专利名称：：一种促甲状腺素释放激素及其可药用盐的制备方法
技术领域：
：本发明涉及一种药学领域的多肽药物的制备方法，特别是涉及一种促甲状腺素释放激素及其可药用盐的规模化制备方法。
背景技术：
：促甲状腺(激)素释放激素，又称为促甲状腺(激)素释放因子，英文简称为TRH或TRF,TRH的化学结构为L-焦谷氨酰-L-组氨酰-L-脯氨酰胺(L-pGlu-L-HiS-L-Pro-NH2)。TRH是下丘脑分泌的激素，存在于人和多种动物体内，除具有刺激促甲状腺激素(TSH)的合成和分泌外，还能引起催乳素的释放。此外，TRH对中枢神经系统也有很好的促进作用，如促进脊髓损伤恢复、加速局部缺血缺氧的脑神经损伤的恢复、改善脑血流减轻脑水肿、促进脑损伤的神经功能性障碍的恢复等，还有防止癫痫发作和促清醒的作用。TRH作为人类使用的药物，已被列入日本药典(14版)、欧洲药典(5.2版)、英国药典(2003版)。自从TRH的化学结构被阐明以来，关于其合成的报道很多。在这些合成报道中，除美国雅培公司(AbbottLaboratories)和日本武田化学公司(TakedaChemicalIndustries,Ltd.)报道的合成方法外，其他合成方法均需要采用柱层析分离的办法才能得到高质量的TRH。众所周知的是，在生产上使用柱层析的工艺会使生产成本大幅度上升，使操作难度增加，难以实现产业化大量制备。1974年美国雅培公司的Kurath和Thomas，日本武田化学公司的MasahikoFujino等，先后分别报道了极为相似的合成路线，该路线不需要使用柱层析分离，而是对中间体采用重结晶的办法，即可制备出高质量的TRH。他们采用的合成方法是以Z-L-pGlu为起始原料，制备成活泼酯，再与L-His的碱金属盐反应，得到Z-L-pGlu-L-His，最后与L-Pro-NH2在DCC的作用下，得到Z-L-pGlu-L-His-L-Pro-NH2。Z-L-pGlu-L-HiS-L-Pro-NH2再经钯碳催化氢化，得到高质量的TRH。雅培公司与武田公司的不同之处为前者采用DCC法进行缩合反应，而后者使用DCC/H0NB(N-羟基-5-降冰片烯_2，3-二甲酰亚胺)法进行缩合反应，此外在反应溶剂方面略有不同。1990年张家瑾报道的合成方法与武田公司的完全相同，只在实验的个别细节方面采用了雅培公司报道的方法。雅培公司与武田公司制备TRH的方法存在一个严重的缺陷，即Z-L-pGlu-L-His与L-Pro-NH2在DCC(二环己基碳二亚胺)的作用下得到Z-L-pGlu-L-HiS-L-Pro-NH2，为了得到合格产品，后处理步骤用乙醇或乙腈重结晶后的实际收率较低，只有45-58%，且该步反应产生的副产物D⑶(二环己基脲)、添加剂HONB或HOSu、过剩的DCC，即使经过重结晶步骤，仍可能残留在产品中。该步得到的产物Z-L-PGlu-L-His-L-Pr0-NH2在氢化脱去Z(苄氧羰基)保护基后，不再进行产品精制，上述杂质(DCC、DCU、Η0ΝΒ、HOSu)都可能残留在最终产品(TRH)中。特别是残留的DCC由于毒性大具有很大的危害。显然，雅培公司、武田公司、张家瑾制备TRH的方法无法满足大规模经济地制备高质量TRH的需要。Z-L-pGlu-L-His的制备方法，可按照下面的文献方法制备P.Kurath,A.M.Thomas,HelvChimicaActa,1973，56(5)1656-61.ChitoshiHatanaka,etal.BiochemBiophyResCommun.1974,60(4)1345-50.MasahikoFujino，etal.ChemPharmBull1974,22(8)1857-63.张家瑾，等.首都医学院学报.1990，11(4):276_8·由此可见，上述现有的促甲状腺素释放激素的制备方法仍存在有不便与缺陷，而亟待加以进一步改进。本发明采用羰基二咪唑(CDI)作为多肽缩合剂用于合成Z-L-PGlu-L-His-L-Pr0-NH2，可以克服现有技术方案的不足，本发明的优点是大大提高收率、降低生产成本、提高产品纯度、简化后处理步骤，使经济地大规模制备TRH成为可能。
发明内容本发明的主要目的在于，克服现有的促甲状腺素释放激素及其可药用盐的制备方法存在的缺陷，而提供一种新的促甲状腺素释放激素及其可药用盐的制备方法，所要解决的技术问题是使其采用CDI作为多肽缩合剂用于合成Z-L-PGlu-L-His-L-Pr0-NH2,从而实现可规模化制备TRH及其药物上可接受的酸加成盐。本发明的目的及解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。依据本发明提出的一种促甲状腺素释放激素的制备方法，该方法包括步骤1以Z-L-pGlu-L-His为原料与羰基二咪唑反应，形成Z-L-pGlu-L-His酰基咪唑活化中间体，Z为苄氧羰基；步骤2向步骤1得到的产物中加入L-Pro-NH2进行反应，得到Z-L-pGlu-L-HiS-L-Pro-NH2。步骤3对所述的Z-L-PGlu-L-His-L-Pro-NH2进行催化氢化反应，即可得到促甲状腺素释放激素(L-PGlu-L-His-L-Pr0-NH2)。该方法还包括以下步骤向步骤2得到的反应物中加入不良溶剂并搅拌，然后静置，去除上清液，得到残余物，步骤2的反应物与不良溶剂的体积比例为120至130，所述的不良溶剂为醚类、卤代烃、烷烃、环烷烃和芳香烃中之一或者其中几种的混合物；向残余物中加入醇、四氢呋喃、二氧六环、丙酮和腈中之一或其中几种物质的混合物，在60°C至75°C下搅拌使残余物溶解形成残余物溶液；将残余物溶液与不良溶剂混合，然后过滤，对滤饼后处理得到产品Z-L-PGlu-L-His-L-Pro-NH2，所述的不良溶剂为乙醚、异丙醚和叔丁基甲基醚的一种或几种物质的混合物；本发明的目的及解决其技术问题还可采用以下技术措施进一步实现。前述的促甲状腺素释放激素的制备方法，其中所述的步骤1包括在-20°c至O°C下，向Z-L-pGlu-L-His的溶液或悬浊液中加入羰基二咪唑，Z-L-pGlu-L-His与羰基二咪唑的摩尔比为11-13;然后在搅拌下进行步骤1的反应，反应温度为-20°C至0°C，反应时间为10分钟至1小时。优选的加料温度为-15°C至-10°C，优选的Z-L-pGlu-L-His与羰基二咪唑的摩尔比为11-12.5，优选的反应温度为-151至-101，优选的反应时间为25分钟至45分钟。所述的Z-L-pGlu-L-His的溶液或悬浊液的溶剂为THF、DMF、DMSO,DCM、EtOAc,NMP、1，2-二氯乙烷、1，4-二氧六环、丙酮、氯仿、乙腈、DMA和HMPA中之一或其中几种物质的混合物。优选的溶剂为DMF、DMS0、NMP中之一或其中几种物质的混合物。所述的步骤2包括在-15°C至0°C下，向步骤1得到的产物中加入L-Pro-NH2,Z-L-pGlu-L-His与L-Pro-NH2的摩尔比为11；然后在搅拌下进行反应，反应温度为-15°C至0°C，反应时间为1小时至5小时。优选的加料温度为-15°C至-10°C，优选的反应温度为_15°C至-10°C，优选的反应时间为2小时至5小时。所述的步骤3包括将Z-L-PGlu-L-His-L-Pro-NH2经钯碳催化氢化(常压，或氢气压1-6个大气压)，得到L-PGlu-L-His-L-Pr0-NH2,即TRH游离碱。优选的催化氢化的氢气压为4-6个大气压，优选的氢气时间为6-8小时，优选的氢化温度为20-25°C。本发明还提出一种促甲状腺素释放激素可药用盐的制备方法，该方法是首先通过前述的方法制备得到L-PGlu-L-His-L-Pr0-NH2，然后再与酒石酸、富马酸、马来酸、醋酸、草酸、乳酸、枸橼酸、苹果酸、苯甲酸、甲磺酸、山梨酸、谷氨酸、天门冬酸、盐酸、硫酸、磷酸、硝酸、氢溴酸或氢碘酸进行反应。借由上述技术方案，本发明采用CDI作为肽合成的缩合剂制备促甲状腺素释放激素及其可药用盐至少具有下列优点第一是反应的副产物是二氧化碳和咪唑，二氧化碳是挥发性气体，咪唑可溶于乙醚等多种有机溶剂，可以很容易地通过溶剂冲洗来除去，产品后处理不再需要重结晶步骤，仅采用在反应混合物中加入难溶溶剂即可得到产品，使收率大幅度提高；第二是CDI在反应中形成的活化酰胺的活性比DCC做缩合剂形成的活性中间体的活性高，反应迅速，收率高，产品纯度高；第三是各反应原料采用等摩尔比投料，反应结束后各反应原料都已参与反应而没有剩余，使后处理简化。如本文所用，除非另外说明，术语通常具有本领域中常用的如下含义。如本文所用，术语“TRH”指促甲状腺(激)素释放激素。如本文所用，术语“Z，，指苄氧羰基。如本文所用，术语“Z-L-pGlu-L-HiS-L-Pro-NH2”指苄氧羰酰_L_焦谷氨酰_L_组氨酰-L-脯氨酰胺。如本文所用，术语“L-pGlu-L-His-L-Pro-NH2”指L-焦谷氨酰-L-组氨酰-L-脯氨酰胺。如本文所用，术语“HA”指药物上可接受的酸。如本文所用，术语“Z-L-pGlu-L-His”指苄氧羰酰_L_焦谷氨酰-L-组氨酸。如本文所用，术语“Z-L-pGlu”指苄氧羰酰-L-焦谷氨酸。如本文所用，术语“L-His”指L-组氨酸。如本文所用，术语“L-Pro-NH2”指L-脯氨酰胺。如本文所用，术语“DCC”指二环己基碳二亚胺。如本文所用，术语“HONSu”指N-羟基琥珀酰亚胺。如本文所用，术语“Η0ΝΒ”指N-羟基_5_降冰片烯_2，3_二甲酰亚胺.如本文所用，术语“⑶I，，指羰基二咪唑。如本文所用，术语“THF”指四氢呋喃。如本文所用，术语“DMF”指N，N-二甲基甲酰胺。如本文所用，术语“DMS0”指二甲基亚砜。如本文所用，术语“DCM”指二氯甲烷。如本文所用，术语“EtOAc”指乙酸乙酯。如本文所用，术语“NMP”指N-甲基-2-吡咯烷酮。如本文所用，术语“DMA”指N，N-二甲基乙酰胺。如本文所用，术语“HMPA”指六甲磷酰胺。上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段，并可依照说明书的内容予以实施，以下以本发明的较佳实施例详细说明如后。具体实施例方式为更进一步阐述本发明为达成预定发明目的所采取的技术手段及功效，以下结合较佳实施例，对依据本发明提出的促甲状腺素释放激素及其可药用盐的制备方法详细说明如下。Z-L-PGlu-L-His-L-Pro-NH2的制备方法采用现有技术的方法制备得到Z-L-pGlu-L-His。步骤1在Z-L-pGlu-L-His的溶液或悬浊液中，加入⑶I，在上述反应中，Z-L-pGlu-L-His与⑶I投料的优选摩尔比为11至12.5。由于按文献制备得到的Z-L-pGlu-L-His分子中通常含有1.5分子的结晶水，⑶I接触到水分子会迅速分解，所以CDI的加入量与Z-L-pGlu-L-His的摩尔比为2.51；对于采用无水Z-L-pGlu-L-His进行反应，⑶I的加入量与Z-L-pGlu-L-His的摩尔比为11。为了减少副反应的发生和抑制活化了的Z-L-pGlu-L-His发生消旋，加料温度和反应温度控制在-15°C至-10°C。反应温度应保持在_15°C以上，以避免反应过慢导致副反应发生。步骤2在Z-L-pGlu-L-His的溶液或悬浊液中，加入⑶I后，可见二氧化碳的气泡放出，到气泡停止，这段时间大约为25分钟至45分钟，气泡停止后即可加入L-Pro-NH2。同样为了减少副反应的发生和抑制消旋，反应温度应保持在_15°C至-10°C。优选的反应时间为2小时至5小时。步骤2中的后处理将步骤2得到的反应混合物与不良溶剂混合，搅拌，静置。反应产物L-PGlu-L-His-L-Pro-NH2不溶于不良溶剂而沉淀下来，反应的副产物咪唑能溶解在不良溶剂中，而被除去。优选的不良溶剂为乙醚、异丙醚和叔丁基甲基醚的一种或几种物质的混合物。步骤2中的纯化向残余物加入乙醇、异丙醇、四氢呋喃、二氧六环、丙酮和乙腈中的一种或几种物质的混合物，搅拌并加热，使残余物溶解于上述溶剂中形成残余物溶液。L-PGlu-L-His-L-Pro-NH2能与甲醇发生反应，所以，L-pGlu-L-HiS-L-Pro-NH2应避免与甲醇接触。优选的加热的温度为65°C至70°C。随后，将残余物溶液与不良溶剂混合并搅拌。优选的不良溶剂为乙醚、异丙醚、叔丁基甲基醚，以及它们的混合物。优选的搅拌时间为15分钟至2小时。然后过滤，用不良溶剂洗得到的产品，减压干燥，得到的产品为Z-L-pGlu-L-HiS-L-Pro-NH2。L-PGlu-L-His-L-Pro-NH2的制备Z-L-PGlu-L-His-L-Pro-NH2溶解于11的THF/水混合液中，在20-25°C经钯碳催化氢化(常压，或氢气压1-6个大气压)，通过硅藻土或氧化铝过滤，在40°C以下减压蒸除THF，得到的水溶液冷冻干燥，得到TRH游离碱(L-PGlu-L-His-L-Pr0-NH2)。TRH药学上可接受的盐的制备TRH游离碱再与酸反应得到药物上可接受的盐。所述的酸为酒石酸、富马酸、马来酸、醋酸、草酸、乳酸、枸橼酸、苹果酸、苯甲酸、甲磺酸、山梨酸、谷氨酸、天门冬酸、盐酸、硫酸、磷酸、硝酸、氢溴酸或氢碘酸。例如，与L-酒石酸在乙醇溶液中反应，得到结晶的TRH酒石酸盐。实例1Z-L-PGlu-L-His-L-Pro-NH2的制备Z-L-pGlu-L-His在60°C及0.ImmHg真空下干燥24小时，制得无水Z-L-pGlu-L-His。取无水Z-L-pGlu-L-His(llg，27.47mmol)溶解于60mL的无水DMF中，冷却到-20°C，加入固体CDI(4.5g，27.47mmol)，保持_15°C并搅拌45分钟。然后，加入L-Pro-NH2(3.lg，27.47mmol)，在-15°C搅拌1小时，然后自然升温至室温，搅拌3小时。搅拌下将反应溶液倒入1.5L乙醚中，静置24小时，将上清液倾去，然后加入2LTHF并微热至60°C使瓶壁上的残余物溶解，再在猛烈搅拌下将该溶液倒入1.5L无水乙醚中，产生大量白色粉末状固体，室温下持续搅拌15分钟，抽滤，用无水乙醚洗白色粉末(每次200mL，3次)，得到12.9g(收率93%)Z-L-PGlu-L-His-L-Pro-NH2,HPLC检测纯度98.9%。HPLC检测条件正相硅胶柱，流动相梯度洗脱，乙醇氯仿(23)至乙醇氯仿(32)，检测波长250nm，流速lml/min。实例2Z-L-PGlu-L-His-L-Pro-NH2的制备Z-L-pGlu-L-His(llg，25.74mmol)溶解于55mL的无水DMF中，冷却到_15°C，加入固体CDI(10.4g，64.34mmol)，保持_10°C并搅拌30分钟。然后加入L-Pro-NH2(2.9g，25.74mmol)，-10°C搅拌1小时，然后自然升温至室温，搅拌5小时。搅拌下将反应溶液倒入2L乙醚中，静置48小时，将上清液倾去，然后加入1.2L无水乙醇并微热至75°C使瓶壁上的残余物溶解，再在充分搅拌下将2L异丙醚缓慢倒入该乙醇溶液中，产生大量白色粉末状固体，室温下持续搅拌2小时，抽滤，用无水乙醚洗白色粉末(每次200mL，3次)，得到12.6g(收率97%)Z-L-PGlu-L-His-L-Pro-NH2,HPLC检测纯度98.5%。实例3Z-L-PGlu-L-His-L-Pro-NH2的制备Z-L-pGlu-L-His(llg,25.74mmol)悬浮于40mL分析纯DMF与40mL分析纯THF的混合溶液中，冷却到-10°C，加入固体⑶I(12.5g，77.22mmol)，保持_5°C并搅拌25分钟。然后加入L-Pro-NH2(2.9g，25.74mmol)，在_5°C搅拌1小时，然后自然升温至室温，搅拌5小时。搅拌下将反应溶液倒入2L乙醚中，静置72小时，将上清液倾去，然后加入1.5L异丙醇并微热至70°C使瓶壁上的残余物溶解，再在猛烈搅拌下将该乙醇溶液倒入1.8L叔丁基甲基醚中，产生大量白色粉末状固体，室温下持续搅拌5分钟，抽滤，用叔丁基甲基醚洗白色粉末(每次300mL，3次)，得至Ij11.7g(收率90%)Z-L-pGlu-L-HiS-L-Pro-NH2，HPLC检测纯度98.1%ο实例4Z-L-PGlu-L-His-L-Pro-NH2的制备Z-L-pGlu-L-His在60°C及0.ImmHg真空下干燥24小时，制得无水Z-L-pGlu-L-His。取无水Z-L-pGlu-L-His(llg,27.47mmol)溶解于60mL的无水DMF中，冷却到_5°C，加入固体⑶I(4.5g，27.47mmol)，保持OV并搅拌25分钟。然后，加入L-Pro-NH2(3.lg，27.47mmol)，在0°C搅拌1小时，然后自然升温至室温，搅拌4小时。搅拌下将反应溶液倒入1.5L乙醚中，静置24小时，将上清液倾去，然后加入1.5L乙腈并微热至65°C使瓶壁上的残余物溶解，再在猛烈搅拌下将该乙醇溶液倒入1.5L无水乙醚中，产生大量白色粉末状固体，室温下持续搅拌8小时，抽滤，用无水乙醚洗白色粉末(每次200mL，3次)，得至Ij11.9g(收率86%)Z-L-PGlu-L-His-L-Pro-NH2,HPLC检测纯度98.0%o实例5L-PGlu-L-His-L-Pro-NH2的制备Z-L-PGlu-L-His-L-Pro-NH2(12g,23.73mmol)溶解于600mL的THF和600mL水的混合液中，加入2.4g钯碳(10%)，加压氢化(4个大气压)6小时，通过硅藻土抽滤，滤除钯碳，用11的THF/水混合液洗滤层3次，滤液减压浓缩除去THF，水浴温度不超过40°C，所得水溶液冷冻干燥，得到白色无定形固体8.5g(收率97%)，为TRH游离碱。HPLC检测纯度98.6%(按照英国药典2003版的方法检验)。实例6L-PGlu-L-His-L-Pro-NH2酒石酸盐的制备实例5得到TRH游离碱(8g，21.56mmol)溶解于6.9mL水中，然后加入L-酒石酸(3.2g，21.32mmol)，溶解后，再加入41mL无水乙醇，室温放置2天，出现结晶。再加入79mL无水乙醇，再室温放置5天，出现大量结晶，抽滤，得到TRH酒石酸盐10.7g(收率95%)。HPLC检测纯度99.2%(按照日本药典14版的方法检验)。采用富马酸、马来酸、醋酸、草酸、乳酸、枸橼酸、苹果酸、苯甲酸、甲磺酸、山梨酸、谷氨酸、天门冬酸、盐酸、硫酸、磷酸、硝酸、氢溴酸或氢碘酸来代替上述的酒石酸就可以得到TRH相应的药学上可接受的盐。对比例1Z-L-PGlu-L-His-L-Pro-NH2的制备参照P.Kurath，Α.Μ.Thomas,HelvChimicaActa,1973,56(5):1656_61·进行实验。Z-L-pGlu-L-His(llg,25.74mmol)与L-Pro-NH2(3.6g,31.14mmol)溶解于60mL的无水DMF中，搅拌，冰浴冷却到0°C，加入固体DCC(6g，29.06mmol)，再加入20mL无水DMF，保持0°C并搅拌2小时，然后自然升温至室温，搅拌过夜。抽滤，用DMF洗沉淀(IlmLX3)。搅拌下将滤液将反应溶液倒入1.5L乙醚中，静置48小时，将上清液倾去，然后加入1.IL无水乙醇并微热使瓶壁上的残余物溶解，再在猛烈搅拌下将该乙醇溶液倒入1.5L无水乙醚中，产生大量白色粉末状固体，室温下持续搅拌30分钟，抽滤，用无水乙醚洗白色粉末(200mLX3)。白色粉末再用无水乙醇重结晶，特别要注意的是，本步产物在无水乙醇完全沉淀下来的速度很慢，通常要静置3天或以上，否则收率会受很大影响。得到5.8g(收率45%)Z-L-PGlu-L-His-L-Pro-NH2,HPLC检测纯度93.4%。对比例2Z-L-PGlu-L-His-L-Pro-NH2的制备参照下列文献进行实验ChitoshiHatanaka,etal.BiochemBiophyResCommun.1974,60(4)1345-50.MasahikoFujino,etal.ChemPharmBull1974,22(8)1857-63.张家瑾，等.首都医学院学报·1990，11(4)276-8.Z-L-pGlu-L-His(llg,25.74mmol)与L-Pro-NH2(3.6g,31.14mmol)溶解于60mL的无水DMF中，搅拌下冷却至0°C，加入20mL无水DMF，加入HONB(5.2g，29.12mmol)，搅拌10分钟，加入固体DCC(6g，29.06mmol)，再加入20mL无水DMF，保持0°C并搅拌2小时，然后自然升温至室温，搅拌过夜。抽滤，用DMF洗沉淀(IlmLX3)。搅拌下将滤液将反应溶液倒入1.5L乙醚中，静置48小时，将上清液倾去，然后加入1.IL无水乙醇并微热使瓶壁上的残余物溶解，再在猛烈搅拌下将该乙醇溶液倒入1.5L无水乙醚中，产生大量白色粉末状固体，室温下持续搅拌30分钟，抽滤，用无水乙醚洗白色粉末(200mLX3)。白色粉末再用无水乙醇重结晶，特别要注意的是，本步产物在无水乙醇完全沉淀下来的速度很慢，通常要静置3天或以上，否则收率会受很大影响。得到7.6g(收率58%)Z-L-PGlu-L-His-L-Pro-NH2,HPLC检测纯度91.2%。实例与对比例反应条件、产品纯度及收率对照表<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>以上所述仅是本发明的较佳实施例而已，上述实施例的反应温度、反应时间以及溶剂、稀释剂等物质的选择已经给出具体范围，本领域的技术人员可以参考上述实例的内容做出合适的选择，发明人在此不再一一举例。虽然本发明已以较佳实施例揭露如上，然而并非用以限定本发明，任何熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明技术方案范围内，当可利用上述揭示的技术内容做出些许更动或修饰为等同变化的等效实施例，但凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。权利要求一种制备促甲状腺素释放激素(TRH)的方法，包括制备Z-L-pGlu-L-His-L-Pro-NH2的步骤和对所述的Z-L-pGlu-L-His-L-Pro-NH2进行催化氢化反应的步骤，其特征在于所述的制备Z-L-pGlu-L-His-L-Pro-NH2的步骤包括(1)Z-L-pGlu-L-His与羰基二咪唑反应，形成Z-L-pGlu-L-His酰基咪唑活化中间体，Z为苄氧羰基；(2)向步骤(1)得到的产物中加入L-Pro-NH2进行反应，得到Z-L-pGlu-L-His-L-Pro-NH2。(3)将步骤(2)得到的产物脱去Z保护基，得到TRH。2.根据权利要求1所述的促甲状腺素释放激素的制备方法，其特征在于，所述的制备Z-L-PGlu-L-His-L-Pro-NH2的步骤还包括向步骤(2)得到的反应产物中加入不良溶剂并搅拌，静置，去除上清液，得到残余物，步骤(2)的反应物与稀释溶剂的体积比例为120至130，所述的稀释溶剂为醚类、卤代烃、烷烃、环烷烃和芳香烃中之一或者其中几种的混合物；向残余物中加入醇、四氢呋喃、二氧六环、丙酮和乙腈中之一或其中几种物质的混合物，在60°C至75°C下搅拌使残余物溶解形成残余物溶液；将残余物溶液与不良溶剂混合，搅拌，然后过滤，对滤饼后处理，所述的不良溶剂为乙醚、异丙醚和叔丁基甲基醚的一种或几种物质的混合物。3.根据权利要求1或2所述的促甲状腺素释放激素的制备方法，其特征在于，所述的步骤(1)包括在-20°C至0°C下，向Z-L-pGlu-L-His的溶液或悬浊液中加入羰基二咪唑，Z-L-pGlu-L-His与羰基二咪唑的摩尔比为11-13；然后在搅拌下进行步骤(1)的反应，反应温度为_20°C至0°C，反应时间为10分钟至1小时。4.根据权利要求3所述的促甲状腺素释放激素的制备方法，其特征在于，所述的加料温度为_15°C至-10°C；或者Z-L-pGlu-L-His与羰基二咪唑的摩尔比为11-12.5；或者所述的反应温度为_15°C至-10°C；或者所述的反应时间为25分钟至45分钟。5.根据权利要求1所述的促甲状腺素释放激素的制备方法，其特征在于，所述的步骤(2)包括在-15°C至0°C下，向步骤(1)得到的产物中加入L-Pro-NH2,Z-L-pGlu-L-His与L-Pro-NH2的摩尔比为11。然后在搅拌下进行反应，反应温度为_15°C至0°C，反应时间为1小时至5小时。6.根据权利要求5所述的促甲状腺素释放激素的制备方法，其特征在于，所述的加料温度为_15°C至-10°C；或者所述的反应温度为_15°C至-10°C；或者所述的反应时间为2小时至5小时。7.根据权利要求3或5所述的促甲状腺素释放激素的制备方法，其特征在于，所述的Z-L-pGlu-L-His的溶液或悬浊液的溶剂为THF、DMF、DMSO、DCM、EtOAc、NMP、l，2-二氯乙烷、1，4-二氧六环、丙酮、氯仿、乙腈、DMA和HMPA中之一或其中几种物质的混合物。8.一种促甲状腺素释放激素可药用盐的制备方法，其特征在于，通过如权利要求1-7任一项所述的方法制备得到TRH，然后再与酒石酸、富马酸、马来酸、醋酸、草酸、乳酸、枸橼酸、苹果酸、苯甲酸、甲磺酸、山梨酸、谷氨酸、天门冬酸、盐酸、硫酸、磷酸、硝酸、氢溴酸或氢碘酸进行反应。全文摘要本发明是关于一种促甲状腺素释放激素(TRH)及其可药用盐的制备方法。该方法包括将Z-L-pGlu-L-His与羰基二咪唑(CDI)反应；然后加入L-Pro-NH2进行反应；然后与不良溶剂混合，静置，去除上清液，得到残余物；向残余物中加入溶剂形成残余物溶液；将残余物溶液与不良溶剂混合，然后过滤，对滤饼后处理得到Z-L-pGlu-L-His-L-Pro-NH2，对所述Z-L-pGlu-L-His-L-Pro-NH2进行催化氢化反应，得到TRH，并任选将其盐化。本发明的方法采用CDI做缩合剂，具有反应速度快，反应原料不需要过量投料，产品后处理不再需要重结晶步骤，仅采用在反应混合物中加入难溶溶剂即可得到Z-L-pGlu-L-His-L-Pro-NH2，使收率大大提高。文档编号C07K1/02GK101817870SQ20101013732公开日2010年9月1日申请日期2010年4月1日优先权日2010年4月1日发明者张伟,辛军,韩震申请人:济南兆德生物科技有限公司