专利名称：从灯盏花中提取高纯度灯盏花乙素的方法
技术领域：
本发明属于植物有效成份提取分离技术领域，具体地说是一种从灯盏花中提取分离高 纯度灯盏花乙素的方法。
背景技术：
灯盏花是菊科植物短葶飞蓬[Erigeron breviscapus (vant)Hard, —Mass]的干燥全草， 又名灯盏细辛，东菊。分布在云南、四川、贵州、广西、湖南等地。性寒，微苦，具有散 寒解表，祛风除湿，活血化瘀，通经活络，消炎止痛的功效。曾列入《中国药典》1977版 一部。灯盏花素是从灯盏花原草中提取的黄酮类有效成份，其中主要为灯盏花乙素，又名 野黄芩苷，化学命名为4'、 5、 6-三羟基黄酮-7-0-葡萄糖醛酸苷，目甜从市场上购得的灯 盏花素原料药经HPLC分析，灯盏花乙素含量在80-90%之间，其各种制剂临床上用于治疗心 脑血管疾病，疗效确切，'但其注射液稳定性差，其灯盏花乙素以外的成分不明确，对灯盏 花素注射液用药安全增加了不可控性，故从灯盏花中提取分离高纯度灯盏花素意义重大。
为了解决长期以来灯盏花素中灯盏花乙素含量低的工艺问题，专利申请 200410062573.3; 200410040182.1; 200410040352.6; 200410079583.8 ; 200410079642.1; 200510010723.0、 200710066155. 5均是高纯度灯盏花乙素原料药的制备工艺，其所提出的 工艺制备的灯盏花乙素含量高，达98%以上，专利申请200710066155. 5和200710065713. 6 用大孔吸附树脂纯化灯盏花素，但以上专利均是以市售灯盏花素为原料进行精制，并需要 大量的酸碱才能实现，而从灯盏花原草直接提取分离质量稳定的高纯度灯盏花乙素的提取 分离工艺未见相关的文献报导。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的缺点，提供一种从灯盏花原草直接提取分离高纯度 灯盏花乙素的方法。
本发明的方法是以灯盏花乙素以盐的形式存在于灯盏花中的特性来进行设计(由于有 -C00H)，存在于灯盏花中的灯盏花乙素盐不易被大孔吸附树脂吸附，能被水洗脱，从而 实现与其他杂质分离，而灯盏花乙素盐在水溶液中加热不稳定，故通过反渗透膜和滤膜浓 縮，可以防止热的影响，浓縮液加入有机溶剂后可沉淀出该灯盏花乙素盐，然后酸化，游
3离出高纯度的灯盏花乙素沉淀，其纯度可达到97%以上。
本发明从灯盏花中提取分离高纯度灯盏花乙素的方法包括下述顺序的步骤
(1) 、取灯盏花原料用的有机溶剂提取，提取液过滤，减压浓縮至相对密度为 1.05-1.25，加水稀释，其加水量为灯盏花总重量的l-5倍；
(2) 、稀释液加入澄清剂絮凝澄清，澄清剂加入量为灯盏花总重量的0. 0卜3%，静置，
过滤；
(3) 、絮凝澄清过滤液上大孔吸附树脂吸附，用水洗脱，收集水洗脱液；
(4) 、水洗脱液用反渗透膜或纳滤膜浓縮，浓縮的过程的温度为20-6(TC，操作压力 为0. 6-2. 0MPa。；
(5) 、膜浓縮液加入有机溶剂，有机溶剂加入量为膜浓縮液的1-10倍，静置沉淀；
(6) 、过滤、收集沉淀物，加入沉淀物1-50倍有机溶剂水溶液，搅拌，使混悬，加 入酸调PH至l-3，静置过夜，过滤，收集沉淀，水洗沉淀至近中性，干燥，即得高纯度灯 盏花乙素。
所述的灯盏花为家种的灯盏花或野生的灯盏花，可以是新鲜的或干燥的灯盏花。 所述的歩骤(1)的有机溶剂为甲醇或乙醇的水溶液。 所述的提取方法包括冷浸提取、温浸提取或热回流提取。 所述的澄清剂为ZTC1+1澄清剂或101果汁澄清剂。
所述的大孔吸附树脂为聚苯乙烯型大孔吸附树脂，AB-8、 D101、 HPD100、 D1400、 D1300、 DM130、 D3520中的一种或几种。
所述的收集水洗脱液为收集2-8柱体积的洗脱液，纳滤膜的截留相对分子量为 100-400。
所述的膜浓縮液加入的有机溶剂为能与水以任意比例相溶的有机溶剂，如甲醇、乙醇、 丙酮、四氢呋喃、乙腈中的一种或几种。
本发明关键技术在于整个工艺不使用碱，使用澄清剂除去水不溶物，利用大孔吸附树 脂除杂，利用反渗透膜或纳滤膜浓縮，防止灯盏花乙素植物盐在水中的加热降解，所制备 的灯盏花乙素含量可在97%以上，质量稳定，解决了从灯盏花原草直接提取分离质量稳定 的高纯度灯盏花乙素的工艺问题。
本发明与现有工艺相比，本发明与专利申请200410062573.3; 200410040182.1; 200410040352.6; 200410079583.8; 200410079642.1; 200510010723.0; 200710066155.5及200710065713.6制备工艺有本质的不同，该专利申请是以市售灯盏花素为原料进行精 制，其的制备工艺必须加入无机碱或有机碱才能实现，市售灯盏花素的提取分离工艺为醇 提，碱溶，过滤，酸沉，乙醇反复洗涤，酸碱反复精制处理，其酸碱用量大，污染大，且 灯盏花乙素含量在80-90%之间，其质量不一，造成高纯度灯盏花乙素原料药的制备工艺所 制备的灯盏花乙素质量不稳定。而本发明是以灯盏花草为原料，工艺简单，尤其是整个工 艺过程不加入无机碱或有机碱，污染小。本发明制备方法简单，革除了灯盏花乙素提取精 制需要大量酸碱的方法，整个工艺污染小，易于工业化生产。
具体实施方式
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通过下面的具体实施例进一步了解本发明，但它们不是对本发明的限定。
实施例1:
取干燥野生灯蛊花原草100kg，加入800L75。/q甲醇，浸泡提取3次，每次提取12h，合 并提取液，过滤，减压回收甲醇液至相对密度1. 12，加水稀释，加水量为灯盏花投料量的 3倍，稀释液加热至80°C，加入浓度(质量体积比)为1%的ZTC1+1澄清剂B组分20L， 边加边搅拌至有沉淀析出，继续搅拌5min， 8(TC保温静置lh，加入浓度(质量体积比) 为1%的ZTC1+1澄清剂A组分15L，边加边搅拌至有絮状沉淀析出，继续搅拌2min，静置 lh，过滤，滤液冷却至30。C以下，上250KgAB-8大孔吸附树脂柱，用水洗脱，第1个柱体 积的洗脱液弃去，收集2-5个柱体积的洗脱液，用反渗透膜浓缩，洗脱液温度24'C，操作 压力，0.8Mpa，浓縮至反渗透膜出水口近无出水，浓縮液加入浓縮液体积6倍量的乙醇， 静置过夜，过滤，收集过滤沉淀物得1. 2Kg，沉淀物加入8L5(m乙醇，搅拌混悬，加入10%HCL 至有大量沉淀析出，调PH二1.8，静置过夜，过滤，用纯化水洗至ra近中性，再用95%乙 醇洗涤，抽干，干燥，得灯盏花乙素0.47kg，灯盏花乙素含量97.3%。
实施例2
取干燥家种灯盏花原草100kg，加入600L8Cm乙醇，用乙醇回流提取2次，每次提取 2h，合并提取液，过滤，减压回收醇液至相对密度1. 07，加水稀释，加水量为灯盏花投料 量的2倍，稀释液加入浓度(质量体积比)为5%的101果汁澄清剂30L，边加边搅拌至有 沉淀析出，继续搅拌5min，静置lh，过滤，滤液上250KgD101大孔吸附树脂柱，用水洗 脱，第l-2个柱体积的洗脱液弃去，收集3-7个柱体积的洗脱液，用纳滤膜浓縮，洗脱液 温度26"C，操作压力，1Mpa，浓缩至纳滤膜出水口近无出水，浓縮液加入浓縮液体积4倍 量的丙酮，静置过夜，过滤，收集过滤沉淀物得1.8Kg，沉淀物加入10L7(F。乙醇，搅拌混
5悬，加入10。/。HCL至有大量沉淀析出，调P^2.2，静置过夜，过滤，用纯化水洗至ra近中 性，再用95%乙醇洗涤，抽干，千燥，得灯盏花乙素0.61kg，灯盏花乙素含量98.4%。 实施例3
取新鲜家种灯盏花地上部份100kg，加入600L70。/。乙醇，50。C温浸提取3次，每次提 取5h，合并提取液，过滤，减压回收醇液至相对密度1. 15，加水稀释，加水量为灯盏花 投料量的5倍，稀释液加热至8CTC，加入浓度(质量体积比)为1%的ZTC1+1澄清剂B组 分40L，边加边搅拌至有沉淀析出，继续搅拌3min， 80。C保温静置lh，加入浓度(质量体 积比)为1%的ZTC1+1澄清剂A组分25L，边加边搅拌至有絮状沉淀析出，继续搅拌2min， 静置lh，过滤，滤液冷却至30'C以下，上250KgHPD-100大孔吸附树脂柱，用水洗脱，第 1-2个柱体积的洗脱液弃去，收集3-7个柱体积的洗脱液，用反渗透膜浓縮，洗脱液温度 23°C，操作压力，1.2Mpa，浓縮至反渗透膜出水口近无出水，浓缩液加入浓縮液体积5倍 量的甲醇，静置过夜，过滤，收集过滤沉淀物得0.5Kg，沉淀物加入5L40。/。甲醇，搅拌混 悬，加入1(F。HCL至有大量沉淀析出，调PH二2，静置过夜，过滤，用纯化水洗至PH近中性， 再用95%乙醇洗涤，抽干，干燥，得灯盏花乙素O. 14kg，灯盏花乙素含量97. 1%。
实施例4
取干燥家种灯盏花原草100kg，加入700L7(F。乙醇，浸泡提取3次，每次提取24h，合 并提取液，过滤，减压回收醇液至相对密度1.08，加水稀释，加水量为灯盏花投料量的4 倍，稀释液加热至80。C，加入浓度(质量体积比)为1%的ZTC1+1澄清剂B组分50L，边 加边搅拌至有沉淀析出，继续搅拌6min， 8(TC保温静置lh，加入浓度(质量体积比)为 1%的ZTC1+1澄清剂A组分30L，边加边搅拌至有絮状沉淀析出，继续搅拌3min，静置lh， 过滤，滤液冷却至30。C以下，上250KgDM130大孔吸附树脂柱，用水洗脱，第1个柱体积 的洗脱液弃去，收集2-6个柱体积的洗脱液，用纳滤膜浓縮，洗脱液温度25'C，操作压力， 1Mpa，浓縮至纳滤膜出水口近无出水，浓縮液加入浓缩液体积5倍量的四氢呋喃-乙腈-丙 酮(3: 3: 4)，静置过夜，过滤，收集过滤沉淀物得1.4Kg，沉淀物加入20L3(F。丙酮，搅 拌混悬，加入10。/。HCL至有大量沉淀析出，调PH4.6，静置过夜，过滤，用纯化水洗至PH 近中性，再用95%乙醇洗涤，抽干，干燥，得灯盏花乙素0.42kg，灯盏花乙素含量98.6%。
权利要求
1、一种从灯盏花中提取高纯度灯盏花乙素的方法，其特征在于按下述步骤进行(1)、取灯盏花原料用有机溶剂提取，提取液过滤，减压浓缩至相对密度为1.05-1.25，加水稀释，其加水量为灯盏花总重量的1-5倍；(2)、稀释液加入澄清剂絮凝澄清，澄清剂加入量为灯盏花总重量的0.01-3％，静置，过滤；(3)、絮凝澄清过滤液上大孔吸附树脂吸附，用水洗脱，收集水洗脱液；(4)、水洗脱液用反渗透膜或纳滤膜浓缩，浓缩过程的温度为20-60℃，操作压力为0.6-2.0MPa。；(5)、膜浓缩液加入有机溶剂，有机溶剂加入量为膜浓缩液的1-10倍，静置沉淀；(6)、过滤、收集沉淀物，加入沉淀物1-50倍的有机溶剂水溶液，搅拌，使混悬，加入酸调PH至1-3，静置过夜，过滤，收集沉淀，水洗沉淀至近中性，干燥，即得高纯度灯盏花乙素。
2、 根据权利要求1所述从灯盏花中提取高纯度灯盏花乙素的方法，其特征在于所 述的灯盏花为家种的灯盏花或野生的灯盏花，新鲜的或干燥的灯盏花。
3、 根据权利要求1所述从灯盏花中提取高纯度灯盏花乙素的方法，其特征在于歩骤(1)中所述的有机溶剂为甲醇或乙醇的水溶液。
4、 根据权利要求1所述从灯盏花中提取高纯度灯盏花乙素的方法，其特征在于:所述的提取方法包括冷浸提取、温浸提取或热回流提取。
5、 根据权利要求1所述从灯盏花中提取高纯度灯盏花乙素的方法，其特征在于所:述的澄清剂为ZTC1+1澄清剂或101果汁澄清剂。
6、 根据权利要求1所述从灯盏花中提取高纯度灯盏花乙素的方法，其特征在于戶万述的大孔吸附树脂为聚苯乙烯型大孔吸附树脂，AB-8、 DlOl、 HPDIOO、 D1400、 D1300、 DM130、 D3520中的一种或几种。
7、 根据权利要求1所述从灯盏花中提取高纯度灯盏花乙素的方法，其特征在于所 述的收集水洗脱液为收集2-8柱体积的水洗脱液。
8、 根据权利要求1所述从灯盏花中提取高纯度灯盏花乙素的方法，其特征在于所 述的纳滤膜的截留相对分子量为100-400。
9、 根据权利要求1所述从灯盏花中提取高纯度灯盏花乙素的方法，其特征在于所 述的膜浓缩液加入的有机溶剂为能与水以任意比例相溶的有机溶剂，甲醇、乙醇、丙酮、 四氢呋喃、乙腈中的一种或几种。
全文摘要
本发明是一种从灯盏花中提取高纯度灯盏花乙素的方法。用有机溶剂提取灯盏花原料，滤液加入澄清剂絮凝澄清，絮凝澄清过滤液上大孔吸附树脂吸附，用水洗脱，水洗脱液用反渗透膜或纳滤膜浓缩，膜浓缩液加入有机溶剂静置沉淀，过滤、收集沉淀物，加入有机溶剂水溶液，搅拌，使混悬，静置过夜，过滤，收集沉淀，水洗沉淀至近中性，干燥，即得高纯度灯盏花乙素。本发明整个工艺不使用碱，使用澄清剂除去水不溶物，利用大孔吸附树脂除杂，利用反渗透膜或纳滤膜浓缩，防止灯盏花乙素植物盐在水中的加热降解，所制备的灯盏花乙素含量可在97％以上，质量稳定，工艺简单，污染小。
文档编号C07H17/00GK101497637SQ20091009424
公开日2009年8月5日 申请日期2009年3月19日 优先权日2009年3月19日
发明者何玉清, 敏 周, 文 李, 武正才, 赵锋宁, 黄春球 申请人:云南植物药业有限公司