专利名称：一种从新鲜地黄中制备梓醇和地黄多糖的方法
技术领域：
本发明涉及梓醇和地黄多糖的提取纯化工艺，特别是一种同时从地黄中制备梓醇和地黄多糖的新工艺。
背景技术：
地黄为玄参科多年生草本植物，其块根人药，始载于《神农本草经》，列为上品，我国传统的大宗中药材，怀地黄为道地药材，主治鲜地黄清热生津，凉后，止血；用于热风伤 阴、舌绛烦渴、发斑发疹、吐血、衄血、咽喉肿痛。生地黄清热凉血，养阴，生津；用于热病烦 渴、发斑发疹、阴虚内热、吐血、衄血、糖尿病、传染性肝。化学成分含梓醇(catalpol)、多种 氨基酸和糖、甘露醇、β-谷留醇及菜油留醇(campesterol)等。2005版《药典》已将梓醇 作为地黄的主要成分之一。梓醇环烯醚萜类化合物。分子式=Cl5H22O分子量362·45梓醇是地黄最主要有效成分之一，是其“滋阴，，作用的有效活性成分，为一种不很 稳定的环烯醚萜类化合物，具有利尿、缓泻、降血糖、保肝及抗衰老等多种药理活性。研究表 明，在暂时缺血情况下，梓醇有显著的神经保护功能，并发现梓醇能激活脑神经元，可以治 疗因外伤、代谢障碍、脑缺血和帕金森氏病等引起的脑神经病。现有提取梓醇方法，有微波萃取、超声提取、有机试剂提取，如刘影等人在《时珍国 医国药》2009年第20卷第1期发表的“正交实验法优选地黄中梓醇的提取工艺”，文献中比 较了梓醇的提取方法，纯化梓醇的方法，多是硅胶柱分离，如专利2008100016005. 8 (申请 号)“鲜地黄中分离梓醇的方法”所公开的方法采用水提，大空树脂吸附，硅胶柱分离。地黄多糖在地黄中含量很高，它有增强人体免疫力、抗肿瘤和降血糖作用。在临床 已广泛应用。现有公开地黄多糖提取纯化方法很多，如卢晓琳等人在《天然产物研究与开 发》发表了 “怀地黄多糖双酶法提取工艺研究”，该文献比较了地黄多糖提取方法的优劣。同时从地黄中提取纯化地黄多糖和梓醇的方法研究甚少，如专利 200710026330. 8 (申请号)公开了利用地黄生产水苏糖和梓醇的方法，该工艺采用水提取、 膜分离、树脂柱联用。总之现有公开工艺存在以下缺点①地黄原料利用率不高；②产品收率低或含量 低。
发明内容
本发明采用新鲜地黄，同时提取纯化梓醇和地黄多糖，解决了现有工艺的缺点。本发明的目的是这样来实现的一种从新鲜地黄中制备梓醇和地黄多糖的方法，其特征在于包括以下几个步骤①提取将新鲜地黄切成薄片，加入原料量的4-5倍95%乙醇回流提取一次，滤液加入活性炭脱色，得液体A，再加水提取2-3次，合并滤液加入活性炭脱色得液体B ；②醇沉将上述液体B浓缩液至密度1. 3-1. 4，加入乙醇沉淀，分离沉淀物和液体 C ；③多糖纯化上述沉淀热水溶解，加入乙醇再次沉淀，再次热水溶解，加Sevag试 剂沉淀蛋白，离心，得液体回收试剂后加入纳滤膜纳滤，收集浓缩液，加入乙醇沉淀，滤出沉 淀物，干燥得地黄多糖产品，纳滤透过液、沉淀分离液和液体B、C合并，得混合液；④梓醇纯化将上述混合液回收乙醇，通过大空树脂吸附，乙醇溶液洗脱，洗脱液 浓缩干燥，得梓醇粗品，粗品甲醇溶解加入中压硅胶柱分离，收集梓醇流分，浓缩，结晶，干 燥即得梓醇产品
其特征在于所述提取条件水提取温度为80-90°C，提每次加水4-5倍量，提取时 间1-2小时，活性炭加入量为液体的0. 5-1%，脱色时间0. 5-2小时。其特征在于所述分醇沉条件为乙醇浓度为95%，加入量浸膏的3-4倍量。其特征在于所述的纳滤膜为截留分子量1000-600的中空纤维纳滤膜，根据权利要求1所述提制备方法，其特征在于所述大空树脂可选AB-8或ADS-7极 性大空树脂，优选ADS-7。其特征在于所述步骤④的乙醇溶液洗脱条件为4_5倍柱体积10-30%乙醇洗脱 杂质，5-6倍柱体积的70-80%乙醇洗脱梓醇。其特征在于所述步骤④的中压硅胶柱分离条件5_6柱体积量二氯甲烷甲醇混合 溶液(20 1)洗脱杂质，二氯甲烷和甲醇(5 1)洗脱梓醇，TLC监测洗脱。其特征在于所述步骤④的重结晶条件为乙酸乙酯回流饱和溶解，放置结晶。本发明存在以下优点以新鲜地黄为原料，梓醇不会因干燥而损失；先用高浓度 乙醇提取梓醇，减少了提取过程酶和温度对梓醇的破坏，更易分离梓醇和多糖；醇沉过程中 液体利用，提高了梓醇收率；选用纳滤膜提纯多糖，除小分子物质和无机盐效果好，透过液 中的梓醇再次被利用；大空树脂柱分段洗脱除杂效果好，减少了后序硅胶的用量；中压柱 可以连续上样，提高了硅胶的利用率，缩短了生产周期。下面将结合具体实施方式
进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限 于下列实施方式。
具体实施例方式TLC检测条件(药典法)取梓醇对照品加甲醇制成每Iml含0. 5mg的溶液，作为 对照品溶吸取上述两种溶液各5 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水 (14 6 1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茴香醛试液，在105°C加热至斑点显色清晰。 供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。实施例1 将新鲜地黄(梓醇含量0.8%)水洗干净，切成薄片，取50kg，投入提取罐内，加入 200L95%乙醇，回流提取2小时，抽滤液体，加入Ikg活性炭脱色2小时，过滤得液体A(主 要含梓醇)；再水提2次，每次加水200kg水，温度90°C，提取时间2小时，合并液体加入3kg 活性炭脱色2小时，滤过，得液体B。减压浓缩液体B至密度1. 3放出，得18kg浓缩液，注入醇沉罐，取54kg95%乙醇，缓慢加入充分搅拌沉淀，分离沉淀物，得沉淀物和液体C。沉淀物热水溶解，再加其体积的4倍量95%乙醇沉淀，分离沉淀物热水溶解，加入 Sevag试剂除去蛋白，液体加入截留分量1000纳滤膜纳滤，收集浓缩液，加入95 %乙醇，含 醇量80%停止加入，分离沉淀物，干燥即得地黄多糖3kg，含量85%。在醇沉和膜分离过程 的液体和液体AC合并。上述合并液体减压浓缩无醇，加入10LADS-7大空树脂柱吸附，先用40L30%乙醇 洗脱杂质，再用50L80%乙醇洗脱梓醇，收集有效成分减压浓缩，干燥得500g粗提物。粗提 物用99%甲醇溶解，泵入IOL中压硅胶柱。先泵入50L 二氯甲烷甲醇混合溶液(20 1)洗 脱杂质，再用二氯甲烷和甲醇(5 1)洗脱梓醇，TLC监测洗脱，至无梓醇成分流出，收集该 段流分，回收试剂至3L放置结晶。滤出结晶物，乙酸乙酯回流饱和溶解，放置重结晶，滤出 干燥得梓醇产品231g，含量98. 2%。实施例2 将新鲜地黄(梓醇含量0.8%)水洗干净，切成薄片，取50kg，投入 提取罐内，加入 250L95%乙醇，回流提取2小时，抽滤液体，加入2. 5kg活性炭脱色0. 5小时，过滤得液体 A (主要含梓醇)；再水提3次，每次加水250kg水，温度80°C，提取时间1小时，合并液体加 入5kg活性炭脱色0. 5小时，滤过，得液体B。减压浓缩液体B至密度1. 4放出，得19kg浓缩液，注入醇沉罐，取78kg95%乙醇， 缓慢加入充分搅拌沉淀，分离沉淀物，得沉淀物和液体C。沉淀物热水溶解，再加其体积的4倍量95%乙醇沉淀，分离沉淀物热水溶解，加入 Sevag试剂除去蛋白，液体加入截留分量800纳滤膜纳滤，收集浓缩液，加入95 %乙醇，含醇 量75%停止加入，分离沉淀物，干燥即得地黄多糖3. 2kg，含量85%。在醇沉和膜分离过程 的液体和液体AC合并。上述合并液体减压浓缩无醇，加入10LADS-7大空树脂柱吸附，先用50L10%乙醇 洗脱杂质，再用60L70%乙醇洗脱梓醇，收集有效成分减压浓缩，干燥得490g粗提物。粗提 物用1L99%甲醇溶解，泵入IOL中压硅胶柱。先泵入60L 二氯甲烷甲醇混合溶液(20 1) 洗脱杂质，再用二氯甲烷和甲醇(5 1)洗脱梓醇，TLC监测洗脱，至无梓醇成分流出，收集 该段流分，回收试剂至5L放置结晶。滤出结晶物，乙酸乙酯回流饱和溶解，放置重结晶，滤 出干燥得梓醇产品235g，含量98%。实施例3 将新鲜地黄(梓醇含量0.8% )水洗干净，切成薄片，取100kg，投入提取罐内，力口 入500L95 %乙醇，回流提取2小时，抽滤液体，加入4kg活性炭脱色1小时，过滤得液体A (主 要含梓醇)；再水提2次，加水600kg、500kg，温度90°C，提取时间2小时、1小时，合并液体 加入IOkg活性炭脱色1小时，滤过，得液体B。减压浓缩液体B至密度1.35放出，得40kg浓缩液，注入醇沉罐，取160kg95%乙 醇，缓慢加入充分搅拌沉淀，分离沉淀物，得沉淀物和液体C。沉淀物热水溶解，再加其体积的4倍量95%乙醇沉淀，分离沉淀物热水溶解，加入 Sevag试剂除去蛋白，液体加入截留分量600纳滤膜纳滤，收集浓缩液，加入95 %乙醇，含醇 量80%停止加入，分离沉淀物，干燥即得地黄多糖6. 7kg，含量75%。在醇沉和膜分离过程 的液体和液体AC合并。
上述合并液体减压浓缩无醇，加入20LAB-8大空树脂柱吸附，先用100L20%乙醇 洗脱杂质，再用100L80%乙醇洗脱梓醇，收集有效成分减压浓缩，干燥得IlOOg粗提物。粗 提物用99%甲醇溶解(分两次)，泵入10LZH中压硅胶柱。先泵入120L 二氯甲烷甲醇混合 溶液(20 1)洗脱杂质，再用二氯甲烷和甲醇(5 1)洗脱梓醇，TLC监测洗脱，至无梓醇， 收集该段流分。依次用甲醇，二氯甲烷处理硅胶柱，再次泵入粗提物溶解液，二氯甲烷甲醇 洗脱，收集梓醇流分，合并两次流分回收试剂至IOL放置结晶。滤出结晶物，乙酸乙酯回流 饱和溶解，放置重结晶，滤出干燥得梓醇产品485g，含量98%。 实施例4 将新鲜地黄(梓醇含量0.8% )水洗干净，切成薄片，取100kg，投入提取罐内，力口 入500L95%乙醇，回流提取1小时，抽滤液体，加入4kg活性炭脱色0. 5小时，过滤得液体 A (主要含梓醇)；再水提2次，每次加水600kg，温度80°C，提取时间2小时、1小时，合并液 体加入8kg活性炭脱色1小时，滤过，得液体B。减压浓缩液体B至密度1. 4放出，得40kg浓缩液，注入醇沉罐，取120kg95%乙醇， 缓慢加入充分搅拌沉淀，分离沉淀物，得沉淀物和液体C。沉淀物热水溶解，再加其体积的4倍量95%乙醇沉淀，分离沉淀物热水溶解，加入 Sevag试剂除去蛋白，液体加入截留分量1000纳滤膜纳滤，收集浓缩液，加入95 %乙醇，含 醇量80%停止加入，分离沉淀物，干燥即得地黄多糖6. 5kg，含量80%。在醇沉和膜分离过 程的液体和液体AC合并。上述合并液体减压浓缩无醇，加入20LADS-7大空树脂柱吸附，先用80L30%乙醇 洗脱杂质，再用120L70%乙醇洗脱梓醇，收集有效成分减压浓缩，干燥得1050g粗提物。粗 提物用2L99%甲醇溶解，分两次分离，每次泵入20LZH中压硅胶柱。先泵入60L 二氯甲烷甲 醇混合溶液(20 1)洗脱杂质，再用二氯甲烷和甲醇(5 1)洗脱梓醇，TLC监测洗脱，至 无梓醇，收集该段流分。依次用甲醇，二氯甲烷处理硅胶柱，再次泵入粗提物溶解液，二氯甲 烷甲醇溶液洗脱，收集梓醇流分，合并两次流分回收试剂至IOL放置结晶。滤出结晶物，乙 酸乙酯回流饱和溶解，放置重结晶，滤出干燥得梓醇产品487g，含量98%。
权利要求
一种从新鲜地黄中制备梓醇和地黄多糖的方法，其特征在于包括以下几个步骤①提取将新鲜地黄切成薄片，加入原料量的4-5倍95％乙醇回流提取一次，滤液加入活性炭脱色，得液体A，再加水提取2-3次，合并滤液加入活性炭脱色得液体B；②醇沉将上述液体B浓缩液至密度1.3-1.4，加入乙醇沉淀，分离沉淀物和液体C；③多糖纯化上述沉淀物B热水溶解，加入乙醇再次沉淀，再次热水溶解，加Sevag试剂沉淀蛋白，离心，得液体回收试剂后加入纳滤膜纳滤，收集浓缩液，加入乙醇沉淀，滤出沉淀物，干燥得地黄多糖产品，纳滤透过液、沉淀分离液和液体B、C合并，得混合液；④梓醇纯化将上述混合液回收乙醇，通过大空树脂吸附，乙醇溶液洗脱，洗脱液浓缩干燥，得梓醇粗品，粗品甲醇溶解加入中压硅胶柱分离，二氯甲烷甲醇洗脱，收集梓醇流分，浓缩结晶，重结晶，干燥即得梓醇产品。
2.根据权利要求1所述制备的方法，其特征在于所述提取条件水提取温度为 80-900C，提每次加水4-5倍原料量，提取时间1-2小时，活性炭加入量为液体的0. 5-1 %，脱 色时间0. 5-2小时。
3.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于所述分醇沉条件为乙醇浓度为95%，力口 入量浸膏的3-4倍量。
4.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于所述的纳滤膜为截留分子量1000-600的 中空纤维纳滤膜。
5.根据权利要求1所述提制备方法，其特征在于所述大空树脂可选AB-8或ADS-7极性 大空树脂。
6.根据权利要求1所述提制备方法，其特征在于所述步骤④的乙醇溶液洗脱条件为4-5倍柱体积10-30%乙醇洗脱杂质，5-6倍柱体积的70-80%乙醇洗脱梓醇。
7.根据权利要求1所述提制备方法，其特征在于所述步骤④的中压硅胶柱分离条件5-6柱体积量二氯甲烷甲醇混合溶液(20 1)洗脱杂质，7-8柱体积量二氯甲烷甲醇混合 溶液(5 1)洗脱梓醇。
8.根据权利要求1所述提制备方法，其特征在于所述步骤④的重结晶条件为乙酸乙 酯回流饱和溶解，放置结晶。
全文摘要
本发明涉及一种从新鲜地黄中制备梓醇和地黄多糖的方法。工艺以新鲜地黄为原料，切片，先醇提梓醇，再水提取多糖，醇沉、纳滤纯化多糖，大空树脂吸附、中压硅胶柱分离梓醇。采用本发明生产梓醇和地黄多糖，原料利用率高，成本低，工艺简单。
文档编号C07H1/08GK101817855SQ20091026445
公开日2010年9月1日 申请日期2009年12月23日 优先权日2009年12月23日
发明者刘东锋, 张翼, 杨成东 申请人:南京泽朗医药科技有限公司