专利名称：一种镇咳作用有效成分-对羟基苯乙腈的制备方法
技术领域：
本发明涉及中药中生物活性成分的提取制备方法，尤其涉及一种镇咳作用有效成分-对羟 基苯乙腈的制备方法。
背景技术：
白芥子为十字花科植物白芥&'"^^"/6"L.的干燥成熟种子，炒制入药，辛，温，归肺经。 具有温肺豁痰利气，散结通络止痛之功能。用于治疗寒痰咳喘，胸肋胀痛，痰滞经络，关节 麻木、疼痛，痰湿流注，阴疽肿毒。
白芥子在历代本草中均有记载，常用来治疗咳喘症和消肿毒等。自1953年以来我国各版 药典均收载。近年来很多临床研究报道都表明白芥子确是治疗支气管哮喘，咳嗽等呼吸道疾 病的有效药物，有效率都在90%以上。通过豚鼠实验性哮喘模型对白芥子提取物进行颈背"穴
位"敷贴和口服给药观察，均有较好效果。
本发明人前期研究得到了国家自然科学基金项目"炒白芥子中镇咳、平喘有效成分及其 作用机理的研究(30600802)"的支持。对炒制前后的白芥子进行了镇咳、平喘的药效学研究， 发现醇提物具有镇咳作用而且炒制后的药效显著提高，这与传统的炒制入药相符e对炒白芥 子醇提物的化学成分进行了研究发现其中含有大量的对羟基苯乙腈(见图2)，而未炒制的白 芥子提取物中对羟基苯乙腈很少(见图l)。可见白芥子炒制产生的羟基苯乙腈与炒制后镇咳 活性的提高密切相关，因此可能为炒白芥子的主要镇咳有效成分。如图lb所示，HPLC分析 发现炒制后还有少量的对羟基苯甲醛的生成，推测其可能为对羟基苯乙腈部分降解产物，这 个过程类似于苦杏仁苷元的酶解产生HCN的过程，见式(l)。因此推测对羟基本乙腈会在体 内发生类似苦杏仁苷元的降解过程产生HCN从而抑制咳嗽中枢发挥镇咳作用见式(2)。对分 离纯化得到的对羟基苯乙腈在一定浓度下采用浓氨水引咳法对小鼠具有很强的镇咳作用，进 一步采血分析确实含有HCN。杏仁苷
白芥子苷
+ HCN
+ HCN
式(1)
式(2)
由此可见，对羟基苯乙腈与苦杏仁苷按照相同的机理发挥镇咳作用，但苦杏仁苷不稳定， 很难制备得到纯品，更无法在有效剂量下与药用载体混合并制成适当剂型的药物。但对羟基 苯乙腈在体外性质稳定，容易保存，可以制成各种剂型使用。另外该成分在炒制以后的白芥 子乙醇提取物中含量非常高，达到20%以上，因此白芥子是其丰富的来源。
该成分虽然可以采用化学方法合成，但成本较高，合成时会引入有毒物质，无法用于药 用。综上分析，对白芥子中对羟基苯乙腈纯化工艺进行深入研究，在镇咳药物研究开发上具 有非常重要的意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一种从白芥子中提取一种镇咳有效成分-对羟基苯乙腈的完整制 备方法。
本发明的技术方案是以白芥子为原料，从中提取一种镇咳作用有效成分-对羟基苯乙腈， 方法步骤如下
(1) 将白芥子在200-25(TC搅拌10-15 min，然后冷却，粉碎。
(2) 对粉碎后的炒白芥子以浓度为75% 95%的乙醇-水溶液提取，料液比(g/ml) =1: 5-10，提取温度7(TC 10(TC，提取时间lh 5h，提取次数1次~5次；优选提取条件为提取液 95%的乙醇-水溶液，料液比(g/ml) =1: 8，提取温度90。C，提取时间3h，提取次数3次。
(3) 提取物浓縮干燥后加入3-5倍量(g/ml)的丙酮，50。C加热30min使提取物溶解， 然后过滤，静止12h待析出结晶后过滤，再反复重结晶2-5次，干燥后得到具有镇咳作用的有效成分-对羟基苯乙腈；优选重结晶条件为加入4倍量(g/ml)丙酮，重结晶3次。
对羟基苯乙腈在制备镇咳药物上的用途，将有效剂量的对羟基苯乙腈与药用载体混合并 制成适当剂型的药物。
本发明的有益效果是原料为纯天然植物种子，安全易得，方法简单易操作，不引入有
毒物质，成本低廉，在镇咳药物研究开发上具有非常重要的意义。
图1为生白芥子醇提物HPLC图。 图2为炒制后白芥子醇提物HPLC图。 图3为本发明实施例制备样品HPLC图。
具体实施例方式
下面以具体实施方式
对本发明作进一步的说明，但并不影响本发明的保护范围。
实施例1
白芥子购自河北安国中药材市场，使用仪器包括515HPLC， 2487紫外检测器(美国Waters
公司)。
取白芥子0.5kg，在20(TC炒10min，粉碎，用95免的乙醇5L回流提取3次，每次3h，合并提 取液，减压回收乙醇至无醇味，得浸膏70g;该浸膏加入280mL丙酮溶解，5(TC加热30min，过 滤，冷却至室温，静止12h待析出结晶后过滤，反复重结晶3次；干燥后得到具有镇咳作用的 有效成分-对羟基苯乙腈。采用HPLC法进行对羟基苯乙腈的含量测定。
(1) 色谱条件
色谱柱为Luna5uPhenyl-Hexyl (250*4.60mm， 5pm);流动相为甲醇-水(35: 65)流速 0.6mLTnin";检测波长287nm;柱温为室温。
(2) 标准曲线的绘制
精密称取对羟基苯乙腈对照品加甲醇溶解并定容至质量浓度分别为10吗.mi;1、 20昭.mU1、 30吗-mlA 40吗-ml/1、 50吗'mL"的溶液。精密吸取各溶液10 ^L,注入液相色 谱仪，按2.2所述条件测定。测得进样浓度("对峰面积(y)的直线回归方程为y-5840.9X 十3573,r = 0.9996;线性范围0.5 mg 2.5 mg。
(3)样品测定
精密称取样品O.lg，加甲醇溶解并定容至50mL，精密吸取各溶液10 tiL，注入液相色 谱仪，按上述条件测定，采用面积归一化法，根据回归方程求出含量>99%。
权利要求
1、一种镇咳作用有效成分-对羟基苯乙腈的制备方法，其特征在于，该方法以白芥子为原料，从中提取一种镇咳作用有效成分-对羟基苯乙腈，步骤如下(1)将白芥子在200-250℃搅拌10-15min，然后冷却，粉碎；(2)对粉碎后的炒白芥子以浓度为75～95％的乙醇-水溶液提取，料液比(g/ml)＝1∶5-10，提取温度为70-100℃，提取时间为1-5h，提取次数为1-5次；(3)提取物浓缩干燥后加入3-5倍量(g/ml)的丙酮，50℃加热30min使提取物溶解，然后过滤，静止12h待析出结晶后过滤，再反复重结晶2-5次，干燥后得到具有镇咳作用的有效成分-对羟基苯乙腈。
2、 根据权利要求1所述的一种镇咳作用有效成分-对羟基苯乙腈的制备方法，其特征在 于，步骤(2)中提取液为95%的乙醇-水溶液，料液比(g/ml) =1: 8，提取温度为90。C，提 取时间为3h，提取次数为3次。
3、 根据权利要求1所述的一种镇咳作用有效成分-对羟基苯乙腈的制备方法，其特征在 于，步骤(3)中用于重结晶的丙酮为4倍量(g/ml)，重结晶次数为3次。
全文摘要
本发明涉及中药中生物活性成分的提取制备方法，尤其涉及一种镇咳作用有效成分-对羟基苯乙腈的制备方法。以白芥子为原料，提取前对其进行了炒制，大大提高对羟基苯乙腈的收率，采用提取和重结晶等简单的方法进行制备得到高纯度的对羟基苯乙腈，将有效剂量的对羟基苯乙腈与药用载体混合并制成适当剂型即可制备镇咳药物。本发明原料为纯天然植物种子，安全易得，方法简单易操作，不引入有毒物质，成本低廉，在镇咳药物研究开发上具有非常重要的意义。
文档编号C07C253/00GK101531616SQ20091001074
公开日2009年9月16日 申请日期2009年3月19日 优先权日2009年3月19日
发明者冯宝民, 王惠国, 王永奇 申请人:大连大学