专利名称：一种从灯盏花素中提取分离高纯度野黄芩苷的方法
技术领域：
本发明公开了一种从灯盏花素中大量快速分离高纯度野黄芩苷的方法，属于植物 中有效成分提取分离技术领域。
背景技术：
灯盏花素是从菊科植物短葶飞蓬(Erigeronbreviscapus (Vant.) Hand. -Mazz., 又名灯盏细辛，灯盏花)中分离出来的一类黄酮类成分，主要含有野黄芩苷、灯盏花甲素 等，其中野黄芩苷(Scutellarin)的含量在80%左右(HPLC法检测)是其主要活性成 分，又名灯盏乙素、灯盏花乙素，化学名为3’，5，6-三羟基-7-0-葡萄糖醛酸苷，分子式为 C21H18O12，结构式见式I。<formula>formula see original document page 3</formula>灯盏花素在临床上应用于治疗心脑血管疾病疗效显著，需求量大，已被开发成注 射齐 、片剂、胶囊剂等各种剂型。由于野黄芩苷的水溶性和脂溶性均较差，只溶于碱水，因 此，制备99%以上高纯度野黄芩苷的难度很大，因而目前市场上的各种灯盏花制剂主要以 95% (紫外法检测)的灯盏花素投料，由于原料药中杂质成分含量去除不完全，导致灯盏花 制剂的不良反应多，特别是注射剂质量问题让人担忧。有报道采用甲醇反复结晶的方法分离高纯度野黄芩苷，但由于灯盏花甲素等杂质 成分与野黄芩苷结构相似，重结晶并不能去除干净，因此此种方法的分离野黄芩苷纯度只 能达到97%左右。中国专利申请200610075982. 6报道采用碱水溶解后，加入沉淀剂沉淀，然后再一 定浓度的复合溶剂中酸化解离，经过多次重复上述步骤，可以得到99%以上的野黄芩苷。该 方法操作步骤繁琐，多次重复操作使得产品得率低，不适用于工业化大生产。中国专利申请200910068662. 1公开了一种灯盏花提取物中灯盏花乙素的吸附树 脂法分离工艺，该工艺以市售提取物为原料，通过“吸附_解吸” 一步连续工艺，制备灯盏花 乙素含量高于98%、灯盏花甲素含量低于0.5%的样品。此方法采用吸附树脂分离，而用树 脂方法制备注射剂原料药存在树脂残留的问题。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中的上述不足，提供一种从灯盏花素中大量快速 分离高纯野黄芩苷的方法，该方法操作简单、消耗溶剂少、产品得率高，安全无毒、环保，适 于工业化生产。本发明所采用的技术方案如下一种从灯盏花素中提取分离高纯度野黄芩苷的方法，按如下工艺步骤进行(1)、原料溶解取80 95%的灯盏花素(UV法检测)，按质量比加入8 12倍量 的N，N- 二甲基甲酰胺(DMF)，得到制备原料溶液；(2)、高效制备液相分离将步骤(1)得到的制备原料溶液过滤，经高效制备液相 色谱柱分离得到野黄芩苷制备溶液，于60°C 80°C温度下减压回收溶剂得野黄芩苷产品， 所述高效制备液相色谱柱填料为十八烷基硅烷键合硅胶(C18),柱规格可以为50CmX10Cm、 50cmX 8cm 或 50cmX 5cm,制备液相的色谱条件为检测波长135nm，流动相为甲醇-DMC-水。所述流动相中DMF的体积百分比浓度为10 % 20 %。所述流动相中甲醇的体积百分比浓度为20% 40%。所述流动相中DMF的体积百分比浓度优选15%，所述流动相中甲醇的体积百分比 浓度优选35%。灯盏花素中的主要有效成分野黄芩苷的水溶性和脂溶性均较差，只溶于碱水，但 多次碱水溶解、沉淀、酸化的工艺不适用于工业化大生产；由于杂质成分与野黄芩苷结构相 似，重结晶也难以去除杂质，因此，制备99%以上高纯度野黄芩苷的难度很大，导致灯盏花 制剂的不良反应多。近年来，制备型高效液相色谱分离技术开始广泛应用于药物单体的分 离纯化，但由于高效液相色谱对样品溶液的纯度、色泽等要求均较高，否则既可能达不到良 好的分离效果，还可以对高效液相色谱系统的色谱柱整配件产生难以逆转的影响，缩短其 使用周期，增加生产成本；而野黄芩苷的水溶性和脂溶性均较差，通常溶剂只能将灯盏花素 配制成混悬液，难以配制成溶液进入高效液相色谱系统进行处理，因而到目前为止还未有 采用制备型高效液相色谱技术分离纯化野黄芩苷的文献报道。本发明人经过大量试验，令人惊讶地发现，N, N- 二甲基甲酰胺对野黄芩苷有助溶 作用，故本发明采用二甲基甲酰胺作为溶剂，将灯盏花素配制成溶液后送入制备型高效液 相色谱系统进行分离提纯。在高效液相色谱分离过程中，色谱条件的选择非常重要，它对样品溶液中各物质 的出峰顺序、峰形、分离效果等起着决定性的作用；色谱条件主要包括色谱柱(包括填料、 柱长及直径等)、流动相(包括组成及流速等)、柱温、检测波长、检测器等，各色谱条件的选 择及其组合至关重要。本发明人通过大量的试验研究及对比分析，确定了如上所述的各色谱条件，使样 品溶液中各物质的出峰时间、峰形、分离效果等最佳化，有利于野黄芩苷得到充分有效的分 离。可很好地解决野黄芩苷溶解性差的难题，以便将灯盏花素制备成溶液，进而通过制备型 高效液相色谱系统进行分离提纯。 与现有技术相比，本发明的有益效果 1、步骤少，耗时短，收率高，能够达到90%，并且操作简便，重现性好，容易收集样品，易于工业化生产。2、溶剂消耗少，制备液相色谱分离步骤中的溶剂都可回收再利用。3、经济效益好。能进行大规模生产，且工序简便，仅包括2个步骤，易于控制，分离 效率高，经HPLC检测，野黄芩苷纯度能够得到99%以上。4、具有较高的学术价值。目前国内关于野黄芩苷分离纯化的文献报道都是碱溶酸 沉、结晶或是常规柱层析，高效制备液相色谱用于野黄芩苷的分离纯化属首次。本发明所得 产品不但可作为野黄芩苷对照品，也为工业化生产注射剂提供了高纯度的原料。
图1为本发明A步骤所述HPLC检测图谱。图2为本发明B步骤所述制备分离在线监测图谱。图3为本发明B步骤所述HPLC检测图谱。
具体实施例方式下面结合具体实施例对本发明的从灯盏花素中提取分离高纯度野黄芩苷的方法 作进一步说明。实施例1本实施例的从灯盏花素中提取分离野黄芩苷的方法，按如下工艺步骤进行一种高纯野黄芩苷的高效分离方法，其特征在于按如下工艺步骤进行(1)、原料溶解取80%的(UV法检测)灯盏花素100g，按质量比加入12倍量的 DMF溶解，得到灯盏花素溶液IL ；(2)、高效制备液相分离将步骤(1)得到的灯盏花素溶液过滤，经高效制备液相 色谱柱分离得到野黄芩苷制备溶液，所述高效制备液相色谱柱填料为十八烷基硅烷键合硅 胶(C18)，柱规格为50cmX 10cm,色谱条件检测波长350nm，流动相为甲醇-DMF-水(体积 比为 30 20 50)，流速 200mL/min。每针进样时间lmin，即进样量20g，单针运行60min。收集制备溶液于80°C温度、-0. 07Pa条件下减压回收试剂至约1L，室温静置8小 时，析出大量黄色固体，过滤，固体于80°C干燥12小时得野黄芩苷产品60g。所得野黄芩苷产品经HPLC纯度分析为99.2 %。分析条件为C18 (5 μ m， 250mmX4. 6mm)，流动相为甲醇水磷酸=45 55 0. 2，检测波长为335nm，流速为 lmL/min，柱温为 25 °C。实施例2本实施例的从灯盏花素中提取分离野黄芩苷的方法，按如下工艺步骤进行一种高纯野黄芩苷的高效分离方法，其特征在于按如下工艺步骤进行(1)、原料溶解取90%的(UV法检测)灯盏花素50g，按质量比加入10倍量的DMF 溶解，得到灯盏花素溶液500mL ；(2)、高效制备液相分离将步骤(1)得到的灯盏花素溶液过滤，经高效制备液相 色谱柱分离得到野黄芩苷制备溶液，所述高效制备液相色谱柱填料为十八烷基硅烷键合硅 胶(C18)，柱规格为50cmX 8cm，色谱条件为检测波长350nm，流动相为甲醇-DMF-水(体积比为 35 15 50)，流速 140mL/min。每针进样时间lmin，即进样量14g，单针运行50min。收集制备溶液于70°C温度、-0. OSPa条件下减压回收试剂至约500mL，室温静置8 小时，析出大量黄色固体，过滤，固体于80°C干燥12小时得野黄芩苷产品40g。所得野黄芩苷产品经HPLC纯度分析为99. 4%，HPLC检测条件同实施例1。实施例3本实施例的从灯盏花素中提取分离野黄芩苷的方法，按如下工艺步骤进行一种高纯野黄芩苷的高效分离方法，其特征在于按如下工艺步骤进行(1)、原料溶解取95%的(UV法检测)灯盏花素20g，按质量比加入8倍量的DMF 溶解，得到灯盏花素溶液IL ；(2)、高效制备液相分离将步骤(1)得到的灯盏花素溶液过滤，经高效制备液相 色谱柱分离得到野黄芩苷制备溶液，所述高效制备液相色谱柱填料为十八烷基硅烷键合硅 胶(C18)，柱规格为50cmX 5cm，色谱条件为检测波长350nm，流动相为甲醇DMF水(体积比 为 40 10 50)，流速 140mL/min。每针进样时间lmin，即进样量14g，单针运行50min。收集制备溶液于60°C温度、-0. 09Pa条件下减压回收试剂至约500mL，室温静置8 小时，析出大量黄色固体，过滤，固体于80°C干燥12小时得野黄芩苷产品40g。所得野黄芩苷产品经HPLC纯度分析为99. 5%, HPLC检测条件同实施例1。
权利要求
一种从灯盏花素中提取分离高纯度野黄芩苷的方法，其特征在于该方法按如下工艺步骤进行(1)、原料溶解取80～95％的灯盏花素(UV法检测)，按质量比加入8～12倍量的二甲基甲酰胺，得到制备原料溶液；(2)、高效制备液相分离将步骤(1)得到的制备原料溶液过滤，经高效制备液相色谱柱分离得到野黄芩苷制备溶液，60～80℃温度下减压回收溶剂得野黄芩苷产品，所述高效制备液相色谱柱填料为十八烷基硅烷键合硅胶，柱规格为50cm×10cm、50cm×8cm或50cm×5cm，制备液相的检测波长135nm，流动相为甲醇-DMC-水。
2.根据权利要求1所述的从灯盏花素中提取分离高纯度野黄芩苷的方法，其特征在于 步骤(2)中所述流动相中DMF的体积百分比浓度为10% 20%，所述流动相中甲醇的体积 百分比浓度为20% 40%。
3.根据权利要求2所述的从灯盏花素中提取分离高纯度野黄芩苷的方法，其特征在于 步骤(2)中所述流动相中DMF的体积百分比浓度为15%，所述流动相中甲醇的体积百分比 浓度为35%。
全文摘要
本发明公开了一种高纯野黄芩苷的高效分离方法，它按如下工艺步骤进行(1)原料溶解DMF作为助溶剂溶解原料；(2)用甲醇-DMF-水作为流动相，采用高效制备液相色谱柱分离，回收溶剂，干燥，得到纯度99％以上的野黄芩苷产品。本发明方法简易快速，溶剂消耗少，得率高，经济环保，可以一次制备得到大量产品，具有较高的经济价值和学术价值。
文档编号C07H17/07GK101830951SQ20091031130
公开日2010年9月15日 申请日期2009年12月13日 优先权日2009年12月13日
发明者刘丁, 夏柯, 文焕松, 肖莹莹, 郭建华 申请人:成都普思生物科技有限公司