人胰岛淀粉样多肽类似物的制作方法
【专利摘要】本发明涉及包含是人胰岛淀粉样多肽的类似物的氨基酸序列的多肽、包含这些多肽的药物组合物和用作药物的这些多肽。
【专利说明】人膜岛淀粉样多化类似物 发明领域
[000。 本发明涉及包含是SEQ ID NO: 1 (人膜岛淀粉样多肤（amylin))的类似物的氨 基酸序列的多肤、包含该些多肤的药物组合物和用作药物的该些多肤。
[0002] 发明背景 为数众多且日益增加的人患有糖尿病和服胖症。糖尿病是一种代谢障碍，其中利用葡 萄糖的能力部分丧失或完全丧失。
[0003] 许多治疗方案将目标定在过量的血糖上，而其他方案则主要集中在体重减轻上。 用于降低血糖的最有效的抗糖尿病药是膜岛素及其类似物。长期W来就已知当用传统的膜 岛素来治疗糖尿病时，伴发体重的增加。膜岛素不得不每天皮下注射多达若干次。
[0004] 早期的2型糖尿病一般通过饮食和锻炼来治疗。随着病情的发展，加入各种口服 的抗糖尿病药。在此阶段也可使用例如GLP-1类似物的注射剂。一般来说，该些药剂在具 有能够释放膜岛素和膜岛淀粉样多肤的功能性目细胞的患者中最有效。
[0005] 人膜岛淀粉样多肤是37个氨基酸长的多肤，它所具有的物理化学性质使其难W 作为药物使用。特别是它在体外和/或离体（ex-vivo)情况下具有原纤维形成的趋势，即形 成原纤维，并且由于沉淀而失效。另外膜岛淀粉样多肤难W配制，因为它是化学不稳定的， 并且在生理抑下沉淀。因此，其在酸性溶液中配制。
[0006] 人膜岛淀粉样多肤与两种截然不同的受体复合物结合。该两种复合物含有降巧素 受体加受体活性修饰蛋白，RAMP1或RAMP3。根据降巧素受体和膜岛淀粉样多肤受体之间的 密切关系，可预期膜岛淀粉样多肤受体激动剂与降巧素受体的某种交叉反应性。作为实例， 普兰林肤对降巧素受体具有某种亲和力，但对膜岛淀粉样多肤受体的效力是对降巧素受体 的14倍。
[0007] 普兰林肤是一种由Amylin化armaceuticals W Symlin?销售的药物产品，作为膜 岛素的辅助药物用于治疗糖尿病。普兰林肤是一种膜岛淀粉样多肤受体激动剂。对降巧素 受体的活性是对膜岛淀粉样多肤受体的大约1/14。
[0008] 普兰林肤的化学结构见下，另见图5。 r--S-'， r於 -K-N.-.、-厂N T A T-N'-、广* T 日 RLAHFL 巧 HSSHHFESP I L P P T N H B S H 叫 H 曰 H 曰 H 白
[0009] 普兰林肤在中性抑下是化学不稳定的，因此，在酸性溶液中提供。与人膜岛淀粉 样多肤相比，普兰林肤25、28和29位上的氨基酸被脯氨酸取代。该种修饰降低蛋白质的原 纤维形成趋势。普兰林肤具有非常短的血浆半寿期，因此，不得不每天注射2-3次。
[0010] W0 2010/046357公开了包含具有白蛋白结合部分的人膜岛淀粉样多肤类似物的 多肤。W0 2009/034119也公开了包含具有白蛋白结合部分的人膜岛淀粉样多肤类似物的多 肤。虽然与普兰林肤相比，该些具有白蛋白结合部分的多肤显示改进的药代动力学（PK)或 药效学（PD)性质，但是它们在某些情况下仍显示物理稳定性差。另外，所述多肤一般不显 示对膜岛淀粉样多肤受体相对于降巧素受体的选择性。
[0011] 降巧素受体存在于整个机体的许多组织中，被认为参与骨代谢的调节。然而，除骨 调节w外，有关人体中降巧素受体的生理学所知极少。因此认为与降巧素活性相比，对膜岛 淀粉样多肤受体的选择性增加的基于膜岛淀粉样多肤的多肤可提供有利的药代动力学和 药理学性质。
[001引发明概述 出乎意料地发现，包含是SEQ ID No: 1 (人膜岛淀粉样多肤）的类似物（其中21位 的氨基酸残基是脯氨酸）的氨基酸的多肤可显示相对于降巧素受体对膜岛淀粉样多肤受 体的选择性提高。
[0013] 至少在一些实施方案中，与降巧素活性相比，本发明的多肤对膜岛淀粉样多肤受 体的选择性提高。
[0014] 至少在一些实施方案中，本发明的多肤显示有利的药代动力学性质和/或有利的 药理学性质。有利的药代动力学性质的一个实例是长效性质。
[0015] 在一个宽泛的实施方案中，本发明涉及包含是SEQ ID No: 1的类似物的氨基酸序 列的多肤，其中所述类似物包含21位的脯氨酸残基，其中类似物的氨基酸序列编号对应于 SEQ ID No: 1的氨基酸编号序列。任选在人膜岛淀粉样多肤受体结合测定法（例如本文公 开的结合测定法）中多肤的ICw为约1200PM或更小。任选所述多肤具有与其氨基酸残基 的至少一个连接的至少一个取代基。本发明还涉及包含所述多肤的药物制剂。本发明还涉 及所述多肤的药物用途。本发明还涉及将所述多肤递送至（例如给予）需要所述多肤治疗 的患者。
[0016] 在另一个宽泛的实施方案中，本发明涉及包含是SEQ ID No: 1的类似物的氨基酸 序列的多肤，其中所述类似物包含21位的脯氨酸残基和27位的脯氨酸残基，其中类似物的 氨基酸序列编号对应于SEQ ID No: 1的氨基酸编号序列。任选在人膜岛淀粉样多肤受体 结合测定法（例如本文公开的结合测定法）中多肤的ICw为约1200pM或更小。任选所述 多肤具有与其氨基酸残基的至少一个连接的至少一个取代基。本发明还涉及包含所述多肤 的药物制剂。本发明还涉及所述多肤的药物用途。本发明还涉及将所述多肤递送至（例如 给予）需要所述多肤治疗的患者。
[0017] 在另一个宽泛的实施方案中，本发明涉及包含是SEQ ID No: 1的类似物的氨基酸 序列的多肤，其中所述类似物包含21位的脯氨酸残基、27位的脯氨酸残基和17位的精氨酸 残基，其中类似物的氨基酸序列编号对应于SEQ ID No: 1的氨基酸编号序列。任选在人膜 岛淀粉样多肤受体结合测定法（例如本文公开的结合测定法）中多肤的ICw为约1200PM 或更小。任选所述多肤具有与其氨基酸残基的至少一个连接的至少一个取代基。本发明还 涉及包含所述多肤的药物制剂。本发明还涉及所述多肤的药物用途。本发明还涉及将所述 多肤递送至（例如给予）需要所述多肤治疗的患者。
[0018] 在另一个宽泛的实施方案中，本发明涉及包含是SEQ ID No: 1的类似物的氨基酸 序列的多肤，其中所述类似物包含21位的脯氨酸残基、27位的脯氨酸残基、17位的精氨酸 残基和14位的天冬氨酸残基，其中类似物的氨基酸序列编号对应于SEQ ID No: 1的氨基 酸编号序列。任选在人膜岛淀粉样多肤受体结合测定法（例如本文公开的结合测定法）中 多肤的ICw为约1200PM或更小。任选所述多肤具有与其氨基酸残基的至少一个连接的至 少一个取代基。本发明还涉及包含所述多肤的药物制剂。本发明还涉及所述多肤的药物用 途。本发明还涉及将所述多肤递送至（例如给予）需要所述多肤治疗的患者。
[0019] 在另一个宽泛的实施方案中，本发明涉及包含是SEQ ID No: 1的类似物的氨基 酸序列的多肤，其中所述类似物包含21位的脯氨酸残基、27位的脯氨酸残基、17位的精氨 酸残基、14位的天冬氨酸残基和35位的精氨酸残基，其中类似物的氨基酸序列编号对应于 SEQ ID No: 1的氨基酸编号序列。任选在人膜岛淀粉样多肤受体结合测定法（例如本文公 开的结合测定法）中多肤的IQ。为约1200PM或更小。任选所述多肤具有与其氨基酸残基 的至少一个连接的至少一个取代基。本发明还涉及包含所述多肤的药物制剂。本发明还涉 及所述多肤的药物用途。本发明还涉及将所述多肤递送至（例如给予）需要所述多肤治疗 的患者。
[0020] 在另一个宽泛的实施方案中，本发明涉及包含是下式（I)的SEQ ID No: 1的类似 物的氨基酸序列的多肤： (I) Xaai-Cys-Asn-Thr-Ala-Thr-Cys-Ala-Thr-Gln-Arg-Leu-Ala-Xaa"-Phe-Leu-Xaai7 - His-Ser-Ser-Xaa2i-Asn-Phe-Gly-Xaa25 - Xaa26-Xaa27 - Xaa28-Xaa29 - Thr-Xaasi-Val-Gly-X过过34一X过过3日-Thr-X过过37 ; 其中 Xaai 独立选自 Ala、切S、Glu、Gly、His、Arg、Ser 和 Lys ; Xaai4 独立选自 Asp、Glu、His、Asn、Arg、Gly、Ala、Ser、Lys、T虹和切s ; Xaai7独立选自Arg和Val ; Xaa2i 为 Pro ; Xaa]日独立选自Pro和Ala ; Xaa2e独立选自Pro和lie ; Xaa27独立选自Pro和Leu ; Xaa28独立选自Pro和Ser ; Xaagg独立选自Pro和Ser ; Xaasi独立选自Pro和Asn ; Xaa34 独立选自 Pro、His、Lys、Arg 和 Ser ; Xaa]日独立选自 Asp、Arg、Glu、Lys、His 和 Asn ; Xaa37独立选自Pro和Tyr ; 且其中C端可任选被衍生化。
[0021] 本发明还涉及包含所述多肤的药物制剂。本发明还涉及所述多肤的药物用途。本 发明还涉及将所述多肤递送至（例如给予）需要所述多肤治疗的患者。
[0022] 在一个实施方案中，本发明涉及包含是SEQ ID No: 1的类似物的氨基酸序列的多 肤，其中： (a)所述类似物包含21位的脯氨酸残基； 其中类似物的氨基酸序列编号对应于SEQ ID No: 1的氨基酸编号序列； 任选其中化）在人膜岛淀粉样多肤受体结合测定法中多肤的ICg。为约1200PM或更小； 任选其中多肤具有与其氨基酸残基的至少一个连接的至少一个取代基。
[0023] 在一个实施方案中，本发明涉及包含是SEQ ID No: 1的类似物的氨基酸序列的多 肤，其中： (a)所述类似物包含21位的脯氨酸残基；和 (b)在人膜岛淀粉样多肤受体结合测定法中所述多肤的ICg。为约1200pM或更小； 其中类似物的氨基酸序列编号对应于SEQ ID No: 1的氨基酸编号序列。
[0024] 在一个实施方案中，本发明涉及包含是SEQ ID No: 1的类似物的氨基酸序列的多 肤，其中： (a)所述类似物包含21位的脯氨酸残基， 其中类似物的氨基酸序列编号对应于SEQ ID No: 1的氨基酸编号序列；和 其中多肤具有与其氨基酸残基的至少一个连接的至少一个取代基。
[00巧]在一个实施方案中，本发明涉及包含是SEQ ID No: 1的类似物的氨基酸序列的多 肤，其中： (a)所述类似物包含21位的脯氨酸残基；和 化）在人膜岛淀粉样多肤受体结合测定法中所述多肤的ICg。为约1200PM或更小； 其中类似物的氨基酸序列编号对应于SEQ ID No: 1的氨基酸编号序列；和 其中多肤具有与其氨基酸残基的至少一个连接的至少一个取代基。
[0026] 在另一个实施方案中，本发明还包含含有上述多肤的药物组合物。
[0027] 在另一个实施方案中，本发明还包含用于制备包含上述多肤的药物组合物的方 法。
[0028] 在另一个实施方案中，本发明还包含用作药物的上述多肤。
[0029] 本发明的多肤是有利的，因为它们对膜岛淀粉样多肤受体的选择性提高。
[0030] 本文描述了测定ICg。的合适的人膜岛淀粉样多肤受体结合测定法。例如参见测定 法（V)。
[003。 另外，图1表示所述多肤的数据。在图1所述化合物表中，术语"序列修饰"意指 相对于人膜岛淀粉样多肤的修饰。
[0032] 总的来说，图6-16表示娃鱼降巧素对膜岛淀粉样多肤受体和降巧素受体具有相 当的结合亲和力。因此，娃鱼降巧素当给予大鼠（剂量30 nmol/kg)时，介导血浆巧降低 (低于1. 7 ml)和食物摄取减少两者。该与本发明的多肤大不相同，本发明的多肤是改进的 膜岛淀粉样多肤选择性化合物，并且在仅最小降低血浆巧的同时能够减少食物摄取（参见 图 6-16)。
[0033] 在各表和图1中；术语"醜化部位"意指白蛋白结合部分或接头与多肤的连接位 点；术语"N端"意指与多肤序列N端氨基酸的a氨基连接；术语"1K"意指它与序列1位的 赖氨酸的￡氨基连接；术语"2化"意指与多肤序列21位赖氨酸的e氨基连接；术语化" 意指与-1位（即邻接1位）的赖氨酸的e氨基连接；术语"序列修饰"意指相对于人膜岛 淀粉样多肤的修饰。
[0034] 附图简述 图1/16表示本发明的一系列多肤的表格。
[00巧]图2/16表示结构。
[0036] 图3/16表示结构。
[0037] 图4/16表示结构。
[0038] 图5/16表示结构。
[0039] 图6/16单次皮下给予实施例化合物对大鼠的血浆巧（测定法XI)的作用，在注射 溶媒或实施例86化合物后48小时内监测食物摄取。本发明的化合物减少大鼠的食物摄取， 溶媒则不减少。
[0040] 图7/16单次皮下给予实施例化合物对大鼠的血浆巧（测定法XI)的作用，在注射 溶媒或实施例89或实施例106化合物后48小时内监测食物摄取。本发明的化合物减少大 鼠的食物摄取，溶媒则不减少。
[0041] 图8/16单次皮下给予实施例化合物对大鼠的血浆巧（测定法XI)、对大鼠的食物 摄取的作用，在注射溶媒或实施例109后48小时内监测食物摄取。本发明的化合物减少大 鼠的食物摄取，溶媒则不减少。
[0042] 图9/16单次皮下给予实施例化合物对大鼠的血浆巧（测定法XI)、对大鼠的食物 摄取的作用，在注射溶媒或实施例52后48小时内监测食物摄取。本发明的化合物减少大 鼠的食物摄取，溶媒则不减少。
[0043] 图10/16单次皮下给予实施例化合物对大鼠的血浆巧（测定法XI)、对大鼠的食物 摄取的作用，在注射后溶媒或实施例110或实施例117化合物后48小时内监测食物摄取。 本发明的化合物减少大鼠的食物摄取，溶媒则不减少。
[0044] 图11/16单次皮下给予实施例化合物对大鼠的血浆巧（测定法XI)、对大鼠的食物 摄取的作用，在注射溶媒或娃鱼降巧素后48小时内监测食物摄取。降巧素减少大鼠的食物 摄取，溶媒则不减少。
[0045] 图12/16单次皮下给予实施例化合物对大鼠的血浆巧的作用（测定法XII)，在注 射溶媒或3种不同剂量的娃鱼降巧素后24小时内监测巧水平。相对于溶媒巧水平，3nmol/ kg降巧素抑制巧水平与30nmol/kg和300nmol/kg降巧素一样有效。
[0046] 图13/16单次皮下给予实施例化合物对大鼠的血浆巧的作用（测定法XII)，在注 射溶媒或递增剂量的实施例86化合物后24小时监测巧水平。相对于溶媒巧水平，所述剂 量无一引发巧水平的显著抑制。
[0047] 图14/16单次皮下给予实施例化合物对大鼠血浆巧的作用（测定法XII)，在注射 溶媒或递增剂量的实施例109化合物或lOOnmol/kg的实施例2化合物后24小时内监测巧 水平。在3nmol/kg下，相对于溶媒巧水平，实施例109化合物不引发巧水平的显著抑制。在 30 nmol/kg下，相对于溶媒巧水平，实施例109化合物注射引起巧水平少量抑制，但不如相 同浓度下的降巧素有效（参见图7/11)。在100和300 nmol/kg下，相对于溶媒巧水平，实 施例109化合物引起更显著的巧水平抑制，该与用3 nmol/kg的降巧素观察到的巧水平抑 制相当。相对于溶媒巧水平，100 nmol/kg实施例2化合物不引发巧水平的显著抑制。
[0048] 图15/16单次皮下给予实施例化合物对大鼠的血浆巧的作用（测定法XII)，在注 射溶媒或30 nmol/kg实施例51、89、110或117化合物或10(K)nmol/kg实施例89化合物后 24小时内监测巧水平。相对于溶媒巧水平，在30 nmol/kg下的实施例化合物无一引起巧水 平的显著抑制。相对于溶媒巧水平，lOOOnmol/kg实施例89化合物引起更显著的巧水平抑 巧||，该与用3 nmol/kg的降巧素观察到的巧水平抑制相当。
[0049] 图16/16单次皮下给予实施例化合物对大鼠和血浆巧的作用（测定法XII)，在注 射溶媒或递增剂量的实施例52化合物后24小时内监测巧水平。相对于溶媒巧水平，所述 剂量无一引发巧水平的显著抑制。
[0050] 定义 本文所用术语"人膜岛淀粉样多肤"涉及具有SEQ ID No 1所述序列的多肤人膜岛淀粉 样多肤。该术语包括但不限于称为膜岛淀粉样多肤的37个氨基酸的人多肤激素，实际上， 它与膜岛素一起从膜腺的目-细胞中共同分泌。人膜岛淀粉样多肤具有下列一级氨基酸序 列： Lys-Cys-Asn-Thr-Ala-Thr-Cys-Ala-Thr-Gln-Arg-Leu-Ala-Asn-Phe-Leu-Val-His-Ser-Ser-Asn-Asn-Phe-Gly-Ala-Ile-Leu-Ser-Ser-Thr-Asn-Val-Gly-Ser-Asn-Thr-Tyr (S EQ ID NO: 1) 人膜岛淀粉样多肤具有在2个切s残基之间的二硫桥和C端醜胺。该结构见下，另见 图2。 H 0 H 0 H-K.N^_/nTAT.N.^ILaTQRLANFLVHSSNNFGA, LSSTNVOSNTY-NH, 、-s'
[0051] 在本文，SEQ ID No: 1和人膜岛淀粉样多肤可互换使用。
[0052] 本文所用术语"膜岛淀粉样多肤肤"、"膜岛淀粉样多肤多肤"或"膜岛淀粉样多肤 蛋白"是指人膜岛淀粉样多肤、膜岛淀粉样多肤类似物和/或膜岛淀粉样多肤衍生物。本文 所用术语"肤"、"多肤"或"蛋白质"是指膜岛淀粉样多化除非有不同的说明。
[0053] 本文所用术语"膜岛淀粉样多肤的类似物"或"膜岛淀粉样多肤类似物"是指SEQ ID : 1的变体。
[0054] 例如，所述变体包括但不限于将任一个氨基酸残基进行一个或多个置换和/或一 个或多个缺失和/或一个或多个添加为任何天然或非天然氨基酸、合成氨基酸或肤模拟物 (peptidomimetics)，和/或取代基在任何可用位置与天然或非天然氨基酸、合成氨基酸或 肤模拟物的任一个连接。在上文定义的膜岛淀粉样多肤类似物或肤中，在取代基在任何可 用位置与天然或非天然氨基酸、合成氨基酸或肤模拟物的任一个连接的情况下，所得膜岛 淀粉样多肤多肤在本文亦可称为"膜岛淀粉样多肤衍生物"、"本发明的衍生物"、"膜岛淀粉 样多肤的衍生物"或"肤的衍生物"。
[0055] 变体可具有与人膜岛淀粉样多肤相同的氨基酸残基数（即37个）。或者，变体可 包含比人膜岛淀粉样多肤少的氨基酸残基。或者，变体可包含比人膜岛淀粉样多肤多的氨 基酸残基。在一些实施方案中，变体具有与人膜岛淀粉样多肤相同的氨基酸残基数（即37 个）。在一些实施方案中，变体包括置换任一个氨基酸残基为任何天然或非天然氨基酸、合 成氨基酸或肤模拟物，和/或取代基在任何可用位置与天然或非天然氨基酸、合成氨基酸 或肤模拟物的任一个连接。
[0056] 如果类似物含有多于37个氨基酸残基或小于37个氨基酸残基，则技术人员仍可 将该序列与人膜岛淀粉样多肤（SEQ ID No. 1)的序列比对W确定相应的各个氨基酸残基 的位置数。合适的比对程序为"needle",其是Needleman-Wunsch比对。该比对程序的算 法描述于 Needleman，S.B.和 Wunsch，C.D.，（1970) Journal of Molecular Biology, 48: 443-453。
[0057] 所述多肤可包含一个或多个氨基酸置换。因此，对于一些实施方案，膜岛淀粉样多 肤类似物中氨基酸置换的数目可为至少一个。优选氨基酸置换的数目为1-15个，更优选 1-12个，还更优选1-9个，还更优选1-5个。
[0058] 所述多肤可包含氨基酸残基的一个或多个上的一个或多个取代基。本文所用术语 "膜岛淀粉样多肤衍生物"是指包含在氨基酸残基的一个或多个上的一个或多个取代基的 膜岛淀粉样多肤多肤（包括如上定义的人膜岛淀粉样多肤和膜岛淀粉样多肤类似物）。
[0059] 本文所用术语"取代基"意指与氨基酸残基、特别与氨基酸残基上的任何可用位置 键合、特别是共价键合的任何合适部分。通常，合适的部分为化学部分。
[0060] 对于一些实施方案，取代基包括接头。
[0061] 对于一些实施方案，多肤在一个氨基酸残基上具有取代基，所述氨基酸残基是N 端残基中的氨基酸残基或氨基酸残基是赖氨酸。
[0062] 对于一些实施方案，多肤具有通过N端氨基酸残基的a -氨基结合的N端氨基酸 残基上的取代基。
[0063] 对于一些实施方案，N端氨基酸残基是赖氨酸，且多肤具有通过赖氨酸氨基残基的 e-氨基结合的N端氨基酸残基上的取代基。
[0064] 对于一些实施方案，多肤通过在N端上添加赖氨酸残基而延伸，且多肤具有通过 赖氨酸氨基残基的e-氨基结合的N端氨基酸残基上的取代基。
[0065] 对于一些实施方案，多肤通过在N端上添加氨基酸残基而延伸，且多肤具有通过N 端氨基酸残基的a-氨基结合的N端氨基酸残基上的取代基。
[0066] 对于一些实施方案，相对于a氨基，通过在Lysl的e氨基上的醜化引起的取代 出人意料地导致选择性改进，例如至约1. 5-5倍的水平。
[0067] 在SEQ ID No: 1的编号序列中，并且按照本领域的惯例，N端的氨基酸残基（Lys) 被指定为1号，随后的氨基酸残基连续编号，W具有指定为37号的酪氨酸的C端结束。因 此，本文任何提及氨基酸残基的位置编号一般提供其在37个氨基酸序列中的位置；所述37 个氨基酸序列为人膜岛淀粉样多肤的类似物。例如，提及21位上修饰的类似物是指其中类 似物中37个氨基酸的第21个氨基残基被修饰的类似物。
[0068] 换句话说，类似物的氨基酸序列编号根据37个氨基酸序列提供各类似物的位置， 其中编号在N端至C端的方向上是连续的并且是上升的。
[0069] 可参考人膜岛淀粉样多肤中被修饰的氨基酸残基的编号，即通过其位置和修饰的 性质来描述类似物。下面是合适类似物命名的非限制性实例。
[0070] 例如： Pro21人膜岛淀粉样多肤表示该样的人膜岛淀粉样多肤的类似物，其中人膜岛淀粉样 多肤的修饰是21位的Asn被Pro置换。
[0071] Pro21人膜岛淀粉样多肤表示该样的人膜岛淀粉样多肤的类似物，其中人膜岛淀 粉样多肤的修饰是人膜岛淀粉样多肤序列（SEQ ID NO 1)的21位的Asn被Pro置换。
[0072] Pro21Pro27人膜岛淀粉样多肤表示该样的人膜岛淀粉样多肤的类似物，其中人膜 岛淀粉样多肤的修饰是21位的Asn和27位的Leu两个均被Pro置换。
[0073] Pro21Pro27人膜岛淀粉样多肤表示该样的人膜岛淀粉样多肤的类似物，其中人膜 岛淀粉样多肤的修饰是人膜岛淀粉样多肤序列（SEQ ID NO 1)的21位的Asn和27位的 Leu两者均被Pro置换。
[0074] 从上述实例显而易见，氨基酸残基可通过其全名、其一字母代码和/或其H字母 代码来识别。该3种方式完全等同。
[0075] 表述"与……一致"、"对应于"、"等同于……的位置"或"相应位置"可用来表征 参照SEQ ID No: 1的人膜岛淀粉样多肤的类似物中的修饰位点。例如通过简单的手写 和目测，容易推导出相同或相应位置；和/或可应用标准蛋白质或多肤比对程序，例如作 为 Needleman-Wunsch 比对的"needle"。该算法描述于 Needleman, S. B.和 Wunsch, C. D.， (1970)'Journal of Molecular Biology, 48:443-453，W 及 Myers 和 W. Miller 载于 "Optimal Alignments in Linear Space" CABIOS (计算机在生物科学中的应用）（1988) 4:11-17的比对程序。对于比对，可采用默认评分矩阵化0SUM62和默认单位矩阵，并且空位 中的第一个残基的罚分可设置为-10,空位中的其它残基的罚分设置为-0. 5。
[0076] 当本文使用时，术语"天然氨基酸"是选自W下的氨基酸（圆括号中为其惯常的H 字母代码和一字母代码）；甘氨酸（Gly和G)、脯氨酸（Pro和巧、丙氨酸（Ala和A)、额氨酸 (Val和V)、亮氨酸（Leu和L)、异亮氨酸（lie和I)、甲硫氨酸（Met和M)、半脫氨酸（切S和 C)、苯丙氨酸（Phe和巧、酪氨酸（Tyr和巧、色氨酸（Trp和W)、组氨酸化is和H)、赖氨酸 (Lys和K)、精氨酸（Arg和时、谷氨醜胺佑In和曲、天冬醜胺（Asn和脚、谷氨酸佑lu和 E)、天冬氨酸（Asp和D)、丝氨酸（Ser和巧和苏氨酸订虹和T)。如果由于打印错误所致， 与常用代码有偏差，则常用代码适用。存在于本发明多肤中的氨基酸优选为可通过核酸编 码的氨基酸。
[0077] 本文所用术语"姪基"是指包含至少碳和氨的基团，其可任选包含一个或多个其它 合适的取代基。所述取代基的实例可包括轻基、焼基、团素、焼氧基、团代焼基、团代焼氧基、 氨基、氨基焼基或环状基团。除了取代基为环状基团的可能性外，取代基的组合可形成环状 基团。如果姪基包含一个W上的碳原子，则该些碳原子不一定彼此连接。例如，至少2个碳 原子可通过合适的原子或基团连接。因此，姪基可含有杂原子。合适的杂原子对本领域技术 人员而目是显然的，包括例如硫、氮、氧、磯和娃。在一个实施方案中，姪基选自焼基、帰基、 快基、芳基、杂芳基或环焼基，其每一个可被任选被取代。所述取代基的实例可包括轻基、焼 基、团素、焼氧基、团代焼基、团代焼氧基、氨基、氨基焼基或环焼基。
[0078] 本文所用术语"焼基"包括可W是取代（单取代或多取代）或未取代的饱和直链 和支链焼基两者。优选焼基为。_2。焼基，更优选Ci_ig，甚至更优选。_1。焼基，甚至更优选 焼基，甚至更优选Ci_e焼基。特别优选的焼基包括例如甲基、己基、正丙基、异丙基、正下基、 仲下基、异下基、叔下基、正戊基、正己基、正庚基和正辛基。合适的取代基包括例如轻基、焼 基、团素、焼氧基、团代焼基、团代焼氧基、氨基、氨基焼基或环焼基。
[0079] 本文所用术语"环焼基"是指可W是取代（单取代或多取代）或未取代的环焼基。 合适的取代基包括例如轻基、焼基、团素、焼氧基、团代焼基、团代焼氧基、氨基、氨基焼基或 环焼基。
[0080] 本文所用术语"帰基"是指含有一个或多个碳-碳双键的碳链，其可W是支链或无 支链的，且是取代（单取代或多取代）或未取代的。优选帰基为C2_2。帰基，更优选〇2_1。帰 基，甚至更优选Cw。帰基，甚至更优选C2_8帰基或甚至更优选C2_e帰基。合适的取代基包括 例如轻基、焼基、团素、焼氧基、团代焼基、团代焼氧基、氨基、氨基焼基或环焼基。
[0081] 本文所用术语"快基"是指含有一个或多个碳-碳H键的碳链，其可W是支链或无 支链的，且是取代（单取代或多取代）或未取代的。优选快基为C2_2。快基，更优选〇2_1。快 基，甚至更优选C2_i。快基，甚至更优选C2_8快基或甚至更优选C2_e快基。合适的取代基包括 例如轻基、焼基、团素、焼氧基、团代焼基、团代焼氧基、氨基、氨基焼基或环焼基。
[0082] 本文所用术语"芳基"是指可W是取代（单取代或多取代）或未取代的Ce_i。芳基。 典型实例包括苯基和蔡基等。合适的取代基包括例如轻基、焼基、团素、焼氧基、团代焼基、 团代焼氧基、氨基、氨基焼基或环焼基。
[0083] 本文所用术语"杂芳基"是指含有一个或多个杂原子的上文定义的芳基。合适的 杂原子对本领域技术人员而言是显然的，包括例如硫、氮、氧、磯和娃。合适的取代基包括例 如轻基、焼基、团素、焼氧基、团代焼基、团代焼氧基、氨基、氨基焼基或环焼基。
[0084] 本文所用术语"接头"包括可使某一部分（例如化学部分）与多肤（例如多肤骨 架）连接的合适取代基。因此，接头和化学部分共同变成取代基。与接头连接的部分可W 是任何合适部分。实例包括白蛋白结合部分-(CH2),-C00H，其中S为12-20的整数。其它 实例包括白蛋白结合部分例如-(CH2),-CH3,其中S为12-20的整数；賴基部分例如-(C&) S-SO3H，其中S为12-20的整数；和四哇例如-畑2)5-〔师，其中S为12-20的整数。
[0085] 在一个实施方案中，与接头连接的部分是白蛋白结合部分。
[0086] 例如，接头可包含一个或两个氨基酸，其在一端与所述部分（例如白蛋白结合部 分）结合，在另一端与在多肤骨架中的任何可用位置结合。
[0087] 在一些实施方案中，接头提供多肤骨架上的氨基和所述部分（例如白蛋白结合部 分）上的醜基之间的桥或连接。接头可结合或接近N端氨基酸残基。优选接头与膜岛淀粉 样多肤类似物的1位的氨基酸结合。
[0088] 接头的另一个实例是至少一个氨基酸和胺的组合。
[0089] 在实施方案中，优选胺是基团0EG，其中0EG的结构式如下：
【权利要求】
1. 一种是SEQ ID No: 1的类似物的多肽，其对与人胰岛淀粉样多肽受体结合的选择 性是其与人降钙素受体的结合的约10倍或更多，其中： (a) 所述SEQ ID No: 1的类似物包含21位的脯氨酸残基； 其中类似物的氨基酸序列编号对应于SEQ ID No: 1的氨基酸编号序列；和 (b) 其中所述多肽具有与其氨基酸残基的至少一个连接的至少一个取代基和任选 (c) 其中在人胰岛淀粉样多肽受体结合测定法中所述多肽的IC5(I为约1200pM或更小。
2. 权利要求1和2中任一项的多肽，其中所述类似物包含27位的脯氨酸或亮氨酸残 基。
3. 权利要求1和2中任一项的多肽，其中所述类似物包含27位的脯氨酸残基。
4. 前述权利要求中任一项的多肽，其中所述类似物包含14位是天冬氨酸的氨基酸残 基、17位是精氨酸的氨基酸残基、21位是脯氨酸的氨基酸残基、27位是脯氨酸的氨基酸残 基和35位是精氨酸的氨基酸残基。
5. 权利要求1和2中任一项的包含下式（I)的SEQ ID No: 1的类似物的多肽： (I)Xaa1-Cys-Asn-Thr-Ala-Thr-Cys-Ala-Thr-Gln-Arg-Leu-Ala-Xaa 14~Phe-Leu- Xaa17_Hi s_Ser_Ser_Xaa21_Asn _Phe_Gly_Xaa25_Xaa 26_Xaa27_Xaa28 _Xaa29_Thr_Xaa31 _Val_Gly-Xaa34-Xaa35-Thr_Xaa37 ; 其中 Xaai 独立选自 Ala、Cys、Glu、Gly、His、Arg、Ser 和 Lys ; Xaa14 独立选自 Asp、Glu、His、Asn、Arg、Gly、Ala、Ser、Lys、Thr 和 Cys ; Xaa17独立选自Arg和Val ; Xaa21 为 Pro ; Xaa25独立选自Pro和Ala ; Xaa26独立选自Pro和lie ; Xaa27独立选自Pro和Leu ; Xaa28独立选自Pro和Ser ; Xaa29独立选自Pro和Ser ; Xaa31独立选自Pro和Asn ; Xaa34 独立选自 Pro、His、Lys、Arg 和 Ser ; Xaa35 独立选自 Asp、Arg、Glu、Lys、His 和 Asn ; Xaa37独立选自Pro和Tyr ; 且其中C端可任选被衍生化。 6?权利要求 5 的多肽，其中 Xaax 为 Lys，Xaa14 为 Asp，Xaa17 为 Arg，Xaa21 为 Pro, Xaa25为 Ala，Xaa26 为 Ile，Xaa27 为 Pro，Xaa28 为 Ser，Xaa29 为 Ser，Xaa31 为 Asn，Xaa34 为 Ser，Xaa35为 Asn，Xaa37 为 Tyr〇
7. 权利要求7的多肽，其中所述取代基基团选自表1 (较早提供）提供的任何取代基 基团。
8. 前述权利要求中任一项的多肽，其中取代基仅与N端氨基酸残基的a-氨基或与 Lys残基或半胱氨酸残基连接。
9. 前述权利要求中任一项的多肽，所述多肽选自表2 (较早提供）中提供的任何多肽 或选自表3(较早提供）中提供的任何多肽。
10. 前述权利要求中任一项的多肽，其中所述多肽为N- e -1-{(S)_4-羧 基-4-[(5)-4-羧基-4-(19-羧基十九烷酰基氨基）丁酰基氨基]丁酰基}-^邓14，找17， Pr〇21，Pr〇27, Arg35]-人胰岛淀粉样多肽。
11. 用作药物的前述权利要求中任一项的多肽。
12. 前述权利要求中任一项的多肽，所述多肽用于治疗或预防高血糖症、2型糖尿病、 葡萄糖耐量受损、1型糖尿病、肥胖症、高血压、X综合征、血脂异常、认知障碍、动脉粥样硬 化、心肌梗死、冠心病和其它心血管疾病、中风、炎性肠综合征、消化不良和胃溃疡和/或用 于减少食物摄取、减少0 _细胞凋亡、提商0 _细胞功能和0 _细胞质量和/或恢复0 _细 胞的葡萄糖敏感性。
13. 前述段落中任一个的发明，其中所述多肽在单次皮下注射3nmol/kg后的前24小 时内相对于溶媒减少大鼠的食物摄取达25%或更高，且在单次皮下注射3-30nmol/kg后的 任何时间相对于溶媒降低大鼠的血浆钙水平小于30%。
14. 一种药物组合物，其包含前述权利要求中任一项的多肽和药学上可接受的赋形 剂。
15. -种制备权利要求14的药物组合物的方法，所述方法包括将任何前述权利要求 的多肽与至少一种药学上可接受的赋形剂混合。
【文档编号】C07K14/575GK104395338SQ201380032197
【公开日】2015年3月4日 申请日期:2013年4月19日 优先权日:2012年4月19日
【发明者】K.达尔, L.舍弗, T.克鲁塞 申请人:诺和诺德A/S（股份有限公司）