居泉沙雷菌多克隆抗血清、制备方法及其在检测沙门氏菌中的应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种居泉沙雷菌多克隆抗血清及其制备方法以及在检测沙门氏菌中的应用，包括下列步骤：（1）居泉沙雷菌免疫抗原的制备；（2）抗原接种；（3）多克隆抗血清的采集；居泉沙雷菌多克隆抗血清在检测沙门氏菌中的应用包括含有居泉沙雷菌多克隆抗血清的沙门氏菌选择性增菌培养基及其沙门氏菌方法。本发明的多克隆抗血清可降低甚至完全抑制增菌液中居泉沙雷菌的数量，从而消除因居泉沙雷菌的存在而给沙门氏菌的检测带来的干扰，最终提高沙门氏菌分离鉴定的准确性，适用于现行的包括前增菌和选择性增菌步骤的沙门氏菌检测标准。该方法具有操作简单、结果准确可靠等优点。
【专利说明】居泉沙雷菌多克隆抗血清、制备方法及其在检测沙门氏菌中的应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种居泉沙雷菌多克隆抗血清、制备方法及其在检测沙门氏菌中的应用，属于沙门氏菌检测【技术领域】。
【背景技术】
[0002]沙门氏菌是当前公共卫生上重要的肠道致病菌之一，同时也是引起动物肠道传染病的致病菌之一。目前对于沙门氏菌的检测方法多使用常规的细菌分离鉴定，即先采用非选择性增菌、选择性增菌、分离和鉴定等步骤。通常在分离过程中会出现干扰菌，居泉沙雷菌即是其中之一，而且出现的几率较大。居泉沙雷菌的出现会降低沙门氏菌分离鉴定的准确性，因此，如果能够抑制增菌过程中居泉沙雷菌的生长，则能够明细提高沙门氏菌分离鉴定的准确性。
【发明内容】
[0003]为了抑制居泉沙雷菌的存在而给沙门氏菌的检测带来的干扰，最终提高沙门氏菌分离鉴定的准确性；本发明所要解决的技术问题提供一种改进的沙门氏菌的检测方法，同时提供居泉沙雷菌的多克隆抗血清及其制备方法，并提供一种含有居泉沙雷菌多克隆抗血清的沙门氏菌选择性增菌培养基。
[0004]特异性抗血清可在体外特异性地对相应的目标微生物进行抑制并杀灭，该发明即利用该原理展开的沙门氏菌检测技术的改进。
[0005]通过对临床145份样品的应用结果显示，该方法可提高沙门氏菌分离鉴定的准确性达79%，明显降低了沙门氏菌的假阳性率。同时，所制备的多克隆抗血清对临床上常见的26种沙门氏菌没有抑制作用，结果显示，该方法可应用于沙门氏菌的分离鉴定。具体结果见下表:
【权利要求】
1.一种居泉沙雷菌多克隆抗血清的制备方法，其特征在于，包括下列步骤: (1)居泉沙雷囷免疫抗原的制备 将居泉沙雷菌接种于营养琼脂，37°c，12h，刮取菌苔于0.85%的生理盐水中，加入终浓度为2%(v/v)的甲醛，感作37°C，24h，接甲醛感作的培养物接种营养琼脂进行无菌检测，确定甲醛感作的培养物无活菌的情况后，测定培养物蛋白浓度，应确保培养物的蛋白浓度大于2mg/mL，符合上述条件的情况下，以其为抗原； (2)抗原接种 免疫接种新西兰大白兔，首免的接种剂量为2mg/只，第二次免疫于首免后7天进行，剂量同首免；第三次免疫于第二次免疫后14天进行,剂量为首免的一半；第三次免疫后，采血测定居泉沙雷菌抗血清的效价，抗血清效价不低于1:256时，采血； (3)多克隆抗血清的采集 采集的血液先在室温放置30min，血液自然凝固后，放于37°C，12h，使血清析出，然后将其放于4°C，lh，使血凝块收缩，以易于分离血清，随后将血清无菌分离到灭菌的离心管中，所制备的血清可直接应用于沙门氏菌检测。
2.利用权利要求1所述的方法制备的居泉沙雷菌多克隆抗血清。
3.一种含有居泉沙雷菌多克隆抗血清的沙门氏菌选择性增菌培养基。
4.一种检测沙门氏菌方法，其特征在于，包括下列步骤: (1)待检样品的前增菌` 取25g待检样品无菌加入到225mL的灭菌缓冲蛋白胨水，37°C，12h ； (2)选择性增菌 向灭菌的沙门氏菌选择性增菌培养基加入IOmL样品的增菌液，随后加入ImL居泉沙雷菌多克隆抗血清，37°C，培养12h ； (3)选择性分离 将培养后的选择性液接种于胆硫乳琼脂(DHL)和酚红黄绿琼脂，37°C，12h ； (4)可疑菌的纯培养 从选择性培养基上挑选可疑的沙门氏菌菌落，接种于营养琼脂，37°C，12h ； (5)可疑菌的鉴定 对于纯培养的培养物，进行生化鉴定或血清学鉴定； (6)结果判定。
【文档编号】C07K16/06GK103626868SQ201310630974
【公开日】2014年3月12日 申请日期:2013年12月2日 优先权日:2013年12月2日
【发明者】肖西志, 孙敏, 吴振兴, 陈煜 , 邓明俊, 林超, 吴信海, 房保海, 谭乐义, 朱来华 申请人:山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心