专利名称：一种马迪林碱的制备方法
技术领域：
本发明属于天然产物分离领域，具体是涉及一种应用高速逆流色谱技术从生马钱茎皮中分离纯化马迪林碱的方法。
背景技术：
马迪林碱(Sickingine)是从马钱科植物生马钱SizycAffo1S decussata (Pappe)Gilg.的茎皮中分离得到的一种咔啉生物碱类活性成分，呈淡黄色针晶，mp. 232-234°C。现代药理研究表明，马迪林碱具有肌肉松弛作用。在小鼠抓握筛选中，75mg/kg剂量腹腔注射时有肌松作用。对大鼠隔膜收缩振幅抑制50%的浓度为O. 15mg/ml。现有提取马迪林碱的报道并不多见，市场上也尚未有马迪林碱对照品的出售，因此提供一种马迪林碱的制备方法则很有必要，可以为其后续研究提供支持。
发明内容
本发明的目的是提供一种马迪林碱的制备方法，该方法制得的马迪林碱质量好，
纯度高。为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案
一种马迪林碱的制备方法，其特征在于包含以下步骤
Cl)提取将生马钱茎皮药材粉碎，加入7-12倍量的75-90%乙醇水溶液，空化混悬20-40min,进行负压空化混悬固液萃取1_2次,得到萃取液；
(2)除杂将上述萃取液浓缩至小体积，加入2-5倍量1%的盐酸水溶液溶解，过滤，再加入碱液将滤液调至PH9-10，加等体积量的二氯甲烷萃取，萃取液回收试剂得总生物碱浸膏；
(3)大孔树脂富集总生物碱浸膏加入大孔树脂，拌匀、干燥后装柱，醇水溶液洗脱，收集马迪林碱流分，浓缩得马迪林碱粗品；
(4)纯化将上述粗品采用高速逆流色谱法分离纯化，设定色谱仪转速为800-9001·/min,流速为2. 5-5. Oml/min,收集流分，回收试剂,真空干燥得产品。步骤(2)所述萃取液浓缩至密度I. 3-1. 5g/ml。步骤(2)所述碱性溶液为2-5mol/L的氨水溶液。步骤(3)所述大孔树脂为DlOl型，醇水溶液为85%的乙醇溶液。步骤(4)所述高速逆流色谱法采用的溶剂系统是二氯甲烷-甲醇-pH3. I磷酸盐缓冲液(5-9:15-17:6-8)。本发明的有益效果是采用高速逆流色谱法纯化，样品损失少，得率高。
具体实施例方式 下面将结合具体实施方式
进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。实施例I :取生马钱茎皮10kg，粉碎成粗粉，与70L 85%的乙醇溶液混合后，空化混悬30min，进行负压空化混悬固液萃取2次，得到萃取液，浓缩至密度I. 5g/ml，加入2倍量1%盐酸溶液溶解，滤除沉淀后，加入2mol/L氨水调至pH9. 5，用等量二氯甲烷萃取，萃取液回收试剂，得总生物碱浸膏，向浸膏中加DlOl型大孔树脂拌匀、干燥后装柱，先用水洗至色浅，再用6倍柱体积的85%的乙醇溶液洗脱，薄层检测，收集目标流分，浓缩得粗品。取氯仿-甲醇-pH3. I磷酸盐缓冲液按(5:15:6)体积比置于分液漏斗中，混匀后，静置，放出上层作为固定相，下层作为流动相，将总生物碱用下相溶解，开启制备型高速逆流色谱仪，先将固定相泵入色谱柱中，再以4ml/min流速泵入流动相，并通过进样阀连续进样，控制转速为800r/min，收集流出液，浓缩，干燥得马迪林碱，检测含量98. 4%。实施例2
取生马钱茎皮20kg，粉碎成粗粉，与240L 75%的乙醇溶液混合后，空化混悬40min，进行负压空化混悬固液萃取I次，得到萃取液，浓缩至密度I. 3g/ml，加入5倍量1%盐酸溶液 溶解，滤除沉淀后，加入5mol/L氨水调至pH9. 2，用等量二氯甲烷萃取，萃取液回收试剂，得总生物碱浸膏，向浸膏中加DlOl型大孔树脂拌匀、干燥后装柱，先用水洗至色浅，再用5倍柱体积的85%的乙醇溶液洗脱，薄层检测，收集目标流分，浓缩得粗品。取氯仿-甲醇-pH3. I磷酸盐缓冲液按(9:17:8)体积比置于分液漏斗中，混匀后，静置，放出上层作为固定相，下层作为流动相，将总生物碱用下相溶解，开启制备型高速逆流色谱仪，先将固定相泵入色谱柱中，再以3. 5ml/min流速泵入流动相，并通过进样阀连续进样，控制转速为900r/min，收集流出液，浓缩，干燥得马迪林碱，检测含量97. 2%。实施例3:
取生马钱茎皮20kg，粉碎成粗粉，与150L 85%的乙醇溶液混合后，空化混悬20min，进行负压空化混悬固液萃取2次，得到萃取液，浓缩至密度I. 4g/ml，加入4倍量1%盐酸溶液溶解，滤除沉淀后，加入2mol/L氨水调至pHIO，用等量二氯甲烷萃取，萃取液回收试剂，得总生物碱浸膏，向浸膏中加DlOl型大孔树脂拌匀、干燥后装柱，先用水洗至色浅，再用6倍柱体积的85%的乙醇溶液洗脱，薄层检测，收集目标流分，浓缩得粗品。取氯仿-甲醇-pH3. I磷酸盐缓冲液按(7:16:7)体积比置于分液漏斗中，混匀后，静置，放出上层作为固定相，下层作为流动相，将总生物碱用下相溶解，开启制备型高速逆流色谱仪，先将固定相泵入色谱柱中，再以5ml/min流速泵入流动相，并通过进样阀连续进样，控制转速为900r/min，收集流出液，浓缩，干燥得马迪林碱，检测含量97. 7%。实施例4:
取生马钱茎皮20kg，粉碎成粗粉，与200L90%的乙醇溶液混合后，空化混悬35min，进行负压空化混悬固液萃取I次，得到萃取液，浓缩至密度I. 5g/ml，加入3倍量1%盐酸溶液溶解，滤除沉淀后，加入2mol/L氨水调至pH9，用等量二氯甲烷萃取，萃取液回收试剂，得总生物碱浸膏，向浸膏中加DlOl型大孔树脂拌匀、干燥后装柱，先用水洗至色浅，再用5倍柱体积的85%的乙醇溶液洗脱，薄层检测，收集目标流分，浓缩得粗品。取氯仿-甲醇-pH3. I磷酸盐缓冲液按(8:15:7)体积比置于分液漏斗中，混匀后，静置，放出上层作为固定相，下层作为流动相，将总生物碱用下相溶解，开启制备型高速逆流色谱仪，先将固定相泵入色谱柱中，再以2. 5ml/min流速泵入流动相，并通过进样阀连续进样，控制转速为850r/min，收集流出液，浓缩，干燥得马迪林碱，检测含量98. 3%。
权利要求
1.一种马迪林碱的制备方法，其特征在于包含以下步骤 (1)提取将生马钱茎皮药材粉碎，加入7-12倍量的75-90%乙醇水溶液，空化混悬20-40min,进行负压空化混悬固液萃取1_2次,得到萃取液； (2)除杂将上述萃取液浓缩至小体积，加入2-5倍量1%的盐酸水溶液溶解，过滤，再加入碱液将滤液调至PH9-10，加等体积量的二氯甲烷萃取，萃取液回收试剂得总生物碱浸膏； (3)大孔树脂富集总生物碱浸膏加入大孔树脂，拌匀、干燥后装柱，醇水溶液洗脱，收集马迪林碱流分，浓缩得马迪林碱粗品； (4)纯化将上述粗品采用高速逆流色谱法分离纯化，设定色谱仪转速为800-9001·/min,流速为2. 5-5. Oml/min,收集流分，回收试剂,真空干燥得产品。
2.如权利要求I所述的一种马迪林碱的制备方法，其特征在于步骤(2)所述萃取液浓缩至密度I. 3-1. 5g/mL·
3.如权利要求I所述的一种马迪林碱的制备方法，其特征在于步骤(2)所述碱性溶液为2-5mol/L的氨水溶液。
4.如权利要求I所述的一种马迪林碱的制备方法，其特征在于步骤(3)所述大孔树脂为DlOl型，醇水溶液为85%的乙醇溶液。
5.如权利要求I所述的一种马迪林碱的制备方法，其特征在于步骤(4)所述高速逆流色谱法采用的溶剂系统是二氯甲烷-甲醇-PH3. I磷酸盐缓冲液(5-9:15-17:6-8)。
全文摘要
本发明提供一种马迪林碱的制备方法，其特征在于包含以下步骤(1)将生马钱茎皮药材粉碎，加入乙醇水溶液，进行负压空化混悬固液萃取，得到萃取液；(2)萃取液浓缩至小体积，加酸水溶解，滤除不溶物，滤液调至碱性，用二氯甲烷萃取，萃取液回收试剂得总生物碱浸膏；(3)总生物碱浸膏加入大孔树脂，拌匀、干燥后装柱，醇水溶液洗脱，收集马迪林碱流分，浓缩得马迪林碱粗品；(4)将上述粗品采用高速逆流色谱法分离纯化得马迪林碱。本方法具有所得产品含量高，操作简单，提率高等优点。
文档编号C07H1/08GK102816161SQ201210371190
公开日2012年12月12日 申请日期2012年9月29日 优先权日2012年9月29日
发明者刘东锋, 万冬梅 申请人:南京泽朗医药科技有限公司