专利名称：用于合成生长抑素的主要肽片段的制作方法
技术领域：
本发明提供一种短肽(肽片段)，具体地说，提供一种用于合成生长抑素的主要肽片段Boc-Ala-Gly-Cys (Trt) -Lys (Boc) -0H,以及该主要妝片段的合成方法和用途，属于多肽化合物制备方法技术领域。
背景技术：
多肽的化学合成的任务就是如何把各种氨基酸单位按照 目标多肽的氨基酸排列顺序和连接方式连接起来，一般分为固相合成和液相合成。固相合成通常是指连接在固相载体(如树脂等)上的活性官能团与溶解在有机溶剂中的试剂之间的反应，多肽的固相合成法是一种将肽链一端结合于固相载体上的方法，通过在N—末端逐步加上氨基酸的方法合成肽段，使肽链延长。液相合成法基于将单个N-α保护氨基酸反复加到生长的氨基成份上，合成在溶液相中一步步地进行，通常从合成链的C端氨基酸开始，接着的单个氨基酸的连接通过指定的偶联缩合方法实现。生长抑素是人下丘脑分泌的天然含14氨基酸的环肽物质，在体内起重要的生理调节作用，人工合成的生长抑素已在临床上有广泛的使用。生长抑素合成可采用液相和固相二种方法完成，制备重要片段肽是生长抑素化学合成的关键工作。一般情况，无论固相还是液相合成，均采用按照目标多肽氨基酸顺序逐步缩合延长肽链的方法来合成目标产物。如果将目标多肽中的部分氨基酸序列制成保护短肽片段，用于合成目标多肽，可以减少接入次数，提高收率，降低成本。Ala-Gly-Cys-Lys是多肽药物生长抑素氨基酸序列的I 4号序列片段，将其制成保护肽中间体用于生长抑素的合成，可以减少逐步缩合延长次数，一次缩合就能完成需要经过4次逐步缩合才能完成的肽链延长。CN200910131201. 4公开了一种十四肽生长抑素的制备方法，并公开了合成生长抑素的中间体短肽片段 Boc-Ala-Gly-Cys (Fmoc)-Lys (Boc)-Asn-OH ；CN200910142420. 2 公开了一种生长抑素的液相合成方法，并公开了用于生长抑素合成的短肽片段Boc-Ala-Gly-Cys (MeOBzl)-Lys(Z) -0H。专利CN200910131201. 4 中没有具体描述 Boc-Ala-Gly-Cys (Fmoc) -Lys (Boc) -Asn-OH的制备方法，而且最终反应时使用了氢溴酸，氢溴酸的腐蚀性、挥发性强，不易储存。专利 CN200910142420. 2 中具体描述了短肽片段 Boc-Ala-Gly-Cys (MeOBzl)-Lys (Z)-OH 的制备方法，该方法需低温反应，所得片段脱除保护基时需使用三氟甲磺酸，三氟甲磺酸具有强腐蚀性、强吸湿性且价格昂贵。氢溴酸、三氟甲磺酸在大量使用时均需特别注意环境和安全问题。
发明内容
本发明的目的是提供一种用于合成生长抑素的主要肽片段，以及该主要肽片段的合成方法和用途。方法简单易行，便于工业化生产。本发明技术方案如下
本发明提供一种用于合成生长抑素的主要肽片段，其为B0c-Ala-Gly-Cys(Trt)-Lys (Boc)-0H,结构式如下
权利要求
1.一种用于合成生长抑素的主要肽片段，其为
2.权利要求I所述的用于合成生长抑素的主要肽片段的合成方法，其特征在于包括如下步骤 (1)将Lys(Boc)-OX 或其盐与 Fmoc-Cys(Trt)-OH 反应得到Fmoc-Cys(Trt)-Lys(Boc)-OX ；(2)将Fmoc-Cys (Trt) -Lys (Boc) -OX 脱去 Fmoc 保护基得到 Cys (Trt) -Lys (Boc) -OX ；(3)将Cys (Trt) -Lys (Boc) -OX 与 Boc-Ala-Gly-OH 反应得到 Boc-Ala-Gly-Cys (Trt) -Lys (Boc) -OX ;将 Boc-Ala-Gly-Cys (Trt) -Lys (Boc) -OX 水解反应得到 Boc-Ala-Gly-Cys (Trt)-Lys(Boc)-OH ； 其中，所述的X为低级烷基、取代或者未取代的苯基。
3.根据权利要求2所述的方法，其中X为甲基或者苄基。
4.根据权利要求2或3所述的合成方法，其中所述的步骤⑴是将Lys(Boc)-OX或其盐溶解在有机溶剂中，与Fmoc-Cys(Trt)-OH在碱和缩合试剂存在下进行反应得到Fmoc-Cys (Trt) -Lys (Boc) -OX ;优选地，所述的有机溶剂选自二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺、乙酸乙酯、四氢呋喃、二氧六环中的一种或两种以上的混合；所述的碱选自N，N- 二异丙基乙胺(DIEA)、三乙胺、N-甲基吗啉中的一种或两种以上的混合；所述的缩合试剂选自N，N-二环己基碳二亚胺(DCC)、2_(7-氮杂-IH-苯并二氮唑-I-基)-1,1,3,3-四甲基服六氟磷酸酯(HATU)、苯并三氮唑-N，N，N’，N’ -四甲基脲六氟磷酸盐(HBTU)、0_苯并三氮唑-N，N，N’，N’ -四甲基脲四氟硼酸酯(TBTU)中的一种或两种以上的混合。
5.根据权利要求2或3所述的合成方法，其中所述的步骤⑵是将Fmoc-Cys (Trt) -Lys (Boc) -OX溶解在有机溶剂中，在脱帽试剂存在下进行脱帽反应脱去Fmoc保护基得到Cys(Trt)-Lys(B0c)-OX ;优选地，其中所述的有机溶剂选自二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺、乙酸乙酯、四氢呋喃、二氧六环中的一种或两种以上的混合；所述的脱帽试剂选自三甲胺、三乙胺中的一种或两种以上的混合。
6.根据权利要求2或3所述的合成方法，其中所述的步骤(3)是将Cys (Trt) -Lys (Boc) -OX溶解在有机溶剂中，与Boc-Ala-Gly-OH在碱和缩合试剂存在下进行反应得到B0c-Ala-Gly-Cys(Trt)-Lys(B0c)-OX ;优选地，所述的有机溶剂选自二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺、乙酸乙酯、四氢呋喃、二氧六环中的一种或两种以上的混合；所述的喊选自N, N-二异丙基乙胺(DIEA)、二乙胺、N-甲基吗啉中的一种或两种以上的混合；所述的缩合试剂选自N，N- 二环己基碳二亚胺(DCC)、2_ (7-氮杂-IH-苯并三氮唑_1_基)-I，.1，3，3_四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)、苯并三氮唑-N，N, N’，N’ -四甲基脲六氟磷酸盐(HBTU)、O-苯并三氮唑-N，N，N’，N’ -四甲基脲四氟硼酸酯(TBTU)中的一种或两种以上的混合。
7.根据权利要求6所述的合成方法，其中将生成的Boc-Ala-Gly-Cys (Trt) -Lys (Boc) -OX 水解反应得到 Boc-Ala-Gly-Cys (Trt) -Lys (Boc) -OH
8.根据权利要求7所述的合成方法，其中还包括将生成的Boc-Ala-Gly-Cys (Trt) -Lys (Boc) -OH 进行结晶得到 Boc-Ala-Gly-Cys (Trt) -Lys (Boc) -OH晶体的步骤；优选地，其中所述的结晶控制pH范围3 5，温度范围O 20°C，溶剂选自甲醇、乙醇中的一种或两种的混合。
9.根据权利要求2—8所述的合成方法，其中所述的Lys (Boc)-OX或其盐选自Lys (Boc) -OCH3> Lys (Boc) -OCH2C6H5' Lys (Boc) -OCH3 盐酸盐或 Lys (Boc) -OCH2C6H5 盐酸盐。
10.权利要求I所述的用于合成生长抑素的主要肽片段的用途，其特征在于用作生长抑素合成中间体，用于合成生长抑素。
全文摘要
本发明涉及一种短肽(肽片段)，具体地说，提供一种用于合成生长抑素的主要肽片段Boc-Ala-Gly-Cys(Trt)-Lys(Boc)-OH，以及该主要肽片段的合成方法和用途。采用上述生长抑素的主要肽片段制备生长抑素可有效提高接肽产率和缩短接肽时间，提高肽纯度，并且其可以同时适用于液相或固相二种方法合成生长抑素。本发明还提供保护肽Boc-Ala-Gly-Cys(Trt)-Lys(Boc)-OH的制备方法，该方法反应条件温和，试剂廉价易得，可避免使用氢化方法或避免使用昂贵及非环境友好的试剂，终产品可通过结晶方式获得，操作简便。
文档编号C07K7/08GK102875643SQ20121040701
公开日2013年1月16日 申请日期2012年10月24日 优先权日2012年10月24日
发明者孙永强, 钱明霞, 蒋伟, 冯晓辉, 屠永锐, 胡亚琴 申请人:常州市第四制药厂有限公司