专利名称：一种莲叶桐碱的制备方法
技术领域：
本发明属于天然药物提取技术领域，涉及一种莲叶桐碱的制备方法。
背景技术：
莲叶桐喊是莲叶桐科植物莲叶桐nymphaeifolia(Presl. ) Kubitzki的主要活性成分之一。莲叶桐具有行气止痛、行血去瘀，用于治疗气滞腹痛、癌性疼痛、瘀血症等，其主要化学成分为木脂素和生物碱类。莲叶桐碱属于阿朴啡类生物碱。CAS登录号为172924-21-9，分子式为C18H11NO4,分子量为305. 29。莲叶桐碱对P388、KB16、A_549和HT-29细胞株有显著细胞毒活性，其ED5tl分别为O. 539μ g/mL、0. 640μ g/mL、0. 684 μ g/mL和0. 474μ g/mL。开发简单实用、经济可行的莲叶桐碱的制备工艺，对确保该对照品的质量稳定和供应充足，确保莲叶桐药材、提取物、配方颗粒和含莲叶桐制剂的质量得到有效控制和合理评价具有重要意义。 目前未见有关自天然植物莲叶桐的茎叶中提取制备莲叶桐碱的方法报道和专利申请。
发明内容
本发明的目的是提供一种从莲叶桐茎叶中提取制备莲叶桐碱的方法。为实现上述目的，本发明采用以下技术方案
一种莲叶桐碱的制备方法，其特征在于包括以下步骤将莲叶桐茎叶粉碎，用60-90%乙醇加热回流提取，过滤，滤液合并浓缩得到提取物浸膏；将浸膏用O. 5%-1%的盐酸水溶液超声溶解分散，静置，离心，取上清液调PH至8-9，用乙酸乙酯萃取得到乙酸乙酯萃取物，将萃取物用氧化铝柱反复柱层析分离得到莲叶桐碱淡黄色棱晶。所述乙醇加入量为药材量的6-10倍，提取时间为1-3小时，过滤后，药渣再提取2-3次，合并提取液，减压浓缩至无醇味。所述盐酸水溶液加入量为浸膏量的2-4倍。所述氧化铝为200-300目碱性或中性氧化铝，将萃取物用甲醇溶解，然后按1:1-3拌入氧化铝，自然烘干，得到拌样氧化铝，将拌样氧化铝装于氧化铝柱顶，体积比为1-5:1的环己烷-丙酮混合溶剂为洗脱剂，分段收集，薄层色谱跟踪检识，合并含有莲叶桐碱的流分，减压浓缩后再次上柱层析，合并莲叶桐碱高浓度流分，自然析晶，得到淡黄色莲叶桐碱结晶。本发明采用乙酸乙酯萃取，毒性小，且较高速逆流色谱法操作简单，采用氧化铝柱分离，环己烷-丙酮混合溶剂洗脱，工艺简单易于放大生产。
具体实施例方式 下面将结合具体实施方式
进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。实施例I :将莲叶桐茎叶粉碎，取IOkg用8倍量的85%乙醇溶液回流提取4次，每次I. 5小时，合并4次提取液，70°C条件下减压回收试剂至无醇味，得到莲叶桐提取浸膏I. 2kg。将浸膏加4000mL0. 8%盐酸水溶液超声分散溶解，静置，离心，将上清液用lmol/L氢氧化钾溶液调pH至8. 0，用乙酸乙酯萃取至水层无生物碱成分，乙酸乙酯萃取液回收试剂得到乙酸乙酯萃取物。将乙酸乙酯萃取物用少量甲醇溶解，拌入等量碱性氧化铝(200-300目)，自然烘干得到拌样氧化铝，另取碱性氧化铝干法装柱，将拌样氧化铝装于柱顶，以环己烷-丙酮(3:1)混合溶剂为洗脱剂，分段收集，每份500ml，硅胶薄层层析跟踪检识，收集合并含有莲叶桐碱的流分，加压浓缩再与碱性氧化铝拌样上柱，以环己烷-丙酮(3:1)为洗脱剂洗脱，收集高浓度莲叶桐碱流分，减压浓缩，自然析晶，得到淡黄色莲叶桐碱棱晶。经HPLC检测其含量大于95%。实施例2:
将莲叶桐茎叶粉碎，取IOkg用6倍量的80%乙醇溶液回流提取2次，每次2. 5小时，合并2次提取液，70°C条件下减压回收试剂至无醇味，得到莲叶桐提取浸膏I. Ikgo将浸膏加2500mL0. 5%盐酸水溶液超声分散溶解，静置，离心，将上清液用lmol/L氢氧化钾溶液调pH至8. 5，用乙酸乙酯萃取至水层无生物碱成分，乙酸乙酯萃取液回收试剂得到乙酸乙酯萃取物。将乙酸乙酯萃取物用少量甲醇溶解，拌入3倍体积量的中性氧化铝(200-300目)，自然烘干得到拌样氧化铝，另取中性氧化铝干法装柱，将拌样氧化铝装于柱顶，以环己烷-丙酮(4:1)混合溶剂为洗脱剂，分段收集，每份500ml，硅胶薄层层析跟踪检识，收集合并含有莲叶桐碱的流分，加压浓缩再与中性氧化铝拌样上柱，以环己烷-丙酮(4:1)为洗脱剂洗脱，收集高浓度莲叶桐碱流分，减压浓缩，自然析晶，得到淡黄色莲叶桐碱棱晶。经HPLC检测其含量大于95%。实施例3:
将莲叶桐茎叶粉碎，取20kg用8倍量的85%乙醇溶液回流提取4次，每次I. O小时，合并4次提取液，70°C条件下减压回收试剂至无醇味，得到莲叶桐提取浸膏2. 5kg。将浸膏加7000mLl. 0%盐酸水溶液超声分散溶解，静置，离心，将上清液用lmol/L氢氧化钾溶液调pH至9. 0，用乙酸乙酯萃取至水层无生物碱成分，乙酸乙酯萃取液回收试剂得到乙酸乙酯萃取物。将乙酸乙酯萃取物用少量甲醇溶解，拌入2倍体积量的中性氧化铝(200-300目)，自然烘干得到拌样氧化铝，另取中性氧化铝干法装柱，将拌样氧化铝装于柱顶，以环己烷-丙酮(1:1)混合溶剂为洗脱剂，分段收集，每份500ml，硅胶薄层层析跟踪检识，收集合并含有莲叶桐碱的流分，加压浓缩再与中性氧化铝拌样上柱，以环己烷-丙酮(I: I)为洗脱剂洗脱，收集高浓度莲叶桐碱流分，减压浓缩，自然析晶，得到淡黄色莲叶桐碱棱晶。经HPLC检测其含量大于95%。实施例4:
将莲叶桐茎叶粉碎，取50kg用6倍量的90%乙醇溶液回流提取3次，每次3小时，合并3次提取液，70°C条件下减压回收试剂至无醇味，得到莲叶桐提取浸膏5kg。将浸膏加15L0. 6%盐酸水溶液超声分散溶解，静置，离心，将上清液用lmol/L氢氧化钾溶液调pH至
8.5，用乙酸乙酯萃取至水层无生物碱成分，乙酸乙酯萃取液回收试剂得到乙酸乙酯萃取物。将乙酸乙酯萃取物用少量甲醇溶解，拌入等量碱性氧化铝(200-300目)，自然烘干得到拌样氧化铝，另取碱性氧化铝干法装柱，将拌样氧化铝装于柱顶，以环己烷-丙酮(5:1)混合溶剂为洗脱剂，分段收集，每份500ml，硅胶薄层层析 跟踪检识，收集合并含有莲叶桐碱的流分，加压浓缩再与碱性氧化铝拌样上柱，以环己烷-丙酮(5:1)为洗脱剂洗脱，收集高浓度莲叶桐碱流分，减压浓缩，自然析晶，得到淡黄色莲叶桐碱棱晶。经HPLC检测其含量大于95%。
权利要求
1.一种莲叶桐碱的制备方法，其特征在于包括以下步骤将莲叶桐茎叶粉碎，用60-90%乙醇加热回流提取，过滤，滤液合并浓缩得到提取物浸膏；将浸膏用O. 5%-1%的盐酸水溶液超声溶解分散，静置，离心，取上清液调PH至8-9，用乙酸乙酯萃取得到乙酸乙酯萃取物，将萃取物用氧化铝柱反复柱层析分离得到莲叶桐碱淡黄色棱晶。
2.如权利要求I所述的一种莲叶桐碱的制备方法，其特征在于所述乙醇加入量为药材量的6-10倍，提取时间为1-3小时，过滤后，药渣再提取2-3次，合并提取液，减压浓缩至无醇味。
3.如权利要求I所述的一种莲叶桐碱的制备方法，其特征在于所述盐酸水溶液加入量为浸骨量的2-4倍。
4.如权利要求I所述的一种莲叶桐碱的制备方法，其特征在于所述氧化铝为200-300目碱性或中性氧化铝，将萃取物用甲醇溶解，然后按1:1-3拌入氧化铝，自然烘干，得到拌样氧化铝，将拌样氧化铝装于氧化铝柱顶，体积比为1-5:1的环己烷-丙酮混合溶剂为洗脱齐IJ，分段收集，薄层色谱跟踪检识，合并含有莲叶桐碱的流分，减压浓缩后再次上柱层析，合并莲叶桐碱高浓度流分，自然析晶，得到淡黄色莲叶桐碱结晶。
全文摘要
本发明属于天然药物化学领域，涉及一种莲叶桐碱的制备方法，方法包括以莲叶桐茎皮为原料，粉碎，用乙醇回流提取得浸膏，将浸膏用盐酸水溶液超声溶解，静置，取上清液调pH，然后用乙酸乙酯萃取得到乙酸乙酯萃取物，萃取物采用氧化铝柱层析分离得到莲叶桐碱淡黄色棱晶。经高效液相色谱法测定其纯度高于95%。
文档编号C07D491/06GK102838608SQ20121035013
公开日2012年12月26日 申请日期2012年9月20日 优先权日2012年9月20日
发明者刘东锋 申请人:南京泽朗医药科技有限公司