专利名称：一种从蛹虫草中分离的叶黄素及其提取分离方法
技术领域：
本发明涉及一种叶黄素及其提取分离方法，尤其涉及一种从蛹虫草中分离的叶黄 素及其提取分离方法。
背景技术：
人工蛹虫草Cordyc印s militaris (Fr. ) Link.又称北冬虫夏草，与冬虫夏草同属 于麦角菌科虫草属。北方民间曾把蛹虫草作为冬虫夏草应用，《新华本草纲要》记载其“性 平，味甘，有益肺肾，补精髓，止血化痰”，用于肺结核、老人虚弱和贫血等症，为珍贵的中药 材，目前蛹虫草主要被开发作为具有滋补作用的药品和功能食品。近年来对人工蛹虫草化 学成分研究多集中在核苷类物质、虫草多糖、虫草酸、留醇等常见化合物，对其色素成分的 研究还很有限，目前仅两篇文献报道蛹虫草中含有类胡萝卜素，但未纯化和结构鉴定。目前 从其它物质中分离提取叶黄素的方法比较复杂，容易造成光、氧、热、酸对于叶黄素结构的 破坏，分离的叶黄素纯度不高，回收率低，不适宜于工业化生产。
发明内容
本发明的目的在于克服上述已有技术的不足而提供一种从蛹虫草中提取分离和 纯化叶黄素的方法，其方法简单，分离的叶黄素纯度高，回收率高，具有抗氧化、延缓动脉硬 化的作用，叶黄素结构不会被破坏，适宜于工业化生产。本发明的目的可以通过如下措施来达到一种从蛹虫草中分离的叶黄素，其特征 在于该叶黄素通过采用石油醚脱脂，氯仿回流提取，硅胶柱色谱层析方法从蛹虫草中提取 分离、纯化而得到，该叶黄素分子式C4(iH5602，相对分子质量568，为3，3 ‘ - 二羟基-a -胡
萝卜素，结构式为 一种从蛹虫草中分离的叶黄素的提取分离方法，其特征在于其包括如下步骤A、将人工蛹虫草进行烘干粉碎，烘干温度为30-40 °C，先用石油醚 25°C -35°C (30°C )回流提取2_4次，每次提取7_9小时，再用氯仿50°C-60°C回流提取 3-5次，每次提取7-9小时，合并氯仿提取液，30°C -40°C减压浓缩，得黑褐色浸膏；B、将该 黑褐色浸膏按每次6g-10g分次进行硅胶柱色谱分离纯化先将浸膏用8-12ml的氯仿和甲 醇混合溶液溶解，氯仿和甲醇的体积比为1 1，后拌以14g_22g硅胶后旋干，干法上样， 硅胶装柱的高度为上样高度的4-6倍，用石油醚-醋酸乙酯(石油醚与醋酸乙酯的体积比2 1-1.5)为流动相进行洗脱，自洗脱液出现颜色开始收集洗脱液，每份收集80-120mL，共 收集20份，合并收集的第10-20份洗脱液，减压浓缩得洗脱物ZF-L ；重复上述步骤，将洗脱 物ZF-L按每次6g-10g分次进行硅胶柱色谱分离纯化，以石油醚-醋酸乙酯(石油醚-醋 酸乙酯的体积比为5 2-3)为流动相，ZF-L经硅胶柱色谱分离得洗脱物ZF-LA;再重复上 述步骤，将洗脱物ZF-LA按每次6g-10g分次进行硅胶柱色谱分离纯化，以二氯甲烷_甲醇 (二氯甲烷-甲醇体积比为50 1-3)为流动相，最终得叶黄素IV L2。为了进一步实现本发明的目的，所述的洗脱液采用棕色瓶收集。为了进一步实现本发明的目的，所述的合并后的洗脱液低温浓缩后放于低温冰柜 中避光存放。本发明同已有技术相比可产生如下积极效果本发明以蛹虫草为原料分离提取叶 黄素，其方法简单，只需要用硅胶柱层析，进行吸附和洗脱，就能完成分离和纯化，适宜于工 业化生产。其可以避免光、氧、热、酸对于叶黄素结构的破坏，本发明中分离得到的天然色 素，是首次在虫草属真菌中发现，也是从蛹虫草中分离和鉴定的第一个色素，属于天然药物 中化学成分的研究成果，具有抗氧化、延缓动脉硬化的作用。本发明中分离并鉴定的叶黄 素，可为研究虫草属真菌中的功能天然色素和优化蛹虫草的人工栽培条件提供重要参考， 还能为人工蛹虫草在更多方面的开发利用提供理论支撑。
具体实施例方式下面对本发明的具体实施方式
作详细说明实施例1 将人工蛹虫草进行烘干粉碎，烘干温度为30°C，先用石油醚(沸程 30-60°C )25°C回流提取2次，每次提取7小时，用于除去样品中的油脂等小极性成分；再用 氯仿50°C回流提取3次，每次提取7小时，合并氯仿提取液，30°C减压浓缩，得黑褐色浸膏； 将该黑褐色浸膏按每次6g分次进行硅胶柱色谱分离纯化，先将浸膏用8ml的氯仿和甲醇混 合溶液溶解，氯仿和甲醇的体积比为1 1，后拌以14g硅胶后旋干，干法上样，使用的玻璃 柱规格为3 X 40cm，硅胶(200-300目)装柱的高度为上样高度的4倍，用石油醚-醋酸乙酯 (石油醚与醋酸乙酯的体积比2 1)为流动相进行洗脱，自洗脱液出现颜色开始使用收集 瓶收集洗脱液，所用收集瓶应为避光的棕色瓶，每瓶收集80mL，共收集20瓶，合并收集的第 10-20瓶，减压低温浓缩得洗脱物ZF-L ；重复上述步骤，将洗脱物ZF-L按每次6g分次进行 硅胶柱色谱分离纯化，以石油醚-醋酸乙酯(石油醚-醋酸乙酯的体积比为5 2)为流动 相，ZF-L经硅胶柱色谱分离得洗脱物ZF-LA ；再重复上述步骤，将洗脱物ZF-LA按每次6g分 次进行硅胶柱色谱分离纯化，以二氯甲烷-甲醇(二氯甲烷-甲醇体积比为50 1)为流动 相，最终得天然色素IV L2，运用HPLC-MS/MS的多反应监测法、紫外-可见吸收光谱法和薄层 色谱法综合对该色素进行结构鉴定，鉴定结果表明其为叶黄素。在上述分离过程中应注意 洗脱液和样品在空气中的暴露时间应尽量少，合并后的洗脱液减压低温浓缩后放于低温冰 柜中避光存放。该叶黄素分子式C4(lH5602，相对分子质量568，为3，3' - 二羟基-a-胡萝
卜素，结构式为 实施例2 将人工蛹虫草进行烘干粉碎，烘干温度为40°C，先用石油醚(沸程 30-60°C)35°C回流提取4次，每次提取9小时，用于除去样品中的油脂等小极性成分；再用 氯仿60°C回流提取5次，每次提取9小时，合并氯仿提取液，40°C减压浓缩，得黑褐色浸膏； 将该黑褐色浸膏按每次10g分次进行硅胶柱色谱分离纯化，先将浸膏用12ml的氯仿和甲 醇混合溶液溶解，氯仿和甲醇的体积比为1 1，后拌以22g硅胶后旋干，干法上样，使用的 玻璃柱规格为3 X 40cm，硅胶(200-300目)装柱的高度为上样高度的6倍，用石油醚-醋 酸乙酯(石油醚与醋酸乙酯的体积比2 1.5)为流动相进行洗脱，自洗脱液出现颜色开 始使用收集瓶收集洗脱液，所用收集瓶应为避光的棕色瓶，每瓶收集120mL，共收集20瓶， 合并收集的第10-20瓶，减压低温浓缩得洗脱物ZF-L ；重复上述步骤，将洗脱物ZF-L按每 次10g分次进行硅胶柱色谱分离纯化，以石油醚_醋酸乙酯(石油醚_醋酸乙酯的体积比 为5 3)为流动相，ZF-L经硅胶柱色谱分离得洗脱物ZF-LA;再重复上述步骤，将洗脱物 ZF-LA按每次10g分次进行硅胶柱色谱分离纯化，以二氯甲烷-甲醇(二氯甲烷-甲醇体积 比为50 3)为流动相，最终得天然色素IVL2，运用HPLC-MS/MS的多反应监测法、紫外-可 见吸收光谱法和薄层色谱法综合对该色素进行结构鉴定，鉴定结果表明其为叶黄素。在上 述分离过程中应注意洗脱液和样品在空气中的暴露时间应尽量少，合并后的洗脱液减压 低温浓缩后放于低温冰柜中避光存放。该叶黄素分子式C4(lH5602，相对分子质量568，为3， 3' _ 二羟基-a-胡萝卜素，结构式为 实施例3 将人工蛹虫草进行烘干粉碎，烘干温度为35°C，先用石油醚(沸程 30-60°C )30°C回流提取3次，每次提取8小时，用于除去样品中的油脂等小极性成分；再用 氯仿55°C回流提取4次，每次提取8小时，合并氯仿提取液，35°C减压浓缩，得黑褐色浸膏； 将该黑褐色浸膏按每次8g分次进行硅胶柱色谱分离纯化，先将浸膏用10ml的氯仿和甲醇 混合溶液溶解，氯仿和甲醇的体积比为1 1，后拌以18g硅胶后旋干，干法上样，使用的玻 璃柱规格为3 X 40cm，硅胶(200-300目)装柱的高度为上样高度的5倍，用石油醚-醋酸乙 酯(石油醚与醋酸乙酯的体积比2 1)为流动相进行洗脱，自洗脱液出现颜色开始使用收 集瓶收集洗脱液，所用收集瓶应为避光的棕色瓶，每瓶收集100mL，共收集20瓶，合并收集 的第10-20瓶，减压低温浓缩得洗脱物ZF-L ；重复上述步骤，将洗脱物ZF-L按每次8g分次
5进行硅胶柱色谱分离纯化，以石油醚-醋酸乙酯(石油醚-醋酸乙酯的体积比为5 2.5) 为流动相，ZF-L经硅胶柱色谱分离得洗脱物ZF-LA ；再重复上述步骤，将洗脱物ZF-LA按每 次8g分次进行硅胶柱色谱分离纯化，以二氯甲烷-甲醇(二氯甲烷-甲醇体积比为50 2) 为流动相，最终得天然色素IV L2，运用HPLC-MS/MS的多反应监测法、紫外-可见吸收光谱 法和薄层色谱法综合对该色素进行结构鉴定，鉴定结果表明其为叶黄素。在上述分离过程 中应注意洗脱液和样品在空气中的暴露时间应尽量少，合并后的洗脱液减压低温浓缩后 放于低温冰柜中避光存放。该叶黄素分子式C4(lH5602，相对分子质量568，为3，3' -二羟
基胡萝卜素，结构式为
权利要求
一种从蛹虫草中分离的叶黄素，其特征在于该叶黄素通过采用石油醚脱脂，氯仿回流提取，硅胶柱色谱层析方法从蛹虫草中提取分离、纯化而得到，该叶黄素分子式C40H56O2，相对分子质量568，为3，3′-二羟基-α-胡萝卜素，结构式为FSA00000132552900011.tif
1. 一种从蛹虫草中分离的叶黄素，其特征在于该叶黄素通过采用石油醚脱脂，氯仿回 流提取，硅胶柱色谱层析方法从蛹虫草中提取分离、纯化而得到，该叶黄素分子式C4(IH5602， 相对分子质量568，为3，3 ‘ - 二羟基_ d _胡萝卜素，结构式为括如下步骤A、将人工蛹虫草进行烘干粉碎，烘干温度为30-40°C，先用石油醚25°C-35°C (30°C ) 回流提取2-4次，每次提取7-9小时，再用氯仿50°C -60°C回流提取3_5次，每次提取7_9 小时，合并氯仿提取液，30°C -40°C减压浓缩，得黑褐色浸膏；B、将该黑褐色浸膏按每次6g-10g分次进行硅胶柱色谱分离纯化先将浸膏用8-12ml 的氯仿和甲醇混合溶液溶解，氯仿和甲醇的体积比为1 1，后拌以14g_22g硅胶后旋干， 干法上样，硅胶装柱的高度为上样高度的4-6倍，用石油醚-醋酸乙酯(石油醚与醋酸乙 酯的体积比2 1-1.5)为流动相进行洗脱，自洗脱液出现颜色开始收集洗脱液，每份收集 80-120mL,共收集20份，合并收集的第10_20份洗脱液，减压浓缩得洗脱物ZF-L ；重复上 述步骤，将洗脱物ZF-L按每次6g-10g分次进行硅胶柱色谱分离纯化，以石油醚-醋酸乙 酯(石油醚-醋酸乙酯的体积比为5 2-3)为流动相，ZF-L经硅胶柱色谱分离得洗脱物 ZF-LA ；再重复上述步骤，将洗脱物ZF-LA按每次6g_10g分次进行硅胶柱色谱分离纯化，以 二氯甲烷-甲醇(二氯甲烷-甲醇体积比为50 1-3)为流动相，最终得叶黄素IV L2。
2.
3.根据权利要求1所述的一种从蛹虫草中分离的叶黄素的提取分离方法，其特征在于 所述的洗脱液采用棕色瓶收集。
4.根据权利要求1所述的一种从蛹虫草中分离的叶黄素的提取分离方法，其特征在于 所述的合并后的洗脱液低温浓缩后放于低温冰柜中避光存放。
全文摘要
本发明公开了一种从蛹虫草中提取分离和纯化叶黄素的方法，其特征在于对从蛹虫草中得到的含叶黄素的提取物，采用石油醚脱脂，氯仿回流提取，硅胶柱色谱分离纯化而得到叶黄素，用HPLC-MS/MS的多反应监测法等方法进行了鉴定。该叶黄素分子式C40H56O2，相对分子质量568，为3，3′-二羟基-α-胡萝卜素，结构式为其方法简单，分离的叶黄素纯度高，回收率高，具有抗氧化、延缓动脉硬化的作用，叶黄素结构不会被破坏，适宜于工业化生产。
文档编号C07C403/24GK101863813SQ20101019417
公开日2010年10月20日 申请日期2010年6月3日 优先权日2010年6月3日
发明者刘宇, 图力古尔, 李维焕, 杨树德, 程显好, 高兴喜 申请人:鲁东大学