专利名称：四环素半抗原及其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种半抗原及其制备方法和应用，具体涉及四环素半抗原及其制备方法和应用。
背景技术：
四环素类药物(TCs)具有广谱高效的杀菌抗生功效，可以与大多数药物或饲料添加剂混用，已被广泛应用于畜禽生产中。但过量使用不可避免的造成了严重的药物残留，成为严重危害人类健康的食品安全隐患之一。为此世界各国对TCs残留的检测十分关注。欧盟第675/92号令中初步规定在肌肉及牛奶中的四环素族化合物的总量不得超过100μg/kg,在肾脏、肝脏及鸡蛋中分别不得超过600 μ g/kg>300 μ g/kg及200 μ g/kg。日本肯定列表制度规定奶和鸡蛋中四环素类化合物的总量分别不得超过100ng/mL和400ng/mg。已报道的四环素类药物残留的检测方法有微生物法、薄层色谱法、高效液相测定法、高效液相色谱-串联质谱法、毛细管电泳、电化学分析、化学发光、酶联免疫法等，仪器检测方法对待测样品的前处理要求高，操作繁琐，需要精密仪器设备。免疫学方法具有快速、灵敏、特异性高等特点，是药品残留检测的有效方法之一。目前常采用酶联免疫检测试剂盒对大量样品进行四环素类药物残留的初筛，筛选阳性样品再用仪器方法进行进一步确证。
发明内容
本发明的目的是提供一种四环素半抗原及其制备方法。本发明提供的四环素半抗原分子结构式为:
O' C
权利要求
1.一种四环素半抗原，其特征在于分子结构式为:
2.一种制备权利要求1所述四环素半抗原的方法，其特征在于四环素半抗原是通过四环素与4-哌啶甲酸利用曼尼希反应，在四环素的酰胺的胺基上引入了 N-甲基-4-哌啶甲酸基团所得到的衍生物。
3.一种四环素类药物抗原，其是由权利要求1所述的四环素半抗原与载体蛋白偶联得至IJ，其特征在于分子结构式为:
4.如权利要求3所述的四环素类药物抗原，其制备方法包括如下步骤: 取四环素半抗原用二甲基甲酰胺(DMF)溶解，冷却至10°C，加入氯甲酸异丁酯，10°C搅拌反应30min，得到溶液A ;取偶联的载体蛋白用50mmol/L Na2CO3溶解，与溶液A混合，10°C反应4h，然后4°C过夜，得到溶液B ;溶液B用0.01mol/L磷酸盐缓冲溶液(PBS) 4°C透析3天，每天换3次透析液，以除去未反应的小分子物质，得到免疫原，分装，于-20°C保存备用。
取四环素半抗原溶解于DMF中；取碳化二亚胺(EDC)用0.2ml水充分溶解后加入上述溶液中，室温下搅拌24h，即可得到反应液A ;称取偶联的载体蛋白使之充分溶解在PBS (pH7.2)中，将反应液A逐滴缓慢滴加到蛋白溶液中，并于室温下搅拌24h，得到反应液B ;反应液B用0.01mol/L PBS 4°C透析3天,每天换3次透析液，以除去未反应的小分子物质,得到包被原，分装，于-20°C保存备用。
5.一种四环素类药物抗体，其是由四环素类药物免疫原免疫动物制备得到。
6.如权利要求5所述的抗体，其特征在于所述抗体为四环素类药物单克隆抗体。
7.一种由权利要求5-6任一项所述的抗体制备的四环素类药物酶联免疫试剂盒。
8.如权利要求7所述的四环素类药物酶联免疫试剂盒，其特征在于:四环素类药物为四环素、金霉素、土霉素、强力霉素、米诺环素、去甲金霉素、吡甲四环素。
9.一种四环素类药物酶联免疫试剂盒检测动物源性食品中四环素类药物残留的应用。
全文摘要
本发明公开了一种四环素半抗原及其制备方法和应用，具体涉及一种四环素半抗原，四环素半抗原是通过四环素与4-哌啶甲酸利用曼尼希反应，在四环素的酰胺的胺基上引入了N-甲基-4-哌啶甲酸基团所得到的衍生物。本发明还公开了所述半抗原的制备方法及其应用。基于四环素半抗原建立的试剂盒快速检测产品，能够同时快速检测动物源性食品中多种四环素类药物，使用方便、检测成本低、检测方法高效、准确、快速、可同时检测大批量的样本，适于动物源性食品中四环素类药物残留的现场监控和大量样本的筛查。
文档编号C07K14/765GK103102300SQ20111035649
公开日2013年5月15日 申请日期2011年11月11日 优先权日2011年11月11日
发明者何方洋, 冯才伟, 孙震, 吴鹏, 赵正苗, 陈炜玲, 刘琳 申请人:北京勤邦生物技术有限公司