专利名称：利用大孔吸附树脂富集纯化花生根中白藜芦醇的方法
技术领域：
本发明涉及一种白藜芦醇的纯化方法，特别是涉及一种利用大孔吸附树脂富集纯化花生根中白藜芦醇的方法。
背景技术：
白藜芦醇是一种对人类健康有着显著保健作用的天然活性物质，已引起国际社会的普遍关注。经科学研究及临床应用证明，白藜芦醇具有抗癌、抗氧化以及防止血栓形成、保护肝脏和清除自由基等功效，对老年人的退化疾病如帕金森症、痴呆症、早老性痴呆、风湿性疾病等都有较好的预防和治疗作用；在化妆品方面，它具有祛除黄褐斑和增白的功效；它对脂类代谢和血小板的凝固亦有影响，可以防治冠心病和动脉粥样硬化等疾病。近年来，人们发现天然植物虎杖中含有大量的虎杖甙(又名白藜芦醇甙)和白藜芦醇，从中提取白藜芦醇并且取得了可喜的进展，如公开号为CN1341587A、名称为“一种从虎杖中制备白藜芦醇的方法”的专利申请中便公开了一种将虎杖作为原料来提取白藜芦醇的方法，但由于其原料虎杖为中药，原料来源较少，从中提取白藜芦醇存在与药争源。据报道花生根中也含有白藜芦醇，虽然含量比虎杖中要低，但原料来源丰富，价格低廉。在公开号为CN1709846A，名称为“花生根提取白藜芦醇的生产方法”的专利申请中便公开了将花生根经有机溶剂提取浓缩后经高压层析洗脱、精制得白藜芦醇产品的工艺流程。上述专利文献中的白藜芦醇提取工艺主要是经过有机溶剂直接浸泡萃取后经高压硅胶柱层析等步骤提取而成，其分离效果远远不如大孔吸附树脂处理后再进行硅胶柱层析分离的效果。
发明内容
本发明的目的在于克服常规技术提取率相对较低、提取纯度低等的缺点，提供一种利用大孔吸附树脂富集纯化花生根中白藜芦醇的方法。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案是一种利用大孔吸附树脂富集纯化花生根中白藜芦醇的方法，其步骤如下(1)将干花生根粉碎后用有机溶剂提取；(2)将经步骤(1)处理的花生根提取液抽滤，得提取液并减压回收溶剂的初提物；(3)将所获初提物用水加热溶解，加入乙酸乙酯萃取，用碱调其PH值为7.0～11.0，静置、抽滤、减压浓缩得白藜芦醇粗提物；(4)将所得白藜芦醇粗提物用大孔吸附树脂进行吸附；(5)用不同浓度乙醇对大孔吸附树脂进行洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集白藜芦醇段洗脱液；(6)将白藜芦醇段洗脱液浓缩回收乙醇，得白藜芦醇半成品，其含量为35％以上；(7)将所得白藜芦醇半成品上硅胶层析柱，并以乙酸乙酯、氯仿以不同体积比例进行洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集白藜芦醇段洗脱液；(8)将所收集到的白藜芦醇洗脱液，采用活性炭脱色、重结晶方法精制得白藜芦醇，其含量在98％以上。
所述的步骤(1)中，花生根粉碎后过10～80目筛再进行有机溶剂提取。
在所述的步骤(1)中，有机溶剂为丙酮、乙酸乙酯、10～100％乙醇中的一种或一种以上，提取时间为4～48小时。
所述的步骤(1)中，有机溶剂提取的方法为浸渍法、回流提取法、渗漉法、煎煮法、连续提取法中的一种或一种以上。
所述的步骤(1)中，加入有机溶剂的体积为花生根粉体积的5～20倍。
在所述的步骤(3)中，加入乙酸乙酯的量按体积计算为提取物水溶液的5～20倍，调节PH值所用的碱为氢氧化钠或氨水。
步骤(4)中所用的大孔吸附树脂为天津南开大学所生产的X-5、NKA-9、S-8、D3520、D4006、H103、D4020、AB-8和NKA-II型树脂中的一种，吸附为静态吸附或动态吸附。
步骤(5)中所述的洗脱为用10～90％的乙醇进行洗脱。
在步骤(5)和(7)中，所采用的检测方法均为薄层色谱法跟踪检测。
步骤(7)中所采用乙酸乙酯与氯仿的体积比为1～7∶1。
本发明应用大孔吸附技术分离纯化白藜芦醇，对白藜芦醇的吸附选择性良好，吸附快，解析也快，吸附容量较大；提取方便快捷，原料来源丰富，生产成本低廉，分离效果明显，提取纯度高，可以得到含量35％以上的白藜芦醇半成品和含量98％以上的白藜芦醇终产品，克服了常规提取率相对较低、提取纯度低等的缺点。
本发明选用理化性质稳定、表面积较大、交换速度较快、机械强度高、抗污染能力强、热稳定性能好的大孔吸附树脂，不溶于酸、碱及有机溶媒，对有机物选择性较好，不受无机盐类及强离子低分子化合物存在的影响，可以通过物理吸附从溶液中有选择地吸附白藜芦醇，吸附快，解析也快，吸附容量较大。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明做进一步的说明实施例1一种利用大孔吸附树脂富集纯化花生根中白藜芦醇的方法，其步骤如下(1)将干花生根粉碎后过60目筛，用花生根粉体积10倍的乙酸乙酯浸渍提取48小时；(2)将经步骤(1)处理的花生根提取液抽滤，得提取液并减压回收溶剂得初提物；(3)将所获初提物用水加热溶解，加入体积为提取物水溶液体积20倍的乙酸乙酯进行萃取，然后用氢氧化钠水溶液调其PH值为9.0，静置、抽滤、减压回收溶剂得白藜芦醇粗提物；(4)将所得白藜芦醇粗提物在大孔吸附树脂层析柱上进行吸附，所用的大孔吸附树脂为天津南开大学所生产的NKA-II型树脂；(5)用10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％的乙醇在大孔吸附树脂层析柱中依次进行梯度洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集白藜芦醇段洗脱液；(6)将白藜芦醇段洗脱液浓缩回收乙醇，得到含量35％以上的白藜芦醇半成品；(7)将所得白藜芦醇半成品上硅胶层析柱，并用乙酸乙酯、氯仿依次以1∶1、2∶1、3∶1、4∶1、5∶1、6∶1、7∶1的体积比进行梯度洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集白藜芦醇段洗脱液；(8)将所收集到的白藜芦醇洗脱液，采用活性炭脱色、重结晶等方法精制，得到含量98％以上的白藜芦醇。
实施例2一种利用大孔吸附树脂富集纯化花生根中白藜芦醇的方法，其步骤如下(1)将干花生根粉碎后过10目筛，用花生根粉体积20倍的丙酮浸渍12小时，然后回流提取4小时；(2)将经步骤(1)处理的花生根提取液抽滤，得提取液并减压回收溶剂得初提物；(3)将所得初提物用水加热溶解，加入体积为提取物水溶液体积10倍的乙酸乙酯进行萃取，然后用氨水调其PH值为7.0，静置、抽滤、减压浓缩得白藜芦醇粗提物；(4)将所得白藜芦醇粗提物用大孔吸附树脂进行吸附，所用的大孔吸附树脂为天津南开大学所生产的D4006型树脂；(5)用10％、30％、50％、70％、90％的乙醇对大孔吸附树脂进行洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集白藜芦醇段洗脱液；(6)将白藜芦醇段洗脱液浓缩回收乙醇，得到含量35％以上的白藜芦醇半成品；(7)将所得白藜芦醇半成品上硅胶层析柱，并用乙酸乙酯、氯仿依次以1∶1、2∶1、3∶1、4∶1、5∶1、6∶1、7∶1的体积比进行梯度洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集白藜芦醇段洗脱液；(8)将所收集到的白藜芦醇洗脱液，采用活性炭脱色、重结晶等方法精制，得到含量98％以上的白藜芦醇。
实施例3一种利用大孔吸附树脂富集纯化花生根中白藜芦醇的方法，其步骤如下
(1)将干花生根粉碎后过80目筛，用花生根粉体积15倍的75％乙醇回流提取6小时；(2)将经步骤(1)处理的花生根提取液抽滤，得提取液并减压回收溶剂得初提物；(3)将所获初提物用水加热溶解，加入体积为提取物水溶液体积10倍的乙酸乙酯进行萃取，然后用氢氧化钠水溶液调其PH值为11.0，静置、抽滤、减压回收溶剂得白藜芦醇粗提物；(4)将所得白藜芦醇粗提物在大孔吸附树脂层析柱上进行吸附，所用的大孔吸附树脂为天津南开大学所生产的NKA-9型树脂；(5)用20％、40％、60％、80％的乙醇在大孔吸附树脂层析柱中依次进行梯度洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集白藜芦醇段洗脱液；(6)将白藜芦醇段洗脱液浓缩回收乙醇，得到含量35％以上的白藜芦醇半成品；(7)将所得白藜芦醇半成品上硅胶层析柱，并用乙酸乙酯、氯仿依次以1∶1、2∶1、3∶1、4∶1、5∶1、6∶1、7∶1的体积比进行梯度洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集白藜芦醇段洗脱液；(8)将所收集到的白藜芦醇洗脱液，采用活性炭脱色、重结晶等方法精制，得到含量98％以上的白藜芦醇。
实施例4一种利用大孔吸附树脂富集纯化花生根中白藜芦醇的方法，其步骤如下(1)将干花生根粉碎后过40目筛，用花生根粉体积10倍的50％的乙醇滲漉提取24小时；(2)将经步骤(1)处理的花生根提取液抽滤，得提取液并减压回收溶剂得初提物；(3)将所获初提物用水加热溶解，加入体积为提取物水溶液体积10倍的乙酸乙酯进行萃取，然后用氨水调其PH值为9.0，静置、抽滤、减压回收溶剂得白藜芦醇粗提物；(4)将所得白藜芦醇粗提物在大孔吸附树脂层析柱上进行吸附，所用的大孔吸附树脂为天津南开大学所生产的H103型树脂；(5)用10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％的乙醇在大孔吸附树脂层析柱中依次进行梯度洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集白藜芦醇段洗脱液；(6)将白藜芦醇段洗脱液浓缩回收乙醇，得到含量35％以上的白藜芦醇半成品；(7)将所得白藜芦醇半成品上硅胶层析柱，并用乙酸乙酯、氯仿依次以1∶1、2∶1、3∶1、4∶1、5∶1、6∶1、7∶1的体积比进行梯度洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集白藜芦醇段洗脱液；(8)将所收集到的白藜芦醇洗脱液，采用活性炭脱色、重结晶等方法精制，得到含量98％以上的白藜芦醇。
实施例5一种利用大孔吸附树脂富集纯化花生根中白藜芦醇的方法，其步骤如下(1)将干花生根粉碎后过60目筛，用花生根粉体积10倍的丙酮连续提取4小时；(2)将经步骤(1)处理的花生根提取液抽滤，得提取液并减压回收溶剂得初提物；(3)将所获初提物用水加热溶解，加入体积为提取物水溶液体积15倍的乙酸乙酯进行萃取，然后用氢氧化钠水溶液调其PH值为10.0，静置、抽滤、减压回收溶剂得白藜芦醇粗提物；(4)将所得白藜芦醇粗提物用大孔吸附树脂进行吸附，所用的大孔吸附树脂为天津南开大学所生产的AB-8型树脂；(5)用15％、25％、35％、45％、55％、65％、75％、85％的乙醇对大孔吸附树脂进行洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集白藜芦醇段洗脱液；(6)将白藜芦醇段洗脱液浓缩回收乙醇，得到含量35％以上的白藜芦醇半成品；(7)将所得白藜芦醇半成品上硅胶层析柱，并用乙酸乙酯、氯仿依次以1∶1、2∶1、3∶1、4∶1、5∶1、6∶1、7∶1的体积比进行梯度洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集白藜芦醇段洗脱液；(8)将所收集到的白藜芦醇洗脱液，采用活性炭脱色、重结晶等方法精制，得到含量98％以上的白藜芦醇。
实施例6一种利用大孔吸附树脂富集纯化花生根中白藜芦醇的方法，其步骤如下(1)将干花生根粉碎后过40目筛，用花生根粉体积5倍的50％乙醇煎煮提取6小时；(2)将经步骤(1)处理的花生根提取液抽滤，得提取液并减压回收溶剂得初提物；(3)将所获初提物用水加热溶解，加入体积为提取物水溶液体积15倍的乙酸乙酯进行萃取，然后用氨水调其PH值为7.5，静置、抽滤、减压回收溶剂得白藜芦醇粗提物；(4)将所得白藜芦醇粗提物在大孔吸附树脂层析柱上进行吸附，所用的大孔吸附树脂为天津南开大学所生产的NKA-9型树脂；(5)用10％、30％、50％、70％、90％的乙醇在大孔吸附树脂层析柱中依次进行梯度洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集白藜芦醇段洗脱液；(6)将白藜芦醇段洗脱液浓缩回收乙醇，得到含量35％以上的白藜芦醇半成品；(7)将所得白藜芦醇半成品上硅胶层析柱，并用乙酸乙酯、氯仿依次以1∶1、2∶1、3∶1、4∶1、5∶1、6∶1、7∶1的体积比进行梯度洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集白藜芦醇段洗脱液；(8)将所收集到的白藜芦醇洗脱液，采用活性炭脱色、重结晶等方法精制，得到含量98％以上的白藜芦醇。
权利要求
1.一种利用大孔吸附树脂富集纯化花生根中白藜芦醇的方法，其特征在于，其步骤如下(1)将干花生根粉碎后用有机溶剂提取；(2)将经步骤(1)处理的花生根提取液抽滤，得提取液并减压回收溶剂得初提物；(3)将所获初提物用水加热溶解，加入乙酸乙酯萃取，用碱调其PH值为7.0～11.0，静置、抽滤、减压浓缩得白藜芦醇粗提物；(4)将所得白藜芦醇粗提物用大孔吸附树脂进行吸附；(5)用不同浓度乙醇水溶液对大孔吸附树脂进行洗脱，收集白藜芦醇段洗脱液；(6)将白藜芦醇段洗脱液浓缩回收洗脱剂，得白藜芦醇半成品；(7)将所得白藜芦醇半成品上硅胶层析柱，并以乙酸乙酯、氯仿以不同体积比进行洗脱，收集白藜芦醇段洗脱液；(8)将所收集到的白藜芦醇洗脱液进行精制得白藜芦醇。
2.根据权利要求1所述的利用大孔吸附树脂富集纯化花生根中白藜芦醇的方法，其特征是所述的步骤(1)中，花生根粉碎后过10～80目筛再进行有机溶剂提取。
3.根据权利要求1或2所述的利用大孔吸附树脂富集纯化花生根中白藜芦醇的方法，其特征是在所述的步骤(1)中，有机溶剂为丙酮、乙酸乙酯、10～100％乙醇中的一种或一种以上，提取时间为4～48小时。
4.根据权利要求3所述的利用大孔吸附树脂富集纯化花生根中白藜芦醇的方法，其特征是所述的步骤(1)中，有机溶剂提取的方法为浸渍法、回流提取法、渗漉法、煎煮法、连续提取法中的一种或一种以上。
5.根据权利要求4所述的利用大孔吸附树脂富集纯化花生根中白藜芦醇的方法，其特征是所述的步骤(1)中，加入有机溶剂的体积为花生根粉体积的5～20倍。
6.根据权利要求5所述的利用大孔吸附树脂富集纯化花生根中白藜芦醇的方法，其特征是在所述的步骤(3)中，加入乙酸乙酯的量按体积计为提取物水溶液的5～20倍，调节PH值所用的碱为氢氧化钠或氨水。
7.根据权利要求6所述的利用大孔吸附树脂富集纯化花生根中白藜芦醇的方法，其特征是步骤(4)中所述吸附为静态吸附或动态吸附；步骤(5)中所述的洗脱为用10～90％的乙醇水溶液进行洗脱。
8.根据权利要求7所述的利用大孔吸附树脂富集纯化花生根中白藜芦醇的方法，其特征是在步骤(5)和(7)中，洗脱过程中采用薄层色谱法跟踪检测。
9.根据权利要求8所述的利用大孔吸附树脂富集纯化花生根中白藜芦醇的方法，其特征是步骤(7)中所采用乙酸乙酯与氯仿的体积比为1～7∶1。
10.根据权利要求9所述的利用大孔吸附树脂富集纯化花生根中白藜芦醇的方法，其特征是在步骤(8)中，采用活性炭脱色、重结晶方法进行精制。
全文摘要
本发明涉及一种利用大孔吸附树脂富集纯化花生根中白藜芦醇的方法，包括以下步骤干花生根粉碎后用有机溶剂提取，提取液抽滤、回收溶剂得初提物，用水加热溶解，加入乙酸乙酯萃取，调pH值为7.0～11.0，静置、抽滤、减压浓缩，得到的白藜芦醇粗提物用大孔吸附树脂进行吸附，不同浓度乙醇洗脱，薄层色谱法跟踪检测，将收集的白藜芦醇段洗脱液浓缩回收乙醇，得到含量35％以上的白藜芦醇半成品，上硅胶层析柱，用不同体积比例的乙酸乙酯、氯仿进行梯度洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集的白藜芦醇段洗脱液采用活性炭脱色、重结晶等方法精制得到含量98％以上的白藜芦醇。本发明提取的白藜芦醇纯度高，提取方便快捷，原料来源丰富，生产成本低廉。
文档编号C07C37/00GK101074188SQ20071005423
公开日2007年11月21日 申请日期2007年4月17日 优先权日2007年4月17日
发明者黄纪念, 方杰, 侯传伟 申请人:河南省农科院农副产品加工研究所