专利名称：一种从土茯苓中提取落新妇苷的方法
技术领域：
本发明属于天然植物提取领域，涉及一种从土茯苓中提取落新妇苷的方法，尤其 涉及一种应用高逆流色谱法分离落新妇苷的方法。
背景技术：
土茯苓为百合科菝莫属植物光叶菝葜(Smilax glabra Roxb.)的干燥根茎，具有 除湿、解毒、通利关节之功效，用于湿热淋浊，梅毒以及汞中毒所致的肢体拘挛，筋骨疼痛等 症。土茯苓主要有效成分为皂苷和黄酮类化合物。据报道，土茯苓水提物有明显的抗炎作 用，从土茯苓中提取分离的落新妇苷具有明显的利尿及镇痛作用。落新妇苷，即花旗松素-3-0- α -L-吡喃鼠李糖苷，黄酮苷类，易溶于沸水，几乎不 溶于乙醚。落新妇苷具有多种显著的生物学活性，包括抑制辅酶A还原酶，抑制醛糖还原 酶，保护肝脏，镇痛，抗水肿等。近年又来有报道称落新妇苷有显著的选择性免疫抑制作用， 且它的选择性作用与以往的免疫抑制剂相比具有明显优势，因此可以作为一种新的免疫抑 制剂用于免疫相关疾病的治疗。张笑彦等“高效液相色谱法测定不同产地土茯苓药材中落 新妇苷的含量”，研究显示，落新妇苷在土茯苓药材中含量在0. 5-1. 5%。有关落新妇苷提取工艺的报道较少，多数为总苷提取工艺，专属性不强，如中国专 利(申请号200910043236) “土茯苓皂甙、黄酮类提取物及其制备方法”，采用醇提和有机 溶剂萃取的方法，该方法得到的黄酮提取物中新落妇苷含量少，只适合粗提或总提取物的 制备。中国专利(申请号200910194385. 9) “测定土茯苓乙醇水溶液提取物中的总苷有 效成分的方法”通过醇提、硅胶层析的方法得到了苷类物质，但落新妇苷含量较低；有些只 研究了部分提纯方法，还不能构成完整的工艺，如王晋黄等“土茯苓中提取总黄酮的工艺研 究”；还有许多来源于测定方法，无法用于生产，如陈幸等“HPLC法测定土茯苓中落新妇苷的
含量”。中国专利(申请号200510040944. 2) “一种落新妇苷的制备方法”，公开的方法是 将药材粉碎，经过两种浓度乙醇水溶液分别渗漉提取，90 %-95 %重量的乙醇水提取液经石 油醚脱脂后浓缩成浸膏，浸膏醇沉后，其母液与20% -80%重量乙醇水提取液合并，浓缩后 用含乙醇的乙酸乙酯液萃取，萃取物经醇沉后与前述沉淀混合，溶解后过大孔吸附树脂或 聚酰胺柱，20% -80%重量乙醇水溶液洗脱，洗脱液经重结晶后得落新妇苷，该方法有机溶 剂使用量大，周期长，步骤繁复，不易于大规模生产。
发明内容
发明人经工艺优化试验，发明了一种从土茯苓中提取落新妇苷的方法。该工艺简 单易操作，生产时间短，产品收率高，生产成本低。本发明是采用以下技术方案实现的一种从土茯苓中提取落新妇苷的方法，其特征在于包含以下步骤
1)提取将干燥土茯苓粉碎至20-30目，加5-8倍(V/W)热水超声提取，合并提取 液，浓缩，得浸膏；2)碱溶上述浸膏加5% NaHCO3溶液至pH8_10，过滤，得澄清液；3)酸沉上述澄清液加酸至不再产生沉淀，过滤得到沉淀物；4)高逆流色谱分离上述沉淀物用下相溶解，通过高逆流色谱柱分离，收集落新 妇苷流分；5)结晶上述流分脱溶后，加热水溶解，放冷结晶，重复2-3次，干燥即得产品。所述步骤1)中超声提取频率为20-35KHZ，提取2_3次，每次1_2小时。所述步骤幻中酸为lmol/L盐酸或0. 5mol/L硫酸溶液。所述步骤4)中高逆流色谱以氯仿-甲醇-正丁醇-水为两相溶剂系统，体积比为 6-10 5-7 2-5 8-12，以下相为流动相，上相位固定相，色谱仪转速为750 IOOOr/ min，流动相的流速为1. 5 3. 5ml/min。综上所述，本发明存在以下优点1、加碱可以使游离的落新妇苷溶解，除去大量杂质。2、本发明采用HSCCC，分离效果好，溶剂用量小，无需使用载体，减少了过程中的损失。3、本工艺对落新妇苷的提纯专属性高。下面将结合具体实施方式
进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限 于下列实施方式。
具体实施例方式实施例1 取土茯苓^ig,粉碎至20目，加入16L水，超声提取1小时，提取3次，合并提取液， 浓缩至浸膏，加5% NaHCO3溶液至pH8，过滤，得澄清液，加lmol/L盐酸至不再产生沉淀，过 滤得到沉淀物，取氯仿-甲醇-正丁醇-水按体积比6 :5:2: 8，超声波振荡混合，转移 至分液漏斗，静置分层，分出上下相，以上相为固定相，下相为流动相。上述结晶物用350ml 下相溶解，将上相用泵以lOml/min的流量灌满色谱柱，将柱的首端与进样阀相接，开启速 度控制器，使螺旋管柱顺时针方向旋转，当色谱仪转速为750r/min时，以流速为2. 5ml/min 泵入流动相，并通过进样阀进样，每次进样量为150mg，收集流出液，脱溶后溶于220ml热 水，放冷结晶，养晶2小时，重复3次，滤出低温干燥，得产品4. 7g，含量97. 2%。实施例2 取土茯苓^ig,粉碎至20目，加入12L水，超声提取2小时，提取2次，合并提取液， 浓缩至浸膏，加5 % NaHCO3溶液至pHIO，过滤，得澄清液，加0. 5mol/L硫酸至不再产生沉 淀，过滤得到沉淀物，取氯仿-甲醇-正丁醇-水按体积比10 :7:5: 12，超声波振荡 混合，转移至分液漏斗，静置分层，分出上下相，以上相为固定相，下相为流动相。上述结晶 物用300ml下相溶解，将上相用泵以lOml/min的流量灌满色谱柱，将柱的首端与进样阀相 接，开启速度控制器，使螺旋管柱顺时针方向旋转，当色谱仪转速为lOOOr/min时，以流速 为3. 5ml/min泵入流动相，并通过进样阀进样，每次进样量为200mg，收集流出液，脱溶后溶 于ml热水，放冷结晶，养晶2. 5小时，重复2次，滤出低温干燥，得产品3. 9g，含量96. 5%。
实施例3 取土茯苓^ig,粉碎至30目，加入15L水，超声提取1小时，提取3次，合并提取液， 浓缩至浸膏，加5% NaHCO3溶液至pH9，过滤，得澄清液，加lmol/L盐酸至不再产生沉淀，过 滤得到沉淀物，取氯仿-甲醇-正丁醇-水按体积比8 :5:2: 8，超声波振荡混合，转移 至分液漏斗，静置分层，分出上下相，以上相为固定相，下相为流动相。上述结晶物用400ml 下相溶解，将上相用泵以lOml/min的流量灌满色谱柱，将柱的首端与进样阀相接，开启速 度控制器，使螺旋管柱顺时针方向旋转，当色谱仪转速为950r/min时，以流速为2ml/min泵 入流动相，并通过进样阀进样，每次进样量为200mg，收集流出液，脱溶后溶于200ml热水， 放冷结晶，养晶3小时，重复3次，滤出低温干燥，得产品4. 8g，含量97. 4%。实施例4 取土茯苓^cg,粉碎至30目，加入IOL水，超声提取2小时，提取2次，合并提取 液，浓缩至浸膏，加5 % NaHCO3溶液至pH8. 5，过滤，得澄清液，加lmol/L盐酸至不再产生 沉淀，过滤得到沉淀物，取氯仿-甲醇-正丁醇-水按体积比8 :7:3: 10，超声波振荡 混合，转移至分液漏斗，静置分层，分出上下相，以上相为固定相，下相为流动相。上述结晶 物用300ml下相溶解，将上相用泵以lOml/min的流量灌满色谱柱，将柱的首端与进样阀相 接，开启速度控制器，使螺旋管柱顺时针方向旋转，当色谱仪转速为800r/min时，以流速为 1.5ml/min泵入流动相，并通过进样阀进样，每次进样量为250mg，收集流出液，脱溶后溶于 280ml热水，放冷结晶，养晶3小时，重复2次，滤出低温干燥，得产品4. 2g，含量98. 8%。实施例5:取土茯苓^ig,粉碎至30目，加入IOL水，超声提取2小时，提取2次，合并提取液， 浓缩至浸膏，加5% NaHCO3溶液至pHIO，过滤，得澄清液，加0. 5mol/L硫酸至不再产生沉淀， 过滤得到沉淀物，取氯仿-甲醇-正丁醇-水按体积比9 :6:3: 10，超声波振荡混合， 转移至分液漏斗，静置分层，分出上下相，以上相为固定相，下相为流动相。上述结晶物用 350ml下相溶解，将上相用泵以lOml/min的流量灌满色谱柱，将柱的首端与进样阀相接，开 启速度控制器，使螺旋管柱顺时针方向旋转，当色谱仪转速为850r/min时，以流速为:3ml/ min泵入流动相，并通过进样阀进样，每次进样量为200mg，收集流出液，脱溶后溶于200ml 热水，放冷结晶，养晶3小时，重复3次，滤出低温干燥，得产品5. 2g，含量98. 0%。
权利要求
1.一种从土茯苓中提取落新妇苷的方法，其特征在于包含以下步骤1)提取将干燥土茯苓粉碎至20-30目，加5-8倍(V/W)热水超声提取，合并提取液， 浓缩，得浸膏；2)碱溶上述浸膏加5%NaHCO3溶液至pH8_10，过滤，得澄清液；3)酸沉上述澄清液加酸至不再产生沉淀，过滤得到沉淀物；4)高逆流色谱分离上述沉淀物用下相溶解，通过高逆流色谱柱分离，收集落新妇苷 流分；5)结晶上述流分脱溶后，加热水溶解，放冷结晶，重复2-3次，干燥即得产品。
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述步骤1)中超声提取频率为 20-35KHz，提取2-3次，每次1_2小时。
3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述步骤3)中酸为lmol/L盐酸或 0. 5mol/L硫酸溶液。
4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述步骤4)中高逆流色谱以氯仿-甲 醇-正丁醇-水为两相溶剂系统，体积比为6-10 5-7 2-5 8-12，以下相为流动相，上 相位固定相，色谱仪转速为750 lOOOr/min，流动相的流速为1. 5 3. 5ml/min。
全文摘要
本发明涉及一种从土茯苓中提取落新妇苷的方法，工艺以土茯苓为原料，热水超声提取，提取液浓缩至浸膏，加5％NaHCO3溶液搅拌，过滤，得澄清液，加酸沉淀，滤出沉淀，以氯仿-甲醇-正丁醇-水为两相溶剂系统，采用高速逆流色谱分离纯化，流出物脱溶后用热水溶解，放冷析晶，滤出结晶干燥即得产品。采用该法生产落新妇苷操作方便，成本低，无污染，工艺专属性强，收率高，纯度高。
文档编号C07H17/07GK102070687SQ20101060397
公开日2011年5月25日 申请日期2010年12月24日 优先权日2010年12月24日
发明者万冬梅, 刘东锋, 杨成东 申请人:南京泽朗医药科技有限公司