级，得到63pm以下(过250目筛)的微粉。同样操作，将其余4种金合欢No.25的树皮粉碎，分别得到63pm以下的微粉。因种类不同，过250目筛的微粉的收率多少存在差异，但均得到了目标微粉。金合欢树皮提取物的制造例2将本发明的各金合欢No.15的树皮分别干燥至含水率为20%以下，将该干燥树皮用锤式粉碎机粉碎至1.6mm以下的粉末后，相对于该干燥粉碎树皮100g，加入5倍量的热水，沸腾后提取15分钟，用10pm2(^m的过滤器过滤。将得到的滤液用喷雾干燥器进行喷雾干燥，得到树皮提取物各40g。以下，各树皮提取物记作金合欢No.l5热水提取物。金合欢树皮提取物的制造例3将本发明的金合欢树皮干燥至含水率为20%以下，将该干燥树皮用锤式粉碎机粉碎至1.6mm以下的粉末后，相对于该干燥粉碎树皮100g，加8入5倍量的乙醇，一边沸腾回流一边提取15分钟，用10pm2(Hmi的过滤器过滤。从得到的滤液蒸发乙醇，将浓縮液用封闭式喷雾干燥器进行喷雾干燥，得到树皮提取物(以下记为金合欢No.l乙醇提取物)40g。同样操作，得到金合欢No.l5的乙醇提取物。金合欢树皮提取物的制造例4在制造例2中得到的金合欢热水提取物10g中加入3倍量的乙醇，一边沸腾回流一边提取15分钟，用1(Vm20^im的过滤器过滤。从得到的滤液蒸发乙醇，在其中加水后冷冻干燥，得到9g提取物(以下记为金合欢No.l热水提取物乙醇馏分)。同样操作，得到金合欢No.15的热水提取物乙醇馏分。试验例l肿瘤细胞的试管内培养的增殖抑制效果(1)试验样品的制备在制造例2所述的金合欢No.l热水提取物200mg中加入2ml的蒸馏水，在IO(TC下提取IO分钟。将该提取液过滤(微孔滤器、孔径0.45pm)，将滤液用10%FCS-RPMI1640稀释至10倍和100倍，分别制备金合欢No.l热水提取物的浓度为10mg/ml以及lmg/ml的试验样品(浓度用相当于原材料的份来表示)。作为有效对照，使用将丝裂霉素C2mg用10。/。FCS-RPMI1640稀释而得到的50pig/ml溶液。(2)材料和方法将小鼠白血病细胞YAC-1(由理化学研究所细胞库提供)进行继代培养，将继代培养第4天的细胞用10。/。FCS-RPMI1640制备成lxl(^细胞/ml。将上述YAC-1细胞(lxl()S细胞/ml)950^1注入24孔板的各孔中，加入5(Hil上述制备的试验样品，搅拌，在37。C下培养3天。培养后，测定细胞数和存活率，求存活细胞数。(3)结果若添加金合欢No.l热水提取物的试验样品，则YAC-1细胞的增殖被抑制，特别是0.5mg/ml的浓度显示出比5.0mg/ml的浓度以及丝裂霉素C(浓度2.5(xg/ml)更大的YAC-1细胞增殖抑制作用(图l)。试验例2小鼠的肿瘤增殖抑制试验(1)试验方法按所需量称取制造例2所述的金合欢NO.I热水提取物，分散于60°C的水中，制备分别含有7.8mg/ml、15.6mg/ml以及31.3mg/ml的金合欢No.l热水提取物的试验饮料1、试验饮料2和试验饮料3。按所需量称取制造例2所述的金合欢No.l热水提取物并与市售饲料混合，制备分别含有15.6mg/g以及31.1mg/g的金合欢No.l热水提取物的试验饲料2和试验饲料3。将C3H/HeN雌小鼠按下表所述分成对照1组、试验1组、试验2组、试验3组以及阳性对照组。表l分组移植第1天第6天<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>*由于在移植第4天为止出现死亡例而变为4只。按图2所示的时间表进行试验。首先，对按上述分组得到的小鼠，根据AbeSetal.Gann7391-96(1982)及OhasiKetal.YakugakuZasshi113396-399(1993)中记载的方法，在鼠蹊部皮下移植同类肿瘤MM46乳癌细胞2><106个。从肿瘤移植那天开始，作为饮用水，使对照l组摄取自来水，使试验1组试验3组分别摄取试验饮料13。另外，使阳性对照组摄取自来水，并且在肿瘤移植后第7天、第11天以及第14天腹腔内给予6.25mg/kg香燕多糖。试验2组和试验3组的饮水量为0.2ml/日，明显少于其他组的饮水量4ml/日6ml/日，而且体重下降显著。因此，在肿瘤移植第7天将试验饮料2和3改为自来水。将试验2组的小鼠分成各5只的对照2组和试验2a组，将试验3组的小鼠分成各5只的对照3组和试验3a组。向对照2组和对照3组继续给予对照饲料。向试验2a组和试验3a组分别给予试验词料2和3来代替对照饲料。间隔3天或4天通过触觉观察移植到小鼠鼠蹊部皮下的肿瘤的增殖情况，一直观察4周，并测定肿瘤直径。此外，还测定存活天数和体重。在试验结束时，取出肿瘤，测定其湿重。(2)试验结果结果如表2、图3所示。另外，统计学检验采用Student's的t检验。表2对平均肿瘤直径的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>单位mmI表示与对照1组相比较的减少率(％)。II表示与对照2组相比较的减少率(％)。III表示与对照3组相比较的减少率(％)。*与对照3组比较，P<0.05。以上可知金合欢树皮抑制白血病细胞和乳癌的增殖，具有抗肿瘤活性。在试验l组和3a组中，从移植后第14日开始肿瘤受到抑制，证实金合欢树皮的抗肿瘤作用早期呈现。在试验2组和试验3组中，可见饮水量的减少，认为这是由高浓度含有金合欢树皮的试验饮料的强烈苦味所致。将试验饮料改成自来水，取而代之，给予试验饲料后，可见体重的恢复，因此认为其体重减少不是由金合欢树皮的毒性引起的。试验例3突变诱发性试验根据劳动省告示第77号(1988年9月1日)，实施突变诱发性试验。用156pg/板500(Hig/板的剂量的样品(制造例2的金合欢No.15热水提取物)进行试验，结果任一菌株的回复突变菌落数均未增加。试验例4微核试验按照常法，分析体内微核诱发能力的有无。向雄性ICR系小鼠以2000mg/kg、1000mg/kg及500mg/kg的每日剂量间隔24小时口服给予2次金合欢No.l热水提取物，在最终给予24小时后，制作微核标本。金合欢No.l热水提取物的任一剂量均未显示阳性。同时观察的总多染性红细胞相对于总红细胞的比没有一定的变动，与阴性对照组相比，未见红细胞的增殖抑制。试验例5小鼠急性毒性试验(口服给药)根据OECD(GuidelinesfortheTestingofChemicals401,1987)，用ICR系雌雄小鼠进行急性口服毒性试验。其结果是，金合欢No.l热水提取物的LD50值在雄小鼠中为4468mg/kg，在雌小鼠中为3594mg/kg。对制造例2的金合欢No.25热水提取物进行上述试验，得到同样的结果。试验例6大鼠反复给药毒性试验(口服给药)根据常法，用大鼠进行13周反复给药毒性试验。向Slc:SD大鼠的雌雄大鼠给予含有0.5%、1.5%以及5.0%金合欢No.l热水提取物的混合词料。其结果是，没有大鼠死亡的例子。在包括一般状态在内的检查中未见异常。试验例7人单次给药试验让32岁43岁的健康成年男性5名摄取1500mg(12片下述掺和例4的片剂)金合欢No.l热水提取物，在摄取前，摄取3小时后，摄取8小时后-摄取24小时后.摄取1周后，实施一般检査.血液学检査.血液生化学检查-尿检，没有成为临床问题的检测值的变动。也没有与片剂相关的有害现象。试验例8人4周连续给药试验让23岁44岁的健康成年男性25名分别摄取4周750mg/日(6片掺和例4的片剂)以及1000mg/日(8片掺和例4的片剂)下述掺和例4的金合欢No.l热水提取物。在各组的摄取前，摄取2周后，摄取4周后，摄取结束2周后，实施一般检查、血液检査、尿检。没有有问题的检测值的变动。也没有有害现象。掺和例1内服制剂的制备使用制造例4的金合欢树皮热水提取物乙醇馏分，按下述所示的组成，制备内服制剂。制造例4的提取物馏分1.0(重量％)乳糖30.0玉米淀粉60.0微晶纤维素8.0聚乙烯吡咯烷酮__共计100.013掺和例2宠物食品的制备使用制造例2的金合欢树皮热水提取物，按下述所示的组成制备宠物'1=1叩'制造例2的提取物1.0(重]燕麦88.0淀粉5.0食盐2.5鸡蛋3.0调味料_0,5共计100.0掺和例3片剂(点心)的制备使用制造例4的金合欢树皮热水提取物乙醇馏分，按下述所示的组成制备片剂(点心)。制造例4的提取物馏分1.0(重量％)柠檬酸1.0脱脂奶粉15.0蔗糖酯1.0香料0.5糖粉20.0ILM_^_共计100.0惨和例4片剂的制备使用制造例2的金合欢树皮No.l热水提取物，按下述所示的组成制备片剂。制造例2的金合欢树皮No.l热水提取物125(mg)庶糖酉旨9乳糖__共计300.0工业上利用的可能性本发明能得到肿瘤的预防和/或治疗用组合物。更详细而言，本发明的组合物对于各种良性肿瘤或恶性肿瘤的预防和/或治疗有用。这些组合物可以用于药品、非药品、化妆品、或健康食品、健康补助食品、特定保健用食品或营养补助食品等食品或动物饲料。权利要求1.一种肿瘤的预防和/或治疗用组合物，其特征在于，含有来自金合欢属树皮的物质。2.根据权利要求1所述的组合物，其中，金合欢属树皮是从由AcaciamearnsiiDeWild.、AcaciamangiumWilld.、AcaciadealbataLink、AcaciadecurrensWilld.以及AcaciapycnanthaBenth.构成的组中选择的树皮。3.根据权利要求1所述的组合物，其中，金合欢属树皮是AcaciamearnsiiDe^V^ild.或AcaciamangiumWilld.白勺丰对皮。4.根据权利要求13中任一项所述的组合物，其中，来自金合欢属树皮的物质是金合欢属树皮的提取物。5.根据权利要求13中任一项所述的组合物，其中，来自金合欢属树皮的物质是金合欢树皮多酚。6.根据权利要求5所述的组合物，其中，金合欢树皮多酚是缩合型丹宁。7.根据权利要求6所述的组合物，其中，縮合型丹宁的分子量为5003000。8.根据权利要求6或7所述的组合物，其中，縮合型丹宁是以黄烷-3-醇为基本骨架的黄烷醇类的聚合物。9.根据权利要求18中任一项所述的组合物，其中，相对于每lkg摄取者的体重或摄取动物的体重，作为有效成分量而每日经口摄取0.001glg的金合欢树皮多酚。10.根据权利要求19中任一项所述的组合物，其为食品。11.根据权利要求19中任一项所述的组合物，其为药品。12.根据权利要求19中任一项所述的组合物，其为动物饲料。13.根据权利要求19中任一项所述的组合物，其为非药品。14.根据权利要求19中任一项所述的组合物，其为化妆品。全文摘要本发明提供用于肿瘤的预防或治疗的组合物。该肿瘤的预防和/或治疗用组合物的特征在于含有来自金合欢属树皮的物质。文档编号C07D311/62GK101505777SQ20068005558公开日2009年8月12日申请日期2006年8月10日优先权日2006年8月10日发明者中本祐昌,小野启子申请人:株式会社沃达王