专利名称：一种栗籽豆碱的制备方法
一种栗籽豆碱的制备方法技术领域
本发明属于天然产物分离领域，具体是涉及一种应用高速逆流色谱技术从大花补豆的干燥叶中分离纯化栗籽豆碱的方法。
背景技术：
栗杆豆喊(Castanospermine)是从豆科植物大花补豆^7(9X3 grandiflora Ducke的叶中分离得到的一种吲哚生物碱类活性成分。现代药理研究表明，栗籽豆碱能抑制α -葡萄糖甙1、II和改变大鼠糖原代谢；抑制HIV — I和HIV — 2的生长作用，抑制艾滋病毒在人体细胞内的繁殖，有望与AZT合用治疗艾滋病；抗病毒作用，对鼠白血病病毒的IC50为1.0 μ g/mL ;抑制肿瘤转移,对荷Lewis肺癌小鼠每天腹腔注射一次500mg/kg,在第18天平均抑制肿瘤重量25%和40%，平均抑制转移病灶49%和50% ;抗炎作用，大鼠口服60 65mg/(kg*d)，有抗关节炎作用；与环孢菌素合用于心脏移植，可降低环孢菌素的不良反应，延长心脏的存活期。
栗籽豆碱，mp.212-215°C，分子式为C8H15NO4，分子量为189.21，结构式为 9 OH
现有提取栗籽豆碱的报道并不多见，市场上也尚未有栗籽豆碱对照品的出售，因此提供一种栗籽豆碱的制备方法则很有必要，可以为其后续研究提供支持。发明内容
本发明的目的是提供一种栗籽豆碱的制备方法，该方法制得的栗籽豆碱质量好，纯度高。
为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案: 一种栗籽豆碱的制备方法，其特征在于包含以下步骤: (1)提取:将大花补豆的干燥叶粉碎，加入7-12倍药材重量的70-90%乙醇水溶液，空化混悬20-40min，进行负压空化混悬固液萃取1_2次，得到萃取液； (2)大孔树脂富集:萃取液回收乙醇得总生物碱浸膏，加入大孔树脂，拌匀、干燥后装柱，醇水溶液洗脱，收集栗籽豆碱流分，浓缩得栗籽豆碱粗品； (3)纯化:将上述粗品采用高速逆流色谱法分离纯化，以氯仿-甲醇-水为两相溶剂系统，ELSD检测器监测，收集目标流分，回收试剂，真空干燥得产品。
步骤(I)所述乙醇水溶液浓度为`，萃取2次。
步骤(2)所述萃取液浓缩至密度1.1-1.2g/ml。
步骤(2)所述大孔树脂为DlOl型，醇水溶液为85%的乙醇溶液。
步骤(3)所述氯仿-甲醇-水体积比为(5-9): (15-17): (6_8)。
本发明采用高速逆流色谱法纯化，与以往的技术手段相比有明显的优点:分离能力强、时间段、样品损失少，以及分离和纯化同步进行，实现了工业化目的。
下面将结合具体实施方式
进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
具体实施方式
: 实施例1: 取大花补豆的干燥叶1kg，粉碎成粗粉，与10kg75%的乙醇溶液混合后，空化混悬30min，进行负压空化混悬固液萃取2次，得到萃取液，浓缩至密度1.2g/ml，得总生物碱浸膏，向浸膏中加DlOl型大孔树脂拌匀、干燥后装柱，先用水洗至色浅，再用6倍柱体积的85%的乙醇溶液洗脱，薄层检测，收集目标流分，浓缩得粗品。
取氯仿-甲醇-水按(5:15:6)体积比置于分液漏斗中，混匀后，静置，放出上层作为固定相，下层作为流动相，将粗品用下相溶解，开启制备型高速逆流色谱仪，先将固定相泵入色谱柱中，再以4ml/min流速泵入流动相，并通过进样阀连续进样，控制转速为850r/min, ELSD检测器监测，收集流出液，浓缩，干燥得栗籽豆碱，检测含量96.4%。
实施例2: 取大花补豆的干燥叶2kg，粉碎成粗粉，与20kg75%的乙醇溶液混合后，空化混悬30min，进行负压空化混悬固液萃取2次，得到萃取液，浓缩至密度1.2g/ml，得总生物碱浸膏，向浸膏中加DlOl型大孔树脂拌匀、干燥后装柱，先用水洗至色浅，再用5倍柱体积的85%的乙醇溶液洗脱，薄层检测，收集目标流分，浓缩得粗品。
取氯仿-甲醇-水按(9:17:8)体积比置于分液漏斗中，混匀后，静置，放出上层作为固定相，下层作为流动相，将粗品用下相溶解，开启制备型高速逆流色谱仪，先将固定相泵入色谱柱中，再以3.5ml/min流速泵入流动相，并通过进样阀连续进样，控制转速为900r/min, ELSD检测器监测，收集流出液，浓缩，干燥得栗籽豆碱，检测含量97.2%。
实施例3: 取大花补豆的干燥叶2kg，粉碎成粗粉，与20kg75%的乙醇溶液混合后，空化混悬30min，进行负压空化混悬固液萃取2次，得到萃取液，浓缩至密度1.lg/ml，得总生物碱浸膏，向浸膏中加DlOl型大孔树脂拌匀、干燥后装柱，先用水洗至色浅，再用6倍柱体积的85%的乙醇溶液洗脱，薄层检测，收集目标流分，浓缩得粗品。
取氯仿-甲醇-水按(7:16:7)体积比置于分液漏斗中，混匀后，静置，放出上层作为固定相，下层作为流动相，将粗品用下相溶解，开启制备型高速逆流色谱仪，先将固定相泵入色谱柱中，再以4ml/min流速泵入流动相，并通过进样阀连续进样，控制转速为IOOOr/min, ELSD检测器监测，收集流出液，浓缩，干燥得栗籽豆碱，检测含量97.0%。
实施例4: 取大花补豆的干燥叶2kg，粉碎成粗粉，与20kg75%的乙醇溶液混合后，空化混悬30min，进行负压空化混悬固液萃取2次，得到萃 取液，浓缩至密度1.2g/ml，得总生物碱浸膏，向浸膏中加DlOl型大孔树脂拌匀、干燥后装柱，先用水洗至色浅，再用5倍柱体积的85%的乙醇溶液洗脱，薄层检测，收集目标流分，浓缩得粗品。
取氯仿-甲醇-水按(8:15:7)体积比置于分液漏斗中，混匀后，静置，放出上层作为固定相，下层作为流动相，将粗品用下相溶解，开启制备型高速逆流色谱仪，先将固定相泵入色谱柱中，再以3.5ml/min流速泵入流动相，并通过进样阀连续进样，控制转速为950r/min, ELSD检测器监测，收集流出 液，浓缩，干燥得栗籽豆碱，检测含量96.3%。
权利要求
1.一种栗籽豆碱的制备方法，其特征在于包含以下步骤: (1)提取:将大花补豆的干燥叶粉碎，加入7-12倍药材重量的70-90%乙醇水溶液，空化混悬20-40min，进行负压空化混悬固液萃取1_2次，得到萃取液； (2)大孔树脂富集:萃取液回收乙醇得总生物碱浸膏，加入大孔树脂，拌匀、干燥后装柱，醇水溶液洗脱，收集栗籽豆碱流分，浓缩得栗籽豆碱粗品； (3)纯化:将上述粗品采用高速逆流色谱法分离纯化，以氯仿-甲醇-水为两相溶剂系统，ELSD检测器监测，收集目标流分，回收试剂，真空干燥得产品。
2.如权利要求1所述的一种栗籽豆碱的制备方法，其特征在于步骤(I)所述乙醇水溶液浓度为75%，用量为10倍药材重量。
3.如权利要求1所述的一种栗籽豆碱的制备方法，其特征在于步骤(I)所述混悬时间为30min,萃取2次。
4.如权利要求1所述的一种栗籽豆碱的制备方法，其特征在于步骤(2)所述萃取液浓缩至密度1.l_1.2g/ml。
5.如权利要求1所述的一种栗籽豆碱的制备方法，其特征在于步骤(2)所述大孔树脂为DlOl型，醇水溶液为85%的乙醇溶液。
6.如权利要求1所述的一种栗籽豆碱的制备方法，其特征在于步骤(3)所述氯仿-甲醇-水体积比为(5-9): (15-17): (6-8)。
全文摘要
本发明提供一种栗籽豆碱的制备方法，其特征在于包含以下步骤(1)将大花补豆的干燥叶粉碎，加入乙醇水溶液，进行负压空化混悬固液萃取，得到萃取液，萃取液回收试剂得总生物碱浸膏；(2)总生物碱浸膏加入大孔树脂，拌匀、干燥后装柱，醇水溶液洗脱，收集栗籽豆碱流分，浓缩得栗籽豆碱粗品；(3)将上述粗品采用高速逆流色谱法分离纯化得栗籽豆碱。本方法具有所得产品含量高，操作简单，提率高等优点。
文档编号C07D471/04GK103232450SQ20131019589
公开日2013年8月7日 申请日期2013年5月24日 优先权日2013年5月24日
发明者苏刘花, 万冬梅 申请人:南京泽朗农业发展有限公司