专利名称：：介导癌细胞细胞毒性的人源化和嵌合抗trop-2抗体的制作方法
技术领域：
：本发明涉及诊断和治疗癌性疾病，具体地，涉及介导肿瘤细胞细胞毒性；和更具体地，涉及减轻癌性疾病的抗体(CDMAB)，任选与一种或多种CDMAB/化疗剂组合作为用于起始细胞毒性响应的工具的应用。本发明还涉及利用本发明CDMAB的结合测定。
背景技术：
：TROP-2是在大部分癌，以及一些正常人组织上表达的细胞表面糖蛋白。最初将其定义为由两种针对人绒毛膜癌细胞系BeWo产生的鼠单克隆抗体识别的分子，所述人绒毛膜癌细胞系BeWo识别人滋养层细胞上的抗原(Faulk1978)。其他研究者独立发现了相同的分子，这导致描述该相同抗原的多种名称。因此，TROP-2也称为GA733-1和上皮糖蛋白-l(EGP-l)(Basu1995,Fomaro1995)。TROP-2基因是无内含子的基因，认为其是由同源基因04733-2(也称为J:皮薪歪A"-2，五pC4M和7>cp-7)通过RNA中间体的反转录转座形成的。7T0尸-2基因已被定位在染色体lp32上(Calabrese2001)。TROP-2的蛋白质组分具有约35千道尔顿的分子量。其质量可以通过异源N-连接糖基化其胞外结构域而增加11-13千道尔顿。在胞外结构域中存在许多半胱氨酸残基，它们可以形成二硫键位点。TROP-2是蛋白激酶C，即Ca^依赖性蛋白激酶的底物，且胞内丝氨酸303残基显示为是磷酸化的(Basu1995)。还显示TROP-2与抗TROP-2抗体的交联转导钙信号，如由细胞质C,增高所示(Ripani1998)。这些数据支持信号转导是TROP-2的生理学功能，尽管至今仍未确定生理学配体。在一个报告中显示了TROP-2表达和癌症之间的联系，其中将770尸-2确定为是一组这样的基因中的一个成员，所述基因被报告为在利用cDNA微阵列技术进行的大规模基因表达分析中，与正常卵巢上皮相比在卵巢浆液乳头癌中最高度过表达(Santin2004)。近期研究，即通过定量实时RT-PCR分析74份结肠直肠人癌症样品和通过免疫组化分析这些样品中的34份，检验了TROP-2在癌症和正常患者切片上的表达。对比正常患者样品，发现TROP-2更高度表达在癌症中，且该研究进一步证明TROP-2表达水平和生物学侵占性之间的相关性。发现高水平TROP-2与不良预后、患者存活减少和肝转移频率增高有关(Ohmachi2006)，这提示TROP-2可以有效用作预后指示剂并且可以是引人注目的治疗耙标。通过利用许多不同TROP-2抗体的免疫组化(IHC)和流式细胞计数法研究阐明了TROP-2的表达特征。抗TROP-2抗体162-25.3和162-46.2通过用人绒毛膜癌细胞系BeWo免疫小鼠产生，并研究其与一系列肿瘤和淋巴样细胞系和外周血单核细胞的反应性。在该研究中，这两种抗体似乎都是滋养层特异性的，染色检测的4种绒毛膜癌细胞系中的3种，而在间接免疫荧光FACS测定中没有其他淋巴样或肿瘤细胞系(代表纤维肉瘤、子宫颈肉瘤、结肠癌、黑素瘤、成神经细胞瘤、红白血病)染色。另外，没有正常外周血细胞染色。检测抗体对福尔马林-固定的石蜡包埋的胎盘组织切片和肝、肾、脾、胸腺和淋巴结组织冷冻正常切片的染色。胎盘组织切片被这两种抗体染色，而其他正常组织无染色(Lipinski1981)。的确报告了这两种抗体在体外诊断研究中的应用。抗TROP-2抗体MOvl6通过用不良分化的卵巢癌OvCa4343/83的粗膜制剂免疫小鼠产生。检测MOvl6与一系列良性和恶性卵巢肿瘤冷冻组织切片的反应性。MOvl6与54种恶性卵巢肿瘤中的31种和16种良性卵巢肿瘤中的2种反应。在检测的5种粘液卵巢肿瘤中，MOvl6完全不反应。还检测了MOvl6与非卵巢恶性肿瘤冷冻切片的反应性，其中发现其结合189个乳腺癌切片中的117个和18个肺癌切片中的12个。MOvl6在检测的16种非上皮肿瘤(包括脂肪肉瘤、软骨肉瘤、内皮瘤、组织细胞瘤和无性细胞瘤)上完全不反应。当在冷冻正常组织切片上检测时，MOvl6与乳腺、胰腺、肾和前列腺切片反应。报告MOvl6的反应性在肺、脾、皮肤、卵巢、甲状腺、腮腺、胃、喉、子宫和结肠切片上是阴性的，尽管未报告所用组织切片的数量。作者注意到因为MOvl6对石蜡包埋的组织无反应性，所以使用冷冻组织切片(Miotti1987)。也仅报告该抗体在体外诊断研究中的应用。抗TROP-2抗体Rs7-3G11(RS7)通过用源自手术摘除的人肺原发鳞状细胞癌的粗膜制剂免疫小鼠产生。IHC用于检验RS7在人肿瘤和正常组织冷冻切片上的染色。RS7结合40个代表乳腺癌、结肠癌、肾癌、肺癌、前列腺癌和鳞状细胞癌的切片中的33个。在正常组织中，RS7结合20个乳腺、结肠、肾、肝、肺和前列腺组织切片中的16个，而5个脾组织切片中没有一个被染色。在该研究中，作者注意到肿瘤中抗原密度似乎高于正常上皮组织中(Stein1990)。RS7组织特异性的另一项研究在肿瘤和正常组织上进行。RS7在一组冷冻肿瘤切片上检测并与77个代表肺、胃、肾、膀胱、结肠、乳腺、卵巢、子宫和前列腺肿瘤的切片中65个结合。不存在对5个检测的淋巴瘤的结合。RS7在一组85个由总共24种组织类型组成的冷冻人正常组织切片上检测。13种正常组织(肺、支气管、气管、食道、结肠、肝、胰腺、肾、膀胱、皮肤、甲状腺、乳腺和前列腺)的39个切片被RS7染色。该研究的作者注意到在其中观察到阳性染色的组织中，反应性通常局限于上皮细胞，主要在导管或腺体中。还注意到，该研究限于冷冻切片，因为观察到RS7在福尔马林固定的石蜡包埋切片上无反应性(Stein1993)。多克隆抗TROP-2抗体通过用与人TROP-2细胞质结构域的169-182之间氨基酸位置相对应的合成肽免疫小鼠制备。该多克隆抗体在组织阵列载玻片上检测，所述组织阵列载玻片含有福尔马林固定的人食道增生和癌组织。55个癌样本中的IO个表现出该多克隆抗体的重度染色，而非常微弱地染色适度增生组织，这说明表达水平可能与恶性转化有关(Nakashima2004)。总之，由不同抗TROP-2抗体获得的IHC反应性模型是一致的。癌症中的表达主要见于癌中，且大部分癌是反应性的。在正常组织中，表达似乎仅限于上皮来源的细胞，且存在一些这样的证据，即癌染色比相应正常上皮组织染色更强。除用于IHC研究外，在体内模型中用由裸鼠异种移植模型中的肿瘤耙向研究组成的最初实验检测抗体RS7。显示".注射的放射性标记的RS7特异性累积在携带Calu-3(肺腺癌)或GW-39(结肠癌)肿瘤的小鼠肿瘤中(Stein1990)。进行其他研究，以研究放射性标记的RS7在异种移植系统中的生物学分布和研究RS7作为免疫缀合物的治疗潜力。在该研究中，在携带Calu-3人肺腺瘤异种移植物的裸鼠中研究1311标记的RS7F(ab，)2的治疗功效。用Calu-3细胞接种小鼠后3周，当肿瘤达到约0.3-0.9克尺寸时，用1.0mCi1311-RS7-F(ab，》或1.5mCi131I-RS7-F(ab，)2单次剂量/.v.处理6-7只小鼠的组并与相似的未处理对照小鼠组比较。1.0mCi131I-RS7-F(ab，)2单次剂量导致肿瘤生长抑制约5周，而1.5mCi1311-RS7-F(ab，)2单次剂量导致肿瘤退化，且平均肿瘤尺寸不超过治疗前的尺寸直到放射性抗体注射后第8周。接受1.5mCi^I-RS7-F(ab')2剂量的小鼠经历平均体重减轻18.7%,这说明存在与处理有关的毒性。在该研究中，未检测用裸RS7或RS7的F(ab，)2片段处理的作用(Stein1994a)。进行另一项研究，以检测131I-RS7在MDA-MB-468乳腺癌异种移植模型中的功效。10只携带约0.1cm3MDA-MB-468肿瘤的小鼠组用250微居里131I-RS7或250微居里131I-Ag8(同种型匹配对照抗体)单次剂量"处理。6只小鼠组用单次剂量的30微克未标记RS7或Ag8进行"处理。在用131I-RS7处理的动物中观察到肿瘤的完全退化(除一只具有瞬间再现肿瘤的动物外)，且持续了一段11周的观察时期。还在131I-Ag8处理的小鼠中观察到肿瘤退化，尽管仅在2周-5周之间观察到，肿瘤在其余研究过程中持续或继续生长。接受未标记的RS7或Ag8的小鼠的肿瘤生长不受抑制且RS7处理小鼠的平均肿瘤体积与Ag8处理的小鼠相比似乎不存在任何差别。另外两组10只携带约0.2-0.3cm3的较大MDA-MB-468肿瘤的小鼠用275微居里131I-Rs7或275微居里131Ag8的略高单次剂量处理，并与相似的未处理小鼠组比较。每周测量肿瘤体积，进行15周。尽管在该情形中131I-RS7处理小鼠与未处理小鼠相比肿瘤生长存在显著差别，但是131I-RS7与131I-Ag8处理小鼠相比肿瘤生长不存在显著差别，这说明一部分功效可以归因于辐射的非特异性作用。在含有0.2-0.3cm3肿瘤的小鼠中未检测到未标记的抗体(Shih1995)。存在许多检验RS7作为免疫缀合物的功效的另外的研究，其目的在于为放射性免疗法选择最佳放射性标记(Stein2001a,Stein2001b,Stein2003)。还制备了RS7人源化形式；然而，其仅在临床前异种移植模型中作为放射性缀合物检测(Govindan2004)。这些研究显示与前述关于RS7的研究类似的阳性作用，然而，在一项研究中，即使以以前确定的最大可耐受剂量递送放射性标记的RS7，在一些小鼠中出现毒性导致死亡(Stein2001a)。尽管在这些研究中小鼠中异种移植肿瘤的有效治疗使用放射性标记的RS7获得，但是没有评估裸RS7。用神经氨酸酶预处理的H3922人乳腺癌细胞免疫小鼠产生抗TROP-2单克隆抗体BR110(如美国专利号5,840,854中公开地，参考现有专利部分)。通过免疫组织学，利用人了冷冻组织样本，BR110显示出与广泛范围的人癌性样本包括肺、结肠、乳腺、卵巢、肾、食道、胰腺、皮肤、肺和扁桃体反应。未检测人正常组织切片。体外研究证明BR110在人癌性细胞系H3396或H3922上无ADCC或CDC活性。分析BR110-免疫毒素细胞毒性的体外研究在人癌细胞系H3619,H2987,MCF-7,H3396和H2981上进行。关于检测的细胞系的ECso分别是0.06,0.001,0.05,0.09和>5微克/mL。未公开关于裸BR110抗体的细胞毒性数据。未公开关于裸或免疫缀合BR110的体内数据。产生许多另外的靶向TROP-2的抗体，诸如MR54,MR6和MR23，其通过使用卵巢癌细胞系Colo316免疫小鼠产生(Stein1994b)，和抗体T16，其通过用T24膀胱癌细胞系免疫小鼠产生(Fradet1984)。这些抗体的应用受到TROP-2抗原和细胞系的生物化学特征和组织表达研究的限制。不存在关于这些抗体，体外或体内的，抗癌功效的报告。RS7是唯一在临床前癌症模型中检测治疗功效的抗体，其应用局限于放射性同位素的载体。不存在关于任何裸TROP-2抗体在体外或体内临床研究中或在临床前癌症模型中表现出治疗功效的报告。作为癌症治疗的单克隆抗体患有癌症的每个个体都是独特的，并且患有与其它癌症不同的癌症，正如个人的身份一样。除此之外，目前的治疗法以相同的方法治疗患有同种类型的癌症、处于相同的阶段的所有患者。这些患者中至少有30%将在一线治疗中失败，由此导致以后几轮的治疗和治疗失败、转移、以及最终死亡的增加的可能性。较好的治疗方法应该是对于特定的个体量身定制的治疗法。目前本身适于量身定制的唯一的治疗法是手术。化疗和放射治疗不能对患者进行量身定做，并且手术本身在大部分情形中不足以产生治愈。随着单克隆抗体的出现，由于每种抗体可以针对单个表位，则开发量身定制的治疗法的方法的可能性变得更加现实。此外，产生针对独特限定特定个体的肿瘤的表位群的抗体组合也是可能的。已经认识到在癌症细胞和正常细胞之间的显著不同是在于癌症细胞包含对转化的细胞特异的抗原，科学团体长期认为单克隆抗体可以设计成通过特异性与这些癌症抗原结合而特异性靶向转化的细胞；因此产生这样的信心单克隆抗体可以作为"魔力子弹(MagicBullets)"来消除癌细胞。然而，现在广泛认识到，没有任何一种单个的单克隆抗体可以在所有癌症情形中起作用，并且单克隆抗体可以被开发为一类作为靶向癌症治疗。己经表明按照本文公开的发明的教导分离的单克隆抗体以有益于患者的方式减轻癌性疾病过程，例如通过减少肿瘤负荷的方式，并且在本文中应该不同地称为减轻癌性疾病的抗体(CDMAB)或"抗癌"抗体。目前，癌症患者通常具有很少的治疗选择。对癌症治疗法的管理方法已经在全球存活和发病率中产生了改善。然而，对于特定的个体，这些改善的统计学没有与他们个人情况的改善必然相关。因此，如果采用能够使执业者独立于处于同一团体中的其他患者而治疗每种肿瘤的方法，这将允许产生仅使治疗适合该名个体的独特方法。这样的治疗疗程将理想地增加治愈率，并且产生更好的结果，由此满足长期渴望的需要。历史上，多克隆抗体己经进行了应用，在治疗人类癌症中具有有限的成功。己经使用人血浆治疗淋巴瘤和白血病，但是存在很少延长的好转或反应。此外，与化疗相比，缺少再现性，并且没有其它的益处。实体瘤诸如乳腺癌、黑素瘤和肾细胞癌也己经使用人血液、黑猩猩血清、人血浆和马血清进行治疗，具有相对不可预知的和无效的结果。对于实体瘤，已经存在单克隆抗体的许多临床试验。在20世纪80年代，对于人乳腺癌存在至少4种临床试验，其使用针对特异抗原的抗体或基于组织选择性，在至少47名患者中仅产生一名响应者。直到1998年才出现使用人源化的抗Her2/neu抗体(Herceptir^)与顺铂组合的成功的临床试验。在该试验中，评估37名患者的响应，其中约四分之一具有部分响应率，另外四分之一具有较小或稳定的疾病发展。在所述响应者中对发展的中值时间是8.4个月，中值响应持续5.3个月。Herceptin⑧在1998年首次核准与Taxof组合用于一线应用。临床研究结果显示，与仅接受Taxol⑧的组(3.0个月)相比，对于接受抗体治疗加Taxol⑧的那些的疾病发展的中值时间(6.9个月)增加。在中值存活中也存在稍微的增加；对于Herceptii^加Taxol②治疗组相对于单独的Taxol②治疗组为22个月相对于18个月。另外，与单独的Taxof相比较，在抗体加Taxof组合组中，在完全(8%相对于2%)和部分响应者(34%相对于15%)的数量中存在增加。然而，与单独的Taxof治疗相比较，用Herceptii^和Taxof治疗导致更高的心脏中毒的发生(分别为13%相对于1%)。此外，Herceptin⑧治疗法只对过量表达(通过免疫组化(IHC)分析确定)人表皮生长因子受体2(Her2/neu)的患者，患有转移乳腺癌的患者的大约25%中有效；所述人表皮生长因子受体2是一种受体，其目前具有未知的功能或生物学重要的配体。因此，对于患有乳腺癌的患者仍然存在大量未满足的需求。即使可以受益于Herceptin⑧治疗的那些仍然需要化疗，并且因此仍然必须处理，至少在某种程度上，处理这种治疗的副作用。研究结肠直肠癌的临床试验包括针对糖蛋白和糖脂靶点的抗体。抗体如17-lA，其对于腺癌具有某种特异性，已经在六十多名患者中进行了2期临床试验，仅有l名患者具有部分响应。在其它试验中，在使用额外的环磷酰胺的方案中，使用17-1A在52名患者中仅产生1例完全响应和2例较小的响应。迄今为止，17-lA的III期临床试验尚未表现出作为in期结肠癌的辅助治疗的提高的功效。最初核准用于成像的人源化鼠单克隆抗体的应用也没有产生肿瘤衰减。仅在最近，使用单克隆抗体的结肠直肠癌临床研究产生了一些积极的结果。在2004年，ERBITII^核准用于患有表达EGFR的转移结肠直肠癌的患者的二线治疗，所述患者对基于伊立替康的化疗不起反应(refractory)。来自两组(two-arm)II期临床研究和单组研究的结果表明，￡朋汀1^@与伊立替康组合分别具有23%和15%的响应率，疾病发展的中值时间分别为4.1个月和6.5个月。来自同一两组II期临床研究和另一单组研究的结果表明，仅用ERBITUX⑧治疗分别导致11%和9%的响应率，17疾病发展的中值时间分别为1.5个月和4.2个月。因此，在瑞士和美国，ERBITUX^与伊立替康组合治疗，并且在美国，单独的ERBITUX⑧治疗，己经被核准作为在一线伊立替康治疗中失败的结肠癌患者的二线治疗。因此，如同Herceptin⑧，在瑞士只核准治疗作为单克隆抗体和化疗的组合。另外，在瑞士和美国只核准治疗作为二线治疗用于患者。此外，在2004年，AVASTIN②被核准与静脉内基于5-氟尿嘧啶的化疗组合用作转移性结肠直肠癌的一线治疗。III期临床研究结果表现出与仅用5-氟尿嘧啶治疗的患者相比，用八￥八8丁^@加5-氟尿嘧啶治疗的患者的中值存活延长(分别为20个月相对于16个月)。然而，同样如同Herceptir^和ERBITUX,治疗仅被核准作为单克隆抗体和化疗的组合。对于肺癌、脑癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌和胃癌还继续存在极差的结果。对于非小细胞肺癌的最有希望的最近的结果来自II期临床试验，其中治疗包括与杀细胞药多柔比星缀合的单克隆抗体(SGN-15;dox-BR96,抗-唾液酸(sialy1)-LeX)，其与化疗药TAXOTERE⑧组合。TAXOTERE⑧是唯一一种FDA核准的化疗药，用于肺癌的二线治疗。原始数据显示与单独的TAXOTERE,目比提高的整体存活时间。在本研究征募的62名患者中，三分之二接受SGN-15与TAXOTERE⑧组合，而其余三分之一接受单独的TAXOTERE。对于接受SGN-15与TAXOTERE②组合的患者，中值整体存活时间是7.3个月，而与之比较的接受单独的TAXOTERE②的患者是5.9个月。对于接受SNG-15加TAXOTERE⑧的患者的整体存活时间为1年和18个月的分别为29%和18%，而与之比较的对于接受单独的TAXOTERE的患者分别为24%和8%。计划了进一步的临床试验。临床前，对于黑素瘤使用单克隆抗体己经存在一些有限的成功。这些抗体中很少已经达到临床试验阶段，并且迄今为止没有一种己经被核准或在III期临床试验中表现出有利的结果。治疗疾病的新药的发现受到在30,000种己知的基因产物中缺少相关靶点的鉴定的阻碍，所述30,000种己知的基因可能有助于疾病的发病机理。在肿瘤学研究中，潜在的药物靶点通常由于它们在肿瘤细胞中过量表达的事实来简单地选择。然后筛选这样鉴定的靶点与多种化合物的相互作用。在潜在的抗体治疗的情形中，这些候选化合物通常衍生于根据Kohler和Milstein所述的基本原理(1975,自然(Nature),256，495-497，Kohler和Milstein)的单克隆抗体产生的常规方法。从用抗原(例如，全细胞，细胞级分，纯化的抗原)免疫的小鼠收集脾细胞，并且与无限增殖的杂交瘤配偶体融合。筛选所得到的杂交瘤，并且针对最亲和性地与所述靶点结合的抗体的分泌进行选择。针对癌细胞的许多治疗和诊断抗体，包括Herceptin和RITUXIMAB，已经使用这些方法产生，并且基于它们的亲和性进行选择。这种方法中的缺点是两方面的。首先，对治疗或诊断抗体结合选择适当的耙点受到关于组织特异性致癌过程的极少的知识以及用于鉴定这些靶点的所得到的过于单纯化的方法的限制，所述过于单纯化的方法如通过过量表达进行选择。第二，与受体以最大的亲和力结合的药物分子通常具有起始或抑制信号的最大可能性的假设可能不总是这种情形。除了对于乳腺癌和结肠癌的治疗的一些进展之外，作为单一药剂或共同治疗的有效抗体治疗的鉴定和开发对于所有类型的癌症尚是不充足的。现有专利美国专利号5,750,102公开这样一种方法，其中来自患者肿瘤的细胞用MHC基因转染，所述MHC基因可克隆自来自该患者的细胞或组织。然后，使用这些转染的细胞免疫该患者。美国专利号4,861,581公开这样一种方法，所述方法包括下列步骤获得单克隆抗体，所述单克隆抗体对哺乳动物的肿瘤细胞和正常细胞的内部细胞成分是特异性的，但是对外部成分不是特异性的；标记所述单克隆抗体，使所标记的抗体与己经接受治疗的哺乳动物组织接触以杀死肿瘤细胞；并且通过测量所标记的抗体与退化的肿瘤细胞的内部细胞成分的结合而确定治疗的功效。在制备针对人细胞内抗原的抗体时，专利权所有人认为恶性细胞代表这样的抗原的便利的来源。美国专利号5,171，665提供一种新型抗体以及其生产方法。具体地，该专利教导形成这样的单克隆抗体，所述单克隆抗体具有与人肿瘤例如结肠和肺相关的蛋白质抗原的那些强结合而与正常细胞以弱得多的程度结合的能力。美国专利号5,484,596提供一种癌症治疗方法，所述方法包括从人癌19症患者手术取出肿瘤组织，处理所述肿瘤组织以获得肿瘤细胞，辐射所述肿瘤细胞以成为存活的但非肿瘤发生性的，并且使用这些细胞制备用于患者的疫苗，所述疫苗能够抑制原发瘤的复发而且同时抑制转移。该专利教导开发与肿瘤细胞的表面抗原反应的单克隆抗体。如在第4栏45行等描述的，专利权所有人在开发用于人肿瘤形成的表达单克隆抗体的活性特异性免疫治疗中使用自生的肿瘤细胞。美国专利号5,693,763教导一种糖蛋白抗原，其是人癌症特有的，并且不依赖于起源的上皮组织。美国专利号5,783,186涉及在表达Her2的细胞中诱导程序性细胞死亡的抗-Her2抗体，产生所述抗体的杂交瘤细胞系，使用所述抗体治疗癌症的方法和包括所述抗体的药物组合物。美国专利号5,849,876描述了用于产生针对黏蛋白抗原的单克隆抗体的新杂交瘤细胞系，所述黏蛋白抗原由肿瘤和非肿瘤组织来源纯化。美国专利号5,869,268涉及产生人淋巴细胞的方法，所述人淋巴细胞产生对目的抗原特异性的抗体，产生单克隆抗体的方法，以及由所述方法产生的单克隆抗体。该专利特别涉及有效用于癌症诊断和治疗的抗-HD人单克隆抗体的生产。美国专利号5，869,045涉及与人癌症细胞反应的抗体、抗体片段、抗体缀合物和单链免疫毒素。这些抗体作用的机制是两面性的，原因在于分子与在人癌症表面上存在的细胞膜抗原反应，并且此外，原因在于所述抗体具有在癌症细胞内部内在化的能力，随后结合，使它们特别有效用于形成抗体-药物和抗体-毒素缀合物。在它们的未修饰形式中，所述抗体还在特定的浓度表现出细胞毒性特征。美国专利号5,780,033公开自体抗体用于肿瘤治疗和预防的应用。然而，这种抗体是来自年老的哺乳动物的抗核自体抗体。在这种情形中，认为该自体抗体是在免疫系统中发现的一种自然抗体类型。因为该自体抗体来自"年老的哺乳动物"，不存在所述自体抗体实际来自被治疗的患者的要求。另外，该专利公开了来自年老的哺乳动物的天然和单克隆抗核自体抗体，和产生单克隆抗核自体抗体的杂交瘤细胞系。美国专利号5,840,854公开针对GA733-1的特异性抗体BR110。该专利公开BR110作为免疫毒素缀合物的体外功能。没有公开关于该抗体作为裸抗体的体外功能。也没有公开该抗体的体内功能。美国专利号6,653,104要求免疫毒素-缀合抗体，包括但不仅限于RS7，其针对许多抗原，包括但不仅限于EGP-1。免疫毒素受到那些处理ribonucleolytic活性的限制。然而，实施例公开只有特异性免疫毒素-缀合抗体，LL2，针对CD22。该申请中未公开RS7的体外或体内功能。美国申请号20040001825A1公开针对EGP-1的特异性抗体，RS7。该申请公开RS7作为放射性标记的缀合物的体外功能。未公开该抗体作为裸抗体的体外功能。该申请还公开由顺序施用的放射性标记的和未标记的缀合物产生的RS7的体内功能。然而，该研究仅限于一名患者，且不知任何观察到的功能是否归因于未标记的抗体。不存在由施用裸抗体产生的RS7的体内功能。发明概述本申请利用在U.S.6,180,357专利中教导的生产患者特异的抗癌抗体的方法分离杂交瘤细胞系，所述杂交瘤细胞系编码减轻癌性疾病的单克隆抗体。这些抗体可以针对一种肿瘤特异性制备，并且因此使得癌症治疗的量身定制成为可能。在本申请的情形中，具有杀伤细胞(细胞毒性)或抑制细胞生长(抑制细胞)特性的抗癌抗体在下文中称为细胞毒性的。这些抗体可以用于辅助癌症的分阶段和诊断，并且可以用于治疗肿瘤转移。这些抗体还可以用于通过预防治疗的方式用于预防癌症。与根据传统药物发现样本(paradigm)产生的抗体不同，以这种方式产生的抗体可以耙向这样的分子和途径，所述分子和途径先前没有显示出对于恶性组织的生长和/或存活是必需的。此外，这些抗体的结合亲和力适合起始可能不易受更强的亲和性相互作用影响的细胞毒性事件的需要。此外，将标准化疗形式如放射性核素与本发明的CDMAB缀合也在本发明的范围内，由此集中在所述化疗剂的应用。所述CDMAB也可以与毒素、细胞毒性部分、酶例如生物素缀合的酶、细胞因子、干扰素、靶标或报告部分或造血细胞缀合，由此形成抗体缀合物。所述CDMAB可以单独或与一种或多种CDMAB/化疗剂组合使用。个体化的抗癌治疗的前景将在患者的管理方式中引起改变。可能的临床方案(scenario)是在出现时获得肿瘤样品，并且储存。从该样品，肿瘤可以用一组预先存在的减轻癌性疾病的抗体而确定类型。将患者进行常规分阶段，但是可用的抗体可以用于将患者进一步分阶段。患者可以立即用现有的抗体进行治疗，并且使用本发明描述的方法或通过利用噬菌体展示文库与本发明公开的筛选方法联合，可以产生一组对肿瘤特异性的抗体。由于其它肿瘤可能携带一些与被治疗的肿瘤相同的表位，故将产生的所有抗体加入到抗癌抗体文库中。按照该方法产生的抗体可以有效用于治疗许多患有与这些抗体结合的癌症的患者中的癌性疾病。除了抗癌抗体之外，患者可以选择接受目前推荐的治疗作为多形式治疗方案的一部分。通过本方法分离的抗体对非癌症细胞是相对无毒的事实允许以高剂量抗体组合，单独的，或与常规治疗组合。高治疗指数还允许在短时间范围内再次治疗，这应该降低耐受治疗的细胞出现的可能性。如果患者对初始的治疗疗程没有反应或发展了转移，则可以重复产生针对肿瘤的特异性抗体的方法，进行再次治疗。此外，所述抗癌抗体可以与从该患者获得的红血细胞缀合，并且重新输注用于治疗转移。对于转移癌存在很少有效的治疗，并且转移通常预示着导致死亡的最坏结果。然而，转移癌通常充分地血管化，通过红血细胞递送抗癌抗体可以具有将所述抗体集中在肿瘤部位的作用。甚至在转移之前，大部分癌症细胞依赖于宿主的血液供应它们的生存，并且与红细胞缀合的抗癌抗体还可以有效针对原位肿瘤。备选地，所述抗体可以与其它造血细胞缀合，如淋巴细胞、巨噬细胞、单核细胞、天然杀伤细胞等。存在5类抗体，并且每类与由其重链赋予的功能相关。通常认为由裸抗体杀伤癌症细胞通过抗体依赖性细胞毒作用(ADCC)或补体依赖性细胞毒性(CDC)进行介导。例如，鼠lgM和IgG2a抗体可以通过结合补体系统的C-1成分而激活人补体，由此激活可以导致肿瘤消退的补体激活经典途径。对于人抗体，最有效的补体激活抗体通常是IgM和IgGl。IgG2a和lgG3同种型的鼠抗体有效募集具有Fc受体的细胞毒性细胞，其将导致由单核细胞、巨噬细胞、粒细胞和某些淋巴细胞进行的细胞杀伤。IgGl和IgG3同种型的人抗体介导ADCC。通过Fc区域介导的细胞毒性需要存在效应细胞、其相应受体、或蛋白质，例如NK细胞、T-细胞和补体。在缺乏这些效应子机制的条件下，抗体的Fc部分是无活性的。抗体的Fc部分可以赋予这样的特性，即影响抗体体内药物代谢动力学，但在体外其是无效的。抗体介导的癌症杀伤的另一种可能的机制可以通过使用催化细胞膜中的不同化学键的水解的抗体以及其相关的糖蛋白或糖脂，即所谓的催化抗体进行。存在3种抗体-介导的癌症细胞杀伤的其它机制。第一种是使用抗体作为疫苗来诱导机体产生针对存在于癌症细胞上的推定的抗原的免疫反应。第二种是使用这样的抗体，所述抗体靶向生长受体，并且干扰它们的功能，或下调所述受体，以致有效地丧失其功能。第三种是所述抗体对细胞表面部分的直接连接的作用，所述细胞表面部分的直接连接可能导致直接的细胞死亡，诸如死亡受体如TRAILRl或TRAILR2的连接，或整联蛋白分子如aV(33的连接等。癌症药物的临床应用基于所述药物在对患者的可接受的危险模式下的益处。在癌症治疗中，通常是在益处之后最追求生存，然而，除了延长生命之外，还存在许多其它公认的益处。这些其它的益处，其中治疗没有不利地影响生存，包括症状减轻，针对不利事件的保护，复发时间的延长或没有疾病的生存，并且延长发展的时间。这些标准通常被接受，并且管理团体如美国食品及药品管理局(F.D.A.)核准产生这些益处的药物(Hirschfeld等.肿瘤学/血液学的重要综述(CriticalReviewsinOncology/Hematolgy)42:137-1432002)。除了这些标准之外，公认还存在其它的可以预示这些类型的益处的终点(endpoint)。部分地，由美国RD.A.授予的加速的核准流程承认存在可能预测患者益处的替代品。到2003年年末，在这种流程下已经核准了16种药物，并且这些中有4种已经继续获得了完全的核准，即，随后的研究已经表明由替代品终点预测的直接的患者益处。确定药物在实体瘤中的作用的一个重要的终点是通过测量针对治疗的响应而评估肿瘤负荷(Therasse等.国家癌症研究所杂志(JournaloftheNationalCancerInstitute)92(3):205-2162000)。关于所述评估的临床标准(RECIST标准)已由癌症国际专家组实体瘤工作组的响应评估标准公布。与适当的对照组相比较，对肿瘤负荷具有证明的作用的药物，如由RECIST标准所述的目标响应所示，最终倾向于产生直接的患者益处。在临床前设定中，肿瘤负荷通常更直接进行评估和记录。因为临床前研究可以转换成临床设定，在临床前模型中产生延长的生存的药物具有最大的预测临床用途。与产生针对临床治疗的积极响应类似，在临床前设定中减少肿瘤负荷的药物还可能对疾病具有显著的直接影响。尽管延长生存是在癌症药物治疗的临床结果后最追求的，但是存在其它的益处，其具有临床应用，并且清楚地，可能与疾病发展的延迟、延长的生存或二者相关的肿瘤负荷减少还可以导致直接的益处和具有临床影响(Eckhardt等.发展的治疗学目标化合物的临床试验设计的成功与失败(DevelopmentalTherapeutics:SuccessesandFailuresofClinicalTrialDesignsofTargetedCompounds);ASCO教育书，第39次年会，2003,第209-219页)。充分利用U.S.6,180,357的方法，并如美国专利申请S.N.11/709,676所公开地，将其每篇的内容通过参考引入本文，在用来自人卵巢肿瘤组织的细胞免疫小鼠后，获得鼠单克隆抗体，AR47A6.4.2。AR47A6.4.2抗原在来自不同组织来源的广泛范围的人细胞系的细胞表面上表达。卵巢癌细胞系OVCAR-3在体外易受AR47A6.4.2的细胞毒性作用的影响。AR47A6.4.2在体外针对人癌细胞的细胞毒性的结果通过证明其在体内的抗肿瘤活性得到进一步扩展(如S.N.ll/709，676中公开地)。AR47A6.4.2在人胰腺癌的体内预防性BxPC-3模型中抑制肿瘤生长并减小肿瘤负荷。在植入后第49天，处理的最后一天，AR47A6.4.2处理组中的平均肿瘤体积是缓冲液对照处理组的53%(p<0.05)。在整个研究过程中不存在临床毒性迹象。总之，AR47A6.4.2在人胰腺癌异种移植模型中是良好耐受的且减小肿瘤负荷。为了进一步确定AR47A6.4.2在人胰腺癌BxPC-3模型上的功效，在确立的(established)BxPC-3异种移植模型上检测该抗体(如S.N.11/709,676中公开地)。AR47A6.4.2在确立的人胰腺癌模型中显著减少肿瘤负荷。在第54天，即施用抗体最后剂量后的一天，AR47A6.4.2处理的动物具有是对照处理动物平均肿瘤体积40。/。的平均肿瘤体积(p0.0001)。这些结果对应于AR47A6.4.2的30%的平均T/C。在整个研究过程中不存在临床毒性迹象。总之，AR47A6.4.2在该确立的人胰腺癌异种移植模型中是良好耐受的且减小肿瘤负荷。AR47A6.4.2证明了在预防性和确立的人胰腺癌模型二者中的功效。AR47A6.4.2证明了针对人胰腺癌模型的抗癌作用。为了扩展该发现，在PL45人胰腺癌异种移植模型上检测AR47A6.4.2(如S.N.11/79,676中公开地)。AR47A6.4.2在人胰腺癌PL45体内预防性模型中完全抑制肿瘤生长。如第77天，即最后给药抗体后20天，当对照和抗体处理组中几乎所有小鼠存活时，用ARIUS抗体AR47A6.4.2处理，与缓冲液治疗组相比，以几乎100%减少PL45肿瘤生长&=0.0005,t-检验)。在第102天，即最后给药后45天，由于肿瘤体积，将对照组中的所有小鼠从研究中除去。然而，AR47A6.4.2仍证明几乎完全抑制肿瘤生长且该组中的4只小鼠(由于非癌相关事件失去一些小鼠)仍存活。在整个研究过程中不存在明显的临床毒性迹象。总之，AR47A6.4.2在人胰腺癌异种移植模型中是良好耐受的且几乎完全抑制肿瘤生长。AR47A6.4.2处理还证明与缓冲液处理相比增加存活。AR47A6.4.2由此证明了在两种不同的人胰腺癌模型中的功效。AR47A6.4.2证明了针对两种不同人胰腺癌异种移植模型的抗癌特性。为了确定AR47A6.4.2针对不同人癌症异种移植模型的功效，在PC-3前列腺癌异种移植模型上检测该抗体(如S.N.11/709,676中公开地)。AR47A6.4.2在人前列腺腺癌细胞的PC-3体内预防性模型中抑制肿瘤生长。如第32天，即用抗体5次给药处理后，当对照和抗体处理组中几乎所有小鼠存活时，用ARIUS抗体AR47A6.4.2处理，与缓冲液治疗组相比，以60.9。/。减少PC-3肿瘤生长(p^.00037，t-检验)。到第47天，即最后给药前3天，由于肿瘤体积/病灶，将对照组中的所有小鼠从研究中除去。在第77天，即最后给药抗体后27天，AR47A6.4.2处理组中40。/。的小鼠仍存活。在整个研究过程中不存在明显的临床毒性迹象。总之，AR47A6.4.2在该人前列腺癌异种移植模型中是良好耐受的且显著抑制肿瘤生长。使用抗体的处理还证明了与对照组相比的存活益处。AR47A6.4.2证明了在两种不同的人癌适应症胰腺和前列腺的功效。AR47A6.4.2证明了针对两种不同的人胰腺癌和前列腺癌异种移植模25型的抗癌特性。为了确定AR47A6.4.2针对另一种人癌症异种移植模型的功效，在MCF-7癌症异种移植模型上检测该抗体(如S.N.11/709,676中公开地)。AR47A6.4.2在人乳腺癌的MCF-7体内预防性模型中减少肿瘤生长。使用ARIUS抗体AR47A6.4.2的处理导致显著的肿瘤生长延迟。AR47A6.4.2诱导在处理第18天到第35天低于42%和在直到第49天接近42%的T/C百分比数值(在第18天最佳T/C百分比数值10.9%)。在第53天，即处理终止后，仍以57。/。的T/C观察到AR47A6.4.2处理的功效。在研究结束时(第91天)，2只来自AR47A6.4.2处理组的小鼠保持无肿瘤。处理后存活益处与AR47A6.4.2施用相关。缓冲液对照组到处理后第85天时达到100%死亡率，而在处理后第91天时33.3%的AR47A6.4.2小鼠仍存活。在整个研究过程中不存在临床毒性迹象。总之，AR47A6.4.2在该人乳腺癌异种移植模型中是良好耐受的，减小肿瘤负荷并提供存活益处。AR47A6.4.2证明了针对三种不同的人癌适应症胰腺、前列腺和乳腺的功效。AR47A6.4.2证明了针对两种不同人胰腺、前列腺和乳腺癌异种移植模型的抗癌特性。为了确定AR47A6.4.2针对另一种人癌症异种移植模型的功效，在Colo205结肠癌异种移植模型上检测该抗体(如S.N.11/709,676中公开地)。AR47A6.4.2在人结肠直肠腺癌细胞的Colo205体内预防性模型中减少肿瘤生长。如第27天，即最后给药抗体前4天，用ARIUS抗体AR47A6.4.2处理，与缓冲液治疗组相比，以60.2%减少Colo205肿瘤生长(=0.0003851,t-检验)。在整个研究过程中不存在明显的临床毒性迹象。总之，AR47A6.4.2在该人结肠癌异种移植模型中是良好耐受的且显著抑制肿瘤生长。AR47A6.4.2证明了在四种不同的人癌适应症胰腺、前列腺、乳腺和结肠的功效。在人癌症疾病的若干公认模型中观察到治疗益处，这提示该抗体用于在其他哺乳动物，包括人中治疗的药理学和制药学益处。总之，该数据证明AR47A6.4.2抗原是癌症相关抗原且在人癌细胞上表达，并且是病理学相关的癌症靶标。如先前所公开地(S.N.11/709,676)，生物化学数据显示由AR47A6.4.2识别的抗原是TROP-2。这通过这样的研究得到支持，所述研究显示针对TROP-2反应的单克隆抗体(克隆77220.11,R&DSystems,Minneapolis,MN)通过免疫沉淀反应识别与AR47A6.4.2结合的蛋白。另夕卜，AR47A6.4.2通过蛋白质免疫印迹特异性识别人TROP-2的重组形式。AR47A6.4.2表位似乎不是碳水化合物依赖性的，但是似乎是构象依赖性的。AR47A6.4.2还证明与来自另一种抗TROP-2抗体AR52A301.5的不同表位结合。为了确定AR47A6.4.2表位的效用，以前确定了冷冻正常人组织切片中AR47A6.4.2抗原的表达(显示该抗体与福尔马林固定组织无反应性的实验)(如S.N.11/709,676中所公开地)。与12种正常人器官，即卵巢、胰腺。甲状腺、脑(大脑、小脑)、肺、脾、子宫、宫颈、心脏、皮肤、和骨骼肌的结合利用人正常组织筛选阵列进行(Biochain,CA，美国)。该阵列包含20种正常人器官；然而，在染色后仅能判断这些器官中的12种。AR47A6.4.2抗体显示主要与上皮组织(血管内皮、甲状腺囊泡上皮、胰腺的腺泡和导管上皮、肺泡上皮、和皮肤表皮角化细胞)结合。该抗体还显示与脾的淋巴组织不确定结合和与脑神经组织的结合。细胞定位是细胞质和膜，具有扩散的染色模式。AR47A6.4.2在与研究抗TROP-2抗体(克隆77220.11)相比时，显示处类似的结合模式。为了进一步扩展AR47A6.4.2的治疗益处，以前还确定了该抗原在多种人癌组织及其相应正常组织切片(IO个结肠癌和l个正常结肠，7个卵巢癌和1个正常卵巢，11个乳腺癌和3个正常乳腺，14个肺癌和3个正常肺，13个前列腺癌和3个正常前列腺，和13个胰腺癌和4个正常胰腺)内的频率和定位(如S.N.11/709,676中公开)。AR47A6.4.2显示出分别与5/10(50%)，6/7(86%)，10/11(91%),11/14(79%)，13/13(100%)和2/13(15%)的结肠癌、卵巢癌、乳腺癌、肺癌、前列腺癌和胰腺癌中度到强烈结合。另夕卜，分别在2/10(20%)，1/11(9%)，3/14(21%),和2/13(15%)结肠癌、乳腺癌、肺癌和胰腺癌切片中观察到不确定到微弱的结合。在所有检测的肿瘤中，结合特异于肿瘤细胞。对于相应的正常组织，抗体显示出与0/1,0/1，3/3，3/3，3/3和4/4正常结肠、卵巢、乳腺、肺、前列腺和胰腺组织结合。然而，主要结合于正常器官的上皮组织。以前进行了IHC研究，以表征AR47A6.4.2抗原在多种物种的冷冻正常组织中交叉反应性(如S.N.11/709,676中公开地)。AR47A6.4.2显示，对检测的小鼠、大鼠、豚鼠、山羊、绵羊、仓鼠、鸡、牛、马或猪正常组织无可检测的结合。对于正常兔和狗组织，存在与在相应人组织中观察到的不同的结合。对于食蟹猴正常组织，AR47A6.4.2显示与在相应人正常组织中关于除卵巢和睾丸外的所有检测器官观察到的类似的组织特异性，在卵巢和睾丸中对于食蟹猴切片没有观察到可检测的结合。对于猕猴正常组织，AR47A6.4.2显示出与在相应人组成组织中观察到的类似的组织特异性。应该注意到猕猴正常组织小组(panel)小于关于食蟹猴检测的。基于染色特征，食蟹猴和猕猴均具有与人组织类似的AR47A6.4.2抗原分布。为了促进制备抗体嵌合体，分别克隆并测序编码重链和轻链可变区的基因(如前在S.N.11/709,676中公开地)。本发明描述AR47A6.4.2、嵌合AR47A6.4.2((ch)AR47A6.4.2)和人源化变体(hu)AR47A6.4.2的开发和应用。AIM7A6.4.2通过其在肿瘤生长模型中的细胞毒性测定和在患有癌性疾病的哺乳动物中延长存活时间的作用确定。本发明代表癌症治疗领域中的进步，原因在于本发明首次描述了这样的试剂，所述试剂与靶分子，TROP-2上存在的一种或多种表位特异性结合并还作为裸抗体，具有针对恶性肿瘤细胞而非正常细胞的体外细胞毒性特性，并且还作为裸抗体，直接介导，人癌症体内模型中的肿瘤生长的抑制和存活的延长。这与任何其他前述抗TROP-2抗体相比是一个进步，因为没有一个显示出类似的特性。还在该领域中提供进步，因为其清楚和首次证明了，TROP-2在与某些类型肿瘤生长和发育有关的事件中的直接参与。还代表了在癌症治疗中的进步，因为其具有在人患者中展现类似抗癌特性的潜力。其他进步是使这些抗体包括在抗癌抗体文库中将通过确定不同抗癌抗体的适当组合提高靶向表达不同抗原标记的肿瘤的可能性，从而寻找在靶向和抑制肿瘤生长和发育中最有效的。总之，本发明教导AR47A6.4.2抗原作为治疗剂耙标的应用，在施用时，其可以在哺乳动物中减少表达所述抗原的癌症的肿瘤负荷，并还可以导致受治疗哺乳动物延长的存活。本发明还教导CDMAB(AR47A6.4.2、嵌合的AR47A6.4.2((ch)AR47A6.4.2)和人源化变体，(hu)AR47A6.4.2)、以及它们的衍生物、及其抗原结合片段、和其诱导细胞毒性的配体的应用，其靶向它们的抗原，以减少在哺乳动物中表达所述抗原的癌症的肿瘤负荷并导致受治疗哺乳动物延长的存活。此外，本发明还教导在癌性细胞中检测AR47A6.4.2抗原的应用，所述应用可以有效用于携带表达该抗原的肿瘤的哺乳动物的诊断、治疗预测、和预后。因此，本发明的一个目的是利用制备针对来源于特定个体的癌性细胞或一种或多种特定的癌症细胞系产生的减轻癌性疾病的抗体(CDMAB)的方法，以分离杂交瘤细胞系，和所述杂交瘤细胞系编码的相对应的分离的单克隆抗体及其抗原结合片段，所述CDMAB对于癌症细胞是细胞毒性的，但是同时对于非癌性细胞相对是无毒的。本发明的另一个目的是教导减轻癌性疾病的抗体，其配体和抗原结合片段。本发明的另一个目的是产生减轻癌性疾病的抗体，其细胞毒性通过抗体依赖性细胞毒作用介导。本发明的另一个目的是产生减轻癌性疾病的抗体，其细胞毒性通过补体依赖性细胞毒作用介导。本发明的另一个目的是产生减轻癌性疾病的抗体，其细胞毒性是它们催化细胞的化学键水解的能力的函数(fbnction)。本发明的另一个目的是产生减轻癌性疾病的抗体，所述抗体有效用于癌症诊断、预后和监测的结合测定。本发明的其它目的和优点将通过下述描述变得清楚，其中通过举例说明和实施例的方式描述本发明的某些实施方案。附图简述本发明或申请文件包含至少一幅彩色绘制的附图。本专利或专利申请出版物带有彩色附图的复印件将根据要求和缴付必要的费用由官方提供。图1证明在预防性人MDA-MB-231乳腺癌模型中AR47A6.4.2对肿瘤生长的影响。垂直虚线表示腹膜内施用抗体的时期。数据点表示平均值+/-SEM。图2证明在预防性MDA-MB-231乳腺腺癌模型中AR47A6.4.2对小鼠存活的影响。数据点表示存活百分比。图3证明在预防性MDA-MB-231乳腺癌模型中AR47A6.4.2对小鼠体重的影响。数据点表示平均值+/-SEM。图4证明在确立的人PL45胰腺癌模型中AR47A6.4.2以剂量依赖性方式对肿瘤生长的影响。垂直虚线表示腹膜内施用抗体的时期。数据点表示平均值+/-SEM。图5证明在确立的PL45胰腺癌模型中AR47A6.4.2对小鼠存活的影响。数据点表示存活百分比。图6证明在确立的PL45胰腺癌模型中AR47A6.4.2对小鼠体重的影响。数据点表示平均值+/-SEM。图7列表来自不同组织微阵列的多种人肿瘤和正常组织切片上AR47A6.4.2的IHC比较。图8.来自多种人肿瘤组织微阵列的代表性显微图，其显示使用AR47A6.4.2(A)或同种型对照抗体(B)获得的乳腺肿瘤组织上和使用AR47A6.4.2(C)或同种型对照抗体(D)获得的前列腺肿瘤组织上和使用AR47A6.4.2(E)或同种型对照抗体(F)获得的胰腺肿瘤组织上结合模式。对于乳腺肿瘤组织和胰腺肿瘤组织放大400倍，对于前列腺肿瘤组织放大200倍。图9.显示在卵巢肿瘤组织(A)或卵巢正常组织(B)上用AR47A6.4.2获得的结合模式的代表性显微图。AR47A6.4.2显示出与肿瘤而非相应正常组织的强烈结合。放大倍数是200X。图10.激酶列表，所述激酶的磷酸化受到用AR47A6.4.2处理的BxPC-3细胞处理以及随后进行血清和增补剂刺激的影响。图11.分泌的血管生成因子列表，其受到用AR47A6.4.2处理的BxPC-3细胞处理的影响。图12证明AR47A6.4.2在两种不同的人胰腺癌细胞系；即PL45和BxPC-3上的体外CDC活性。图13.AR47A6.4.2与基于TROP-2氨基酸序列合成的CUPS肽(按照出现的次序分别为SEQIDNOS:13-32)的结合。图14.TR0P匿2的氨基酸序歹ij(SEQIDNO:33)。由AR47A6.4.2识别的不连续表位包含在带下划线的序列中。氨基酸位置1-274代表TROP-2的胞外部分；氨基酸位置275-290代表TROP-2的跨膜部分且氨基酸位置291-232代表TROP-2的胞内部分。图15.轻链PCR扩增中使用的引物(按照出现的次序分别为SEQIDNOS:34-52)。图16.重链PCR扩增中使用的引物(按照出现的次序分别为SEQIDNOS:53-68)。图17.小鼠AR47A6.4.2VH序列(核苷酸和氨基酸序列分别公开为SEQIDNO:69-70)。图18.小鼠AR47A6.4.2VL序列(核苷酸和氨基酸序列分别公开为SEQIDNO:71-72)。图19.用于产生嵌合的和变体人源化AR47A6.4.2VH序列的寡核苷酸(按照出现的次序分别为SEQIDNOS:73-92)。nenn八mtaI^hV入:CnTtet'、店Ana"A广/i^i、rT#力liVi会士ir;ifcl6^囟/tJ—J—FliWr&BUlWX'K^yViW'KjAIV4/AU.4丄VL/丁"J口'J芬'I么口版(按照出现的次序分别为SEQIDNOS:93-110)。图21.轻链和重链表达载体。图22A、22B和22C.人源化AR47A6.4.2VH变体。在CDRs下划线(按照出现的次序分别为SEQIDNOS:lll-113，10，7和114)。图23A、23B和23C.人源化AR47A6.4.2VL变体。在CDRs下划线(按照出现的次序分别为SEQIDNOS:115，9，8和116-117)。图24.人源化AR47A6.4.2VH和VL变体的活性。图25.鼠AR47A6.4.2和(hu)AR47A.6.4.2的多种变体与rhTROP-2结合的结合亲和性结合率常数(Ka)和解离率常数(Kd)的总结。发明详述一般地，当用于概述、描述、实施例和权利要求中时，下述词语或短语具有所示的定义。术语"抗体"以最宽泛的意义使用，并且特别涵盖，例如，单一的单克隆抗体(包括激动剂、拮抗剂、和中和抗体、去免疫的(de-immunized)、鼠、嵌合的或人源化的抗体)，具有多表位特异性的抗体组合物，单链抗体，双抗体，三链抗体，免疫缀合物和抗体片段(见下文)。当用于本发明时，术语"单克隆抗体"是指从一群基本上均一的抗体获得的抗体，即，除了可能以较少量存在的可能天然存在的突变之外，构成(comprising)所述群体的个体抗体是相同的。单克隆抗体是高度特异性31的，针对单一的熟原性位点。此外，多克隆抗体制剂包括针对不同决定簇(表位)的不同抗体，与所述多克隆抗体制剂相反，每个单克隆抗体针对抗原上的单个决定簇。除了它们的特异性，因为单克隆抗体可以不被其它抗体污染地合成，所以单克隆抗体是有利的。修饰词"单克隆"表示该抗体的特征是从基本上均一的抗体群体获得，并且不被解释为抗体的生产需要通过任何特定的方法。例如，按照本发明使用的单克隆抗体可以通过由Kohler禁^然r7V"/wre入Z56:邦5(1975)首先描述的杂交瘤(鼠或人)方法制备，或可以通过重组DNA方法(参见，例如，美国专利号4,816，567)制备。"单克隆抗体"还可以从噬菌体抗体文库分离，例如，使用Clackson等，^然(7Vfl/wwJ352:624-628(1991)和Marks等，分f主激学^^^TJ:Mo/.所o/J,222:581-597(1991)中所述的技术。"抗体片段"包括完整抗体的一部分，优选地包括其抗原-结合或可变区。抗体片段的实例包括小于全长的抗体，Fab,Fab，,F(ab,)2，和Fv片段；双抗体；线性抗体；单链抗体分子；单链抗体，单结构域抗体分子，融合蛋白，重组蛋白和由抗体片段形成的多特异性抗体。"完整的"抗体是一种包括抗原-结合可变区以及轻链恒定结构域(QJ和重链恒定结构域CHl、Ch2和Ch3的抗体。恒定结构域可以是天然序列恒定结构域(例如，人天然序列恒定结构域)或其氨基酸序列变体。优选地，完整的抗体具有一种或多种效应子功能。取决于它们的重链恒定结构域的氨基酸序列，完整抗体可以指定为不同的"种类"。存在5种主要类别的完整抗体IgA,IgD,IgE,IgG,和IgM，并且它们中的一些可以进一步分成"亚类"(同种型)，例如，IgGl,IgG2，IgG3，IgG4，IgA，和IgA2。与不同种类的抗体相对应的重链恒定结构域分别叫作(x，S，s，Y，和p。不同种类的免疫球蛋白的亚基结构和三维构型是公知的。抗体"效应子功能"是指归因于抗体的Fc区(天然序列Fc区或氨基酸序列变体Fc区)的那些生物学活性。抗体效应子功能的实例包括Clq结合；补体依赖性细胞毒性；Fc受体结合；抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC);吞噬作用；细胞表面受体(例如，B细胞受体；BCR)的下调，等。"抗体依赖性细胞介导的细胞毒性"和"ADCC"是指细胞介导的反应，其中表达Fc受体(FcRs)的非特异性细胞毒性细胞(例如，天然杀伤(NK)加始成rh,卜/f:fcV袖fMn壬nFTfl^袖胎、；口Sil^tSP细胎卜的结会的桥优#日-山/]巳，"日'I'l工1'iPW/JCi，化hc^卩m^wA)匕z1^、"'__)'|丄卞1_1^1^」1^_1_^(~1jt口口口Jl^LiKf、，7TJ^L随后引起该靶细胞的裂解。介导ADCC的主要细胞，即NK细胞，仅表达FcyRIII，而单核细胞表达FqRI，FcyRII和FcyRIII。FcR在造血细胞上的表达总结在Ravetch禾QKinet,免疫学年度综述(j""w.iev./wmw"o/J9:457-92(1991)的第464页表3中。为了评估目的分子的ADCC活性，可以进行体外ADCC测定，诸如在美国专利号5,500,362或5，821,337中所述的测定。对于所述测定有用的效应细胞包括外周血单核细胞(PBMC)和天然杀伤(NK)细胞。备选地，或另外地，目的分子的ADCC活性可以在体内进行评估，例如，在动物模型中，诸如在Clynes等./WAS(USA)95:652-656(1998)中公开的动物模型中。"效应细胞"是表达一种或多种FcRs并且执行效应子功能的白细胞。优选地，该细胞至少表达FcyRIII并且执行ADCC效应子功能。介导ADCC的人白细胞的实例包括外周血单核细胞(PBMC)，天然杀伤(NK)细胞，单核细胞，细胞毒性T细胞和嗜中性粒细胞；其中PBMCs和NK细胞是优选的。效应细胞可以从其天然来源分离，例如，从血液或PBMCs分离，如本发明所述。术语"Fc受体"或"FcR"用来描述结合抗体的Fc区的受体。优选的FcR是天然人FcR序列。此外，优选的FcR是一种结合IgG抗体的FcR(Y受体)，并且包括FcyRI，FcyRII，和FcYRIII亚类的受体，包括等位基因变体和这些受体的可变剪接形式。FcyRI1受体包括FcyRIIA("激活受体")和FcyRIIB("抑制受体")，它们具有主要在它们的细胞质结构域不同的相似的氨基酸序列。激活受体FcYRIIA在其细胞质结构域包含免疫受体基于酪氨酸的激活基序(ITAM)。抑制受体FcyRIIB在其细胞质结构域包含免疫受体基于酪氨酸的抑制基序(ITIM)。(参见在M.Dagron，免疫学年度综述(爿wm^.iev.immw"o/.)15:203-234(1997)中的综述)。FcRs在Ravetch和Kinet,免疫学年度综述(Annu.Rev.Immunol)9:457-92(1991);Capel等，jfe^",;^兹^wtw"ow"/7(x/W4:25-34(1994);和deHaas等,^^發^7廢庶"丄a6.C7/".126:330-41(1995)中综述。其它FcRs，包括将在将来鉴定的那些，包含在本发明的术语"FcR"中。该术语还包括新生儿受体，FcRn，其负责将母亲的IgGs转运到胎儿(Guyer等，f资学染,吝"/mww"o/.力17:587(1976)和Kim等，^///^iS"#^V^rEur./柳mw"o/.y>24:2429(1994》。"补体依赖性细胞毒性"或"CDC"是指在存在补体的条件下分子裂解靶点的能力。补体激活途径通过补体系统的第一成分(Clq)同与同源抗原复合的分子(例如，抗体)的结合而起始。为了评估补体激活，可以进行CDC湖lJ定，例如，如在Gazzano-Santoro等，身瘦学_^兹_^,吉"/wmw"o/.MeAoAy>202:163(1996)中所述。术语"可变"是指这样的事实，即，在抗体之间，某些可变结构域的部分在序列上大量不同，并且其用于每种特定的抗体对于其特定的抗原的结合和特异性。然而，在抗体的整个可变结构域中可变性不是均匀分布的。它集中在轻链和重链可变结构域内称为高变区的三个片段中。可变结构域的更高度保守的部分称为构架区(FRs)。天然重链和轻链的可变结构域分别包括4个FRs，其主要采取|3-折叠构型，通过三个高变区连接，其形成环连接，并且在某些情形中形成(3-折叠结构的一部分。每条链中的高变区通过FRs紧密相邻保持在一起，并且与另一条链的高变区一起有助于形成抗体的抗原-结合位点(见Kabat等,^资^^^^y^歪^^^^^y"e《^m^q/7wmwwo/og/ca//"&msT9,第5公共卫生月艮务(PublicHealthService)，全国卫生研究所(NationalInstitutesofHealth),Bethesda，Md.(1991))。恒定结构域不直接参与抗体与抗原的结合，但是表现出多种效应子功能，诸如在抗体依赖性细胞毒作用(ADCC)中的抗体参与。当用于本发明时，术语"高变区"是指抗体负责抗原结合的氨基酸残基。高变区通常包括来自"互补性决定区"或"CDR"的氨基酸残基(例如，在轻链可变结构域中的残基24-34(LI),50-56(L2)和89-97(L3)和在重链可变结构域中的31-35(HI),50-65(H2)和95-102(H3);Kabat等，,瘦^^^邀游歪/^游y^^/rSe《we"caso/iVoto'raT/wwM"o/og/ca//她m^久第5L公共卫生服务(PublicHealthService),全国卫生研究所(NationalInstitutesofHealth),Bethesda,Md.(1991))和/或来自"高变环"的那些残基(例如，在轻链可变结构域中的残基26-32(LI),50-52(L2)和91-96(L3)和在重链可变结构域中的26-32(Hl)，53-55(H2)禾口96-101(H3);Chothia和Lesk，分子生物学杂志"M/.说o/."96:901-917(1987))。"构架区，，或"FR"残基是除了如本文所定义的所述高变区残基之外的那些可变结构域残基。木瓜蛋白酶消化抗体产生两种相同的抗原-结合片段，其称为"Fab"片段，每个具有单个抗原-结合位点，和剩余的"Fc"片段，它的名称反应了它容易结晶的能力。胃蛋白酶处理产生F(ab，)2片段，其具有两个抗原-结合位点，并且仍然能够交联抗原。"Fv"是包含完整的抗原-识别和抗原-结合位点的最小抗体片段。该区域由紧密、非共价缔合的一个重链和一个轻链可变结构域的二聚体组成。正是在这种构型中每个可变结构域的三个高变区相互作用，以限定在Vh-Vl二聚体表面上的抗原-結合位点。笼统地，6个高变区赋予抗体的抗原-结合特异性。然而，甚至单个可变结构域(或仅包括对抗原特异的3个高变区的Fv的一半)具有识别和结合抗原的能力，尽管是以比完整的结合位点低的亲和力结合。Fab片段还包含轻链的恒定结构域和重链的第一恒定结构域(CHI)。Fab'片段不同于Fab片段，其通过在重链CH1结构域的羧基端添加几个残基而不同，所述添加的残基包括来自抗体铰链区的一个或多个半胱氨酸。Fab'-SH在本发明中是Fab'的名称，其中恒定结构域的半胱氨酸残基携带至少一个游离的巯基(thiol)基团。F(ab')2抗体片段最初作为一对Fab，片段产生，其在它们之间具有铰链半胱氨酸。抗体片段的其它化学偶联也是已知的。基于它们的恒定结构域的氨基酸序列，来自任何脊椎动物物种的抗体的"轻链"可以被指定为两种明显不同的类型中的一种，所述两种明显不同的类型称为k(k)和lambda(X)。"单链Fv"或"scFv"抗体片段包括抗体的Vh和VL结构域，其中这些结构域存在于单一的多肽链中。优选地，Fv多肽还包括在Vh和Vl結枸域之间的多肽连接体，其使得scFv能够形成用于抗原结合的理想结构。对于scFv的综述，参见Pliickthun，在单克隆抗体的药理学(7Tze尸/za，aco/ogy。/Mo"oc/owa/贫谬j中'巻113,Rosenburg禾口Moore编,Springer-Verlag,纽约，第269-315页(l994)。术语"双抗体"是指具有两个抗原-结合位点的小抗体片段，所述片段包括与在同一多肽链(VH-VL)中的可变轻链结构域(VO连接的可变重链結枸域(Vh)。通过使用太短而不允许在同一条链中的两个结构域之间成对的连接体，迫使所述结构域与另一条链的互补结构域成对，并且产生两个抗原-结合位点。例如，在EP404,097;WO93/11161;和Hollinger等,夷嵐^^^6/学腐学/^Ato/.^!cad6W.，90:6444-6448(1993)中更充分地描述了双抗体。术语"三链抗体"或"三价三聚体"指三个单链抗体的组合。用VL或VH结构域的氨基酸末端，即不具有任何连接体序列，构建三链抗体。三链抗体具有三个Fv头部，所述Fv头部具有以头-尾的方式环形排列的多肽。所述三链抗体可能的构象是具有三个结合位点的平面，所述结合位点位于彼此相差120度角的平面上。三链抗体可以是单特异性、双特异性或三特异性的。"分离的"抗体是一种己经被鉴定并且与其天然环境的成分分离和/或从中回收的抗体。它的天然环境的污染成分是干扰抗体的诊断或治疗应用的物质，并且可以包括酶、激素、和其它蛋白或非蛋白溶质。因为将不存在抗体天然环境的至少一种成分，分离的抗体包括在重组细胞内原位的抗体。然而，一般地，分离的抗体应该通过至少一个纯化步骤制备。与目的抗原，例如TROP-2抗原"结合"的抗体是一种能够以充足的亲和力结合所述抗原的抗体，以便所述抗体通过靶向表达所述抗原的细胞而有效用作治疗或诊断剂。在所述抗体是一种结合TROP-2的抗体的情形中，与其它受体相反，它通常优先结合TROP-2，并且不包括偶然发生的结合，如非特异性Fc接触，或不包括与其它抗原所常见的翻译后修饰结合，并且可以是一种不与其它蛋白显著交叉反应的抗体。用于检测与目的抗原结合的抗体的方法在本领域中是公知的，并且可以包括，但不限于，如FACS、细胞ELISA和蛋白质印迹的测定。当用于本发明时，表述"细胞"、"细胞系"和"细胞培养物"可以互换地使用，并且所有这样的名称包括后代。还应该理解，由于故意的或偶然的突变，所有的后代在DNA内容物上可能不是精确相同的。包括在初始转化的细胞中筛选的具有相同功能或生物学活性的突变的后代。这将通过使用不同名称的上下文变得清楚。200880017614.3"治疗或处理"是指治疗性治疗和预防或预防性措施，其中目的是预防或减缓(减轻)目的病理症状或病症。需要治疗的那些包括已经患有病症的那些，以及倾向于患有病症的那些，或要预防病症的那些。因此，在本发明中待治疗的哺乳动物可以已经诊断患有病症或可以是倾向于或易受病症影响的。术语"癌症"和"癌性的"是指或描述哺乳动物中的生理状况，所述生理状况的典型特征在于失控的细胞生长或死亡。癌症的实例包括，但不限于，癌，淋巴瘤，胚细胞瘤，肉瘤，和白血病或淋巴恶性病。所述癌症的更具体的实例包括鳞状细胞癌(例如，上皮鳞状细胞癌)，肺癌，包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌和肺鳞状细胞癌，腹膜癌，肝细胞癌，胃癌(gastricorstomachcancer),包括胃肠癌，胰腺癌，成胶质细胞瘤，宫颈癌，卵巢癌，肝癌，膀胱癌，肝细胞瘤，乳腺癌，结肠癌，直肠癌，结肠直肠癌，子宫内膜癌或子宫癌，唾液腺癌，肾脏或肾癌，前列腺癌，外阴癌，甲状腺癌，肝的癌症，肛门癌，阴茎癌，以及头颈癌。"化疗剂"是有效用于治疗癌症的化学化合物。化疗剂的实例包括垸基化试剂，如塞替哌和环磷酰胺(CYTOXANTM);垸基磺酸酯如白消安，英丙舒凡，和哌泊舒凡；吖丙啶类如苯佐替派(benzodopa),卡波醌，美妥替口展(meturedopa),禾P乌瑞替哌(uredopa);ethylenimines禾口methylamelamines，包括六甲蜜胺，曲他胺，三亚乙基磷酰胺，塞替哌(triethylenethiophosphoramide)禾口三萝5甲蜜月安(trimethylolomelamine);氮芥(nitrogenmustards)如苯丁酸氮芥，萘氮芥(chlomaphazine),cholophosphamide,雌莫司汀，异环磷酰胺，氮芥(mechlorethamine),盐酸氧氮芥，美法仑，新氮芥，苯芥胆甾醇，泼尼莫司汀，曲磷胺，乌拉莫司汀；亚硝基脲(nitrosureas)如卡莫司汀，氯脲菌素，福莫司汀，洛莫司汀，尼莫司汀，雷莫司汀；抗生素如阿克拉霉素(aclacinomysins)，放线菌素，authramycin,偶氮丝氨酸，t専来霉素，方夂线菌素C,calicheamicin,carabicin,carnomycin,嗜癌霉素，色霉素，放线菌素D，柔红霉素，地托比星，6-重氮-5-氧代-L-正亮氨酸，多柔比星，表柔比星，依索比星，伊达比星，马塞罗霉素，丝裂霉素，麦考酚酸，诺拉霉素，橄榄霉素，培洛霉素，potfiromycin,嘌罗霉素，三铁阿霉素，罗多比星，链黑霉素，链佐星，杀结核菌素，乌苯美司，净司他丁，佐柔比星；抗代谢物如甲氨喋呤和5-氟尿嘧啶(5-FU);叶酸类似物如den叩terin，甲氨喋呤，喋罗呤，三甲曲沙；嘌呤类似物如氟达拉滨，6-巯嘌呤，thiamiprine,硫鸟嘌呤；嘧啶类似物如安西他滨，阿扎胞苷,6-氮尿苷，卡莫氟，阿糖胞苷，二脱氧尿苷，去氧氟尿苷，依诺他滨，氟尿苷，5-FU;雄激素诸如卡普睾酮，屈他雄酮丙酸盐，环硫雄醇，美雄烷，睾内酯；抗肾上腺药(anti-adrenals)如氨鲁米特，米托坦，曲洛司坦；叶酸补偿物如frolinicacid;醋葡醛内酯；羟醛磷酰胺配糖(aldophosphamideglycoside);5-氨基酮戊酸；安吖啶；bestrabucil;比生群；依达曲沙(edatraxate);defofamine;秋水仙胺；地吖醌；elformithine;依利醋铵；依托格鲁；硝酸镓；羟基脲；香菇多糖；氯尼达明；米托胍腙；米托蒽醌；莫哌达醇；尼曲吖e^;喷司他丁；异丙嗪(phenamet);吡柔比星；鬼臼酸;2-乙基酰肼(2-ethylhydrazide);丙卡巴肼；PSK⑧；雷佐生；西佐喃；锗螺胺；细格孢氮杂酸；三亚胺醌；2，2，,2，，-三氯三乙胺；乌拉坦(urethan);长春地辛；达卡巴嗪；甘露莫司汀；二溴甘露醇；二溴卫矛醇；哌泊溴垸；gacytosine;阿拉伯糖苷("Ara-C");环磷酰胺；塞替哌；紫杉垸类，例如，紫杉醇(TAXOL⑧，Bristol-MyersSquibbOncology,Princeton,新泽西)和多西他赛(TAXOTERE⑧，Aventis,Rhone-PoulencRorer,Antony,法国)；苯丁酸氮芥；吉西他滨；6-硫鸟嘌呤；巯嘌呤；甲氨喋呤；铂类似物如顺铂和卡钼；长春碱；钼；依托泊苷(VP-16);异环磷酰胺；丝裂霉素C;米托蒽醌；长春新碱；长春瑞滨；诺维本；诺消灵(novantome);替尼泊苷；道诺霉素；氨喋呤；适罗达；伊班膦酸盐;CPT-11;拓扑异构酶抑制剂RFS2000;二氟甲基鸟氨酸(DMFO);视黄酸；esperamicins;卡培他滨；以及任何上述物质的药用盐、酸或衍生物。下列物质也包含在本定义中，它们是作用调控或抑制激素对肿瘤的作用的抗激素药剂，诸如抗雌激素药，包括例如他莫昔芬，雷洛昔芬，抑制芳香酶的4(5)-咪唑，4-羟基他莫昔芬，曲沃昔芬，keoxifene,LY117018,奥那司酮，和托瑞米芬(Fareston);和抗雄激素药诸如氟他胺，尼鲁米特，比卡鲁胺，亮丙立德，和戈舍瑞林；以及任何上述物质的药用盐、酸或者衍生物。用于治疗目的的"哺乳动物"是指分类为哺乳动物的任何动物，包括人，小鼠，SCID，或裸鼠或小鼠品系，家畜和农场动物，以及动物园、运动或宠物动物，诸如绵羊、狗、马、猫、牛、等等。在本发明中优选地，所述哺乳动物是人。"寡核苷酸"是长度短的、单链或双链的多聚脱氧核苷酸，其通过已知方法化学合成(如磷酸三酯、亚磷酸酯、或亚磷酰胺化学，使用固相技术，如在1988年5月4日公布的EP266,032中所述的，或通过脱氧核苷H-磷酸酯中间物，如Froehler等，#;##"^77^"爿c/Ai仏j14:5399-5407，1986所述)。然后在聚丙烯酰胺凝胶上纯化它们。按照本发明，非人(例如鼠)免疫球蛋白的"人源化的"和域"嵌合的"形式是指这样的抗体，所述抗体包含特异的嵌合免疫球蛋白、免疫球蛋白链或其片段(如Fv，Fab,Fab，,F(ab，)2或抗体的其它抗原-结合亚序列)，与原始抗体相比较，其导致人抗-小鼠抗体(HAMA)、人抗-嵌合抗体(HACA)或人抗-人抗体(HAHA)反应的减少，并且所述抗体包含来源于所述非人免疫球蛋白的、对再现所需要的作用是必需的必需部分(例如，一个或多个CDR(s)、抗原结合区、可变结构域等)，同时保留与所述非人免疫球蛋白相当的结合特征。对于大部分，人源化的抗体是这样的人免疫球蛋白(受体抗体)，其中来自该受体抗体互补性决定区(CDRs)的残基被来自非人物种(供体抗体)CDRs的、具有需要的特异性、亲和性和能力的残基取代，所述非人物种如小鼠、大鼠或兔。在一些情形中，人免疫球蛋白的Fv构架区(FR)残基被相对应的非人FR残基取代。此外，所述人源化的抗体可以包括在受体抗体和在所引入的CDR或FR序列中都找不到的残基。进行这些修饰以进一步限定和最优化抗体性能。通常，所述人源化的抗体应该包括基本上不少于至少一个、和典型地两个可变结构域，其中所有或基本上所有的CDR区与非人免疫球蛋白的那些相对应，并且所有或基本上所有的FR残基是人免疫球蛋白共有序列的那些。所述人源化抗体优化地还应该包括至少一部分免疫球蛋白恒定区(Fc)，典型地是人免疫球蛋白的恒定区。"去免疫的(De-immunized)"抗体是对于给定的物种是无免疫原性的或较少免疫原性的免疫球蛋白。去免疫可以通过抗体的结构改变实现。可以使用本领域技术人员已知的任何去免疫技术。例如，用于使抗体去免疫性的一种适宜的技术记述在于2000年6月15日公布的WO00/34317中。39诱导"程序性细胞死亡"的抗体是一种通过任何方式诱导程序性细胞死亡的抗体，所述方式示例而不限于，膜联蛋白V的结合，胱天蛋白酶活性，DNA的片段化，细胞收縮，内质网膨胀，细胞片段化和/或膜囊泡的形成(称为凋亡小体)。当用于本文时，"抗体诱导的细胞毒性"应该理解为意指这样的细胞毒性作用，所述细胞毒性作用来源于由以保藏号141205-05保藏在IDAC的杂交瘤产生的杂交瘤上清或抗体，由以保藏号141205-05保藏在IDAC的杂交瘤产生的分离的单克隆抗体的人源化抗体，由以保藏号141205-05保藏在IDAC的杂交瘤产生的分离的单克隆抗体的嵌合抗体，及其抗原结合片段，或抗体配体，所述作用不必与结合程度相关。在整个说明书中，备选地，杂交瘤细胞系以及由其产生的分离的单克隆抗体由它们的内部命名AR47A6.4.2(鼠)，(ch)AR47A6.4.2(嵌合的)，(hu)AR47A6.4.2(人源化的)或保藏命名IDAC141205-05指示。当用于本文时，"抗体-配体"包括这样的部分，所述部分表现出针对靶抗原的至少一个表位的结合特异性，并且其可以是完整的抗体分子、抗体片段、以及至少具有它的抗原-结合区或部分(即，抗体分子的可变部分)的任何分子，例如，Fv分子,Fab分子，Fab，分子,F(ab，)2分子，双特异性抗体，融合蛋白，或特异性识别和结合这样的抗原的至少一个表位的任何遗传工程分子，所述抗原与由命名为IDAC141205-05(IDAC141205-05抗原)的杂交瘤细胞系产生的分离的单克隆抗体、由以保藏号141205-05保藏在IDAC的杂交瘤产生的分离的单克隆抗体的人源化抗体、由以保藏号141205-05保藏在IDAC的杂交瘤产生的分离的单克隆抗体的嵌合抗体及其抗原结合片段结合。当用于本文时，"减轻癌性疾病的抗体"(CDMAB)是指这样的单克隆抗体及其抗体-配体，所述单克隆抗体以有益于患者的方式减轻癌性疾病过程，例如，通过减少肿瘤负荷或延长肿瘤携带个体的生存的方式。"CDMAB相关结合剂"，以其广义，理解为包括，但不仅限于，竞争结合于至少一个CDMAB耙表位的任何形式的人或非-人抗体、抗体片段、抗体-配体等。"竞争性结合剂"理解为包括对至少一个CDMAB靶表位具有结合亲和力的任何形式的人或非-人抗体、抗体片段、抗体-配体等。待治疗的肿瘤包括原发肿瘤和转移瘤，以及顽固性肿瘤。顽固性肿瘤包括对使用单独化疗剂、单独抗体、单独辐射或其组合的治疗未能应答或对其具有抗性的肿瘤。顽固性肿瘤还包括表现出受使用所述试剂治疗抑制但停止治疗后至多5年、有时至多10年或更长复发的肿瘤。可以治疗的肿瘤包括未血管化、或尚未充分血管化的肿瘤，以及血管化的肿瘤。可以因此治疗的实体肿瘤实例包括乳腺癌、肺癌、结肠直肠癌、胰腺癌、神经胶质瘤和淋巴瘤。所述肿瘤的一些实例包括表皮样肿瘤，鳞状细胞肿瘤，诸如头颈肿瘤，结肠直肠肿瘤，前列腺肿瘤，乳腺肿瘤，肺肿瘤，包括小细胞和非-小细胞肺肿瘤，胰腺肿瘤，甲状腺肿瘤，卵巢肿瘤，和肝肿瘤。其他实例包括卡波西肉瘤、CNS瘤、成神经细胞瘤、毛细血管成血管细胞瘤、脑膜瘤和脑转移瘤、黑素瘤、胃肠癌和肾癌和肉瘤、横纹肌肉瘤、成胶质细胞瘤优选多形性成胶质细胞瘤、和平滑肌肉瘤。当用于本文时，"抗原-结合区"意指分子识别靶抗原的部分。当用于本文时，"竞争性抑制"意指使用常规的交互(reciprocal)抗体竞争测定(BelangerL.，SylvestreC.和DufourD.(1973),通过竞争性和夹心方法对a月台蛋白的酶联免疫观!j定(Enzymelinkedimmunoassayforafetoproteinbycompetitiveandsandwichprocedures).ClinicaChimicaActa48，15)能够识别和结合这样的决定簇位点，所述决定簇位点是由命名为IDAC141205-05的杂交瘤细胞系产生的单克隆抗体(IDAC141205-05抗体)、由以保藏号141205-05保藏在IDAC的杂交瘤产生的分离的单克隆抗体的人源化抗体、由以保藏号141205-05保藏在IDAC的杂交瘤产生的分离的单克隆抗体的嵌合抗体、其抗原结合片段或抗体配体所针对的。当用于本文时，"靶抗原"是IDAC141205-05抗原或其部分。当用于本文时，"免疫缀合物"意指与细胞毒素、放射性试剂、细胞因子、干扰素、靶标或报告部分、酶、毒素、抗肿瘤药或治疗药剂化学或生物学连接的任何分子或CDMAB，如抗体。所述抗体或CDMAB可以在分子的任何位置处与所述细胞毒素、放射性试剂、细胞因子、干扰素、靶标或报告部分、酶、毒素、抗肿瘤药或治疗药物连接，只要它能够结合其靶点。免疫缀合物的实例包括抗体毒素化学缀合物和抗体-毒素融合蛋白。适合于用作抗-肿瘤试剂的放射性试剂是本领域中那些技术人员已知的。例如，使用131I或211At。利用常规技术使这些同位素附着于抗体(例如Pedley等，英国癌症杂志(Br.J.Cancer)68,69-73(1993))。备选地，附着于抗体的抗-肿瘤试剂是活化前体药物的酶。可以施用这样的前体药物，所述前体药物保持其失活形式直到其到达肿瘤位点，一旦施用抗体复合物所述前体药物在该位点处转化为其细胞毒素形式。实际上，将抗体-酶缀合物施用于患者并容许定位在待治疗的组织区域。然后将前体药物施用于患者，从而使向细胞毒性药物的转化发生在待治疗组织区域中。备选地，与抗体缀合的抗-肿瘤试剂是细胞因子，诸如白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-4(IL-4)或肿瘤坏死因子a(TNF-a)。所述抗体靶向针对肿瘤的细胞因子，以使得细胞因子在不影响其他组织的条件下介导针对肿瘤的损伤或破坏。利用常规重组DNA技术使细胞因子在DNA水平上与抗体融合。还可以使用千扰素。当用于本文时，"融合蛋白"意指任何嵌合蛋白，其中抗原结合区与生物活性分子如毒素、酶、荧光蛋白、发光标记、多肽标记物、细胞因子、干扰素、耙标或报告部分或蛋白药物连接。本发明还预期本发明的CDMAB，耙标或报告部分与所述CDMAB相连接。靶标部分是结合对的第一个成员。抗-肿瘤试剂，例如，与所述对的第二个成员缀合，且由此针对抗原-结合蛋白结合的位点。所述结合对的常见实例是抗生物素蛋白和生物素。在优选的实施方案中，生物素与本发明CDMAB的靶抗原缀合，并由此为抗-肿瘤试剂或与抗生物素蛋白或链亲和素缀合的其他部分提供靶标。备选地，生物素或另一种所述部分与本发明CDMAB的靶抗原相连接，并用作，例如诊断系统中的报告分子，在所述诊断系统中可检测的信号-生成试剂与抗生物素蛋白或链亲和素缀合。可检测的信号-生成试剂有效用于体内和体外诊断目的。信号生成试剂产生可测量的信号，所述信号是可以通过外部方法，通常电磁辐射测量法检测的。通常，所述信号生成试剂是酶或发色团，或由荧光、磷光或化学发光引起的发光。发色团包括在紫外或可见区吸收光的染料，且可以是酶催化反应的底物或降解产物。而且，在本发明范围内包括本发明CDMAB体内和体外用于研究或诊断方法的用途，这在本领域中是公知的。为了执行如本文中所预期的诊断方法，本发明还可以包括试剂盒，所述试剂盒包括本发明的CDMAB。所述试剂盒应该有效用于通过检测CDMAB的靶抗原在该个体细胞中的过量表达而确定处于某种类型癌症风险中的个体。诊断测定试剂盒预期利用处于诊断测定试剂盒形式的本发明CDMAB确定肿瘤的存在。通常基于一种或多种肿瘤-特异性抗原，例如在生物学样品，诸如血液、血清、尿液和/或肿瘤活组织检查中的蛋白质和/或编码所述蛋白的多核苷酸的存在，检测患者中的肿瘤，所述样品应该是获自所述患者的。所述蛋白起指示具体肿瘤，例如结肠、乳腺、肺或前列腺肿瘤存在或缺乏的标记的作用。还预期所述抗原应该具有检测其他癌性肿瘤的效用。在诊断试剂盒中包括包含本发明CDMAB的结合试剂或CDMAB相关结合试剂，允许检测与生物学样品中的试剂相结合的抗原水平。多核苷酸引物和探针可以用于检测编码肿瘤蛋白的mRNA水平，其也指示是否存在癌症。为了使该结合测定具有诊断性，产生这样的数据，即所述数据与和正常组织中存在的抗原相比具有统计学显著性的抗原水平相关，从而能够实施识别确定地诊断癌肿瘤存在的结合。预期许多形式应该有效用于本发明的诊断测定，如本领域中普通技术人员已知地，从而使用结合试剂检测样品中的多肽标记。例如，如Harlow和Lane,抗体实验室手册(抗体ALaboratoryManual)，冷泉港实验室(ColdSpringHarborLaboratory)，1988中举例说明的。还预期前述诊断测定形式的任意和全部组合、改变或修饰。患者中是否存在癌症应该典型地通过以下确定(a)使获自患者的生物学样品与结合试剂接触；(b)检测样品中与结合试剂结合的多肽水平；和(c)比较多肽水平和预定截断值。在举例说明的实施方案中，预期该测定应该包括使用固定在固体支持物上的基于CDMAB的结合试剂结合以及去除样品的残余中的多肽。结合的多肽然后可以利用检测试剂检测，所述检测试剂包含报告基团并特异性结合于结合试剂/多肽复合物。例证性检测试剂可以包括基于CDMAB的结合试剂，所述结合试剂特异性结合于多肽或抗体或特异性结合于所述结合试剂的其他试剂，诸如抗-免疫球蛋白、蛋白质G、蛋白质A或凝集素。在备选的实施方案中，预期可以使用竞争测定，其中用报告基团标记多肽，并容许其在结合试剂与样品一起温育后结合于固定的结合试剂。样品与固定的结合试剂的反应性指示是所述样品成分抑制标记的多肽与结合试剂结合的程度。对于在所述测定中使用合适的多肽包括结合试剂对其具有结合亲和力的全长肿瘤4寺异性蛋白和/或其部分。所述诊断试剂盒应该具有固体支持物，其可以处于本领域中普通技术人员已知的蛋白质可以附着的任何材料形式。合适的实例可以包括微量滴定板中的检测孔或硝化纤维或其他合适的膜。备选地，所述支持物可以是珠或盘，诸如玻璃、玻璃纤维、乳胶或塑料材料诸如聚苯乙烯或聚氯乙烯。所述支持物还可以是磁性粒子或光纤传感器，诸如例如美国专利号5,359,681中公开的那些。预期利用多种本领域中那些技术人员已知的技术将结合试剂固定在固体支持物上，这详细地记述在专利和科学文献中。术语"固定"指非共价缔合诸如吸附和共价附着，其在本发明的情形中，可以是所述试剂和所述支持物官能团之间的直接连接，或可以是通过交联剂的连接。在优选但非限制性实施方案中，通过吸附固定于微量滴定板的孔或膜是优选的。吸附可以通过使结合试剂，在合适的缓冲液中，与固体支持物接触一段合适的时间获得。接触时间可以随温度变化，且应该通常在约1小时-约1天的范围内。结合试剂与固体支持物的共价附着一般通过首先使该支持物与双功能试剂反应实现，所述双功能试剂应该与支持物和结合试剂上的官能团，诸如羟基或氨基基团二者反应。例如，结合试剂可以通过使用苯醌或通过使支持物上的醛基与结合配偶体上的胺和活性氢縮合共价附着于具有合适聚合物涂层的支持物(参见，例如，PierceImmunotechnologyCatalogandHandbook(皮尔斯免疫技术目录和手册)，1991,在A12A13)。还预期所述诊断测定试剂盒应该采用双-抗体夹心式测定的形式。该测定可以通过首先使抗体，例如本发明公开的固定在固体支持物，通常是微量滴定板的孔上的CDMAB，与样品接触进行，从而容许该样品中的多肽结合于固定的抗体。然后从固定的多肽-抗体复合物中去除未结合的样44品，并加入包含报告基团的检测试剂(优选地，能够结合于多肽上不同位点的第二抗体)。然后使用适合于特异性报告基团的方法确定保持与固体支持物结合的检测试剂的量。在具体实施方案中，预期抗体一旦固定在如上所述的支持物上，应该通过使用本领域中普通技术人员已知的任何合适封闭剂，诸如牛血清清蛋白或吐温2()TM(西格玛化学公司(SigmaChemicalCo.)，St.Louis,Mo.)封闭支持物上剩余的蛋白质结合位点。然后使固定的抗体与样品一起温育，且容许多肽结合于所述抗体。温育前，可以用合适的稀释剂，诸如磷酸盐缓冲液(PBS)稀释样品。通常，合适的接触时间(即温育时间)应该进行选择以对应于这样的时间期，所述时间期足以检测获自患有特定选择的肿瘤的个体的样品中多肽的存在。优选地，接触时间足以获得在结合和未结合多肽之间平衡时获得的结合水平的至少约95%的结合水平。本领域中那些普通技术人员应该承认获得平衡所需的时间可以容易地通过测定经过一段时间发生的结合水平来确定。还预期未结合的样品应该然后通过用合适的缓冲液清洗固体支持物而去除。然后应该将包含报告基团的二级抗体加入固体支持物。然后进行检测试剂与固定的抗体-多肽复合物在一起温育一段足以检测结合的多肽的时间量。随后，然后去除未结合的捡测试剂，并利用报告基团检测结合的检测试剂。用于检测报告基团的方法必须特异于所选报告基团的类型，例如，针对放射性基团，闪烁计数或放射自显影法通常是适合的。光谱法可以用于检测染料、发光基团和荧光基团。生物素可以利用与不同报告基团(通常，放射性或荧光基团或酶)偶联的抗生物素蛋白检测。酶报告基团可以通常通过添加底物(通常进行一段特定时期)，随后进行反应产物的光谱或其他分析来检测。为了使用本发明的诊断测定试剂盒确定是否存在癌症，诸如前列腺癌，通常将从保持与固体支持物结合的报告基团检测到的信号与对应于预确定截断值的信号相比较。例如，用于检测癌症的例证性截断值可以是当使固定的抗体与来自无癌症患者的样品一起温育时获得的平均信号。通常，认为产生高于预确定截断值约3个标准偏差的信号的样品是癌症阳性的。在备选的实施方案中，按照Sackett等，临床流行病学(ClinicalEpidemiology).临床医学基本禾斗学(ABasicScienceforClinicalMedicine)，利特尔布朗公司(LittleBrownandCo.)，1985，106-7页的方法，截断值可以利用接受者操作曲线(ReceiverOperatorCurve)确定。在该实施方案中，截断值可以从对应于关于诊断检测结果的每种可能的截断值的正阳性率(即灵敏性)和假阳性率(100%-特异性)对的图表确定。在最接近左上角的图表中的截断值(即包含最大面积的值)是最准确的截断值，且可以认为产生高于由该方法确定的截断值的信号的样品是阳性的。备选地，截断值可以沿着图表向左移动，从而最小化假阳性率，或向右移动，从而最小化假阴性率。一般，认为产生高于由该方法确定的截断值的信号的样品对癌症是阳性的。预期可通过所述试剂盒进行的诊断测定以流通式或试验纸检验(striptest)形式进行，其中结合试剂固定在膜，诸如硝化纤维膜上。在流通式检测中，当样品流经膜时，样品中的多肽结合于固定的结合试剂。第二种标记的结合试剂在包含该第二种结合试剂的溶液流经该膜时，再结合于结合试剂-多肽复合物。结合的第二种结合试剂的检测可以然后如上所述进行。在试验纸检验形式中，将结合试剂结合的膜的一端浸没在包含样品的溶液中。该样品沿该膜移动经过包含第二种结合试剂的区域，并到达固定的结合试剂的区域。所述第二结合试剂在固定的抗体区域处的浓度指示癌症的存在。在结合位点形成可以视觉读取的图案，诸如线，指示阳性检测。缺乏所述图案指示阴性结果。一般，选择固定在膜上的结合试剂的量，从而在生物学样品包含足以在处于上述形式的双-抗体夹心式测定中产生阳性信号的多肽水平时，产生视觉可辨别的图案。对于在本诊断测定中使用的优选结合试剂是目前公开的抗体，其抗原-结合片段、和如本文中所述的任何CDMAB相关结合试剂。固定在膜上的抗体的量应该是有效引起诊断测定的任意量，且可以在约25毫微克-约1微克的范围内。典型地，所述检测可以利用非常小量的生物学样品进行。另夕卜，本发明的CDMAB由于其识别其靶抗原的能力，可以用在进行研究的实验室中。为了更充分地理解本文所述的本发明，进行了下述描述。本发明提供特异性识别和结合IDAC141205-05抗原的CDMAB(即，IDAC141205-05CDMAB，由以保藏号141205-05保藏在IDAC的杂交瘤产生的分离的单克隆抗体的人源化抗体、由以保藏号141205-05保藏在IDAC的杂交瘤产生的分离的单克隆抗体的嵌合抗体、其抗原结合片段或抗体配体)。通过以保藏号141205-05保藏在IDAC的杂交瘤产生的分离的单克隆抗体的CDMAB可以以任何形式存在，只要它具有这样的抗原-结合区，所述抗原-结合区竞争性抑制由杂交瘤IDAC141205-05产生的分离的单克隆抗体与其靶抗原的免疫特异性结合。因此，具有与IDAC141205-05抗体相同的结合特异性的任何重组蛋白(例如，融合蛋白，其中所述抗体与第二蛋白如淋巴因子或肿瘤抑制性生长因子结合)均落入本发明的范围内。在本发明的一个实施方案中，所述CDMAB是IDAC141205-05抗体。在其它实施方案中，所述CDMAB是抗原结合片段，其可以是Fv分子(如单链Fv分子)、Fab分子、Fab，分子、F(ab，)2分子、融合蛋白、双特异性抗体、异种抗体或具有IDAC141205-05抗体的抗原-结合区的任何重组分子。本发明的CDMAB针对所述IDAC141205-05单克隆抗体针对的表位c本发明的CDMAB可以在分子内进行修饰，g卩，通过氨基酸修饰，以产生衍生物分子。化学修饰也可以是可能的。通过直接突变、亲和力成熟方法、噬菌体展示或链改组的修饰也可以是可能的。亲和力和特异性可以通过突变CDR和/或苯丙氨酸色氨酸(FW)残基和筛选具有所需特征的抗原结合位点进行改进或改良。(例如，Yang等;分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)，(1995)254:392-403)。一种方法是随机化各个残基或残基的组合，从而在其它方面相同的抗原结合位点群中，2-20个氨基酸的子集存在于特定位置处。备选地，突变可以通过易错PCR方法在一定范围的残基中诱导(例如，Hawkins筝分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)，(1992)226:889-96)。在另一个实例中，包含重链和轻链可变区基因的噬菌体展示载体可以在大肠杆菌(￡./0突变菌株中增殖(例如,Low筝分子生物学杂志(J.Mol.Biol.),(1996)250:359-68)。这些诱变方法是许多本领域中技术人员己知方法的例证。增加本发明抗体亲和力的另一种方式是进行链改组，其中重链或轻链与其他重链或轻链随机配对，从而制备具有较高亲和力的抗体。抗体中的多种CDR也可以利用其他抗体中相对应的CDR改组。衍生物分子将保留所述多肽的功能特性，即，具有这样的取代的分子仍然允许所述多肽与所述IDAC141205-05抗原或其部分结合。这些氨基酸取代包括，但不必要限于，本领域内已知为"保守的"氨基酸取代。例如，充分确定的蛋白质化学原理认为，通常可以在蛋白质内进行称为"保守氨基酸取代"的特定的(certain)氨基酸取代，而不改变该蛋白质的构象或功能。这样的变化包括用异亮氨酸(I)，缬氨酸(V)，和亮氨酸(L)中的任一种取代这些疏水性氨基酸中的任意其它一种；用天冬氨酸(D)取代谷氨酸(E)，并且反之亦然；用谷氨酰胺(Q)取代天冬酰胺(N)，并且反之亦然；和用丝氨酸(S)取代苏氨酸(T)，并且反之亦然。其它取代也可以被认为是保守的，这取决于特定氨基酸的环境及其在蛋白质的三维结构中的作用。例如，甘氨酸(G)和丙氨酸(A)常常可以互换，同样丙氨酸和缬氨酸(V)也可以互换。相对疏水性的甲硫氨酸(M)常常可以与亮氨酸和异亮氨酸互换，并且有时可以与缬氨酸互换。赖氨酸(K)和精氨酸(R)常常在这样的情形中互换，在所述情形中，氨基酸残基的重要特征是其电荷，并且这两种氨基酸残基的不同的pK，s并不显著。在特定的情形中，还有其它的变化可以被认为是"保守的"。实施例1使用人MDA-MB-231乳腺癌细胞进行体内肿瘤实验以前证明了(如S.N.11/709，676所公开地)AR47A6.4.2在MCF-7人乳腺癌异种移植模型中的功效。为了扩展该发现，在MDA-MB-231人乳腺癌异种移植模型中测试AR47A6.4.2，所述MDA-MB-231人乳腺癌异种移植模型与MCF-7模型不同且是Her2/neu阴性，雌激素和孕酮受体阴性的。参考图l、2禾B3，对8-10周龄雌性SCID小鼠通过在每只小鼠的右腰中皮下注射而植入在100微升PBS溶液中的500万人乳腺癌细胞(MDA-MB-231)。将小鼠随机分成2个处理组，每组10只。在植入后的1天，在用含有2.7mMKC1,1mMKH2P04,137mMNaCl和20mMNa2HP04的稀释剂从储备的浓縮液稀释后，对每组腹膜内施用300微升体积的20mg/kg的AR47A6.4.2检测抗体或缓冲液对照。然后，在最开始的两周，每周施用所述抗体和对照样品一次，并以每周2次再施用3周。每周用测径器测量肿瘤生长。在8剂量抗体后，结束处理。肿瘤测量的同时，记录动物的体重。在研究结束时，一旦它们达到终点，按照CCAC指导将所有动物处死。AR47A6.4.2在人乳腺癌MDA-MB-231体内预防性模型中显著抑制肿瘤生长。如在第55天，即最后给药抗体后5天时确定地，与缓冲液-处理组相比，用ARIUS抗体AR47A6.4.2处理以91.9%减少MDA-MB-231月中瘤生长(pO.00001,t-检验)(图l)。在第108天，即最后给药抗体后58天时，由于达到终点，从研究中除去对照组中的所有小鼠。然而，在此时，AR47A6.4.2处理组中的90%小鼠仍然存活(图2)。在整个研究过程中，不存在明显的临床毒性迹象。以每周时间间隔测量的体重是健康和不能健壮生长的替代品(surrogate)。从研究的开始到结束，所有组中的平均体重均增加(图3)。在第0天和第55天之间，平均体重在对照组中增加1.3g(6.9%)和在AR47A6.4.2处理组中增加1.8g(9.3%)。在处理期间内，各组间不存在显著差别。总之，AR47A6.4.2在人乳腺癌异种移植模型中是良好耐受的，并且显著抑制肿瘤生长。实施例2使用人PL45胰腺癌细胞进行体内肿瘤实验以前证明了(如S.N.11/709,676所公开地)AR47A6.4.2在预防性PL45人胰腺癌异种移植模型中的功效。为了确定有效剂量水平，在确立的PL45模型中测试处于多种剂量的AR47A6.4.2。参考图4、5和6，对8-10周龄雌性SCID小鼠通过在每只小鼠的颈部后颈处皮下注射而植入在100微升PBS溶液中的400万人胰腺癌细胞(PL45)。当平均小鼠肿瘤体积达到约U)0mmS时，将小鼠随机分成5个处理组，每组10只。在植入后第32天，在用含有2.7mMKC1，1mMKH2P04,137mMNaCl和20mMNa2HP04的稀释剂从储备的浓縮液稀释后，对每组腹膜内施用300微升体积的20,10,2或0.2mg/kg的AR47A6.4.2检测抗体或缓冲液对照。然后，在研究期间内每周施用所述抗体和对照样品三次。大约每4-7天用测径器测量肿瘤生长。在10剂抗体后，结束研究。在研究期间内每周一次记录动物的体重。在研究结束时，一旦它们达到终点，按照CCAC指导将所有动物处死。AR47A6.4.2证明了在人胰腺癌的PL45体内确立模型中的剂量依赖性肿瘤生长抑制。如在第67天，即最后处理剂量后14天时确定地，与缓冲液-处理组相比，使用20,10，2和0.2mg/kg剂量的ARIUS抗体AR47A6.4.2处理分别以48.9%(p=0.0001,t-检验)，34.6o/o(p=0.0011，t-检验),17.4%(p=0.1938,t-检验)和4.7%(p=0.7065，t-检验)减小PL45肿瘤的生长(图4)。这是对照和抗体处理组的几乎所有小鼠均仍存活。监测所有组中的存活直到第88天，即最后处理剂量后35天。在该时间点，对照组中只有20%(2/10)的小鼠仍存活，而在剂量为20,10,和2mg/kg的AR47A6.4.2处理组中分别有60%(6/10),40%(4/10)和90%(9/10)的小鼠仍存活(图5)。在整个研究过程中，不存在明显的临床毒性迹象。以每周时间间隔测量的体重是健康和不能健壮生长的替代品。从研究的开始到结束，所有组中的平均体重均增加(图6)。在第32天和第67天之间，平均体重在对照组中增加0.8g(4.1。/。)禾卩在剂量为20、10、2和0.2mg/kg的AR36A36.il.1处理组中分别增加1.5g(7.6%)，1.5g(7.6%),1.2g(6,3%)或1.9g(9.5%))。在处理期间内，各组间不存在显著差别。总之，在这种确立的人胰腺癌异种移植模型中，处于20和10mg/kg的AR47A6.4.2是良好耐受的，并且以剂量依赖性方式显著抑制肿瘤生长。剂量高于2mg/kg的AR47A6.4.2处理组中的小鼠还证明了显著的存活益处。总之，该数据证明AR47A6.4.2以剂量依赖性方式有效治疗人癌症。实施例3人正常和多肿瘤组织染色进行了另外的IHC研究(以前的研究公开在S.N.11/709，676中)，以进一步表征AR47A6.4.2抗原在人癌症中的普遍性。将载玻片从-80°C转移到-20°C。1小时后，在冷(-20。C)丙酮中对载玻片进行后固定(postfixed)10分钟，并然后容许达到室温。在4。C冷磷酸盐缓冲液(PBS)中冲洗载玻片3次，每次2分钟，随后利用在3%过氧化氢中10分钟封闭内源性过氧化物酶活性。然后在PBS中冲洗载玻片3次，5分钟，随后在通用封闭溶液(Dako，多伦多，安大略)中室温温育5分钟。AR47A6.4.2，抗人肌肉肌动蛋白(克隆HHF35，Dako，多伦多，安大略)，抗细胞角蛋白7克隆OV-TL12/30(Dako,多伦多，安大略),抗-TROP-2克隆77220.11(R&DSystemInc.,MN，USA)或同种型对照抗体(针对黑曲霉"^erg/〃wm'gw)葡糖氧化酶，即在哺乳动物组织中既不存在也不可诱导的酶；Dako,多伦多，安大略)在抗体稀释缓冲液中(Dako,多伦多，安大略)对每种抗体稀释到其各为5微克/mL的工作浓度，除了抗肌动蛋白是0.5微克/mL，抗细胞角蛋白7现成使用和商购的抗TROP-2是1微克/mL以夕卜，并在室温下温育1小时。用PBS清洗载玻片3次，2分钟/次。使用如提供的HRP缀合的二级抗体(DakoEnvisionSystem(DakoEnvisionSystem),多伦多，安大略)在室温下检测/显现初级抗体的免疫反应性30分钟。在该步骤后，载玻片用PBS清洗3次，5分钟/次，并且通过、添加DAB(3,3，-diaminobenzidinetetrahydrachloride,Dako,Toronto,Ontario)发色团底物溶液以在室、温下进行免疫过氧化物酶染色10分钟形成颜色反应。在自来水中洗涤载玻片终止发色反应。在用梅尔苏木精(SigmaDiagnostics(西格玛诊断)，Oakville,ON)复染色后，载玻片用分级乙醇(75-100%)脱水并用二甲苯透明化。利用封固齐廿(mountingmedia)(DakoFaramount,多伦多，安大略)封盖载玻片。对于胰腺阵列(TriStar,Rockville，MD)，除以下改进外遵从相同的流程。组织切片最初在室温下空气干燥2小时，并在用丙酮固定后再空气干燥30分钟。内源性过氧化氢利用处于甲醇中的3%过氧化氢封闭15分钟；该步骤在初级抗体温育后进行。利用Axiovert200(ZiessCanada,多伦多，ON)显微镜法检验载玻片，并用NorthernEclipseImagingSoftware(北方日食图像软件)(Mississauga，ON)获得和保存数字图像。由组织病理学家对结果进行阅读、评分和解释。图7显示人肿瘤和相应正常组织组(11个结肠癌和2个正常结肠，8个卵巢癌和2个正常卵巢，12个乳腺癌和4个正常乳腺，15个肺癌和4个正常肺，14个前列腺癌和4个正常前列腺和14个胰腺癌和5个正常胰51腺)的AR47A6.4.2染色结果的总结。这些组织分布在四种组织微阵列(TriStar,Rockville,MD)上。抗体显示出分别与6/11(55%),6/8(75%),11/12(92%),12/15(80%),14/14(100%)和3/14(21%)的结肠癌、卵巢癌、乳腺癌、肺癌、前列腺癌和胰腺癌中度到强烈的结合(图8和9)。另外，分别对2/11(18%)，1/12(8%)，3/15(20%)和2/14(14%)的结肠癌、乳腺癌、肺癌和胰腺癌观察到不确定到微弱的结合。该结合特异于所有检测的肿瘤中的肿瘤细胞，在一些组织中的肿瘤情形对比正常情形过表达。对于相应的正常组织，抗体显示出与0/2,0/2，4/4,4/4,4/4和5/5的正常结肠、卵巢、乳腺、肺、前列腺和胰腺组织结合(图9)。该结合主要针对那些器官的上皮组织。抗细胞角蛋白-7或抗肌动蛋白，作为阳性抗体对照，显示出分别与上皮组织和肌肉组织预期的阳性结合。IgG同种型阴性对照显示出与检测组织的阴性结合。实施例4磷酸-MAPK(促分裂原活化蛋白激酶)蛋白质组Profiler印迹为了确定受AR47A6.4.2处理影响的胞内信号传导分子，利用蛋白质组profiler人磷酸-MAPK抗体阵列(ARY002,R&DSystemsInc.(R&D系统公司)，Minneapolis,MN)对来自用AR47A6.4.2处理的细胞的溶胞产物进行筛选。处理和制备细胞以前的工作(如S.N.11/709,676中公开地)利用在重度联合免疫缺损小鼠(SCID)中生长的BxPC-3细胞，证明了AR47A6.4.2在胰腺癌异种移植模型中的体内功效。因此，对胞内信号传导分子活性的筛选利用BxPC-3细胞系进行。BxPC-3细胞生长至接近汇合，用磷酸盐缓冲液(PBS)清洗，并然后在血清和增补剂-缺乏的培养基中37°C饥饿4小时。此后，将AR47A6.4.2(20微克/mL)或8A3B.6(同种型对照；IgG2a)(20微克/mL)加入到细胞中并容许在4°C结合20分钟。然后通过向细胞中加入胎牛血清(FBS)、L-谷氨酰胺和丙酮酸钠以提供10n/。FBS,1°/丄-谷氨酰胺,和1%丙酮酸钠的最终浓度来刺激细胞。将细胞置于37°C温育器中并在剌激后1小时收集细胞溶胞产物。通过用PBS清洗细胞2次和在溶胞缓冲液6(Partno.895561:R&D系统抗体阵列ARY002)中收获来收集溶胞产物。通过吸移管吹吸重新混悬细胞，将其转移到1.5mL微量离心管中并通过涡旋在4°C混合30分钟。然后以M000xg离心溶胞产物5分钟，并将上清液转移到干净的管中。蛋白质浓度通过二辛可宁酸(BCA)蛋白测定(Pierce，Rockford,IL)确定。人磷酸-MAPK抗体阵列人磷酸-MAPK抗体阵列按照制造商所述的流程，针对BxPC-3细胞溶胞产物筛选(第四修订版,2006年5月，R&D系统抗体阵列ARY002)。简言之，每种人磷酸-MAPKprofiler膜通过在1.5mL阵列缓冲液1(Partno.895477:R&D系统抗体阵列ARY002)中，在摇动平台摇动器中温育1小时制备。对于每种处理，用溶胞缓冲液6稀释150微克总蛋白，以提供250微升的最终体积，并与1.25mL阵列缓冲液1混合。将该混合物加入到制备的profiler膜中，并在摇动平台摇动器中4°C温育过夜。然后在1X清洗缓冲液(由25X储液(Partno.895003:R&D系统抗体阵列ARY002)在纯化蒸馏水中稀释)中清洗每个膜三次并与在IX阵列缓冲液2/3(5X阵列缓冲液2,Partno.895478:R&D系统抗体阵列ARY002;阵列缓冲液3,Partno.895008:R&D系统抗体阵列ARY002)中制备的1.5mL抗磷酸-MAPK检测抗体混合物(含有生物素化的磷酸特异性抗体)(Partno.893051:R&D系统抗体阵列ARY002)—起温育2小时。在IX清洗缓冲液中清洗膜三次，并与以1:2000稀释在IX阵列缓冲液2/3中的1.5mL链霉抗生物素蛋白-HRP(Partno.890803:R&D系统抗体阵列ARY002)—起温育30分钟。在1X清洗缓冲液中清洗膜三次，并使其暴露于￡0>Western检测试剂(GEHealthcare(GE卫生保健)，LifeSciences(生命科学)，Piscataway,NJ)，以显影。膜暴露于化学发光胶片(Kodak(柯达)，Rochester,NY)并利用X-射线医学处理器显影。显影的X-射线胶片上的磷酸-MAPK阵列数据通过在发送模式扫描仪上扫描胶片和利用图像J分析软件(ImageJ1.37v，NIH)分析阵列图像文件量化。对于每种激酶，利用膜上透明区域的像素密度计算关于相应复制点的平均像素密度，并从背景信号中减去。对于各相应磷酸-麥白耙标，AR47A6.4.2处理样品的平均标准化像素密度除以8A3B.6处理样品的平均标准化像素密度，以获得相对变化比。磷酸-蛋白信号的减少％通过由1减去相对变化比并乘以100确定。来自用AR47A6.4.2或8A3B.6温育的磷酸-MAPK阵列膜的结果显示在图10中。与8A3B.6相比，AR47A6.4.2在受血清和增补剂剌激的BxPC-3细胞中，抑制p42/p44MAPK/胞外信号-调节激酶(ERK)(ERK1(32%)禾口ERK2(20%),Akt/蛋白激酶B(PKB)(Aktl/PKBa(15%),Akt2/PKB卩(18%)和Akt3/PKBY(27。/。))的磷酸化。这些激酶参与能够影响细胞增殖、生长和存活的胞内信号传导途径。AR47A6.4.2在受到血清和增补剂剌激时，可以减少这些激酶的磷酸化，这提示AR47A6.4.2可以通过这些激酶及其相关胞内信号传导途径阻断癌细胞的细胞生长和存活。实施例5调节剂(conditionedmedia)的TranSignalTM血管生成抗体阵列为了确定AR47A6.4.2处理是否影响血管生成因子的分泌，利用血管生成(anangiogenesis)阵歹lJ(MA6310,PanomicsInc.,RedwoodCity,CA)筛选来自受AR47A6.4.2处理的细胞的调节剂。处理和制备细胞如S.N.11/709,676中所公开地，利用在重度联合免疫缺损小鼠(SCID)中生长的BxPC-3细胞，证明了AR47A6.4.2在胰腺癌异种移植模型中的体内功效。因此，对血管生成因子分泌的筛选利用BxPC-3细胞系进行。BxPC-3细胞生长至接近汇合，用磷酸盐缓冲液(PBS)清洗，并然后补充2mL血清-缺乏培养基。将AR47A6.4.2(20微克/mL)或8A3B.6(同种型对照；IgG2a)(20微克/mL)加入到细胞中并容许在4°C结合20分钟。将细胞置于37。C温育器中24小时。24小时后，收集来自各培养物的调节剂并以1200旋转/分子(rpm)离心5分钟，以除去细胞或细胞碎片。TranSignaFM血管生成抗体阵列TranSignaFM血管生成抗体阵列使用BxPC-3细胞调节剂按照制造商所述的流程进行筛选(10/07/03发表，08/03/05修订；MA6310,PanomicsInc.,RedwoodCity，CA)。简言之，每个TranSignalTM血管生成抗体阵列膜通过在3mLIX封闭缓冲液(MA6310,PanomicsInc.,RedwoodCity,CA)中，在在摇动平台摇动器上，室温温育l小时制备。然后在4mLlX清洗缓冲液II(由20X清洗缓冲液II用蒸馏水(dH20)稀释为1X,MA6310，PanomicsInc.,RedwoodCity,CA)中清洗膜2次。清洗后，将收集的全部调节剂(2mL)加入到膜中，并在摇动平台摇动器上4。C温育过夜。然后用4mLoflX清洗缓冲液I(由20X清洗缓冲液在dH20中稀释为IX,MA6310,PanomicsInc.，RedwoodCity,CA)清洗膜3X。其后进行使用4mLIX清洗缓冲液II(MA6310,PanomicsInc.,RedwoodCity,CA)的三次清洗。然后将膜在1.5mL生物素-缀合的抗-血管生成混合物(MA6310,PanomicsInc.,RedwoodCity,CA)中，在摇动平台摇动器上温育1小时，用4mLIX清洗缓冲液I(MA6310,PanomicsInc.,RedwoodCity,CA)清洗3X，随后用4mLIX清洗缓冲液II(MA6310,PanomicsInc.,RedwoodCity,CA)清洗三次。将以1:1000稀释在IX清洗缓冲液II中的链霉抗生物素蛋白-HRP加入到膜中，并在室温下温育1小时，再次用4mLIX清洗缓冲液I(MA6310,PanomicsInc.,RedwoodCity，CA)清洗3X，随后用4mLIX清洗缓冲液II(MA6310,PanomicsInc.,RedwoodCity,CA)清洗三次，并利用HyperfilmECL试剂(RPN3114K,GEHealthcare(GE卫生保健)，LifeSciences(生命科学)，Piscataway,NJ)显影。使膜暴露于化学发光胶片(Kodak(柯达)，Rochester,NY)并利用X-射线医学处理器显影。显影的X-射线胶片上的血管生成阵列数据通过在发送模式扫描仪上扫描胶片和利用图像J分析软件(ImageJ1.37v,NIH)分析阵列图像文件量化。对于每种分泌的因子，利用膜上透明区域的像素密度计算关于相应复制点的平均像素密度，并从背景信号中减去。对于各相应磷酸-蛋白靶标，AR47A6.4.2处理样品的平均标准化像素密度除以8A3B.6处理样品的平均标准化像素密度，以获得相对变化比。信号减少％通过由1减去相对变化比并乘以100确定。来自用AR47A6.4.2或8A3B.6温育的TranSignalTM血管生成抗体阵列膜的结果显示在图11中。与8A3B.6相比，AR47A6.4.2抑制有效的血管生成因子血管内皮生长因子(VEGF)和胎盘生长因子(PLGF)的分泌。这些观察结果提示用AR47A6.4.2处理BxPC-3胰腺癌细胞系可以通过减少在实体瘤中促进血管生长的细胞分泌因子而抑制癌细胞的肿瘤生长和存活。该发现证明关于AR47A6.4.2可能的作用机制。实施例6证明抗-TROP-2抗体AR47A6.4.2的体外补体依赖性细胞毒性(CDC)活性已经在人胰腺癌异种移植肿瘤模型中证明了鼠AR47A—6,4.2的治疗功效(如S.N.11/709,676中和以上实施例2中公开)。为了阐明其作用机制，在两种胰腺癌细胞系PL45和BxPC-3中评估AR47A6.4.2的体外CDC活性。确立的单层PL45和BxPC-3细胞，涂布后2天；用抗体(2，0.2和0.02微克/mL)处理并容许结合l小时(37。C;40/。CO2)。然后，加入兔补体以产生10。/。(v/v)的最终浓度并容许细胞在37°C,4%C02温育另外3小时。CDC活性通过利用Cytotox96TM试剂盒(PromegaCorporation,Madison,WI,美国)测量未受损细胞中存在的剩余乳酸脱氢酶评估。每种检测抗体重复评估三次，并且利用以下等式％细胞毒性=100-[检测抗体(492—-背景(49211111)]/仅补体(492nm)-背景(492run)P100，将结果表述为与仅用兔补体处理孔相比的％细胞毒性。来自该实验的结果(图12)证明抗TROP-2抗体AR47A6.4.2在这两种胰腺癌靶细胞系(PL45和BxPC-3)中能够以剂量依赖性方式募集兔补体。在以最高浓度(20微克/mL)的同种型-匹配对照处理时，在这些细胞系中没有观察到CDC活性。该数据证明AR47A6.4.2能够体外补体募集，并可能是该抗体发挥其体内作用的机制之一。实施例7表位绘图进行表位绘图实验，从而确定由AR47A6.4.2识别的TROP-2分子的区域。利用标准Fmoc-化学基于TROP-2的氨基酸序列合成重叠15聚体肽，并利用具有清除剂作用的三氟酸去保护。另外，利用支架上的化学连接肽(CLIPS)技术，在化学支架上合成至多30聚体双环、三环和折叠-样肽，从56而重建TROP-2分子的不连续表位。将所述成环的肽合成为含有双半胱氨酸(dicysteine)，其通过用a，a，-二溴二甲苯处理而环化且环的尺寸由于以可变间隔引入半胱氨酸残基而变化。如果除新引入的半胱氨酸外存在其他半胱氨酸，则它们被替换为丙氨酸。肽中多个半胱氨酸的侧链通过在信用卡格式聚丙烯PEPSCAN卡(455个肽格式/卡)上与处于碳酸氢铵(20mM，pH7.9)/乙腈(l:l(v/v))中的0.5mMCLIPS模板溶液诸如1，3-二(溴甲基)苯反应与CLIPS模板偶联。将该卡在完全浸没在溶液中的同时在溶液中轻轻摇动30-60分钟。最后，用过量H20广泛清洗卡并在含有处于PBS(pH72)中i。/。SDS/0.1/。P-巯基乙醇的分裂-缓冲液中，70°C，超声波30分钟，随后在H20中另外超声波45分钟。总共，合成了3579种不同的肽。在基于PEPSCAN的ELISA中检测抗体与每种肽的结合。含有共价连接的肽的455-孔信用卡格式聚丙烯卡与由稀释在封闭溶液(处于PBS中的5%马血清(v/v)、5。/。卵清蛋白(w/v)和1%吐温80)中的10微克/mLAR47A6.4.2组成的初级抗体溶液一起温育过夜。用含有1%吐温80的PBS清洗后，将肽与兔抗小鼠抗体过氧化物酶处于封闭溶液(处于PBS中的5%马血清(v/v)、5。/。卵清蛋白(w/v)和吐温80)中的1/1000稀释液一起在25。C温育1小时。用含有1%吐温80的PBS清洗后，加入过氧化物酶底物2,2'-连氮基-二-3-乙基苯并噻唑啉磺酸酯(ABTS)和2微升3Q/。H202。1小时后，测量颜色的显影。用电荷偶联装置(CCD)——照相机和图像处理系统以0-4000的对数标度量化颜色的显影。3579种中的20种与AR47A6.4.2最强有力结合的肽列在图13中。通过分析AR47A6.4.2结合的肽的组成，确定了2个氨基酸热点区域。热点氨基酸序列LFRERYRLH(SEQIDNO:ll)存在于肽编号1，2，7，8,12，16，17和18中，且热点氨基酸序列QVERTLIYY(SEQIDNO:12)存在于肽编号11和20中。肽3-6,10,14,15和19最可能代表表位模拟，因为这些肽的序列属于TROP-2分子的胞内部分。总之，这些结果显示AR47A6.4.2识序列组成的不连续表位。完整TROP-2分子氨基酸序列中的这些氨^酸序列的位置显示在图14中。实施例7AR47A6.4.2的人源化重组DNA技术利用本领域中公知的方法，和适当时，这些方法中所用酶的厂商使用说明进行。详细实验室方法也记述如下。利用多聚A束系统1000(PolyATractSystem1000)mRNA提取试剂盒(PromegaCorp.,Madison,WI)，按照制造商的说明，由杂交瘤AR47A6.4.2细胞提取mRNA。反转录mRNA如下对于k轻链，5.0微升mRNA与1.0微升20pmol/微升MuIgGKVL-3，引物OL040(图15)和5.5微升无核酸酶水(PromegaCorp.,Madison,WI)混合。对于人轻链，5.0微升mRNA与1.0微升20pmol/微升MuIgGXVL-3，引物OL042(图15)和5.5微升无核酸酶水(PromegaCorp.,Madison,WI)混合。对于y重链，5微升mRNA与1.0微升20pmol/微升MulgGVH-3'引物OL023(图16)和5.5微升无核酸酶水(PromegaCorp.,Madison，WI)混合。将全部三种反应混合物置于被设置为70°C的预热的热循环器块中5分钟。将这些在冰上冷冻5分钟，随后分别加入到4.0微升ImPromII5x反应缓冲液(PromegaCorp,.Madison,WI)，0.5微升RNasin核糖核酸酶抑制剂(PromegaCorp，.Madison,WI)，2,0微升25mMMgCl2(PromegaCorp，.Madison,WI)，1.0微升10mMdNTP混合物(Invitrogen，Paisley,UK)禾卩1.0微升ImpromII反转录酶(PromegaCorp.,Madison,WI)中。将反应混合物在室温下温育5分钟，随后转移到设置为42°C的预热PCR块中1小时。此后，通过在PCR块中70°C温育15分钟热灭活反转录酶。由cDNA扩增重链和轻链序列，如下PCR总混合物通过将37.5微升10x高保真扩展PCR缓冲液(Roche(罗氏)，Mannheim,德国)，7.5微升10mMdNTP混合物(Invitrogen，Paisley,英国)和3.75微升高保真扩展DNA聚合酶(Roche(罗氏)，Mannheim,德国)加入到273.75微升无核酸酶水中制备。将该总混合物在冰上分配为容纳在15个薄壁PCR反应管中的21.5微升等分试样。向这些管中的6个加入2.5微升MuIgVH-3'反转录反应混合物和1.0微升重链5'引物集合HA-HF(关于引物序列和引物集合组成参见图16)。向另外7个管中加入2.5微升MuIgKVL-3'反转录反应和1.0微升轻链5，引物集合LA-LG(图15)。向最后的管中加入2.5微升MuIgKVL-3，反转录反应和1.0微升X轻链引物MuIg入VL5'-LI。将反应置于热循环器块中并加入到95°C2分钟。进行聚合酶链反应(PCR)反应在94。C进行30秒，55。C进行1分钟和72。C进行30秒的循环，进行40次。最后在72。C加热PCR产物5分钟，并然后保持在4。C。利用pGEM-T易载体(easyVector)系统I(PromegaCorp.,Madison，WI)试剂盒，将扩增产物克隆到pGEM-T易载体中并测序。由此生成的VH和VL序列分别显示在图17和18中。为了生成嵌合抗体，利用引物OL334和OL335通过PCR扩增VH区基因(图19);设计这些，从而利用来自所述cDNA克隆之一的质粒DNA作为模板在5，Miul和3，Hindm限制性酶位点中进行改造。向0.5mLPCR管中加入5微升10x高保真扩展PCR缓冲液(Roche(罗氏)，Mannheim,德国)，1.0微升10mMdNTP混合物(Invitrogen，Paisley，英国)，0.5微升引物OL330,0.5微升引物OL331,1.0微升模板DNA和0.5微升高保真扩展DNA聚合酶(Roche(罗氏)，Mannheim,德国)加入到41.5微升无核酸酶水中。利用寡核苷酸OL336和OL337(图20)以相似的方法扩增VL区，从而在BssHII和BamHI限制性酶位点中改造。将反应置于热循环器块中并加热到95。C2分钟。进行聚合酶链反应(PCR)反应在94。C进行30秒，55。C进行1分钟和72。C进行30秒的循环，进行30次。最后在72°C加热PCR产物5分钟，并然后保持在4。C。然后，分别在Mlul/Hindlll和BssHII/BamHI位点处将VH和VL区PCR产物分别克隆到载体pANT15和pANT13(图21)中。pANT15和pANT13均是基于pAT153的质粒，其包含人Ig表达盒。pANT15中的重链盒由受hCMVie启动子驱动的具有下游人IgG多聚A区的人基因组IgGl恒定区基因组成。pANT15还包含受SV40启动子驱动的具有下游SV40多聚A区的仓鼠W/^基因。pANT13的轻链盒包含受hCMVie启动子驱动的具有下游轻链多聚A区的基因组人K恒定区。人Ig引导序列和恒定区之间的克隆位点容许可变区基因的插入。NS0细胞(ECACC85110503,Porton,英国)通过电穿孔与这两种质粒一起共转染，并在DMEM(Invitrogen,Paisley,英国)+5。/。FBS(超低IgG目录号16250-078Invitrogen，Paisley,英国)+青霉素/链霉素(Invitrogen,说明书第50/62页Paisley,英国)+100nM甲氨蝶呤(Sigma,Poole，英国)中选择。分离甲氨蝶呤抗性菌落并通过使用1mLHiTrapMabSelectSuRe柱(GEHealthcare(GE卫生健康)，Amersham,英国)的蛋白A亲合层析法，遵照制造商建议的条件纯化抗体。利用AR47A6.4.2小鼠抗体，在基于ELISA的竞争测定中检测嵌合抗体，所述AR47A6.4.2小鼠抗体是利用生物素标记物微型生物素化试剂盒(Biotintagmicrobiotinylationkit)(Sigma(西格玛),Poole,英国)生物素化的。生物素化的小鼠AR47A6.4.2用于在存在不同浓度的竞争抗体的条件下结合OVCAR-3细胞。培养OVCAR-3细胞，从而使其在组织培养物处理的、平底、96孔板中紧密汇合并然后固定。将生物素化的小鼠AR47A6.4.2抗体稀释到1微克/mL并与处于0-5微克/mL浓度范围内的等体积竞争抗体混合。将100微升抗体混合物转移到OVCAR-3包被板的孔中，并在室温下温育1小时。清洗板并通过加入链霉抗生物素蛋白-HRP缀合物(Sigma(西格玛)，Poole,英国)(以1:500稀释)和OPD底物(Sigma(西格玛)，Poole，英国)检测结合的生物素化的小鼠AR47A6.4.2。该测定在黑暗中显影5分钟，随后通过加入3MHC1终止。然后在MRXTCII板读数器(DynexTechnologies(Dynex技术)，Worthing,英国)中以4卯nm的吸光度读该测定板。嵌合抗体((ch)AR47A6.4.2)表现出在与生物素化的AR47A6.4.2抗体竞争结合OVCAR-3细胞中与小鼠AR47A6.4.2抗体等价。通过比较小鼠AR47A6.4.2序列和同源人VH和VL序列设计人源化VH和VL序列。VH变体的序列在图22中给出，VL变体的序列在图23中给出。人源化V区基因利用用于PCR的小鼠AR47A6.4.2VH和VL模板构建，所述PCR使用长重叠寡核苷酸引入来自同源人VH和VL序列的氨基酸。用于生成变体人源化VH和VL序列的寡核苷酸分别显示在图19和20中。将变体基因直接克隆到表达载体pSVgpt和pSVhyg中，如在US2004260069(Hellendoorn,Carr和Baker)中相似描述。变体人源化重链和轻链(包括嵌合构建体)的所有组合瞬间转染到CHO-K1细胞(ECACC85051005,Porton，英国)中并在48小时后收获上清液。利用纯化的人IgGl/k(Sigma(西格玛)，Poole，英国)作为标准物，在IgGFc/kELISA中量化上清液的抗体表达。免疫吸附96孔板(Nalgenunc，60Hereford,英国)用在IXPBS(pH7.4)中以1:1500稀释的小鼠抗人IgGFc-特异性抗体(16260Sigma，Poole，UK)在37°C包被1小时。在PBS+0.05。/。吐温20中清洗板三次，随后加入稀释在2%BSA/PBS中的样品和标准物。室温下温育板1小时，随后在PBS/吐温中清洗三次并加入在2。/。BSA/PBS中以1:1000稀释的100微升/孔检测抗体山羊抗人k轻链过氧化物酶缀合物(A7164Sigma(西格玛)，Poole,英国)。在室温下温育板1小时，随后用PBS/吐温清洗5次。用OPD底物(Sigma(西格玛)，Poole，英国)检测结合的抗体。该测定在黑暗中显影5分钟，随后通过加入3MHC1终止。然后在MRXTCII板读数器(DynexTechnologies(Dynex技术)，Worthing,英国)中在490nm读该测定板。在上述竞争结合ELISA中测定人源化变体的结合。使用不同浓度(156.25ng/mL-5微克/mL)的纯化嵌合抗体((ch)AR47A6.4.2)生成标准曲线，所述嵌合抗体((ch)AR47A6.4.2)与小鼠AR47A6.4.2竞争与96孔微滴定板上固定的OVCAR-3细胞的结合。小鼠AR47A6.4.2与OVCAR-3细胞的结合使用山羊抗小鼠IgG:HRP缀合物(A2179Sigma(西格玛)，Poole，英国)检测，并利用TMB底物(Sigma(西格玛)，Poole，英国)显影。利用嵌合标准曲线，以检测浓度预期的百分比抑制针对每种变体计算并与实际观察到的比较。然后，对于各种不同的重链/轻链组合，通过将观察到的检测样品的抑制除以预期的抑制标准化结果。由此，具有观察/预期比=1.0的样品与嵌合抗体具有相同的结合亲和力，而数值>1.0具有对TROP-2减少的结合，且具有比率〈.0的样品具有对TROP-2增强的结合。该结果显示在图24中。将VH和VL基因的组合通过电穿孔克隆到双载体pANT18(pANT18载体基于质粒前述pANT15，其中将来自pANT13的轻链盒克隆到Spel/Pcil限制性酶位点中)中和转染到CHO/dhfr-细胞(ECACC，94060607)中，并在培养基(具有L-谷氨酰胺和丙酮酸钠的高葡萄糖DMEM(Invitrogen,Paisley,英国)+5。/q透析FBS(目录号26400-044Invitrogen，Paisley,英国)，脯氨酸(Sigma(西格玛)，Poole，英国)和青霉素/链霉素(Invitrogen,Paisley,英国》缺失(depletedof)次黄嘌呤和腺苷中选择。抗体通过如上的蛋白A亲合层析法纯化。纯化的抗体过滤灭菌，随后保存在PBS(pH7.4)中，+4QC。抗体浓度通过如上的人IgGl/K捕获ELISA计算。通过如上的竞争ELISA检测4种纯化的抗体样品与表达人TROP-2的OVCAR-3细胞的结合。不同浓度的各种抗体(156ng/mL-5微克/mL)与纯化的小鼠AR47A6.4.2混合并加入到用固定的OVCAR-3细胞包被的微滴定板中。小鼠AR47A6.4.2的结合如上用山羊抗小鼠IgG(Fc):HRP缀合物检测。在板读数器中测量450nm处的吸光度，并将其针对检测抗体浓度绘图。计算所选变体以50。/。(IC5o)抑制小鼠AR47A6.4.2与OVCAR-3细胞结合所需的浓度并与嵌合抗体比较。4种变体人源化抗体和嵌合的抗体ICs。如下(ch)AR47A6.4.2=1.71微克/mL(hu)AR47A6.4.2变体HV2/KV3=2.24微克/mL(hu)AR47A6.4.2变体HV2/KV4^3.04微克/mL(hu)AR47A6.4.2变体HV3/KV3=2.04微克/mL(hu)AR47A6.4.2变体HV3/KV4=1.02微克/mL实施例9确定AR47A6.4.2禾口(hu)AR47A.6.4.2与rhTROP-2的结合亲和性通过确定结合重组人TROP-2(rhTrop-2)后各自的解离常数(Ko)比较AR47A6.4.2,(hu)AR47A6.4.2变体HV2/KV3,(hu)AR47A6.4.2变体HV2/KV4,(hu)AR47A6.4.2变体HV3/KV3和(hu)AR47A6.4.2变体HV3/KV4的结合亲和性。利用标准胺偶联程序固定抗多聚组氨酸单克隆抗体(R&DSystems(R&D系统)，Minneapolis,MN,美国)。通过注射104微升0.4MEDC和0.1MNHS的1:1混合物(流速10微升/分钟)激活CM5传感器芯片(GEHealthcare(GE卫生保健)，Piscataway,NJ美国以前的Biacore)的表面。以浓度20微克/mL(稀释于10mM乙酸钠pH5.5)注射抗多聚组氨酸抗体以达到约2000RU。最后，将119微升1.0M乙醇胺-HCLpH8.5注射到该表面上，从而封闭传感器芯片表面上的任何未占据活化位点。HIS-标记的rhTROP-2(R&DSystems(R&D系统)，Minneapolis,MN,美国)以1微克/mL注射并通过HIS标记物捕获在芯片表面上，随后注射AR47A6.4.2，(hu)AR47A6.4.2变体HV2/KV3,(hu)AR47A6.4.2变体HV2/KV4,(hu)AR47A6.4.2变体HV3/KV3或(hu)AR47A6.4.2变体HV3/KV4。为了后继注射再生传感器芯片表面通过以50微升/分钟的流速注射10mM甘氨酸-HC1pH2.060秒实现。抗体稀释在运行缓冲液(HBS-EP+，GEHealthcare(GE卫生保健)，Piscataway，NJ美国以前的Biacore)中并以0.67-333nM范围内的浓度连续注射，并在每个周期之间再生表面。作为对照，也在参考表面上注射各种抗体浓度，其在表面上固定抗多聚组氨酸抗体但不捕获rhTROP-2。利用BiacoreT100评估软件1.1版，利用简单的1:1相互作用模型对获得的sensograms进行动力学分析。测量的结合和解离率常数用于计算抗体的KD。实验利用BiacoreT100系统(GEHealthcare(GE卫生保健)，Piscataway,NJ美国以前的Biacore)进行。这些实验的结果关于鼠AR47A6.4.2产生数值3.03nM，而全部四禾中(hu)AR47A6.4.2在0.613-0.697nM之间。(图25)，说明所有抗体处于纳摩尔-亚纳摩尔范围内，且人源化抗体的亲和性高于母体鼠AR47A6.4.2的亲和性。还将结合率常数(Ka)和解离率常数(Kd)列表(图25)。实施例10分离竞争性结合剂给定抗体，本领域普通技术人员可以产生竞争性抑制CDMAB，例如竞争性抗体，其是一种识别相同表位的抗体(BelangerL筝C7/m'caOn'm/cajcto银75-7S(1973))。一种方法需要(entails)用这样的免疫原进行免疫，所述免疫原表达被所述抗体识别的抗原。样品可以包括，但不限于，组织、分离的蛋白或细胞系。得到的杂交瘤可以使用竞争测定进行筛选，所述竞争测定是一种鉴定抑制测试抗体结合的抗体的测定，诸如ELISA,FACS或蛋白质印迹。另一种方法可以使用噬菌体展示抗体文库，和淘选(panning)识别所述抗原的至少一个表位的抗体(RubinsteinJL等.年度生物化学"^/历0c/7em)314:294-300(2003))。在每种情形中，基于抗体置换初始标记抗体与其靶抗原的至少一个表位的结合的能力，选择抗体。因此，这样的抗体将如初始抗体一样具有识别抗原的至少一个表位的特征。实施例11克隆AR47A6.4.2单克隆抗体的可变区以前确定了来自由AR47A6.4.2杂交瘤细胞系产生的单克隆抗体的重链(VH)和轻链(ViJ的可变区序列(如S.N.11/709,676中所公开)。为了生成嵌合和人源化IgG，可以将可变轻和可变重结构域亚克隆到合适的载体中表达(如以上实施例8中所公开)。在另一个实施方案中，AR47A6.4.2或其去免疫的、嵌合的或人源化的形式通过在转基因动物中表达编码所述抗体的核酸产生，从而表达并可以回收抗体。例如，抗体可以以促进回收和纯化的组织特异性方式表达。在该实施方案中，本发明的抗体表达在乳腺中，从而在哺乳期过程中分泌。转基因动物包括但不仅限于小鼠、山羊和兔。(0单克隆抗体使用常规方法容易地分离并测序编码单克隆抗体(如S.N.11/709,676中所公开)的DNA(例如，通过使用能够特异性结合编码所述单克隆抗体重链和轻链的基因的寡核苷酸探针)。杂交瘤细胞作为这样的DNA的优选来源。一旦分离，所述DNA可以置于表达载体内，然后将其转染到不另外产生免疫球蛋白的宿主细胞中，如大肠杆菌(E.coli)细胞、猿猴COS细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、或骨髓瘤细胞中，以在重组宿主细胞中获得单克隆抗体的合成。也可以修饰所述DNA，例如，通过人重链和轻链恒定结构域编码序列取代替换同源鼠序列。也可以使用合成蛋白质化学中的已知方法，包括含有交联剂的那些方法，体外制备嵌合抗体或杂交抗体。例如，可以使用二硫化物交换反应或通过形成硫醚键构建免疫毒素。用于这一目的的适当试剂的实例包括亚氨基硫羟酸盐(iminothiolate)和甲基-4-务1t基butyrimidate。(ii)人源化抗体人源化抗体具有从非人来源引入其中的一个或多个氨基酸残基。这些非人氨基酸残基通常称为"引入"的残基，其典型地来自"引入的"可变结构域。可以通过Winter及合作者的方法用啮齿类CDRs或CDR序列取代相对应的人抗体序列(Jones等，自然(Nature)321:522-525(1986);Riechmann等，自然(Nature)332:323-327(1988);Verhoeyen等，科学(Science)239:1534-1536(1988);在Clark，今日免疫学(Immunol.Today)21:397-402(2000)中的综述)进行人源化。可以通过使用母体和人源化序列的三维模型分析母体序列和多种概念人源化产物的方法而制备人源化抗体。三维免疫球蛋白模型通常是本领域技术人员可获得的和熟悉的。图解和展示所选候选免疫球蛋白序列的可能的三维构象结构的计算机程序是可获得的。这些展示的观察允许分析残基在所述候选免疫球蛋白序列的功能中的可能作用，即，分析影响候选免疫球蛋白与其抗原结合的能力的残基。以这种方式，可以从共有和引入序列中选择FR残基且组合FR残基，以便获得需要的抗体特征，如对靶抗原增加的亲和性。通常，CDR残基直接且最显著地(mostsubstantially)参与影响抗原结合。(iii)抗体片段已经开发了生产抗体片段的各种技术。这些片段可以通过重组宿主邻胞产生(参考Hudson,现代免疫学观点(CumOpin.Immunol.)11:548-557(1999);Little等，今日免疫学(Immunol.Today)21:364-370(2000))。例如，Fab，-SH片段可以直接从大肠杆菌回收，并且化学偶联以形成F(ab，)2片段(Carter等，生物技术(Biotechnology)10:163-167(1992》。在另一个实施方案中，使用亮氨酸拉链GCN4促进F(ab，)2分子的组装而形成F(ab，)2。根据另一种方法，可以直接从重组宿主细胞培养物分离Fv,Fab或F(ab')2片段。实施例12包括本发明的抗体的组合物本发明抗体可以用作预防/治疗癌症的组合物。所述包括本发明抗体的用于预防/治疗癌症的组合物可以作为它们采用液体制剂的形式施用，或作为适用于人或哺乳动物(例如，大鼠、兔、绵羊、猪、牛、猫、犬、猿猴、等等)的制剂的药物组合物口服或肠胃外(例如，静脉内、腹膜内、皮下、身施用，或可以作为适当的组合物施用。用于所述施用的组合物可以包含药用载体，和本发明抗体或其盐，稀释剂或赋形剂。这样的组合物以适于口服或肠胃外施用的药物制剂的形式提供。用于肠胃外施用的组合物的实例是可注射制剂、栓剂等。可注射制剂可以包括这样的剂型，诸如静脉内、皮下、皮内和肌内注射，滴注，关节内注射等等。这些可注射制剂可以通过公知方法制备。例如，可注射制剂可以通过将本发明抗体或其盐溶解、混悬或乳化在常规用于注射的无菌水性介质或油性介质中而制备。对于水性注射介质，存在如生理盐水，含有葡萄糖和其他辅助试剂的等渗溶液等，其可以与适当的增溶剂如醇(例如乙醇)、多元醇(例如，丙二醇、聚乙二醇)、非离子表面活性剂(例如，聚山梨酸酯80,HCO-50(氢化蓖麻油的聚氧乙烯(50mols)加合物))等组合使用。对于油性介质，使用例如芝麻油、大豆油等，其可以与增溶剂如苯甲酸苄酯、苯甲醇等组合使用。这样制备的注射剂通常装在适当的安瓿中。用于直肠施用的栓剂可以通过将本发明抗体或其盐与常规用于栓剂的基质混合而制备。用于口服施用的组合物包括固体或液体制剂，具体为片剂(包括糖衣和薄膜包被的片剂)，丸剂、粒剂、粉末制剂、胶囊(包括软胶囊)、糖桨、乳液、混悬液等。这样的组合物通过公知方法制备，并且可以包含常规用在药物制剂领域中的赋形剂(vehicle)、稀释剂或赋形剂(excipient)。用于片剂的赋形剂(vehicle)或赋形剂(excipient)的实例包括乳糖、淀粉、蔗糖、硬脂酸镁等。有利地，将上述用于口服或肠胃外应用的组合物制备成适于符合活性成分剂量的单位剂量的药物制剂。所述单位剂量制剂包括，例如，片剂、丸剂、胶囊、注射剂(安瓿)、栓剂、等等。所包含的前述化合物的量通常为5-500mg/剂量单位形式；优选地特别是在注射液形式中含有约5-约100mg的上述抗体，并且对于其他形式含有10-250mg的上述抗体。前述包括本发明抗体的预防性/治疗性药剂或调节剂的剂量可以取决于下列各项而不同被施用的受试者，目的疾病，病症，施用途径等等。例如，当用于治时，例如，治疗/预防成年人中的乳腺癌时，有利地以约O.Ol-约20mg/kg体重、优选地约0.1—约10mg/kg体重且66更优选地约0.1-约5mg/kg体重的剂量静脉内施用本发明的抗体，约1-5次沃，优选约1-3次沃。在其他肠胃外和口服施用中，所述药剂可以以与上述剂量相对应的剂量施用。当病症特别严重时，可以依据病症增加剂量。本发明抗体可以以其自身或以适当组合物的形式施用。用于施用的组合物可以包含药用载体与前述抗体或其盐，稀释剂或赋形剂。这样的组合物以适于口服或肠胃外施用(例如，血管内注射、皮下注射等)的药物制剂的形式提供。上述每种组合物还可以包含其他活性成分。此外，本发明抗体可以与其他药剂联合使用，所述其他药剂例如烷基化试剂(例如，环磷酰胺，异环磷酰胺(ifosfamide),等)，代谢拮抗剂(例如，甲氨喋呤，5-氟尿嘧啶，等)，抗肿瘤抗生素(例如，丝裂霉素，阿霉素，等)，植物来源的抗肿瘤药(例如，长春新碱，长春地辛，泰素，等)，顺铂，卡钼，依托泊苷，伊立替康，等。本发明抗体和上述药物可以同时或以交错的次数施用给患者。本文中所述的治疗方法，特别是对于癌症的，也可以利用施用其他抗体或化疗剂进行。例如，也可以施用针对EGFR的抗体，诸如ERBITUX⑧(西妥昔单抗(cetuximab))，特别是当治疗结肠癌时。ERBITUX⑧还显示出有效治疗银屑病。其他组合使用的抗体包括Herceptin(曲妥单抗)(特别是当治疗乳腺癌时)，AVASTIT^(特别是当治疗结肠癌时)，禾nSGN-15(特别是当治疗非-小细胞肺癌时)。施用本发明的抗体和其他抗体/化疗剂可以同时，或者分别，通过相同或不同的途径进行。使用的化疗剂/其他抗体方案包括认为最佳适合于治疗患者病症的任何方案。不同的恶性肿瘤可以需要使用特异性抗-肿瘤抗体和特异性化疗剂，所述特异性抗-肿瘤抗体和特异性化疗剂应该基于具体患者确定。在本发明的优选实施方案中，化学治疗与抗体治疗同时，或更优选地，化学治疗在抗体治疗后施用。然而，应该强调的是，本发明不局限于任何具体的施药方法或途径。证据的优势表明AR47A6.4.2通过与TROP-2上存在的表位连接而介导抗癌作用并延长存活。以前还显示，如在S.N.11/709,676中公开地，AR47A6.4.2抗体可以用于将关联抗原从表达细胞诸如MDA-MB-231细胞中免疫沉淀处理。此外，可以表明，AR47A6.4.2、嵌合AR47A6.4.2((ch)AR47A6.4.2)或人源化变体，(hu)AR47A6.4.2可以用于检测表达与其特异性结合的TROP-2抗原部分的细胞和/或组织；这使用所示的但不限于FACS、细胞ELISA或IHC的技术。如用AR47A6.4.2抗体，其他抗TROP-2抗体可以用于免疫沉淀和分离TROP-2抗原的其他形式，且抗原也可以用于利用相同类型的测定抑制那些抗体与表达该抗原的细胞或组织的结合。<table>tableseeoriginaldocumentpage69</column></row><table>本说明书中提及的所有专利和出版物象征本发明所属领域技术人员的水平。所有的专利和出版物通过引用结合于此，以如同每篇单独的出版物通过引用特别且独立地指明结合的相同程度结合。应该理解，尽管示例了本发明的某些形式，但是不限于本文所述和所示的部分的特定形式或安排。对于本领域技术人员来说，在不背离本发明的范围的条件下可以进行各种变化，并且本发明不应该被视为限于在本说明书中所示和所述的内容，这是显而易见的。本领域技术人员应该容易地理解本发明充分适合实施所述目标并且获得所提及的目的和益处以及其中固有的那些。本发明所述的任何寡核苷酸、肽、多肽、生物相关的化合物、方法、步骤和技术代表目前的优选实施方案，意欲是示例性的，并且不意欲作为对范围的限制。本领域技术人员应该实施其中的变化和其他应用，所述变化和其他应用包括在本发明的精神内，并且由后附的权利要求的范围限定。尽管己经联合特定优选实施方案对本发明进行了描述，但是应该理解所要求的本发明不应该不适当地限于所述特定实施方案。实际上，对于本领域技术人员是明显的实施本发明的所述模式的各种改进意欲被包括在后附权利要求的范围内70国家微生物实验室，加拿大公共健康厅1015ArlingtonStreetWinnipeg,ManitobaCanadaR3￡3R2国际表格IDAC/BP/4原始保藏情形中的收据(按照布达佩斯条约细则Rule7.1发布)附加原始保藏文本和存活证明复印件本国际保藏机构接受以下指定的微生物的保藏，其接收日期为2005年12月14日_^_为(保藏者名称)ValerieHarris_地址阿瑞斯研究公司，55YorkStreet,Suite1600，多伦多，ONM5J1R7保藏鉴定保藏者分配的参考AR47A6.4.2_本IDA分配的保藏号141205-05_以上证明的保藏物伴随科学描述(详列)__提议的分类命名(详列):授权代表IDAC的人员签名日期2005年12月14日原始保藏情形中的收据1/1文件084(05)电话(204)789-6030传真(204)789-2018加拿大国际保藏机构国家微生物实验室，加拿大公共健康厅1015ArlingtonStreetWinnipeg,ManitobaCanadaR3E3R2电话(204)789-6060传真(204)789-2018国际表格IDAC/BP/9存活证明(按照布达佩斯条约细则Rule7.1发布)发给存活证明的团体名禾尔FerrisLander_^__地址2855PGABoulevard,PalmBeachGardens,Florida,USA33410保藏者名称ValerieHarris,_地址阿瑞斯研究公司，55YorkStreet,Suite1600,多伦多,ON，M5J1R7保藏鉴定国际保藏机构给出的保藏号141205-05_原始保藏日期(或最近的相关日期)2005年12月14日_存活测试测试以上鉴定的保藏物的存活性的日期(最近日期)_在以上指示的日期，该培养物是[X]存活[]不再存活进行存活测试的条件(如果需要该信息并且测试的结果是阴性的，则填写)___授权代表IDAC的人员签名日期2006年1月09日存活证明1/1文件084(05)权利要求1.在哺乳动物中减轻人胰腺、乳腺、前列腺、卵巢或结肠肿瘤的方法，其中所述人胰腺、乳腺、前列腺、卵巢或结肠肿瘤表达特异性结合分离的单克隆抗体或其CDMAB的抗原的至少一个表位，所述分离的单克隆抗体由以保藏号141205-05保藏在IDAC的杂交瘤细胞系产生，所述CDMAB的特征在于竞争抑制所述分离的单克隆抗体与其靶抗原结合的能力，所述方法包括向所述哺乳动物以有效导致所述哺乳动物的胰腺、乳腺、前列腺、卵巢或结肠肿瘤负荷减小的量施用所述单克隆抗体或其CDMAB。2.权利要求1的方法，其中所述分离的单克隆抗体与细胞毒性部分缀合。3.权利要求2的方法，其中所述细胞毒性部分是放射性同位素。4.权利要求1的方法，其中所述分离的单克隆抗体或其CDMAB激活补体。5.权利要求1的方法，其中所述分离的单克隆抗体或其CDMAB介导抗体依赖性细胞毒作用。6.权利要求1的方法，其中所述分离的单克隆抗体是由以保藏号141205-05保藏在IDAC的杂交瘤产生的分离的单克隆抗体的人源化抗体或由所述人源化抗体产生的抗原结合片段。7.权利要求1的方法，其中所述分离的单克隆抗体是由以保藏号141205-05保藏在IDAC的杂交瘤产生的分离的单克隆抗体的嵌合抗体或由所述嵌合抗体产生的抗原结合片段。8.在哺乳动物中减轻易受抗体诱导的细胞毒作用影响的人胰腺、乳腺、前列腺、卵巢或结肠肿瘤的方法，其中所述人胰腺、乳腺、前列腺、卵巢或结肠肿瘤表达特异性结合分离的单克隆抗体或其CDMAB的抗原的至少一个表位，所述分离的单克隆抗体由以保藏号141205-05保藏在IDAC的杂交瘤细胞系产生，所述CDMAB的特征在于竞争抑制所述分离的单克隆抗体与其靶抗原结合的能力，所述方法包括向所述哺乳动物以有效导致所述哺乳动物的胰腺、乳腺、前列腺、卵巢或结肠肿瘤负荷减小的量施用所述单克隆抗体或所述其CDMAB。9.权利要求8的方法，其中所述分离的单克隆抗体与细胞毒性部分缀合。10.权利要求9的方法，其中所述细胞毒性部分是放射性同位素。11.权利要求8的方法，其中所述分离的单克隆抗体或其CDMAB激活补体。12.权利要求8的方法，其中所述分离的单克隆抗体或其CDMAB介导抗体依赖性细胞毒作用。13.权利要求8的方法，其中所述分离的单克隆抗体是由以保藏号141205-05保藏在IDAC的杂交瘤产生的分离的单克隆抗体的人源化抗体或由所述人源化抗体产生的抗原结合片段。14.权利要求8的方法，其中所述分离的单克隆抗体是由以保藏号141205-05保藏在IDAC的杂交瘤产生的分离的单克隆抗体的嵌合抗体或由所述嵌合抗体产生的抗原结合片段。15.在哺乳动物中减轻人胰腺、乳腺、前列腺、卵巢或结肠肿瘤的方法，其中所述人胰腺、乳腺、前列腺、卵巢或结肠肿瘤表达特异性结合分离的单克隆抗体或其CDMAB的抗原至少一个表位，所述分离的单克隆抗体由以保藏号141205-05保藏在IDAC的杂交瘤产生，所述CDMAB的特征在于竞争抑制所述分离的单克隆抗体与其靶抗原结合的能力，所述方法包括向所述哺乳动物以有效导致减轻所述哺乳动物的胰腺、乳腺、前列腺、卵巢或结肠肿瘤负荷的量施用所述单克隆抗体或其CDMAB以及至少一种化疗剂。16.权利要求15的方法，其中所述分离的单克隆抗体与细胞毒性部分缀合。17.权利要求16的方法，其中所述细胞毒性部分是放射性同位素。18.权利要求15的方法，其中所述分离的单克隆抗体或其CDMAB激活补体。19.权利要求15的方法，其中所述分离的单克隆抗体或其CDMAB介导抗体依赖性细胞毒作用。20.权利要求15的方法，其中所述分离的单克隆抗体是由以保藏号141205-05保藏在IDAC的杂交瘤产生的分离的单克隆抗体的人源化抗体或由所述人源化抗体产生的抗原结合片段。21.权利要求15的方法，其中所述分离的单克隆抗体是由以保藏号141205，05保藏在IDAC的杂交瘤产生的分离的单克隆抗体的嵌合抗体或由所述嵌合抗体产生的抗原结合片段。22.单克隆抗体用于减小人乳腺、胰腺、卵巢、前列腺或结肠肿瘤负荷的应用，其中所述人乳腺、胰腺、卵巢、前列腺或结肠肿瘤表达特异性结合分离的单克隆抗体或其CDMAB的抗原的至少一个表位，所述分离的单克隆抗体由以保藏号141205-05保藏在IDAC的杂交瘤产生，所述CDMAB的特征在于竞争抑制所述分离的单克隆抗体与其耙抗原结合的能力，所述应用包括向所述哺乳动物以有效导致所述哺乳动物的人乳腺、胰腺、卵巢、前列腺或结肠肿瘤负荷减小的量施用所述单克隆抗体或其CDMAB。23.权利要求22的方法，其中所述分离的单克隆抗体与细胞毒性部分缀合。24.权利要求23的方法，其中所述细胞毒性部分是放射性同位素。25.权利要求22的方法，其中所述分离的单克隆抗体或其CDMAB激活补体。26.权利要求22的方法，其中所述分离的单克隆抗体或其CDMAB介导抗体依赖性细胞毒作用。27.权利要求22的方法，其中所述分离的单克隆抗体是由以保藏号141205-05保藏在IDAC的杂交瘤产生的分离的单克隆抗体的人源化抗体。28.权利要求22的方法，其中所述分离的单克隆抗体是由以保藏号141205-05保藏在IDAC的杂交瘤产生的分离的单克隆抗体的嵌合抗体。29.单克隆抗体用于减小人乳腺、胰腺、卵巢、前列腺或结肠肿瘤负荷的应用，其中所述人乳腺、胰腺、卵巢、前列腺或结肠肿瘤表达特异性结合分离的单克隆抗体或其CDMAB的抗原的至少一个表位，所述分离的单克隆抗体由以保藏号141205-05保藏在IDAC的杂交瘤产生，所述CDMAB的特征在于竞争抑制所述分离的单克隆抗体与其靶抗原结合的能力，所述应用包括向所述哺乳动物以有效导致所述哺乳动物的人乳腺、胰腺、卵巢、前列腺或结肠肿瘤负荷减小的量施用所述单克隆抗体或其CDMAB以及至少一种化疗剂。30.权利要求29的方法，其中所述分离的单克隆抗体与细胞毒性部分缀合。31.权利要求30的方法，其中所述细胞毒性部分是放射性同位素。32.权利要求29的方法，其中所述分离的单克隆抗体或其CDMAB激活补体。33.权利要求29的方法，其中所述分离的单克隆抗体或其CDMAB介导抗体依赖性细胞毒作用。34.权利要求29的方法，其中所述分离的单克隆抗体是由以保藏号141205-05保藏在IDAC的杂交瘤产生的分离的单克隆抗体的人源化抗体。35.权利要求29的方法，其中所述分离的单克隆抗体是由以保藏号141205-05保藏在IDAC的杂交瘤产生的分离的单克隆抗体的嵌合抗体。36.减轻人乳腺、胰腺、卵巢、前列腺或结肠肿瘤的方法，所述肿瘤表达与分离的单克隆抗体特异性结合的人TROP-2抗原的至少一个表位，所述分离的单克隆抗体由具有IDAC保藏号141205-05的杂交瘤细胞系AR47A6.4.2产生，所述方法包括向患有所述人肿瘤的个体施用至少一种分离的单克隆抗体或其CDMAB，所述分离的单克隆抗体或其CDMAB结合与由具有IDAC保藏号141205-05的杂交瘤细胞系AR47A6.4.2产生的分离的单克隆抗体结合的表位相同的一种或多种表位；其中所述一种或多种表位的结合导致乳腺、胰腺、卵巢、前列腺或结肠肿瘤负荷的减小。37.减轻人乳腺、胰腺、卵巢、前列腺或结肠肿瘤的方法，所述肿瘤表达与分离的单克隆抗体特异性结合的人TROP-2抗原的至少一个表位，所述分离的单克隆抗体由具有IDAC保藏号141205-05的杂交瘤细胞系AR47A6.4.2产生，所述方法包括向患有所述人肿瘤的个体施用至少一种分离的单克隆抗体或其CDMAB，以及至少一种化疗剂，所述分离的单克隆抗体或其CDMAB结合与由具有IDAC保藏号141205-05的杂交瘤细胞系AR47A6.4.2产生的分离的单克隆抗体结合的表位相同的一种或多种表位；其中所述施用导致肿瘤负荷的减小。38.确定选自人肿瘤的组织样品中癌细胞的存在的结合测定，所述人肿瘤被由具有IDAC保藏号141205-05的杂交瘤细胞系AR47A6.4.2产生的分离的单克隆抗体、由以保藏号141205-05保藏在IDAC的杂交瘤产生的分离的单克隆抗体的人源化抗体或由以保藏号141205-05保藏在IDAC的杂交瘤产生的分离的单克隆抗体的嵌合抗体特异性结合，所述结合测定包括提供来自所述人肿瘤的组织样品；提供所述分离的单克隆抗体、所述人源化抗体、所述嵌合抗体或其CDMAB中的至少一种，其识别与由具有IDAC保藏号141205-05的杂交瘤细胞系AR47A6.4.2产生的分离的单克隆抗体识别的表位相同的一种或多种表位；使至少一种所述提供的抗体或其CDMAB与所述组织样品相接触；并确定所述至少一种提供的抗体或其CDMAB与所述组织样品的结合；由此指示所述癌性细胞在所述组织样品中的存在。39.确定表达TROP-2的细胞的存在的结合测定，所述TROP-2被由具有IDAC保藏号141205-05的杂交瘤细胞系AR47A6.4.2产生的分离的单克隆抗体、由以保藏号141205-05保藏在IDAC的杂交瘤产生的分离的单克隆抗体的人源化抗体或由以保藏号141205-05保藏在IDAC的杂交瘤产生的分离的单克隆抗体的嵌合抗体特异性识别，所述结合测定包括提供细胞样品；提供由具有IDAC保藏号141205-05的杂交瘤细胞系AR47A6.4.2产生的分离的单克隆抗体，所述人源化抗体，所述嵌合抗体或其CDMAB;使所述分离的单克隆抗体或所述抗原结合片段与所述细胞样品相接触；和确定所述分离的单克隆抗体或其CDMAB与所述细胞样品的结合；由此确定表达TROP-2的抗原的细胞的存在，所述TROP-2被所述分离的单克隆抗体或所述其CDMAB特异性结合。40.用于诱导癌细胞的补体依赖性细胞毒性的方法，所述癌细胞在细胞表面上表达TROP-2的至少一种表位，所述至少一种表位，在与由以141205-05保藏在IDAC的杂交瘤产生的分离的单克隆抗体或由所述分离的单克隆抗体产生的抗原结合片段结合时，导致细胞毒作用，所述方法包括提供由以141205-05保藏在IDAC的杂交瘤产生的分离的单克隆抗体或由所述分离的单克隆抗体产生的抗原结合片段，和使所述癌细胞与所述分离的单克隆抗体或所述抗原结合片段相接触；由此细胞毒性作为所述分离的单克隆抗体或所述抗原结合片段与所述TROP-2的至少一个表位结合的结果发生。41.权利要求40的方法，其中所述分离的单克隆抗体与细胞毒性部分缀合。42.权利要求41的方法，其中所述细胞毒性部分是放射性同位素。43.权利要求40的方法，其中所述分离的单克隆抗体激活补体。44.权利要求40的方法，其中所述分离的单克隆抗体介导细胞毒作用。45.权利要求40的方法，其中所述单克隆抗体是由以141205-05保藏在IDAC的杂交瘤产生的分离的单克隆抗体的人源化抗体或由所述人源化抗体产生的抗原结合片段。46.权利要求40的方法，其中所述单克隆抗体是由以141205-05保藏在IDAC的杂交瘤产生的分离的单克隆抗体的嵌合抗体或由所述嵌合抗体产生的抗原结合片段。47.用于诱导癌细胞的补体依赖性细胞毒性的方法，所述癌细胞在细胞表面上表达TROP-2的至少一种表位，所述至少一种表位，在与由以141205-05保藏在IDAC的杂交瘤产生的分离的单克隆抗体或由所述分离的单克隆抗体产生的抗原结合片段结合时，导致细胞毒作用，所述方法包括提供分离的单克隆抗体，所述分离的单克隆抗体竞争抑制由以141205-05保藏在IDAC的杂交瘤产生的分离的单克隆抗体或由所述分离的单克隆抗体产生的抗原结合片段的结合，并且在与所述TROP-2的至少一种表位结合时，导致细胞毒性；和使所述癌细胞与所述分离的单克隆抗体或所述抗原结合片段相接触；由此细胞毒性作为所述分离的单克隆抗体或所述抗原结合片段与所述TROP-2的至少一种表位结合的结果发生。48.—种单克隆抗体，其特异性结合与由以保藏号141205-05保藏在IDAC的杂交瘤产生的分离的单克隆抗体相同的一种或多种表位。49.一种分离的单克隆抗体或其CDMAB，其特异性结合人TROP-2，其中所述分离的单克隆抗体或其CDMAB与人TROP-2的一种或多种表位反应，所述表位与由具有IDAC保藏号141205-05的杂交瘤细胞系AR47A6.4.2产生的分离的单克隆抗体相同；所述分离的单克隆抗体或其CDMAB的特征在于竞争抑制所述分离的单克隆抗体与其靶人TROP-2抗原结合的能力。50.—种分离的单克隆抗体或其CDMAB，其识别与由具有IDAC保藏号141205-05的杂交瘤细胞系AR47A6.4.2产生的分离的单克隆抗体识别的表位相同的一种或多种表位；所述单克隆抗体或其CDMAB的特征在于竞争抑制所述分离的单克隆抗体与其一种或多种靶表位结合的能力。51.—种人源化抗体，其特异性结合人TROP-2的一种或多种表位，所述表位与由具有IDAC保藏号141205-05的杂交瘤细胞系AR47A6.4.2产生的分离的单克隆抗体相同，所述人源化抗体包括包括互补决定区氨基酸序列SEQIDNO:l,SEQIDNO:2，和SEQIDNO:3的重链可变区；和包含互补决定区氨基酸序列SEQIDNO:4,SEQIDNO:5，或SEQIDNO:6的轻链可变区；或其人TROP-2结合片段。52.—种人源化抗体，其特异性结合人TROP-2的一种或多种表位，所述表位与由具有IDAC保藏号141205-05的杂交瘤细胞系AR47A6.4.2产生的分离的单克隆抗体相同，所述人源化抗体包括包括互补决定区氨基酸序列SEQIDNO:l，SEQIDNO:2，和SEQIDNO:3的重链可变区；和包含互补决定区氨基酸序列SEQIDNO:4，SEQIDNO:5，或SEQIDNO:6的轻链可变区；和来自人抗体或人抗体共有构架的重链和轻链的可变结构域构架区；或其人TROP-2结合片段。53.特异性结合人TROP-2的人源化抗体，其中所述单克隆抗体包括SEQIDNO:7的重链可变区氨基酸序列；和选自SEQIDNO:8的轻链可变区氨基酸序列；或其人TROP-2结合片段。54.特异性结合人TROP-2的人源化抗体，其中所述单克隆抗体包括SEQIDNO:7的重链可变区氨基酸序列；和选自SEQIDNO:9的轻链可变区氨基酸序列；或其人TROP-2结合片段。55.特异性结合人TROP-2的人源化抗体，其中所述单克隆抗体包括SEQIDNO:IO的重链可变区氨基酸序列；和选自SEQIDNO:8的轻链可变区氨基酸序列；或其人TROP-2结合片段。56.特异性结合人TROP-2的人源化抗体，其中所述单克隆抗体包括SEQIDNO:IO的重链可变区氨基酸序列；和选自SEQIDNO:9的轻链可变区氨基酸序列；或其人TROP-2结合片段。57.有效治疗人胰腺、前列腺、卵巢、乳腺或结肠肿瘤的组合物，包括处于组合形式的权利要求1,2，3，6,7,8,17,49,50，54,55,或56中任一项的抗体或CDMAB;所述抗体或其抗原结合片段与选自由细胞毒性部分、酶、放射性化合物、细胞因子、干扰素、靶标或报告部分和造血细胞组成的组中的成员的缀合物；和需要量的药用载体；其中所述组合物有效治疗所述人胰腺、乳腺、前列腺、卵巢或结肠肿瘤。58.有效治疗人胰腺、乳腺、前列腺、卵巢或结肠肿瘤的组合物，包括处于组合形式的权利要求1，2,3,6,7,8，17,49,50，54,55,或56中任一项的抗体或CDMAB;和需要量的药用载体；其中所述组合物有效治疗所述人胰腺、乳腺、前列腺、卵巢或结肠肿瘤。59.有效治疗人胰腺、乳腺、前列腺、卵巢或结肠肿瘤的组合物，包括处于组合形式的权利要求1,2，3,6,7,8,17，49,50,54,55,或56中任一项的抗体、抗原结合片段、或CDMAB与选自由细胞毒性部分、酶、放射性化合物、细胞因子、干扰素、耙标或报告部分和造血细胞组成的组中的成员的缀合物；禾口需要量的药用载体；其中所述组合物有效治疗所述人胰腺、乳腺、前列腺、卵巢或结肠肿瘤。60.用于检测人癌性肿瘤存在的测试试剂盒，其中所述人癌性肿瘤表达特异性结合分离的单克隆抗体或其CDMAB的抗原的至少一种表位，所述分离的单克隆抗体由以保藏号141205-05保藏在IDAC的杂交瘤产生，所述CDMAB的特征在于竞争抑制所述分离的单克隆抗体与其靶抗原结合的能力，所述试剂盒包括所述由以保藏号141205-05保藏在IDAC的杂交瘤产生的分离的单克隆抗体或其CDMAB，和用于检测所述单克隆抗体或其CDMAB是否结合多肽的工具，所述多肽以特定截断水平的存在对所述人癌性肿瘤的存在具有诊断性。全文摘要TROP-2，即约35kDa的跨膜蛋白和蛋白激酶C的底物，其表达与若干癌症有关。TROP-2还称为GA733-1、上皮糖蛋白1(EGP-1)和肿瘤相关钙信号转导物-2。针对来自杂交瘤AR47A6.4.2的TROP-2的单克隆抗体，以前显示为是减轻癌性疾病的抗体(CDMAB)，在若干癌症模型包括前列腺癌、胰腺癌和乳腺癌中通过细胞毒性抑制肿瘤生长和减小肿瘤负荷，所述杂交瘤AR47A6.4.2以保藏号141205-05保藏在加拿大国际保藏机构中。还分离和测序了该单克隆抗体的可变区，确定了互补决定区(CDR)。现在制备与母体141205-05单克隆抗体具有相似抗TROP-2结合活性的嵌合抗体和人源化抗体。所述单克隆、嵌合和人源化抗体可以与毒素、酶、放射性化合物、细胞因子、干扰素、靶标或报告部分和造血细胞缀合，从而治疗癌症。这些抗体还用在结合测定中以确定TROP-2在细胞上的表达。文档编号C07K16/28GK101679526SQ200880017614公开日2010年3月24日申请日期2008年5月23日优先权日2007年5月30日发明者戴维·S·F·扬,海伦·P·芬德利,艾莉森·L·费里,苏珊·E·哈恩,路易斯·A·G·达克鲁兹申请人:霍夫曼-拉罗奇有限公司