专利名称：一种汞离子抗原及其制备方法与应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种汞离子抗原及其制备方法与应用。
背景技术：
汞是环境与农产品中的重要污染物质，由于它在人体和环境中能够长期蓄积，并 且可以通过食物链的富集作用传递给人或动物，因此给人类健康带来了严重的危害。如50 年代中期在日本曾经因食用重金属汞污染的鱼而出现了震惊世界的水俣病，从而使环境中 汞污染的危害问题得到了全世界的关注。环境中汞的大量蓄积主要是因为工业三废的无 序、超限排放，从而造成大量的土壤和水体污染，造成环境恶化。目前，重金属汞的分析方法主要有原子吸收光谱法、电感耦合等离子体发射光/ 质谱法、X-射线荧光光谱法及电位溶出分析法等。这几种检测方法检测重金属汞不仅需 要昂贵的仪器设备，而且检测费用高、检测时间长和检测步骤繁杂，不能用于现场的快速检 测。此外，重金属的毒性与它的化学形式、物理状态和氧化状态有关，而上述仪器分析法大 多无法得到重金属的氧化状态或者演变信息，只能得到某一重金属元素的总量，而这种总 量分析有时与毒性并不成正比。与仪器分析法相比，免疫分析法具有快速、简便、实时、易于 进行现场检测、样品处理简单、灵敏度高、选择性强、适合于高通量分析等优点，而且还能大 幅度降低检测成本。用免疫分析法可以快速检测某一特定物质的含量，但要把免疫分析方 法应用到检测重金属汞离子，还必须制备相应的抗原和抗体。
发明内容
本发明的目的是提供一种汞离子抗原及其制备方法。本发明所提供的汞离子抗原的制备方法，包括以下步骤(1)将对氨基苯甲基乙二胺四乙酸的酸溶液与可溶性亚硝酸盐反应，得到重氮化 的对氨基苯甲基乙二胺四乙酸；(2)将上述步骤(1)的重氮化的对氨基苯甲基乙二胺四乙酸与载体蛋白反应，得 到偶联产物；(3)将上述步骤(2)的偶联产物与汞离子反应，得到汞离子抗原。上述方法中，所述步骤(1)中，所述对氨基苯甲基乙二胺四乙酸的酸溶液是将对 氨基苯甲基乙二胺四乙酸溶于盐酸、硫酸、硝酸、过氯酸或氟硼酸中得到的酸溶液；所述对 氨基苯甲基乙二胺四乙酸与所述酸溶液中氢离子的摩尔比为1 (4-10)，具体可为1 6。所述步骤(1)中，所述对氨基苯甲基乙二胺四乙酸与所述可溶性亚硝酸盐的摩尔 比为1 (1-3)，具体可为1 2。上述方法中，所述步骤(2)中，所述载体蛋白为牛血清白蛋白、人血清白蛋白、血 蓝蛋白或卵清白蛋白；所述载体蛋白与所述重氮化的对氨基苯甲基乙二胺四乙酸的摩尔比 为1 (5-25)，具体可为1 10。上述方法中，所述步骤(3)中，所述偶联物与所述汞离子的摩尔比为1 (1-10)，
3具体可为1 5。上述方法中，所述步骤(1)的反应条件为避光条件下0_5°C反应；具体可为避光 条件下4°C反应。上述方法中，所述步骤(2)和步骤(3)的反应条件为反应温度为15-25°C，pH值 为8. 5-10. 5，反应时间为0. 5-24h ；具体可为反应温度为25°C，pH值为9. 5，反应时间为 12h。上述方法中，所述步骤(2)中，所述载体蛋白与所述重氮化的对氨基苯甲基乙二 胺四乙酸反应前，先将所述载体蛋白溶解于碳酸盐缓冲液中；所述碳酸盐缓冲液的pH为 9. 0-9. 6，具体可为9. 5。上述方法中，所述步骤(2)中，还包括将所述偶联物进行透析的步骤；所述步骤(3)中，还包括将所述汞离子抗原进行透析的步骤，以去除未被鳌合的 汞离子及其它小分子物质。采用上述任一方法得到的汞离子抗原也属于本发明的保护范围。上述汞离子抗原可用于环境、水体、食品或土壤中汞离子的检测。本发明的制备汞离子抗原的方法能够方便、快捷地获得汞离子抗原，且合成步骤 简洁明了、合成成本低，效果好。用本发明方法制备的汞离子抗原进行免疫得到的抗体的特 异性好、最低检测限值低。本发明的制备汞离子抗原的方法及由该方法获得的汞离子抗原 在汞离子的酶联免疫检测中将有广阔的应用前景。
图1为汞离子抗原的合成路线图。图2为以EDTA-Hg为标准样品建立的汞离子间接ELISA法标准曲线。
具体实施例方式下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和生物材 料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。对氨基苯甲基乙二胺四乙酸(购自Sigma公司，商品目录号为A3473)，羊抗小鼠 IgG-HRP(购自Jackson公司，商品目录号为79556)，弗氏完全佐剂(购自Sigma公司，商 品目录号为F5881)，弗氏不完全佐剂(购自Sigma公司，商品目录号为F5506)，EDTA(购自 Sigma公司，商品目录号为E6758)，牛血清白蛋(购自Sigma公司，商品目录号为A7906)，卵 清白蛋白(购自Sigma公司，商品目录号为A5503)，HgCl2(购自Sigma公司，商品目录号为 449199)，其余HC1、K2C03、NaNO2和甘油等常规试剂均购自北京化学试剂公司。实施例1、汞-对氨基苯甲基乙二胺四乙酸-牛血清白蛋白(Hg-对氨基苯甲基 EDTA-BSA)抗原的制备汞离子抗原的合成路线图如图1所示。1、对氨基苯甲基乙二胺四乙酸的重氮化(1)称取3. Omg的固体对氨基苯甲基乙二胺四乙酸，充分溶解于0. 5mL 0. IM的 HCl中，使对氨基苯甲基乙二胺四乙酸与HCl中氢离子的摩尔比为1 6;(2)将上述步骤(1)的溶液在4°C避光条件下进行磁力搅拌，每间隔30s向溶液中滴加30 μ L质量百分含量为1 %的NaNO2溶液；NaNO2的加入量是过量的，即NaNO2与对氨基 苯甲基乙二胺四乙酸的摩尔比大于等于2 1 ； (3)用淀粉_碘化钾试纸对上述步骤(2)的反应液进行检验，在试纸变蓝后，继续
反应15分钟，得到重氮化对氨基苯甲基乙二胺四乙酸溶液。 2、重氮化对氨基苯甲基乙二胺四乙酸与载体蛋白进行偶联(1)称取50. Omg牛血清白蛋(BSA)，充分溶解于2. OmL ρΗ 9. 6的碳酸盐缓冲液 中；(2)将上述步骤1获得的重氮化对氨基苯甲基乙二胺四乙酸溶液逐滴加入上述步 骤(1)的BSA溶液中，使对氨基苯甲基乙二胺四乙酸与BSA的摩尔比为10 1 ；(3)25°C条件下，将上述步骤(2)的反应液搅拌过夜(12小时)，期间用质量百分含 量为5%的K2CO3将反应液的ρΗ控制在9. 5 ；(4)反应12小时后，将上述步骤(3)的反应液置于透析袋中，用ρΗ为9. 5的PBS 透析2天，每天换3次透析液，得到纯化的重氮化对氨基苯甲基乙二胺四乙酸与载体蛋白的 偶联物。3、重金属离子汞的偶联(1)称取10. Omg HgCl2,用超纯水配制成0. IM HgCl2溶液；(2)将上述步骤⑴的HgCl2溶液逐滴加入到上述步骤2获得的偶联物溶液中，边 滴加边搅拌，使重氮化对氨基苯甲基乙二胺四乙酸与汞离子的摩尔比为1 5;(3)将上述步骤(2)的溶液于25°C条件下搅拌24小时，用ρΗ为9. 5的PBS透析2 天，每天换3次透析液，以除去未联结的汞离及其它杂质，透析产物即为Hg-对氨基苯甲基 EDTA-BSA抗原溶液；(4)将上述步骤(3)的透析产物分装，经-40°C冷冻后，真空干燥，置于-20°C冰箱 中保存备用。实施例2、汞-对氨基苯甲基乙二胺四乙酸-卵清白蛋白(Hg-对氨基苯甲基 EDTA-0VA)抗原的制备1、对氨基苯甲基乙二胺四乙酸的重氮化(1)称取3. Omg的固体对氨基苯甲基乙二胺四乙酸，充分溶解于0. 5mL 0. IM的 HCl中，使对氨基苯甲基乙二胺四乙酸与HCl的摩尔比为1 6;(2)将上述步骤(1)的溶液在4°C避光条件下进行磁力搅拌，每间隔30s向溶液中 滴加30 μ L质量百分含量为1 %的NaNO2溶液；NaNO2的加入量是过量的，即NaNO2与对氨基 苯甲基乙二胺四乙酸的摩尔比大于等于2 1 ；(3)用淀粉_碘化钾试纸对上述步骤(2)的反应液进行检验，在试纸变蓝后，继续 反应15分钟，得到重氮化对氨基苯甲基乙二胺四乙酸溶液。2、重氮化对氨基苯甲基乙二胺四乙酸与载体蛋白进行偶联(1)称取34. Omg卵清白蛋白(OVA)，充分溶解于2. OmL ρΗ 9. 6的碳酸盐缓冲液 中；(2)将上述步骤1获得的重氮化对氨基苯甲基乙二胺四乙酸溶液逐滴加入上述步 骤⑴的OVA溶液中，使对氨基苯甲基乙二胺四乙酸与OVA的摩尔比为10 1 ；(3)25°C条件下，将上述步骤(2)的反应液搅拌过夜(12小时)，期间用质量百分含量为5%的K2CO3将反应液的pH控制在9. 5 ；(4)反应12小时后，将上述步骤(3)的反应液置于透析袋中，用pH为9. 5的PBS 透析2天，每天换3次透析液，得到纯化的重氮化对氨基苯甲基乙二胺四乙酸与载体蛋白的 偶联物。3、重金属离子汞的偶联(1)称取10. Omg HgCl2,用超纯水配制成0. IM HgCl2溶液；(2)将上述步骤⑴的HgCl2溶液逐滴加入到上述步骤2获得的偶联物溶液中，边 滴加边搅拌，使重氮化对氨基苯甲基乙二胺四乙酸与汞离子的摩尔比为1 5;(3)将上述步骤(2)的溶液于25°C条件下搅拌24小时，用pH为9. 5的PBS透析2 天，每天换3次透析液，以除去未联结的汞离及其它杂质，透析产物即为Hg-对氨基苯甲基 EDTA-OVA抗原溶液；(4)将上述步骤(3)的透析产物分装，经_40°C冷冻后，真空干燥，置于_20°C冰箱 中保存。(5)取2mg上述步骤(4)的冻干物，用由PBS和甘油(PBS和甘油的体积比为1 1) 组成的混合液稀释成lmg/mL的浓度，保存于_20°C冰箱中。实施例3、汞离子抗原的应用一、利用汞_对氨基苯甲基乙二胺四乙酸_牛血清白蛋白抗原制备抗体(1)取8-10周龄的Bal b/C小白鼠作为实验动物。实验中基础免疫剂量为 0. 25-4. Omg/kg体重，加强免疫剂量为0. 5-4. Omg/kg体重。(2)基础免疫用PBS将上述实施例1制备的汞_对氨基苯甲基EDTA-BSA抗原稀 释为lmg/mL的溶液，取ImL抗原溶液用无菌过滤器过滤，然后加入ImL的弗氏完全佐剂，充 分乳化，直到滴入水中不扩散。将乳化好的抗原采用腹腔及背部皮下多点注射Bal b/C小 鼠，每只小鼠的注射剂量为0. lmg(8周龄的Bal b/C小鼠体重约23_25g)。基础免疫只进行一次。(3)加强免疫基础免疫3-4周后，取ImL上述稀释好的汞-对氨基苯甲基 EDTA-BSA抗原溶液，用无菌过滤器过滤，然后加入ImL弗氏不完全佐剂，充分乳化，直到滴 入水中不扩散。将乳化好的抗原采用腹腔及背部皮下多点注射Bal b/C小鼠，每只小鼠的 注射剂量为0. Img (此时Bal b/C小鼠体重约25_27g)。按照上述方法每隔3-4周加强免疫一次，从第三次加强免疫开始，每次免疫后第 7-10天，从小鼠眼眶采血，测定抗体效价，待效价大于1 4000后，处死小鼠，采血，分离出 抗血清，即得到抗体。二、抗体效果检测下述实验中所用的各种缓冲液如下(1)包被缓冲液0. 05M、pH9. 6的碳酸盐缓冲液；(2) PBS 含有0. 9%质量百分含量的NaCl的0. 1M、pH7. 5磷酸盐缓冲液；(3)样品稀释液PBSTG 含有0. 1 %体积百分含量的吐温-20和终浓度为lg/L明 胶的PBS溶液；(4)柠檬酸盐-磷酸盐缓冲液含有0. OlM柠檬酸三钠和0. 03M Na2HPO4的pH5. 5 的水溶液；
(5)底物缓冲液在10. OmL含有终浓度为2. Omg/mL邻苯二胺(OPD)的柠檬酸 盐-磷酸盐缓冲液中加入4 μ L体积百分含量为30%的H2O2得到的溶液；(6)终止缓冲液2· OM的硫酸溶液；(7)洗涤液每 IL 洗涤液中含有 8. Og NaCUO. 2g KH2PO4,2. 96g Na2HPO4 · 12H20、 1. OmL Tween-20，其余为水。将上述步骤一制备的抗体(用汞-对氨基苯甲基EDTA-BSA免疫小鼠制备的抗体) 进行如下检测，以实施例2中制备的抗原和实施例1中制备的抗原及其制备的抗体为例，下 面详细描述具体的实验过程(一 )抗体抑制实验1、Hg-对氨基苯甲基EDTA-OVA包被抗原溶液的配制将上述实施例2制备的Hg-对氨基苯甲基EDTA-OVA抗原完全解冻后，用上述包被 缓冲液按 1 500,1 1000,1 2000,1 4000,1 8000,1 16000 进行梯度稀释。2、EDTA-Hg螯合物标准品溶液的配制(1)称取29. 22mg EDTA，充分溶解于IOmL蒸馏水中，用IM NaOH调节pH至10. O ；(2)称取27. 15mg HgCl2,溶解于蒸馏水中，并逐滴加入到上述步骤(1)配制的 EDTA溶液中，磁力搅拌，充分鳌合；(3)将步骤⑵的溶液定容至20. OmL,得到终浓度为2. 46mg/mL的EDTA-Hg溶液， 其中Hg离子的浓度为lmg/mL ；(4)用样品稀释液将上述步骤(3)的EDTA-Hg溶液配成浓度为2000ng/mL (以溶液 中Hg离子实际含量计算)的EDTA-Hg螯合物标准品溶液。3、Hg-对氨基苯甲基EDTA-BSA抗血清稀释液的配制将上述步骤一制备的Hg-对氨基苯甲基EDTA-BSA抗血清用样品稀释液按 1 1000,1 2000,1 4000,1 8000,1 16000 进行梯度稀释。4、将IgG-HRP用由PBS和甘油(PBS和甘油的体积比为1 1)组成的混合液稀释 成0. lmg/mL，保存于-20°C冰箱中。使用时用样品稀释液按1 1000稀释。5、抗原、抗体的棋盘格实验(1)包被原的包被将上述步骤1制备的不同浓度的包被抗原溶液加入到酶标板 中，每孔ΙΟΟμ L，37°C温育3小时；倒去酶标板中的溶液，用洗涤液洗板4次，甩干；(2)在步骤(1)的酶标板中加入上述步骤2制备的EDTA-Hg螯合物标准品溶液(实 验孔)，每孔50 μ L，对照孔中不添加EDTA-Hg螯合物标准品溶液而加入50 μ L样品稀释液；(3)分别向上述实验孔和对照孔中加入上述步骤3制备的不同浓度的抗血清稀释 液，每孔50 μ L ；37°C温育30分钟；倒掉酶标板中的溶液，用洗涤液洗板4次，甩干；(4)在实验孔和对照孔中分别加入100 μ L用样品稀释液稀释的IgG-HRP，37°C温 育30分钟；用洗涤液洗板4次，倒掉酶标板中的溶液，甩干；(5)向实验孔和对照孔中分别加入100 μ L底物缓冲液，37°C温育15分钟后，再向 每孔中加入50 μ L 2. OM的硫酸溶液终止反应；(6)在492nm下测定吸光值。实验设3次重复，取三次实验结果的平均值，结果如表1所示。表1、抗原、抗体棋盘格实验结果
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表1中，a表示不添加EDTA-Hg竞争显色值Atl，b表示添加50 μ L 2000ng/mL的 EDTA-Hg竞争显色值A2qqq。结果表明，当包被抗原与抗血清浓度适宜时，就有抑制现象，即2000ng/mL孔与 Ong/mL孔的吸光度值有差别，2000ng/mL孔吸光度值小，Ong/mL孔吸光度值高；用抑制率计 算抗原、抗体的最佳组合，从表1中可以看出，当包被抗原稀释度为1 8000，抗血清稀释度 为1 2000时，此时的抑制率最好，为92. (抑制率=(A。-A2_)/AQ)，也即此时的抑制效 果最好。说明上述实施例1制备的Hg-对氨基苯甲基EDTA-BSA可以作为免疫原制备出检 测汞离子的抗体。( 二 ) EDTA-Hg标准曲线的建立将上述步骤(一)制备的EDTA-Hg螯合物标准品溶液用样品稀释液分别稀释 成如下不同的浓度2000ng/mL、1000ng/mL、500ng/mL、250ng/mL、125ng/mL、62. 5ng/mL、 31. 25ng/mL。(1)包被原的包被将上述实施例2制备的Hg-对氨基苯甲基EDTA-OVA抗原按照 1 8000稀释后加入到酶标板中，每孔ΙΟΟμ L，37°C温育3小时；倒去酶标板中的溶液，用 洗涤液洗板4次，甩干；(2)在步骤(1)的酶标板中分别加入上述不同浓度的EDTA-Hg螯合物标准品溶液 (实验孔)，每孔50 μ L，对照孔中不添加EDTA-Hg螯合物标准品溶液而加入50 μ L样品稀释 液；(3)分别向上述实验孔和对照孔中加入上述步骤(一)中3制备的稀释倍数为 1 2000的抗血清稀释液，每孔50 μ L ;37°C温育30分钟；倒掉酶标板中的溶液，用洗涤液 洗板4次，甩干；(4)在实验孔和对照孔中分别加入100 μ L稀释倍数为1 1000的IgG-HRP，37°C 温育30分钟；用洗涤液洗板4次，倒掉酶标板中的溶液，甩干；(5)向实验孔和对照孔中分别加入100 μ L底物缓冲液，37°C温育15分钟后，再向 每孔中加入50 μ L 2. OM的硫酸溶液终止反应；(6)在492nm下测定吸光值；
(7)绘制标准曲线以不同浓度(ng/mL)的EDTA-Hg螯合物标准品溶液作为X轴， 以吸光度值的比值(BziBciX 100%，其中，B为EDTA-Hg螯合物标准品溶液的平均吸光度值， B0为对照孔的平均吸光度值)作为Y轴，绘制标准曲线图。实验设3次重复，取三次实验结果的平均值，得到的标准曲线图如图2所示。结果 表明，其灵敏度(IC5tl)为134. Ing/mL，检测范围是29. 6ng/mL-2000ng/mL。说明上述实施例 1制备的Hg-对氨基苯甲基EDTA-BSA作为抗原免疫小鼠得到的抗体具有良好的效果。(三)抗体特异性检测EDTA-Hg螯合物标准品溶液的配制1、EDTA-Hg类似鳌合物的制备参照上述步骤(一)中EDTA-Hg螯合物的制备方法，制备EDTA_Cd、EDTA-Cu和 EDTA-Pb供试标准品溶液，以溶液中各金属离子实际含量计算各供试标准品溶液的浓度。用样品稀释液将上述类似螯合物分别稀释成如下浓度20000ng/mL、10000ng/mL、 5000ng/mL、2500ng/mL、1250ng/mL、625ng/mL、312. 5ng/mL、156. 25ng/mL。2、各自建立标准曲线，测定抑制中浓度IC5tl (抑制率达到50%的标样浓度值)。标准曲线的建立方法与上述EDTA-Hg标准曲线的建立方法相同。交叉反应率(%) = (EDTA-Hg IC50) / (EDTA-Hg 类似鳌合物 IC50) X 100%。实验设3次重复，取三次实验结果的平均值，结果如表2所示。结果表明，上述步 骤一制备的Hg-对氨基苯甲基EDTA-BSA抗体与其它EDTA-Hg类似鳌合物的交叉反应率很 小，说明用上述实施例1制备的Hg-对氨基苯甲基EDTA-BSA免疫小鼠产生的抗体具有很好 的特异性。
表2Hg-对氨基苯甲基EDTA-BSA抗体的特异性检测
分析物
EDTA-Hg
EDTA-Cd
EDTA-Cu
EDTA-Pb
EDTA
IC50 (ng/mL) 134. 1 > 20000 > 20000 > 20000 > 20000
交叉反应率(％ ) 100
<0. 5
<0. 5
<0. 5
<0. 权利要求
一种汞离子抗原的制备方法，包括以下步骤(1)将对氨基苯甲基乙二胺四乙酸的酸溶液与可溶性亚硝酸盐反应，得到重氮化的对氨基苯甲基乙二胺四乙酸；(2)将上述步骤(1)的重氮化的对氨基苯甲基乙二胺四乙酸与载体蛋白反应，得到偶联产物；(3)将上述步骤(2)的偶联产物与汞离子反应，得到汞离子抗原。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(1)中，所述对氨基苯甲基乙二 胺四乙酸的酸溶液是将对氨基苯甲基乙二胺四乙酸溶于盐酸、硫酸、硝酸、过氯酸或氟硼酸 中得到的酸溶液；所述酸溶液中，所述对氨基苯甲基乙二胺四乙酸与所述酸溶液中氢离子 的摩尔比为1 (4-10)，优选为1 6;所述步骤(1)中，所述对氨基苯甲基乙二胺四乙酸与所述可溶性亚硝酸盐的摩尔比为 1 (1-3)，优选为 1 2。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于所述步骤(2)中，所述载体蛋白为牛 血清白蛋白、人血清白蛋白、血蓝蛋白或卵清白蛋白；所述载体蛋白与所述重氮化的对氨基 苯甲基乙二胺四乙酸的摩尔比为1 (5-25)，优选为1 10。
4.根据权利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于所述步骤(3)中，所述偶联物与 所述汞离子的摩尔比为1 (1-10)，优选为1 5。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(1)的反应条件为避光条件下 0-5°C反应；优选为避光条件下4°C反应。
6.根据权利要求1或5所述的方法，其特征在于所述步骤(2)的反应条件为反应温 度为15-25°C，pH值为8. 5-10. 5，反应时间为0. 5_24h ；优选为反应温度为25°C，pH值为 9. 5，反应时间为12h;所述步骤(3)的反应条件为反应温度为15-25°C，pH值为8. 5-10. 5，反应时间为 0. 5-24h ；优选为反应温度为25°C，pH值为9. 5，反应时间为12h。
7.根据权利要求1或5或6所述的方法，其特征在于所述步骤(2)中，所述载体蛋白 与所述重氮化的对氨基苯甲基乙二胺四乙酸反应前，先将所述载体蛋白溶解于碳酸盐缓冲 液中；所述碳酸盐缓冲液的PH为9. 0-9. 6，优选为9. 5。
8.根据权利要求5-7中任一所述的方法，其特征在于所述步骤(2)中，还包括将所述 偶联物进行透析的步骤；所述步骤(3)中，还包括将所述汞离子抗原进行透析的步骤。
9.采用权利要求1-8中任一所述的方法获得的汞离子抗原。
10.权利要求9所述的汞离子抗原在汞离子检测中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种汞离子抗原及其制备方法与应用。该汞离子抗原的制备方法包括以下步骤(1)将对氨基苯甲基乙二胺四乙酸的酸溶液与可溶性亚硝酸盐反应，得到重氮化的对氨基苯甲基乙二胺四乙酸；(2)将上述步骤(1)的重氮化的对氨基苯甲基乙二胺四乙酸与载体蛋白反应，得到偶联产物；(3)将上述步骤(2)的偶联产物与汞离子反应，得到汞离子抗原。本发明的汞离子抗原的制备方法能够方便、快捷地获得汞离子抗原，且合成步骤简洁明了、合成成本低，效果好。用本发明方法制备的汞离子抗原进行免疫得到的抗体的特异性好、最低检测限值低。本发明的制备汞离子抗原的方法及由该方法获得的汞离子抗原在汞离子的酶联免疫检测中将有广阔的应用前景。
文档编号C07K1/113GK101885768SQ20091008394
公开日2010年11月17日 申请日期2009年5月11日 优先权日2009年5月11日
发明者何素平, 刘威, 南铁贵, 李召虎, 王保民, 谭伟明, 谭桂玉, 赵洪伟, 高巍 申请人:中国农业大学