1,4-二氢噻吩并[3’,2’:5,6]噻喃并[4,3-c]吡唑-3-羧酸衍生物及其应用的制作方法

专利名称：1,4-二氢噻吩并[3’,2’:5,6]噻喃并[4,3-c]吡唑-3-羧酸衍生物及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及1，4-二氢噻吩并[3’，2’ 5，6]噻喃并[4，3-c]吡唑_3_羧酸衍生物 或其药学上可接受的盐。本发明还涉及所述化合物的制备方法和包含它们的药学上可接受 的组合物及其在治疗疾病中的应用。
背景技术：
已知雌激素为女性性激素。然而，最近有许多关于雌激素在器官中的组织特异性 的报道，所述性质传统上不被认为是雌激素_敏感的或雌激素_反应的。在绝经期雌激素 的分泌显著地下降。雌激素的减少可诱发血管舒缩系统、泌尿生殖系统、心血管系统、骨骼 系统和中枢神经系统疾病的短期和长期症状例如热潮红、泌尿生殖器萎缩、心血管疾病危 险性增加、骨质疏松症、认知减退和心理缺陷，包括认知障碍和早老性痴呆危险性的增加。激素替代疗法(HRT)更准确地讲是雌激素替代疗法(ERT)，通常指定用来解决与 绝经相关的医学问题，同时也有助于以预防性和治疗性方式阻止骨质疏松症和原发性心血 管并发症(例如冠状动脉疾病)的发生。因此，HRT被认为是一种用于延长绝经后妇女的 平均寿命和提高生活质量的药物疗法。ERT有效地缓解了更年期症状和泌尿生殖器症状，已经表明在预防和治疗绝经后 妇女心脏方面有一定益处。然而，也有与降低病人顺应性的ERT相关的副作用。静脉血栓栓 塞、胆囊疾病、月经恢复、乳房痛以及可能增加发生子宫癌和/或乳腺癌的危险性是与ERT 相关的风险。进行ERT的妇女中有高达30%没有完成所述疗法，并且ERT的中止率介于 38 %和70 %之间，其中中止最重要的原因是对安全性担忧和副作用。雷洛昔芬即非类固醇苯并噻吩类正在美国和欧洲市场上销售，用于预防和治疗骨 质疏松症。已经表明，雷洛昔芬减少骨丢失，并防止骨折，不负面的刺激子宫内膜和乳腺组 织，只是雷洛昔芬比ERT在抵抗骨丢失方面稍微逊色。雷洛昔芬是独特的，并且与ERT有显 著性差异，因为它不刺激子宫内膜，因而具有预防乳腺癌的潜力。也证明，雷洛昔芬对心血 管危险性因素有有益的雌激素激动剂作用，更准确的讲，通过快速和持续减少用雷洛昔芬 治疗的病人体内的总脂蛋白胆固醇水平和低密度脂蛋白胆固醇水平而具有有益的雌激素 激动剂作用。另外，已经表明，雷洛昔芬降低高半胱氨酸即动脉粥样硬化和血栓栓塞性疾病 的独立危险因子的血浆浓度。然而，据报道，雷洛昔芬加速与绝经相关的症状例如热潮红和阴道干燥，并且不改 善老年患者的认知功能。据报道，摄取雷洛昔芬的患者与安慰剂或ERT使用者相比，热潮红 发生率较高，比安慰剂使用者的腿部痛性痉挛更高，虽然接受ERT的妇女比雷洛昔芬或安 慰剂使用者的阴道出血和乳房不适的发生率更高。再者，雷洛昔芬和任何其它当前可利用的选择性雌激素受体调节剂都不能提供当 前可利用的ERT的所有益处，例如控制绝经后综合症和预防早老性痴呆，而不引起子宫内 膜癌和乳腺癌和出血危险性增加等不良副作用。因此，需要这样一种化合物它们是选择性雌激素受体调节剂，并且提供ERT的所有益处，同时也解决与绝经相关系统性雌激素减少 相关的血管舒缩、泌尿生殖器和认知障碍或病症。

发明内容
本发明涉及通式I表示的1，4_ 二氢噻吩并[3’，2’ 5，6]噻喃并[4，3_c]吡 唑-3-羧酸衍生物或其药学上可接受的盐或前药，用来治疗和/或预防与雌激素缺乏相关 的疾病。 式中，R,可以独立的选自0CH3或者取代或未取代的胺基；&可以独立的选自H或者乙酰基。本发明的另一个目的是提供一种药用组合物，该组合物包含有效量的所述的通式 I化合物或其非毒性的药学上可接受的盐及其药学上配伍可接受的载体，或其立体异构体 和前药，及其药学上配伍可接受的载体或稀释剂。本发明的又一方面，提供了治疗有一种或多种雌激素受体介导的疾病的患者的方 法，所述方法包括给予所属患者治疗有效量的任一上述化合物或药用组合物。本发明的又一方面，是提供一种避孕方法，所述方法包括给予有需要的患者治疗 有效量的一种式(I)化合物以及孕激素或孕激素拮抗剂的联合方法。本发明的又一方面，是本文描述的任一化合物在制备用于治疗有需要的患者以下 疾病以及避孕的药物中的用途(a)热潮红、(b)阴道干燥、(c)骨量减少、(d)骨质疏松症、 (e)高血脂症、(f)认知功能丧失、(g)变性性脑病、(h)心血管疾病、⑴脑血管疾病、(j) 乳腺癌、(k)子宫内膜癌、(1)子宫颈癌、(m)前列腺癌、(n)良性前列腺增生、(0)子宫内膜 异位、(P)子宫肌瘤、(q)骨关节炎。通式(I)中具体化合物1-(1，4_ 二氢噻吩并[3’，2’ 5，6]噻喃并[4，3_c]吡唑_3_甲酰基)_4_苯基哌 嗪(化合物编号1)；1-(1，4_ 二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并[4，3_c]吡唑_3_甲酰基)-4_(4_甲氧 基苯基)哌嗪(化合物编号2)；1-(1，4_ 二氢噻吩并[3’，2’ 5，6]噻喃并[4，3_c]卩比唑_3_甲酰 基)-4- (3-氯-2-甲基苯基)哌嗪(化合物编号3)；1-(1，4_ 二氢噻吩并[3’，2’ 5，6]噻喃并[4，3_c]卩比唑_3_甲酰 基)-4-(2_氯-4-甲基苯基)哌嗪(化合物编号4)；1-(1，4_ 二氢噻吩并[3’，2’5，6]噻喃并[4，3_c]吡唑_3_甲酰基)_4_(4_氯苯 基)哌嗪(化合物编号5)；1-(1，4_ 二氢噻吩并[3’，2’ 5，6]噻喃并[4，3_c]吡唑 _3_ 甲酰基)-4_[(4_ 氯苯基)苯基]甲基)哌嗪(化合物编号6)；1-(1，4_ 二氢噻吩并[3’，2’ 5，6]噻喃并[4，3_c]卩比唑_3_甲酰 基)-4-(3_氯-4-甲基苯基)哌嗪(化合物编号7)；1-(1，4_ 二氢噻吩并[3，，2，5，6]噻喃并[4，3_c]吡唑_3_甲酰基)_4_( 二苯甲 基)哌嗪(化合物编号8)；1-(1，4_ 二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并[4，3_c]吡唑_3_甲酰基)-4_(4_甲基 苯基)哌嗪(化合物编号9)；1-(1，4_ 二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并[4，3_c]吡唑_3_甲酰基)-4_(3_氯苯 基)哌嗪(化合物编号10)；1-(1，4_ 二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并[4，3_c]吡唑_3_甲酰基)_4_(3_三氟 甲氧基苯基)哌嗪(化合物编号11)；1-(1，4_ 二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并[4，3_c]吡唑_3_甲酰基)-4_(2_氯苯 基)哌嗪(化合物编号12)；1-(1，4_ 二氢噻吩并[3’，2’ 5，6]噻喃并[4，3_c]卩比唑_3_甲酰 基)-4-(3_氯-4-氟苯基)哌嗪(化合物编号13)；1-(1，4_ 二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并[4，3_c]吡唑_3_甲酰基)-4_(2_甲基 苯基)哌嗪(化合物编号14)；1-(1，4_ 二氢噻吩并[3，，2，5，6]噻喃并[4，3_c]吡唑_3_甲酰基)_4_(4_乙氧 基苯基)哌嗪(化合物编号15)；1-(1，4_ 二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并[4，3_c]吡唑_3_甲酰基)_4_甲基哌 嗪(化合物编号16)；N-[2_( 二乙基氨基)乙基]-1，4_ 二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并[4，3_c]吡 唑-3-甲酰胺(化合物编号17)；1-(1，4_ 二氢噻吩并[3，，2，5，6]噻喃并[4，3_c]吡唑 _3_ 甲酰基)_4_(2，5_ 二 甲基苯基)哌嗪(化合物编号18)；1-(1，4_ 二氢噻吩并[3，，2，5，6]噻喃并[4，3_c]吡唑 _3_ 甲酰基)_4_(2，3_ 二 甲基苯基)哌嗪(化合物编号19)；1-(1，4_ 二氢噻吩并[3，，2，5，6]噻喃并[4，3_c]吡唑 _3_ 甲酰基)_4_(2，6_ 二 甲基苯基)哌嗪(化合物编号20)；1-(1，4_ 二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并[4，3_c]吡唑_3_甲酰基)_4_(4_三氟 甲氧基苯基)哌嗪(化合物编号21)；1-(1，4_ 二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并[4，3_c]吡唑_3_甲酰基)_4_(4_三氟 甲基苯基)哌嗪(化合物编号22)；1-(1，4_ 二氢噻吩并[3，，2，5，6]噻喃并[4，3_c]吡唑_3_甲酰基)_4_(1_苯乙 基)哌嗪(化合物编号23)；N-叔丁基-1，4-二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并[4，3_c]吡唑_3_甲酰胺(化 合物编号24)；1-(1，4_ 二氢噻吩并[3’，2’ 5，6]噻喃并[4，3_c]吡唑_3_甲酰基)_4_叔丁基 哌嗪(化合物编号25)；
N-(l-苯乙基)-1，4_ 二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并[4，3_c]吡唑_3_甲酰胺 (化合物编号26)；1-(1，4_ 二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并[4，3_c]吡唑_3_甲酰基)-4_(3_甲基 苯基)哌嗪(化合物编号27)；1-(1，4_ 二氢噻吩并[3’，2’:5，6]噻喃并[4，3_c]吡唑 _3_ 甲酰基)_4_(1_ 萘基) 哌嗪(化合物编号28)；1-(1，4_ 二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并[4，3_c]吡唑_3_甲酰基)_4_环丙基 哌嗪(化合物编号29)；1-(1，4_ 二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并[4，3_c]吡唑_3_甲酰基)_4_苯甲基 哌嗪(化合物编号30)；1-(1，4_ 二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并[4，3_c]吡唑_3_甲酰基)_4_(4_氟苯 基)哌嗪(化合物编号31)；1-(1，4_ 二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并[4，3_c]吡唑_3_甲酰基)-4_(3_氟苯 基)哌嗪(化合物编号32)；N-[2_(4-吗啉基)乙基]-1，4_ 二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并[4，3_c]吡 唑-3-甲酰胺(化合物编号33)；1-(1，4_ 二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并[4，3_c]吡唑_3_甲酰基)-4_(2_氟苯 基)哌嗪(化合物编号34)；1-(1，4_ 二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并[4，3_c]吡唑_3_甲酰基)_4_正己基 哌嗪(化合物编号35)； 1-(6_乙酰基-1，4_ 二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并 基)-4-苯基哌嗪(化合物编号36)；1-(6_乙酰基-1，4_ 二氢噻吩并[3，，2，5，6]噻喃并 基)-4-(4_甲氧基苯基)哌嗪(化合物编号37)；1-(6_乙酰基-1，4_ 二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并 基)-4-(3_氯-2-甲基苯基)哌嗪(化合物编号38)；1-(6_乙酰基-1，4_ 二氢噻吩并[3，，2，5，6]噻喃并 基)-4- (2-氯-4-甲基苯基)哌嗪(化合物编号39)；1-(6_乙酰基-1，4_ 二氢噻吩并[3，，2，5，6]噻喃并 基)-4- (4-氯苯基)哌嗪(化合物编号40)；1-(6_乙酰基-1，4_ 二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并 基)-4-((4-氯苯基)苯基)甲基)哌嗪(化合物编号41)；1-(6_乙酰基-1，4_ 二氢噻吩并[3，，2，5，6]噻喃并 基)-4- (3-氯-4-甲基苯基)哌嗪(化合物编号42)；1-(6_乙酰基-1，4_ 二氢噻吩并[3，，2，5，6]噻喃并 基)-4-二苯甲基哌嗪(化合物编号43)；1-(6_ 乙酰基-1，4_ 二氢噻吩并[3，，2’ 基)-4-(4_甲基苯基)哌嗪(化合物编号44)；1-(6-乙酰基-1，4_ 二氢噻吩并[3，，2’5,6]噻喃并 5,6]噻喃并
3-c 3-c 3-c 3-c 3-c 3-c 3-c 3-c 3-c 3-c
吡唑-3-甲酰 吡唑-3-甲酰 吡唑-3-甲酰 吡唑-3-甲酰 吡唑-3-甲酰 吡唑-3-甲酰 吡唑-3-甲酰 吡唑-3-甲酰 吡唑-3-甲酰 吡唑-3-甲酰
9基)-4- (3-氯苯基)哌嗪(化合物编号45)；1-(6_乙酰基-1，4_ 二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并[4，3_c]吡唑_3_甲酰 基)-4-(3-三氟甲氧基苯基)哌嗪(化合物编号46)；1-(6_乙酰基-1，4_ 二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并[4，3_c]吡唑_3_甲酰 基)-4- (2-氯苯基)哌嗪(化合物编号47)；1-(6_乙酰基-1，4_ 二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并[4，3_c]吡唑_3_甲酰 基)-4- (3-氯-4-氟苯基)哌嗪(化合物编号48)；1-(6_乙酰基-1，4_ 二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并[4，3_c]吡唑_3_甲酰 基)-4-(2_甲基苯基)哌嗪(化合物编号49)；1-(6_乙酰基-1，4_ 二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并[4，3_c]吡唑_3_甲酰 基)-4-(4_乙氧基苯基)哌嗪(化合物编号50)；1-(6_乙酰基-1，4_ 二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并[4，3_c]吡唑_3_甲酰 基)-4_甲基哌嗪(化合物编号51)；N-[2_( 二乙基氨基)乙基]-6-乙酰基-1，4_ 二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并[4， 3-c]吡唑-3-甲酰胺(化合物编号52)；1-(6_乙酰基-1，4_ 二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并[4, 3-c]吡唑_3_甲酰 基)-4-(2，5-二甲基苯基)哌嗪(化合物编号53)；1-(6_乙酰基-1，4_ 二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并[4, 3-c]吡唑_3_甲酰 基)-4-(2，3-二甲基苯基)哌嗪(化合物编号54)；1-(6_乙酰基-1，4_ 二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并[4, 3-c]吡唑_3_甲酰 基)-4-(2，6-二甲基苯基)哌嗪(化合物编号55)；1-(6_乙酰基-1，4_ 二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并[4, 3-c]吡唑_3_甲酰 基)-4-(4-三氟甲氧基苯基)哌嗪(化合物编号56)；1-(6_乙酰基-1，4_ 二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并[4, 3-c]吡唑_3_甲酰 基)-4-(4-三氟甲基苯基)哌嗪(化合物编号57)；1-(6_乙酰基-1，4_ 二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并[4, 3-c]吡唑_3_甲酰 基)-4-(1_苯乙基)哌嗪(化合物编号58)；N-叔丁基-6-乙酰基-1，4-二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并[4, 3-c]吡唑_3_甲 酰胺(化合物编号59)；1-(6_乙酰基-1，4_ 二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并[4, 3-c]吡唑_3_甲酰 基)-4-叔丁基哌嗪(化合物编号60)；N-(l-苯乙基)_6_乙酰基-1，4_ 二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并[4, 3-c]吡 唑-3-甲酰胺(化合物编号61)；1-(6_乙酰基-1，4_ 二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并[4, 3-c]吡唑_3_甲酰 基)-4-(3_甲基苯基)哌嗪(化合物编号62)；1-(6_乙酰基-1，4_ 二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并[4, 3-c]吡唑_3_甲酰 基)-4-(1_萘基)哌嗪(化合物编号63)；1-(6_乙酰基-1，4_ 二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并[4, 3-c]吡唑_3_甲酰 基)-4-环丙基哌嗪(化合物编号64)；
l-(6-乙酰基-1，4_ 二氢噻吩并[3，，2 基)-4-苯甲基哌嗪(化合物编号65)；1-(6_ 乙酰基-1，4_ 二氢噻吩并[3，，2 基)-4- (4-氟苯基)哌嗪(化合物编号66)；1-(6_ 乙酰基-1，4_ 二氢噻吩并[3，，2 基)-4- (3-氟苯基)哌嗪(化合物编号67)；N- [2- (4-吗啉基)乙基]-6-乙酰基_1， 3-c]吡唑-3-甲酰胺(化合物编号68)；1-(6_ 乙酰基-1，4_ 二氢噻吩并[3，，2 基)-4- (2-氟苯基)哌嗪(化合物编号69)；1-(6_ 乙酰基-1，4_ 二氢噻吩并[3，，2 基)-4_正己基哌嗪(化合物编号70)。定义在整篇说明书中，以下术语具有指定的含义。本发明内容中使用的术语“一”、“ 一个”或“这个”及类似形式尤其是在所附权利 要求书中)应解释为包括单数和复数，除非此处另有说明或者显然与上下文相矛盾。在所附权利要求书和本发明的说明书中，除非上下文需要或者表达言语或必要含 意的原因，术语“包括”或其变化形式“包含”或“含有”用作内含性含意，即用于表明存在所 述的特征，但也不排除在本发明的各种实施方式中存在或增加其他特征。本文所用术语“化合物”是指本文所述通式涵盖的任何化合物。本文所述化合物可 含有一个或多个双键，因而可能存在立体异构体。因此，本文所述化学结构涵盖了所示化合 物所可能的立体异构体，包括立体异构纯化形式(例如，几何异构纯)和立体异构混合物。 化合物也可以多种互变异构形式存在，包括烯醇式、酮式及其混合物。因此，本文所示化学 结构涵盖了所示混合物所有可能的互变异构形式。化合物也可具有一个或多个不对称中心 或平面。含有不对称取代原子的本发明化合物可以旋光活性或外消旋形式分离。众所周知 如何制备光学活性形式，例如同构拆分外消旋形式(外消旋化合物)，通过不对称合成，或 者通过从光学起始物质合成。外消旋化合物的分离可通过常规方法完成，例如在拆分剂的 存在下结晶，或例如采用手型HPLC柱的色谱法。化合物可以非溶剂合物和溶剂合物形式存 在，包括水合形式。化合物一般可水合或溶剂化。某些化合物可以多种结晶或无定形形式 存在。通常，所有物理形式在本文所考虑的应用中是等效的，包括在本发明的范围。在现实 部分化合物结构时，短横(“_”)表示所述结构部分与分子其余部分的连接点。术语“前药”是指体内活性增强的化合物。本发明化合物也可以以前药形式存 在，如《药物和前药代谢过程的水解化学、生物化学与酶学》(Hydrolysis in Drugand Prodrug Metabolism :Chemistry, and Enzymology)(Testa, Bernard 禾口 Mayer，Joachim. ffiley-VHCA, Zurich, Switzerland, 2003)所述。本文所述化合物的前药是在生理学条件下 容易发生化学反应形成本发明化合物的化合物的结构修饰形式。此外，前药可在活体环境 中通过化学或生物化学方法转化为本发明化合物。例如，如果置于合适的酶或化学试剂的 经皮贴片储库中，前药可转化为化合物。某些情况下，前药常常是有用的，因为它们比本发 明化合物或母体药物更容易给药。例如，前药可以通过口服给药被生物利用，而母体化合物
，5,6]噻喃并[4, 3-c]吡唑-3-甲酰 ’ 5,6]噻喃并[4, 3-c]吡唑-3-甲酰 ’ 5,6]噻喃并[4, 3-c]吡唑-3-甲酰 4-二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并[4， ’ 5,6]噻喃并[4, 3-c]吡唑-3-甲酰 ，5,6]噻喃并[4, 3-c]吡唑-3-甲酰
11不行。前药在药物组合物中的溶解度也比母体要高。许多前药衍生物是本领域已知的，例 如依赖于前药的水解断裂或氧化活化的前药衍生物。前药的非限制性例子可以是以酯形式 (“前药”)给予后经水解代谢形成羧酸(活性个体)的化合物。其它例子包括化合物的肽 基衍生物。本发明化合物可以药学上可接受的盐形式存在。本发明包括盐形式的上述化合 物，尤其是酸加成盐。合适的盐包括与有机和无机酸形成的盐。这些酸加成盐通常是药学 上可接受的。然而，非药学上可接受的盐可用于所述化合物的制备与纯化。也可形成碱加 成盐，也是药学上可接受的。对于盐的制备与选择方面的更全面讨论参见《药物盐性质、 选择与用途〉〉(PhamaceuticalSalts Properties, Selection, and use) (Stahl,P. Heinrch. ffiley-VHCA, Zurich, Switzerland, 2002)。本文所用术语“药学上可接受的盐”或“治疗上可接受的盐”表示本文定义本发明 化合物的水溶性或油溶性、或水可分散或油可分散且治疗上可接受的盐或两性离子形式。 这种盐可在该化合物的最终分离和纯化期间制备，或者独立地通过游离碱形式的合适化合 物与合适的酸反应来制备。代表性的酸加成盐包括醋酸盐、己二酸盐、藻酸盐、1-抗坏血 酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、本磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸 盐、二葡糖酸盐、甲酸盐、反丁烯二酸盐、龙胆酸盐、戊二酸盐、甘油磷酸盐、乙醇酸盐、半硫 酸盐、庚酸盐、己酸盐、马尿酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐(羟乙基 磺酸盐)、乳酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、DL-扁桃酸盐、1，3，5-三甲基苯磺酸盐、甲磺酸盐、 萘磺酸盐、烟酸盐、2-萘磺酸盐、草酸盐、扑酸盐(pamoate)、果胶酸盐(pectinate)、过硫酸 盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、焦谷氨酸盐、琥珀酸盐、磺酸盐、酒 石酸盐、L-酒石酸盐、三氯乙酸盐、三氟乙酸盐、膦酸盐、谷氨酸盐、碳酸氢盐、对甲苯磺酸盐 和十一酸盐。并且，本发明化合物中的碱性基团可以用以下基团季铵化甲基、乙基、丙基、 丁基的氯化物、溴化物、和碘化物；硫酸二甲酯、硫酸二乙酯、硫酸二丁酯和硫酸二戊酯；癸 基、月桂基、十四烷基和留醇基的氯化物、溴化物和碘化物；苄基和苯乙基的溴化物。可用于 形成治疗上可接受的加成盐的酸的例子包括无机酸、例如盐酸、氢溴酸、硫酸和磷酸；有机 酸，如草酸、马来酸、琥珀酸和柠檬酸。盐也可以通过该化合物与碱金属或碱土金属离子配 位来形成。因此，本发明把化合物的钠盐、钾盐、镁盐和钙盐等考虑在内。在一个实施方式中，“治疗”任意疾病或病症是指缓解疾病或病症(即阻止或降低 疾病或其至少一种临床症状的发展)。在另一个实施方式中，“治疗”是指改善至少一种患 者可能难以辨别的身体参数。在又一个实施方式中，“治疗”是指在物理方面(例如稳定可 辨症状)，生理学方面(例如，稳定身体参数)或两方面上一直疾病或病症。在又一个实施 方式，“治疗”是指延迟疾病或病症的发生。如本文所用，通过给予特定化合物或药物组合物 来缓解具体病症的症状是指归功于组合物或给予组合物有关的永久性或暂时性、持久或短 暂的任意减轻。“治疗有效量”是指对需要的对象给药后，在治疗对象中产生治疗效果(例如治疗、 控制、缓解、防止、延迟疾病、病症或其状况或症状的发生、或降低其发生的可能)的化合物 用量。治疗效果可以是客观(即可通过某些测试或标记物测定)或主观(即对象给出指示 或感光效果)。“治疗有效量”将随化合物。给药模式、疾病及其严重性以及待治疗对象的 年龄、体重等因素而变化。
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药物组合物根据另一个实施方式，本发明提供了包含通式(I)的化合物或其药学上可接受的 盐，以及如本文所述药学上可接受的稀释剂、载体或赋形剂的药物组合物。虽然可单独或联合、直接而不是通过制剂方式给予药学有效量的通式(I)的化合 物，但通常的做法是给予包含药学上可接受的赋形剂与活性成分的药物剂型形式的化合 物。通式(I)的化合物可以在含常规无毒性药学上可接受的载体、辅助试剂和运载体的计 量单位制剂中经口服、胃肠外、或通过吸入给予。尤其优选的是片剂、胶囊、酏剂、糖浆、锭 剂、含锭等形式的口服。本文所用术语胃肠外包括皮下注射、真皮内、血管内(例如静脉 内)、肌肉、脊柱鞘内注射等注射或输注方式。此外，还提供了包含通式(I)与药学上可接受 的载体的药物制剂。一种或多种通式(I)的化合物可与一种或多种无毒性药学上可接受的 载体和/或稀释剂和/或辅助试剂共存，需要时也可以包含其它活性成分。含通式(I)的 化合物的药物组合物可以是合适的口服剂型，例如片剂、含锭、锭剂、水性或油性混悬液、可 分散的粉末或颗粒、乳剂、硬胶囊或软胶囊、或糖浆剂或酏剂。口服应用的组合物可根据本领域已知的任何药物组合物制备方法来制备，这些组 合物可包含一种或多种选自下组的试剂甜味剂、矫味剂、着色剂和防腐剂，以提供药学上 可口的制剂。片剂含有活性成分以及适用于片剂制备的无毒性药学上可接受的赋形剂。这 些赋形剂可以是惰性稀释剂，例如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；造粒剂或崩解 剂，例如玉米淀粉或海藻酸；粘合剂，例如淀粉、明胶或阿拉伯胶；润滑剂，例如硬脂酸镁、 硬脂酸或滑石粉。片剂可以未包衣，或者通过已知技术包衣以在胃肠道中的延迟崩解和吸 收，从而在较长的时间段内提供持续作用。例如，可采用时间延迟物质如单硬脂酸甘油酯或 二硬脂酸甘油酯。口服使用的制剂也可以是硬明胶胶囊，其中，活性成分与惰性固体稀释剂混合，例 如碳酸钙、磷酸钙或高岭土 或是软明胶胶囊，其中，活性成分于水或油介质(例如花生油、 液状石蜡或橄榄油)混合。水性混悬剂包含活性成分以及使用于制备水性混悬剂的赋形剂。这些赋形剂可以 是助悬剂，例如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷 酮、西黄蓍胶和阿拉伯胶；分散剂或润湿剂，例如天然来源的磷脂(例如卵磷脂)、或烯烃氧 化物与脂肪酸的缩合产物(如聚氧乙烯硬脂酸酯)、或环氧乙烷与长链脂肪醇的缩合产物 (如十七乙氧基十六醇)、或环氧乙烷与脂肪酸和己糖醇衍生的部分酯的缩合产物(如聚 氧乙烯山梨糖醇单油酸酯)、或环氧乙烷与脂肪酸和己糖醇酸酐衍生的部分酯的缩合产物 (如聚乙烯去水山梨糖醇单油酸酯)。水性混悬剂还可包含一种或多种着色剂；一种或多种 芳香剂(flavoring agent)；以及一种或多种甜味剂如蔗糖或糖精。油性混悬剂可以通过将活性成分混悬在植物油(例如，花生油、橄榄油、芝麻油或 椰子油)或矿物油(例如液状石蜡)中来配制。油性混悬剂可包含增稠剂，例如蜂蜡、固体 石蜡或十六醇。甜味剂如上所述。如加入芳香剂以形成可口的口服制剂。这些组合物可通 过加入抗氧化剂和抗坏血酸来防腐。适用于加水形成水性混悬剂的可分散的粉末或颗粒提供了活性成分以及分散剂 或润湿剂、助悬剂、一种或多种防腐剂。合适的分散剂或润湿剂及助悬剂的例子如上所述。 也可存在其它赋形剂，例如甜味剂、芳香剂和着色剂。
13
本发明药物组合物还可以是水包油乳剂的形式。油相可以是植物油(例如橄榄油 或玉米油)，或者矿物油(例如液体石蜡)或它们的混合物。合适的乳化剂可以是天然来源 的树胶(例如阿拉伯胶或西黄蓍胶)，天然来源的磷脂(例如大豆磷脂、卵磷脂)，脂肪酸和 己糖醇，酸酐衍生的酯或部分酯(例如去水山梨糖醇单油酸酯)，所述部分酯与环氧乙烷的 缩合产物(例如聚氧乙烯去水山梨糖醇单油酸酯单甘油酯)。这些乳剂还可包含甜味剂和 芳香剂。可用的甜味剂(例如甘油、丙二醇、山梨糖醇和蔗糖)来配置糖浆剂和酏剂。这些 制剂还可包含粘滑剂、防腐剂、矫味剂和着色剂。药物组合物可以无菌注射用水性或油脂性 混悬剂的形式。所述混悬剂可采用上述合适的分散剂或润湿剂及助悬剂根据本领域已知的 方法进行配制。该无菌注射用制剂也可以是在无毒性胃肠外可接受的稀释剂或溶剂(例如 1，3_ 二丁醇)中配制的无菌注射用溶剂或混悬剂。采用的可接受的运载体或溶剂包括水， 林格溶液和等渗氯化钠溶液。此外，无菌非挥发油也是常用的溶剂或混悬介质。为此目的， 可采用任何温和的非挥发性油，包括合成的单甘油酯和双甘油酯。此外，脂肪酸如油酸也可 用于制备注射剂。通式(I)的化合物还可以栓剂的形式给予，例如用于直肠给药。这些组合物可通 过以下方式制备将药物与合适的非刺激性赋形剂混合，所述赋形剂在常温下固态、但在直 肠温度下液态，因而在直肠中溶化以释放药物。这些物质是可可豆酯和聚乙二醇。通式(I)的化合物可以在无菌介质中胃肠外给予。根据所用运载体和使用浓度， 药物可混悬或溶解在运载体。有益地，辅助试剂如局部麻醉剂、防腐剂和缓冲剂也可溶解在 运载体中。通过制剂形式、给药方式、使用目的以及待治疗患者的年龄、体重和症状来决定合 适剂量，剂量不是恒定的。在本发明的另一个实施方式中，提供了本发明化合物的制备方法。代表性的本发 明化合物的合成方法在下面的非限制性方案中提及。起始物质可以商业购得，或者通过本 领域技术人员公知文献方法来制备。应理解，具体合成方法的选择取决于最终化合物所需 的取代基的性质。合成步骤的顺序可以改变，可使用条件和制备过程的已知变量来制备这 些化合物。本文所用的术语“变性性脑病”应该包括不明原因的认知障碍、痴呆和早老性痴呆。本文所用的术语“心血管疾病”应该包括血脂水平升高、冠状动脉粥样硬化和冠心病。本文所用的术语“脑血管疾病”应该包括局部脑血流异常和局部缺血性脑损伤。本文所用的术语“孕激素拮抗剂”应该包括米非司酮(RU-486) ,J-867(Jenapharm/ [AP Pharmaceuticals)、J-956(Jenapharm/TAP Pharmaceuticals)、0RG-31710(Organon)、 0RG-32638 (Organon)、0RG-31806 (Organon)、奥那司酮(ZK98299)和 PRA248 (ffyeth)。本文所用的术语“联合疗法”是指通过给予一种或多种式I化合物以及孕激素或 孕激素拮抗剂而治疗有需要的患者，其中所述式I化合物和孕激素和孕激素拮抗剂通过适 合的方式同时、序贯、独立给予或者在一种药物制剂中给予。在所述式I化合物和孕激素和 孕激素拮抗剂以不同的剂型给予情况下，每种化合物每天的给药次数可以相同或不同。所
14述式I化合物和孕激素或孕激素拮抗剂可以通过相同或不同的给药途径给药。合适给药方 法的实例包括但不限于口服、静脉内(iv)、肌内(im)、皮下(sc)、透皮或直肠。可以将化合 物直接给予到神经系统，包括但不限于脑内、室内、脑室内、鞘内、脑池内、脊柱内和/或脊 柱周围给药途径，通过带有或不带有泵装置的颅内或脊柱内针头和/或导管进行给药。可 以按照同时或交替方案，同时或在不同时间，在疗程期间，在不同或同一剂型，给予所述式I 化合物和孕激素或孕激素拮抗剂。
因此，本发明通式(I)的化合物可以通过以下方案制备。 在本发明的一个实施方式中，通式(I)的化合物通过方案1制备。 方案1
(VIXD如方案1所示，在三乙胺存在下，化合物I与丙烯酸反应，生成化合物II。化合物 II进一步与草酰氯反应并在四氯化锡催化下生成化合物III。III与草酸二甲酯在醇钠的 催化下发生缩合反应，生成化合物IV。醋酸为溶剂，化合物IV与水合胼反应生成化合物V。 V经水解，生成化合物VI。VI再与合适的胺反应生成通式VII化合物。通式VII化合物与乙酸酐反应生成乙酰化化合物VIII。本发明化合物可用于治疗和/或预防与雌激素缺乏相关的疾病(包括但不限于 热潮红、阴道干燥、骨量减少、骨质疏松症、高血脂症、认知功能丧失、变性性脑病、心血管疾病、脑血管疾病)；可用于治疗激素敏感性癌症和增生(在包括女性的乳腺、子宫内膜和子 宫颈以及男性的前列腺在内的组织中)；可用于治疗和预防子宫内膜异位、子宫肌瘤和骨 关节炎；以及可以单独或与孕激素或孕激素拮抗剂联用作为避孕药。本发明化合物的具体剂量和具体剂型应依具体情况决定。确切剂量和给药途径最 好由主治医师决定。本发明化合物的典型日剂量应包括0. 001mg-800mg/天的非毒性剂量。 优选日剂量通常约为0. 001mg-60mg/天。该剂量可根据需要一次给药或分成两次或三次分 开给药。
具体实施例方式在下面的实施例中详细描述了本发明，这些实施例仅仅是示例性的，因而不应解 释为本发明的范围。本发明仅受所附权利要求书的限制。制备实施例实施例1 1-(1，4_ 二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并[4，3_c]吡唑_3_甲酰基)_4_苯基哌 嗪(化合物编号1)(化合物编号1)步骤A :3_(噻吩-2-硫基)丙酸(II)的制备向100mL圆底烧瓶中加入4. 64g 2_巯基噻吩(I)、40mL四氢呋喃、搅拌下滴加 llmL三乙胺，反应液呈橙色混浊。继续加入3. 3mL丙烯酸，反应液由橙色混浊变为澄清。加 热回流12h，反应液由橙色变为黄色，再由黄色变为墨绿色。反应完毕，蒸去四氢呋喃。冷 却，加入乙酸乙酯、水(2 1)40!^，18%盐酸调至？11=2，取有机层，水层用乙酸乙酯萃取 (50mLX3)。合并有机层。用无水硫酸镁干燥2小时。抽滤，取滤液蒸去溶剂。冷却，析出棕 色固体。加入100mL丙酮重结晶，得白色针状固体化合物(II)，产量5. 10克，收率67. 1%.步骤B 噻吩并[2，3_b]噻喃-4-酮(III)的制备向100mL圆底烧瓶中加入3. 76g 3-(噻吩-2-硫基)丙酸(II)、20mL 二氯甲烷、5 滴DMF，氮气保护下，滴加草酰氯的二氯甲烷溶液(草酰氯2. 2mL，二氯甲烷16mL)反应液为 黄色澄清。室温搅拌lh。将反应液用冰盐浴冷却至-10°C，滴加四氯化锡的二氯甲烷溶液 (四氯化锡1. 15mL，二氯甲烷10mL)溶液。滴完后，0°C下搅拌0. 5h，反应液呈黄色混浊。加 入20mL水后，反应液呈黄色澄清。分液，取有机相。放置后溶液由黄色变为粉红色。水相 用二氯甲烷萃取两次(20mLX2)。合并有机相。有机相依次用碳酸钠饱和溶液(20mLX2)、 水(20mLX2)、氯化钠饱和溶液(20mLXl)洗涤。无水硫酸镁干燥两个小时。液体呈粉红 色。抽滤，蒸去溶剂，冷却得粗品，粗品收率>99%。丙酮重结晶，得白色针状固体(III)， 产量 2. 19g，产率 64. 41%。步骤C :4_氧代噻吩并[2，3_b]噻喃-3-羧酸甲酯(IV)的制备甲醇钠的制备将0.7g钠切成钠屑，加入20mL无水甲醇，回流至钠固体消失，旋蒸 蒸去甲醇，得白色固体。向反应瓶中加入2.36g草酸二甲酯、20mL甲苯、噻吩并[2，3_b]噻 喃-4-酮(III)1.70g的甲苯溶液。反应液呈桔黄色。室温搅拌24h，反应液变为黄色混浊。 将反应液倾入100mL冰水中，分液取水层。用20mL无水乙醚洗涤水层中有机相，用18%稀 盐酸酸化水层，得黄色固体。抽滤得粗品。丙酮重结晶得黄色针状晶体(IV) 1.0克。收率 43. 86%。
16
步骤D :1，4_ 二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并[4，3_c]吡唑_3_羧酸甲酯(V)的 制备100mL圆底烧瓶中加入0. 5g 4_氧代噻吩并[2，3_b]噻喃_3_羧酸甲酯(IV)，加 入10mL冰醋酸，搅拌下加入2mL水合胼，加热回流10h，将反应瓶倒入200mL冰水中搅拌，出 现白色固体，抽滤得粗品。加入丙酮重结晶，得白色固体(V)0.64g。收率为63.2%。步骤E 1- (1，4- 二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并[4，3_c]吡唑_3_甲酰基)_4_苯 基哌嗪(化合物编号1)的制备在100mL圆底烧瓶中加入0. 5g 1，4_ 二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并[4，3_c]吡 唑-3-羧酸甲酯(V)，加入10mL甲醇，搅拌下加入0.32g 1_苯基哌嗪，加热回流12h，出现 白色固体，抽滤得粗品。用丙酮重结晶，得白色固体(VI)0.50g。收率为67.0%。实施例2:1-(6_乙酰基-1，4_ 二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并[4，3_c]吡唑_3_甲酰 基)-4-苯基哌嗪(化合物编号36)步骤F :1-(6_乙酰基-1，4_ 二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并[4，3_c]吡唑_3_甲 酰基)-4-苯基哌嗪(化合物编号36)的制备。在含有0. 50g 1-(1，4_ 二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并[4，3_c]吡唑-3-甲酰 基)-4-苯基哌嗪(化合物编号1)的二氯甲烷溶液中，加入0. 14g醋酸酐。室温搅拌12h， 出现黄色沉淀，抽滤得粗品。用丙酮重结晶，得黄色固体(化合物36)0. 34g.收率61.5%采用实施例1制备了 1-35号化合物，采用实施例2制备了 36-70号化合物。下表 (表1)显示了本发明化合物的表征数据。表1
17 药理实施例实施例3:雌激素受体a快速板测定本测定检测放射性标记雌激素与雌激素受体的结合。该测定是在 BioMek2000 (Beckman)上进行的。板在闪烁计数器(Packard Topcount)上读数，计数减 少说明化合物与所述受体结合。所述测定按照Allan等，Anal. Biochem(1999), 275 (2)， 243-247介绍的方法进行。第一天，向与山羊抗小鼠抗体(NEN Life Sciences)交联的96孔FlashPlate Plus板的各孔中加入100 u L含有5mM 二硫苏糖醇(DTT，Panvera), 0. 5u g小鼠抗刺激素 受体单克隆抗体(SRA-1010，Stressgen)和50ng纯化人雌激素受体a (Panvera)的雌激素 筛选缓冲液(ESB，Panvera)。密封该板并于4°C保温过夜。第二天，各孔用200 iiL PBS pH7. 2在室温下洗涤三次，然后向各孔中加入98 y L 放射性标记雌激素(0. 5nM，对于每批120Ci/mmol相当于6nCi，Amersham)，用ESB和5mM 二硫苏糖醇(DTT)稀释。然后向各孔中加入2.5 iiL用30% (v/v) 二甲亚砜/50mM HEPES pH7. 5稀释的试验化合物。通过吸打将各孔混合三次，密封该板并在室温下保温1小时。然 后在Topcount闪烁计数器(Packard)中，对各孔计数1分钟。实施例4:雌激素受体3荧光偏振测定本测定检测雌激素荧光类似物(Fluormone ES2，Panvera)与雌激素受体的结合。 板在可以设定为偏振模式的荧光计数器(Packard TopCount)上读数。相对于溶媒对照，荧 光减少说明化合物与所述受体结合。至关重要的是，在整个过程中，避免将气泡引入96孔板各孔中的反应中。(反应表 面的气泡破坏光通量，从而影响偏振读数)。然而，在将反应组分加入到各孔后充分混合也 是至关重要的。在冰上制备测定缓冲液(Panvera)、10nM DTT和40nM ES2的2X标准混合物。在 冰上也制备测定缓冲液(Panvera)和20nM hER-0 (Panvera)和40nM ES2的2X反应混合 物。用30% (v/v) 二甲亚砜/50mM HEPES pH 7. 5制备试验化合物的稀释液。此时，所 述稀释液为40X所需终浓度。然后向各孔中加入50 PL标准混合物。向所有孔中加入48 PL反应混合物。向适 当孔中加入2.5 yL所述化合物稀释液。用手工吸移管混合所述反应混合物，将一卷铝箔粘 性面覆盖在该板上，然后将该板在室温下保温1小时。然后在LjL Analyst上，读出激发波长265nm和发射波长538nm下该板各孔的读数。 按照上述方法，测试本发明代表性化合物与雌激素受体a和雌激素受体3的结 合，结果示于表2:
0164]表20165]编号雌激素受体a (yM)雌激素受体0166]10.3820.0040167]20.0180.2720168]33.2752.1670169]41.0023.8980170]50.0010.2480171]60.1730.0730172]70.0040.0020173]81.8203.8920174]90.0540.0830175]100.8731.8650176]112.8760.0080177]120.0180.6540178]13> 10K> 10K0179]140.6720.8750180]153.8726.9840181]160.0535.3450182]170.8434.2850183]180.0050.0340184]191.0980.0020185]201.0842.7620186]214.3820.0980187]223.8923.6030188]230.0030.0060189]245.8922.9040190]253.2242.5310191]260.4320.0340192]270.0040.3470193]285.8932.8910194]29> 10K2.4670195]302.4730.0540196]313.8710.0060197]320.6814.8710198]333.8220.0040199]340.0120.064
22
352. 366
36> 10K
373. 225
380. 003
390. 002
400. 0010. 007
410. 1150. 223
420. 0060. 007
430. 0140. 016
440. 1460. 144
450. 3240. 254
460. 2440. 325
471. 3925. 981
485. 3426. 932
490. 0020. 005
500. 0040. 005
510. 0240. 045
520. 0520. 068
530. 0330. 081
543. 9426. 932
551. 4523. 759
562. 4853. 975
570. 0020. 005
581. 0041. 034
595. 3424. 932
600. 0040. 006
612. 4324. 953
625. 982> 10K
630. 5080. 604
641. 0060. 006
650. 6730. 846
663. 8686. 734
679. 5473. 244
680. 4565. 876
690. 0060. 554
700. 4740. 470
1. 899 > 10K 6. 351 0. 005 0. 004
MCF-7细胞增殖测定
按照 Welshons 等(Breast Cancet Res. Treat.，1987，10 (2)，169-75)介绍的方法，进行本项测定。将MCF-7细胞维持在RPMI 1640无酚红培养基(Gibco)中，所述培养基含有10 % FBS(Hycl0ne)、补充牛胰岛素和非必需氨基酸(Sigma)。所述细胞首先用4-羟基他莫西芬 (10_8M)处理，然后让其于37°C静置24小时。在与他莫西芬进行该保温后，所述细胞用不同 浓度的化合物进行处理。向所述培养基中加入不同浓度的激动剂模式的待测化合物。同样制备拮抗剂模式 的待处理化合物，也向所述培养基中加入lOnM 170-雌二醇。将所述细胞于37°C保温24 小时。保温后，向所述培养基中加入0. 1 u Ci14C-胸苷(56mCi/mmol，Amersham)，将所述细 胞再于37°C保温24小时。所述细胞然后用Hank氏缓冲盐溶液(HBSS) (Gibco)洗涤两次， 然后用闪烁计数器进行计数。相对于溶媒对照细胞，用所述化合物处理的细胞14C-胸苷增 加报告为细胞增殖增加百分率。按照上述方法测定本发明代表性化合物，结果示于表3
表3
编号激动剂(nM)拮抗剂(nM)
12400> 10K
2> 10K> 10K
3> 10K> 10K
487> 10K
5> 10K6. 98
6> 10K543
7432649
8> 10K540
9> 10K3690
10> 10K493
11> 10K573
12> 10K9900
13> 10K5710
14> 10K565
15> 10K2900
16> 10K4900
174574720
18> 10K> 10K
19> loK> 10K
20> 10K440
21> 10K43
22> 10K780
23> 10K3200
24> 10K879
2558500
65> 10K> 10K
66NA490
67> 10K561
68> 10K1600
69> 10K> 10K
70> 10K> 10K
NA表示在试验浓度下没有检测到活性。
实施例6
人子宫内膜Ishikawa细胞的碱性磷酸酶测定
按照 Albert 等，CancerRes, (9910) ,50(11)定。将Ishikawa细胞维持在补充10%小牛血清(Hyclone)的DMEM/F12(1 1)无 酚红培养基(Gibco)中。测试前24小时，将培养基更换为含2%小牛血清的无酚红DMEM/ F12(l 1)。向所述培养基中加入不同浓度的激动剂模式的待测化合物。同样制备拮抗剂模式 的待处理化合物，也向所述培养基中加入lOnM 170-雌二醇。将所述细胞于37°C保温3 天。在第三天，去除培养基，向各孔中先加入1倍体积的IX稀释缓冲液(Clontech)，加入1 倍体积的测定缓冲液(Clontech)。然后将所述细胞在室温下保温5分钟。加入1倍体积的 新鲜制备的化学发光缓冲液(1倍体积的化学发光底物(CSPD)，19倍体积的化学发光增强 剂，CSPD的终浓度为1. 25mM ；SigmaChemical Co.)将所述细胞在室温下保温10分钟，然后 在发光计上进行定量。相对于溶媒对照，用化学发光增加计算碱性磷酸酶活性的增强。按照上述方法，测试本发明代表性化合物，
表4
编号激动剂(nM)拮抗剂(nM)
1> 10K> 10K
2230> 10K
3> 10K> 10K
4> 10K> 10K
59523
6> 10K340
7> 10K30
8> 10K50
9400320
10790> 10K
11> 10K> 10K
12> 10K> 10K
13> 10K43
14> 10K> 10K
15300> 10K
55>10K> 10K
56>10K> 10K
57>10K46
58>10K> 10K
59>10K> 10K
60>10K5300
61>10K> 10K
62>10K> 10K
63>10K820
64>10K> 10K
65>10K> 10K
66>10K> 10K
67>10K4390
68>10K> 10K
69>10K> 10K
70>10K> 10K实施例7 对HOB细胞中IL_6和GM-CSF生产的作用将人体破骨细胞HOB铺板在96孔皿内使其在常规HOB培养基(Ham氏F12，补充有 28mM HEPES,Ph7. 4,10% FCS, 1. lmMCaC12，2mM谷酰胺和抗生素-抗真菌剂)中的密度 为7X103个细胞/孔。次日，细胞用化合物或载体处理(0. 2%DMS0)处理30分钟，随后加 A IL-1 3 (Ing/mL)和TNF- a (10ng/mL)。培养持续18至24小时。利用市售ELISA试剂盒 测定培养基中IL-6和GM-CSF水平。本发明化合物显示出对IL-6和GM-CSF的抑制作用。按照上述方法测定部分本发明代表性化合物，结果示于表5 (n = 2)表 5 实施例8 对HOB细胞中IL-6和GM-CSF生产的作用将人体破骨细胞H0B铺板在96孔皿内使其在常规H0B培养基(Ham氏F12，补充有28mM HEPES，Ph7. 4,10% FCS, 1. ImM CaC12，2mM谷酰胺和1 %抗生素-抗真菌剂)中的 密度为7X103个细胞/孔。次日，细胞用化合物或载体处理(0. 2%DMS0)处理30分钟， 随后加入IL-1 3 (Ing/mL)和TNF-a (10ng/mL)。培养持续18至24小时。利用市售ELISA 试剂盒测定培养基中IL-6和GM-CSF水平。本发明化合物显示出对IL-6和GM-CSF的抑制 作用按照上述方法测定部分本发明代表性化合物，结果示于表6 (n = 2)表6
样品名 IC50(pM) (4-(2-甲基笨基)-1-哌嗪基)(3&,4-二氢噻吩并[3,2:5,6]缘 11 喃并[4,3-c]吡唑-3-曱基酮(化合物编号14) (4-曱基-1-派凑基)(3a,4-二氢p塞喻并[3,2:5,6]噻喃并 12.5 [4，3-c]吡唑-3-曱基酮(化合物编号16) N-(2-( 二乙基氨基)乙基)-3a,4-二氢噻吩并[3,2:5,6]噻喃 39.0 并[4,3-c]吡唑-3-曱醜胺(化合物编号17) (4-(2, 5-二曱基苯基)-1 -哌嗪基)(3a,4-二氢噻吩并 2.8 [3,2:5,6]噻喃并[4,3-c]吡唑-3-甲基酮(化合物编号18) (4-(3-氯-4-曱基笨基)-1-哌嗪基)(6-乙酰基-3朱4-二氢噻 5.9 吩并[3,2:5,6]噻喃并[4,3-c]吡唑-3-甲基酮(化合物编号 _42)_实施例9 对卵巢癌细胞SK0V3增殖的作用对数生长期细胞用胰酶消化后，以6X 103个/孔细胞数加人96孔培养板，置 37°C,5% C02培养箱中培养，第2天待大部分细胞贴壁后置人4°C恒温箱lh，以促成细胞同 步化生长。吸去上清液，加人含10%新生小牛血清(FCS)RPMI1640培养液，200iiL/孔，按 实验设计分组。把无菌生理盐水配制的化合物注射液加入96孔中，每孔中加入200 y L，使 每孔的药物浓度分别为lmg/mL、2mg/mL和5mg/ml，以Omg/mL为阴性对照组。继续培养24、 48、72h后，各孔分别加人20 u LMTT溶液(浓度为5mg/mL)，轻轻震荡培养板，放回培养箱内 再孵育4h，然后吸尽上清液，于各孔中加二甲亚砜200 u L，置震荡器上震荡5-lOmin，用酶 标光度计测出每孔中波长为580nm的吸光值(A = 580)，A = 580值与活细胞数量成正比。按照上述方法测定部分本发明代表性化合物，结果示于表7 (n = 3)表 7 实施例10 对骨肉瘤细胞U20S-EGFP-4A 12G增殖的作用对数生长期细胞用胰酶消化后，台盼蓝计数，配制成细胞密度为
细胞悬液，接种于96孔板中，每孔200 u L，每孔约2 X 103个细胞，预培养24h，把无菌生理
盐水配制的化合物注射液加入96孔中，每孔中加入200 u L，使每孔的药物浓度分别为lmg/
mL、2mg/mL和5mg/ml，以Omg/mL为阴性对照组。在分别培养0h、12h、24h和48h后每孔加
入MTT溶液(5mg/mL )20uL,继续孵育4h，终止培养。小心吸弃培养孔中的上清液，每孔加
入150 iiL的二甲基亚砜(DMS0)，震荡lOmin，使甲腊充分溶解，选择490nm波长，在酶联免
疫检测仪上测定各孔光吸收值(A值)，重复检测5次。按照上述方法测定部分本发明代表性化合物，结果示于表8 表8
样品名IC50(|iM) (4-(3-三氟曱氧基笨基)-l-哌 基)(3a,4-二氢噻吩并25^9 [3,2:5,6]噻喃并[4,3-c]吡唑-3-曱基酮(化合物编号11) (4-(2，5-二曱基笨基)-1-旅凑基)(3a,4-二氢噻吩并99.3 [3,2:5,6]噻喃并[4,3-c]吡唑-3-曱基酮(化合物编号18) N-叔丁基-3a,4-二氢缘吩并[3,2:5,6]噻喃并[4,3-c]吡唑23.1 -3-曱酰胺(化合物编号24) (4-萘基-1-派 基)(3a,4-二氢噻吩并[3,2:5,6]噻喃并98.4 [4,3-c]吡唑-3-曱基酮(化合物编号28) 4-(4-氟笨基)-1-派 基)(3a,4-二氢塞纷并[3,2:5，6]噻喃65.3 _并[4,3-c]吡唑-3-曱基酮(化合物编号31)_制剂实施例下列制剂实施例仅举例说明本发明的保护范围，但不以任何方式构成限定。实施例11:明胶胶囊硬明胶胶囊的制备采用 可以根据所提供的合理变化来改进上述制剂。实施例12 片剂片剂的制备采用 将上述组分混合并压制成片剂。实施例13 片剂每片中含有2. 5-1000mg活性组分的片剂制备如下 使活性成分、淀粉和纤维素通过美国45号目筛并彻底混合。将聚乙烯吡咯烷酮溶 液与所得粉末混合，随后经美国14号目筛。将生成的颗粒在50-60°C下干燥并经美国18 号目筛。将预先经过美国60号目筛的羧甲基纤维素钠、硬脂酸镁和滑石粉加入到上述颗粒 中，随后混合，在压片机上压制得到片剂。实施例14 混悬液每5ml含有0. l-1000ma药物的混悬液制备如下
苯甲酸溶液 O.lmL 矫味剂 适量 着色剂 适量 _纯水至_5mL_令药物经美国45号目筛并与羧甲基纤维素钠和糖浆混合形成平滑的糊剂。将苯 甲酸溶液、矫味剂和着色剂用一些水稀释并在搅拌下加入上述糊剂。随后加入足量的水以 达到所需的体积。实施例15 组合片剂 使活性成分、淀粉和纤维素通过美国45号目筛并彻底混合。将聚乙烯吡咯烷酮溶 液与所得粉末混合，随后经美国14号目筛。将生成的颗粒在50-60°C下干燥并经美国18 号目筛。将预先经过美国60号目筛的羧甲基纤维素钠、硬脂酸镁和滑石粉加入到上述颗粒 中，随后混合，在压片机上压制得到片剂。对于上述说明，本领域技术人员可容易地理解本发明的必要特征，不背离本发明 的精神和范围，本发明可进行各种改变和改进以适应不同的应用和条件。
权利要求
一种通式(I)的化合物或其药学上可接受的盐其中R1可以独立的选自取代或未取代的胺基；R2可以独立的选自H或者乙酰基。FSA00000132652000011.tif
2.权利要求1所述的化合物包括1-(1，4_ 二氢噻吩并[3’，2’ 5，6]噻喃并[4，3-c]吡唑-3-甲酰基)_4_苯基哌嗪；5,6]噻喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰基)-4-(4-甲氧基苯1-(1，4_ 二氢噻吩并[3’，2， 基)哌嗪；1-(1，4_ 二氢噻吩并[3’，2， 基苯基)哌嗪；1-(1，4_ 二氢噻吩并[3’，2， 基苯基)哌嗪；1-(1，4_ 二氢噻吩并[3’，2’ 哌嗪；1-(1，4_ 二氢噻吩并[3’，2’ 苯基]甲基)哌嗪；1-(1，4_ 二氢噻吩并[3’，2， 基苯基)哌嗪；1-(1，4_ 二氢噻吩并[3’，2’ 哌嗪；1-(1，4_ 二氢噻吩并[3’，2’哌嗪；1-(1，4_ 二氢噻吩并[3’，2’ 哌嗪；1-(1，4_ 二氢噻吩并[3’，2， 基苯基)哌嗪；1-(1，4_ 二氢噻吩并[3’，2’ 哌嗪；1-(1，4_ 二氢噻吩并[3’，2， 苯基)哌嗪；1-(1，4_ 二氢噻吩并[3’，2’ 哌嗪；1-(1，4_ 二氢噻吩并[3’，2，基)哌嗪；5,6]噻喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰基)-4-(3-氯-2-甲 5,6]噻喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰基)-4-(2-氯-4-甲 5,6]噻喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰基)-4-(4-氯苯基) 5,6]噻喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰基)-4-[(4-氯苯基) 5,6]噻喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰基)-4-(3-氯-4-甲 5,6]噻喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰基)-4-( 二苯甲基) 5,6]噻喃并[4，3-c]吡唑-3-甲酰基)-4-(4-甲基苯基) 5,6]噻喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰基)-4-(3-氯苯基) 5,6]噻喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰基)-4-(3-三氟甲氧 5,6]噻喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰基)-4-(2-氯苯基) 5,6]噻喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰基)-4-(3-氯-4-氟 5,6]噻喃并[4，3-c]吡唑-3-甲酰基)-4-(2-甲基苯基) 5,6]噻喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰基)-4-(4-乙氧基苯1-(1，4_ 二氢噻吩并 N-[2-( 二乙基氨基) 酰胺；1-(1，4_ 二氢噻吩并 苯基)哌嗪；1-(1，4_ 二氢噻吩并 苯基)哌嗪；1-(1，4_ 二氢噻吩并 苯基)哌嗪；1-(1，4_ 二氢噻吩并 基苯基)哌嗪；1-(1，4_ 二氢噻吩并 苯基)哌嗪；1-(1，4_ 二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰基)_4_甲基哌嗪； 乙基]-1，4-二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并[4,3-c]吡唑-3-甲[3，，2，5，6]噻喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰基)-4-(2，5-二甲基[3，，2，5，6]噻喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰基)-4-(2，3-二甲基[3，，2，5，6]噻喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰基)-4-(2，6-二甲基[3，，2，5，6]噻喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰基)-4-(4-三氟甲氧[3，，2，5，6]噻喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰基)-4-(4-三氟甲基[3，，2，:5，6]噻喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰基)-4-(1-苯乙基)5,6]噻喃并[4，3-c]吡唑-3-甲酰基)-4-环丙基哌嗪； 5,6]噻喃并[4，3-c]吡唑-3-甲酰基)-4-苯甲基哌嗪； 5,6]噻喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰基)-4-(4-氟苯基)哌嗪；N-叔丁基-1，4-二氢噻吩并[3’，2’ 5,6]噻喃并[4，3-c]吡唑-3-甲酰胺； 1-(1，4_ 二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰基)_4_叔丁基哌嗪； N-(l-苯乙基)-1，4_ 二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺； 1-(1，4_ 二氢噻吩并[3’，2’:5，6]噻喃并[4，3-c]吡唑-3-甲酰基)-4-(3-甲基苯基) 哌嗪；1-(1，4_ 二氢噻吩并[3’，2’5，6]噻喃并[4，3-c]吡唑_3_甲酰基)-4-(1-萘基)哌嗪；1-(1，4_ 二氢噻吩并[3’，2’ 1-(1，4_ 二氢噻吩并[3’，2’ 1-(1，4_ 二氢噻吩并[3’，2’ 哌嗪；1-(1，4_ 二氢噻吩并[3’，2’ 5，6]噻喃并[4，3-c]吡唑-3-甲酰基)_4_(3-氟苯基) 哌嗪；N-[2-(4-吗啉基)乙基]-1，4-二氢噻吩并[3，，2，5，6]噻喃并[4,3-c]吡唑-3-甲 酰胺；1-(1，4_ 二氢噻吩并[3’，2’ 5，6]噻喃并[4，3-c]吡唑-3-甲酰基)_4_(2-氟苯基) 哌嗪；1-(1，4_ 二氢噻吩并[3，，2，5，6]噻喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰基)-4-正己基哌嗪； 1-(6-乙酰基-1，4-二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰基)-4-苯基哌嗪；1-(6-乙酰基-1，4- 二氢噻吩并[3，，2，5，6]噻喃并[4，3-c]吡唑-3-甲酰 基)-4-(4_甲氧基苯基)哌嗪；1-(6-乙酰基-1，4- 二氢噻吩并[3，，2，5，6]噻喃并[4，3-c]吡唑-3-甲酰 基)-4- (3-氯-2-甲基苯基)哌嗪；1--(6-乙酰基-1，4- 二氢噻吩并[3，，2，5,6]噻喃并[4,3-c吡唑-3- EP酰基)-4 氯-4-甲基苯基)哌嗪；1--(6-乙酰基-1，4-二氢噻吩并[3，，2，5,6]噻喃并[4,3-c吡唑-3- EP酰基)-4-(4-氯苯基)哌嗪；1--(6-乙酰基-1，4- 二氢噻吩并[3，，2，5,6]噻喃并[4,3-c吡唑-3- EP酰基)-4-((4-氯苯基)苯基)甲基)哌嗪;1--(6-乙酰基-1，4- 二氢噻吩并[3，，2，5,6]噻喃并[4,3-c吡唑-3- EP酰基)-4-(3-氯-4-甲基苯基)哌嗪；1--(6-乙酰基-1，4-二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并[4，3-c]吡唑-3-甲酰基苯甲基哌嗪；1--(6-乙酰基-1，4- 二氢噻吩并[3，，2，5,6]噻喃并[4，3-c吡唑-3- EP酰基)-4-(4-甲基苯基)哌嗪；1--(6-乙酰基-1，4- 二氢噻吩并[3，，2，5,6]噻喃并[4,3-c吡唑-3- EP酰基)-4-(3-氯苯基)哌嗪；1--(6-乙酰基-1，4-二氢噻吩并[3，，2，5,6]噻喃并[4,3-c吡唑-3- EP酰基)-4-(3-三氟甲氧基苯基)哌嗪；1--(6-乙酰基-1，4- 二氢噻吩并[3，，2，5,6]噻喃并[4,3-c吡唑-3- EP酰基)-4-(2-氯苯基)哌嗪；1--(6-乙酰基-1，4- 二氢噻吩并[3，，2，5,6]噻喃并[4,3-c吡唑-3- EP酰基)-4-(3-氯-4-氟苯基)哌嗪；1--(6-乙酰基-1，4- 二氢噻吩并[3，，2，5,6]噻喃并[4,3-c吡唑-3- EP酰基)-4-(2-甲基苯基)哌嗪；1--(6-乙酰基-1，4- 二氢噻吩并[3，，2，5,6]噻喃并[4,3-c吡唑-3- EP酰基)-4-(4-乙氧基苯基)哌嗪；1-(6-乙酰基-1，4-二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰基)-4-甲 基哌嗪；N-[2-( 二乙基氨基)乙基]-6-乙酰基-1，4-二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并[4， 3-c]吡唑-3-甲酰胺；1-(6_乙酰基-1，4-二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并[4，3-c]吡唑_3_甲酰基)-4-(2，5-二甲基苯基)哌嗪；1-(6-乙酰基-1，4-二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并[4，3-c]吡唑_3_甲酰基)-4-(2， 3-二甲基苯基)哌嗪；1-(6-乙酰基-1，4-二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并[4，3-c]吡唑_3_甲酰基)-4-(2，6-二甲基苯基)哌嗪；1-(6-乙酰基-1，4- 二氢噻吩并[3，，2，5，6]噻喃并[4，3-c]吡唑-3-甲酰 基)-4- (4-三氟甲氧基苯基)哌嗪；1-(6-乙酰基-1，4- 二氢噻吩并[3，，2，5，6]噻喃并[4，3-c]吡唑-3-甲酰 基)-4- (4-三氟甲基苯基)哌嗪；1-(6-乙酰基-1，4- 二氢噻吩并[3，，2，5，6]噻喃并[4，3-c]吡唑-3-甲酰 基)-4-(1_苯乙基)哌嗪；4N-叔丁基-6-乙酰基-1，4-二氢噻吩并[3，，2，5,6]噻喃并[4，3_c]吡唑-3-甲酰胺；1-(6-乙酰基-1，4-二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰基)-4-叔 丁基哌嗪；N-(l-苯乙基)-6_乙酰基一1，4-二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并[4,3-c]吡唑-3-甲 酰胺；1-(6-乙酰基-1，4- 二氢噻吩并[3，，2，5，6]噻喃并[4，3-c]吡唑-3-甲酰 基)-4-(3_甲基苯基)哌嗪；1-(6-乙酰基-1，4- 二氢噻吩并[3，，2，5，6]噻喃并[4，3-c]吡唑-3-甲酰 基)-4-(1_萘基)哌嗪；1-(6-乙酰基-1，4-二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰基)-4-环 丙基哌嗪；1-(6-乙酰基-1，4-二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并[4，3-c]吡唑-3-甲酰基)-4-苯 甲基哌嗪；1-(6-乙酰基-1，4- 二氢噻吩并[3，，2，5，6]噻喃并[4，3-c]吡唑-3-甲酰 基)-4-(4-氟苯基)哌嗪；1-(6-乙酰基-1，4- 二氢噻吩并[3，，2，5，6]噻喃并[4，3-c]吡唑-3-甲酰 基)-4-(3-氟苯基)哌嗪；N-[2-(4-吗啉基)乙基]-6-乙酰基-1，4-二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并[4,3-c] 吡唑-3-甲酰胺；1-(6-乙酰基-1，4- 二氢噻吩并[3，，2，5，6]噻喃并[4，3-c]吡唑-3-甲酰 基)-4-(2-氟苯基)哌嗪；1-(6-乙酰基-1，4-二氢噻吩并[3，，2，:5，6]噻喃并[4，3-c]吡唑-3-甲酰基)-4-正 己基哌嗪。
3.一种药用组合物，它包含治疗有效量的如权利要求1所述的化合物以及药学上可接 受的载体、稀释剂或赋形剂。
4.权利要求1-3任何一项所述的化合物或其组合物在制备治疗由雌激素受体介导的 疾病的药物中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，给予有效量的权利要求1-3任何一项所述 的化合物或其组合物。
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，其中所述由雌激素受体介导的疾病包括 热潮红、阴道干燥、骨量减少、骨质疏松症、高血脂症、认知功能丧失、变性性脑病、心血管疾 病、脑血管疾病、乳腺组织癌、乳腺组织增生、子宫内膜癌、子宫内膜增生、子宫颈癌、子宫颈 增生、前列腺癌、前列腺增生、子宫内膜异位、子宫肌瘤、骨关节炎和避孕。
7.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，用治疗有效量的权利要求1-3任何一项所 述的化合物或其组合物和一种孕激素或一种孕激素拮抗剂进行联合制备避孕药。
全文摘要
本发明属于医药技术领域，涉及1，4-二氢噻吩并[3’，2’5，6]噻喃并[4，3-c]吡唑-3-羧酸衍生物及其作为雌激素受体调节剂的应用。1，4-二氢噻吩并[3’，2’5，6]噻喃并[4，3-c]吡唑-3-羧酸衍生物和药学上可接受的盐，或其立体异构体和前药，及其药学上配伍可接受的载体或稀释剂作为雌激素受体调节剂。其结构通式如下所示在结构式中，R1可以独立的选自取代或未取代的胺基；和R2可以独立的选自H或者乙酰基。用于治疗或预防与雌激素功能相关的各种疾病。如与雌激素缺乏相关的疾病，激素敏感性癌症和增生，子宫内膜异位、子宫肌瘤和骨关节炎；其化合物或其组合物也可以单独或与孕激素或孕激素拮抗剂联用作为避孕药。
文档编号C07D495/14GK101863903SQ20101019429
公开日2010年10月20日 申请日期2010年6月8日 优先权日2010年6月8日
发明者刘晓平, 孙蕊, 宋菁, 徐赫男, 李大伟, 王欣, 胡春, 黄二芳 申请人:沈阳药科大学