葡萄糖转运蛋白抑制多肽及其制备方法、应用的制作方法
【专利摘要】葡萄糖转运蛋白抑制多肽及其制备方法、应用，本发明涉及药物领域，具体涉及多肽化合物，能治疗糖尿病。所述的多肽序列为MVTRCNNVGRYRVRIYVDA。所述多肽的制备方法，采用Fmoc保护的固相合成技术制备，可共价连接一个佐剂，佐剂是牛血清白蛋白，人血清白蛋白，或聚乙二醇。所述多肽在治疗糖尿病及糖尿病并发症中的应用。所述的糖尿病并发症是糖尿病肾病、糖尿病高血压、糖尿病眼疾、糖尿病神经性病变。多肽可通过多种给药方式治疗糖尿病及糖尿病并发症，包括皮下或肌肉注射，静脉注射或者静脉滴注，口服给药如药丸、胶囊等，鼻喷剂等。本发明中的葡萄糖转运体蛋白抑制多肽，可以靶向抑制葡萄糖转运体蛋白，达到预防或治疗糖尿病的效果。
【专利说明】葡萄糖转运蛋白抑制多肽及其制备方法、应用
【技术领域】：
[0001] 本发明涉及药物领域，具体涉及用于治疗糖尿病的多肽化合物。
【背景技术】
[0002] 糖尿病是一组以高血糖为特征的代谢性疾病，是由于胰岛素不足或胰岛素的细胞 代谢作用缺陷所引起的葡萄糖、蛋白质及脂质代谢紊乱的一种综合症。近年来，糖尿病患者 的人数逐渐增多，分为I型糖尿病和II型糖尿病。其中II型糖尿病患者的人数占糖尿病 总人数的85-90%，严重威胁着病人的健康和生命。如果糖尿病得不到良好的控制，可能引 起很多并发症，例如：糖尿病肾病、视网膜病变、高血压等。
[0003] 目前，大多数患者通过口服降糖药物来帮助控制体内血糖，或调节胰岛素分泌等， 很多患者最终仍然要使用胰岛素治疗。
[0004] 葡萄糖的代谢取决于细胞对葡萄糖的摄取，然而，葡萄糖无法自由通过细胞膜脂 质双层结构进入细胞，细胞对葡萄糖的摄入需要借助细胞膜上的葡萄糖转运蛋白（glucose transporters)简称葡萄糖转运体（GLUT)转运功能才能得以实现。
[0005] 抑制葡萄糖转运体转运功能就可以抑制体内葡萄糖的摄入，缓解体内高血糖的症 状，因此，葡萄糖转运体转运抑制认为是治疗糖尿病的靶点。尽管如此，并没有成熟开发的 葡萄糖转运体转运抑制剂问世，用于治疗糖尿病。
【发明内容】
：
[0006] 本发明目的是针对现有降血糖的药物的特点，设计一种多肽2化合物，能有效治 疗糖尿病。
[0007] 技术方案
[0008] 一种葡萄糖转运蛋白抑制多肽2,其序列为MVTRCNNVGRYRVRIYVDA。所述多肽2的 制备方法，其特征在于：采用Fmoc保护的固相合成技术制备，可共价连接一个佐剂，佐剂是 牛血清白蛋白，人血清白蛋白，或聚乙二醇。所述多肽2在治疗糖尿病及糖尿病并发症中的 应用。所述的糖尿病并发症是糖尿病肾病、糖尿病高血压、糖尿病眼疾、糖尿病神经性病变。 多肽2可通过多种给药方式治疗糖尿病及糖尿病并发症，包括皮下或肌肉注射，静脉注射 或者静脉滴注，口服给药如药丸、胶囊等，鼻喷剂等。
[0009] 有益结果：
[0010] 本发明中的葡萄糖转运体蛋白抑制多肽2，可以靶向抑制葡萄糖转运体蛋白，达到 预防或治疗糖尿病的效果。更优选是治疗糖尿病和/或糖尿病并发症药物中的用途。所 述的糖尿病包括I型糖尿病和Π型糖尿病；所述的糖尿病并发症包括但不限于：糖尿病肾 病、糖尿病高血压、糖尿病眼疾、糖尿病神经性病变等。
【具体实施方式】
[0011] 实施例1
[0012] 多肽的化学合成方法
[0013] 多肽2用Fmoc保护的固相合成技术制备。合成反应按照多肽序列从C端向N端进 行，Rink介质（可在AdvancedChemTech公司购得）上有自由氨基。每一步连接过程中，氨 基酸残基都要活化，活化混合物中有4倍于介质上自由氨基的HBTU，HOBt，DIEA和Fmoc-氨 基酸。每次氨基酸的连接反应之后，都用一个吡啶/醋酸/N-甲基咪唑（4:1:0.5)的混合 物来封闭未连接的自由氨基，封闭反应10分钟。每次氨基酸的连接反应之后，下一个氨基 酸连接之前，都要把介质上的Fmoc-基团去掉,去Fmoc-基团使用含20 %哌陡的二甲基甲酰 胺，需15分钟。最后，当所有氨基酸残基顺序连接之后，多肽2用98 %三氟乙酸从介质上切 割下来，切割在室温下进行2小时。
[0014] 应用上述化学条件可合成并获得多肽2,序列为MVTRCNNVGRYRVRIYVDA，该序列为 全新序列。也可以委托上海生工合成。
[0015] 实施例2
[0016] 葡萄糖转运体蛋白抑制多肽2的体外细胞活性测定
[0017] 采用MTT比色法。将对数生长的胰岛瘤细胞（INS-1细胞），以I.OX105加入96 孔培养板中，培养24h，实验孔分别加入不同浓度的实验药物葡萄糖转运体蛋白抑制多肽2 作为实验组；空白组加入相同体积的溶剂。每孔设五个复孔，培养48h，每孔加入MTT，作用 4h后，加入DMS0,孵育30min，在酶标仪570nm处测定吸光度A值，按公式细胞生长增殖率= (实验组吸光值/对照组吸光值-I)X100%。计算出实验药物的EC50为5. 45nmol/L。
[0018] 实施例3
[0019] 葡萄糖转运体蛋白抑制多肽2的体内降糖实验
[0020] 昆明小鼠，高脂高糖喂养至体重18?22g，雌雄各半，实验前禁食不禁水24h，腹腔 一次性注射链脲佐菌素（STZ) 50mg/kg(l%的柠檬酸盐缓冲液溶解配制）。1周后小鼠尾静 脉采血测血糖（BS)，BS高于16mmol/L为造模成功。造模后将小鼠分为3组，每组10只，糖 尿病模型组（DM组）：给予等量的PBS缓冲液皮下注射；对照组（拜糖平）：20μg/kg皮下 注射给药（溶于0.lmol/LPBS缓冲液），一天两次，连续15d;样品组（葡萄糖转运体蛋白 抑制多肽2):同对照组；另取10只正常小鼠做为空白组。用药后第3d、9d、15d于尾静脉取 血快速测量血糖。15d之后，在停药1周后，禁食不禁水16小时进行葡萄糖耐量试验。用 25%葡萄糖溶液（2g/kg)灌胃，灌胃后0、30、60、120分钟尾静脉取血检测血糖。
[0021] 结果：葡萄糖转运体蛋白多肽2具有降低糖尿病模型小鼠血糖的作用（P〈0. 05,表 1);同时，可以缓解糖尿病模型小鼠的糖耐量（表2)。其多肽2的作用与对照组拜糖平作 用相当。
[0022] 表1葡萄糖转运体蛋白抑制多肽2对小鼠降血糖作用
[0023]
【权利要求】
1. 一种葡萄糖转运蛋白抑制多肽，其特征在于：其氨基酸序列为 MVTRCNNVGRYRVRIYVDA 〇
2. -种权利要求1所述多肽的制备方法，其特征在于：采用Fmoc保护的固相合成技 术制备。
3. 根据权利要求2所述的多肽的制备方法，其特征在于：共价连接一个佐剂，佐剂是牛 血清白蛋白，人血清白蛋白，或聚乙二醇。
4. 权利要求1所述的多肽在制备治疗糖尿病及糖尿病并发症药物中的应用。
5. 根据权利要求4的用途，其特征在于所述的糖尿病并发症是糖尿病肾病、糖尿病高 血压、糖尿病眼疾、糖尿病神经性病变。
6. 根据权利要求4所述的多肽的用途，其特征在于：通过多种给药方式治疗糖尿病及 糖尿病并发症，包括皮下或肌肉注射，静脉注射或者静脉滴注，口服给药如药丸、胶囊等，鼻 喷剂。
【文档编号】A61P3/10GK104262462SQ201410509098
【公开日】2015年1月7日 申请日期:2014年9月28日 优先权日:2014年9月28日
【发明者】罗瑞雪 申请人:苏州普罗达生物科技有限公司