专利名称：一种灵芝孢子多糖的精制工艺的制作方法
技术领域：
本发明属于中药制药领域，涉及一种灵芝孢子多糖的精制工艺。
背景技术：
灵芝，为多孔菌科真菌灵芝、紫芝等的子实体。味甘性平，功能益气血、安心神、健脾胃。始载于《神农本草经》，列为上品，称其有益心气、补中、增智慧不忘、保神、益精气、利关节、坚筋骨、久服轻身延年不老等多种作用。历代中药典籍所载主治病症虽多，概而言之，均属体虚劳损诸疾，表明以补虚强体为其特长。这与现代药理所知提高机体非特异性免疫能力，增强机体抗病能力，如出一辙。
灵芝孢子粉则为灵芝成熟时从菌盖弹射的孢子，随着现代科技手段的进步，对灵芝孢子的新认识，经破壁加工后，开发成新的保健药材，它浓缩了灵芝的精华，禀天地之正气，故其药效及临床应用效果更有明显提高。
灵芝孢子含有蛋白质、氨基酸类、多糖糖肽类、腺苷类、甾醇类、三萜类、生物碱类、脂肪酸类等化学物质。现代药理研究及临床试验证实，灵芝孢子粉比灵芝具有更强更全面的作用，灵芝孢子具有抗染色体突变，诱导肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤细胞增殖、杀伤癌细胞，拮抗环磷酰胺引起的小鼠耐力下降、染色体畸变、血红蛋白与白细胞下降、染色体畸变、巨噬细胞吞噬力下降和SGPT升高等不良反应，抑制60Co照射引起的白细胞减少不良反应、激活并提高特异性杀伤细胞(CTL)和非特异性杀伤细胞(NK、LAK)的抗肿瘤作用、增强单核-巨噬细胞吞噬功能，抗脂质过氧化反应等作用，显示出灵芝孢子在调节免疫功能、抗肿瘤方面的良好应用前景。
灵芝孢子经净制、破壁粉碎、制粒脱脂后得灵芝孢子颗粒，再经水提，醇沉，干燥即得多糖，多糖是灵芝孢子的功效成分之一。实验表明，灵芝孢子粉碱提多糖对小鼠巨噬细胞具有明显的激活作用，灵芝孢子总多糖抗肿瘤疗效明显，对荷Lewis肺癌小鼠NK活性也有明显的提高和促进作用。
专利03131837.1公开了一种灵芝孢子多糖的提取方法。该方法先用CO2超临界萃取法提取灵芝孢子油，然后对提油后的剩余物进行脱脂、水提、醇沉、过滤、干燥，得灵芝孢子多糖。该方法采用脱脂的灵芝孢子粉，使多糖提取方便，且多糖含量得到提高。但是，该方法得到的多糖仍是粗多糖，在药用研究中仅可用于口服类制剂生产，离注射剂类品种还有差距，并且该方法中水提步骤采用煮沸回流提取1-10小时的方法，但是，多糖提取过程中温度过高(＞90℃)，提取时间过长(＞1h)，有可能破坏多糖的结构，甚至使其中的五碳环或六碳环裂解，导致其分子构型变化，使之结构不确切化。
发明内容
本发明的目的是提供一种灵芝孢子多糖的精制工艺。
本发明的目的是通过下列技术措施实现的一种灵芝孢子多糖的精制工艺，该工艺包括以下步骤a、灵芝孢子除杂、破壁粉碎，脱脂；b、温浸法水提取取脱脂后的灵芝孢子药渣加10-20倍量水，70-90℃，提取1-3次，每次0.5-2.5小时，合并提取液，静置，过滤，滤液浓缩；c、醇沉用85-95％乙醇沉淀，至含醇量75-85％，静置，分离沉淀物，用85-100％乙醇洗，干燥，得粗多糖；d、精制取粗多糖加适量水溶解，调节pH至7.5-8.5，离心去除沉淀，上清液加H2O2脱色，sevag法脱蛋白，透析，加95％乙醇至含醇量为70-90％醇沉，沉淀依次用无水乙醇和丙酮洗涤2-3次，真空干燥，得灵芝孢子多糖精制品。
所述的灵芝孢子多糖的精制工艺，该工艺优选包括以下步骤a、灵芝孢子除杂、破壁粉碎，制粒，干燥，用CO2超临界萃取法提取灵芝孢子油进行脱脂b、温浸法水提取取脱脂后的灵芝孢子药渣加10倍量水，90℃，提取3次，每次1.5小时，合并提取液，静置，过滤，浓缩；c、醇沉用95％乙醇沉淀，至含醇量80％，静置，分离沉淀物，用95％乙醇洗，干燥，得粗多糖；d、精制取粗多糖加适量水溶解，调节pH至7.8，离心去除沉淀，上清液加H2O2脱色，sevag法脱蛋白，透析，85％醇沉，沉淀依次用无水乙醇和丙酮洗涤3次，真空干燥，得灵芝孢子多糖精制品。
所述的灵芝孢子多糖的精制工艺，该工艺灵芝孢子脱脂的方法采用CO2超临界萃取法提取灵芝孢子油，其工艺参数是萃取温度为35～65℃，萃取压力为20～35MPa，萃取时间为2～7小时，CO2流量0.5-1m3/h。
本发明有益效果本发明提供的精制工艺采用温浸法提取多糖，对多糖破坏较少，并采用H2O2脱色，sevag法脱蛋白，醇沉等工艺制备灵芝孢子多糖精制品，具有成本低、效果好的优点。
供试品说明批号为20040101，20040102，20040103的供试品为按照实施例1制备的粗多糖(步骤a-c)；批号为20040101p，20040102p，20040103p的供试品为按照实施例1制备的精制品多糖(步骤a-d)。
一、灵芝孢子多糖精制工艺研究多糖精制的常规方法包括脱色素、除蛋白、醇沉、脱水干燥等步骤，操作比较繁琐。文献有报道采用金属络合物法、季铵盐沉淀法等沉淀法将多糖沉淀下来，色素和蛋白则留在溶剂中，这样可以省去脱色素和除蛋白步骤。但本品精制过程中采用这两种方法时均不能使灵芝孢子多糖沉淀。因此，仍采用常规方法精制多糖。
1 脱色素1.1活性炭脱色法取本品三批(批号20040101，20040102，20040103)供试品各5g，加水150ml，煮沸5min，完全溶解，加0.2％活性炭脱色后，趁热抽滤，然后用50ml的热水洗涤滤渣，合并滤液。
1.2 H2O2脱色法取本品三批供试品(批号20040101，20040102，20040103)各10g，加水400ml，加热使完全溶解，加氨水调pH至7.8，有沉淀产生，继续滴加氨水至不再产生沉淀，此时溶液pH维持在7.8，4000rpm离心。取沉淀加0.2mol/L盐酸溶解(沉淀在水中能够溶解，尤其在酸中易于溶解)，加考马斯亮蓝试剂显蓝色，证明为蛋白质；取上清液加30％H2O260ml(糖溶液体积的15％)，于40℃保温4h，溶液由褐色转为淡黄色透明液，放冷至室温。
2 除蛋白除蛋白方法比较了Sevag法和TCA(三氯醋酸)法。采用TCA法时没有蛋白沉淀析出。灵芝孢子多糖溶液以H2O2脱色前，用氨水调pH7.8已能除去绝大多数蛋白质，进一步除蛋白宜采用Sevag法。
Sevag法取脱色素后的糖溶液，加入等体积的氯仿-正丁醇(4∶1)振摇，放置过夜，弃去下层凝胶样物质，取上层溶液同法处理，直至下层溶液不再出现凝胶样物质。将除完蛋白的糖溶液置透析袋中流水透析24h，蒸馏水透析过夜。将保留液(透析内液)浓缩至原体积的1/3，得浓缩后的糖溶液。
3醇沉、脱水干燥取浓缩后的糖溶液，加入6倍体积的无水乙醇沉淀多糖，放置冰箱过夜，经4号砂芯漏斗过滤，沉淀依次用无水乙醇和丙酮洗涤3次，真空干燥，得白色灵芝孢子多糖精制品，称重，计算得率。
三批灵芝孢子多糖原料(批号20040101，20040102，20040103)经活性炭脱色、Sevag法除蛋白、醇沉、脱水干燥得到淡黄色灵芝孢子多糖精制品，得率分别为39.67％，43.09％，46.10％。而以H2O2脱色、Sevag法除蛋白、醇沉、脱水干燥得到类白色灵芝孢子多糖精制品(批号20040101p，20040102p，20040103p)，得率分别为63.67％，59.09％，67.70％。
将同一批灵芝孢子多糖原料(批号20040101)分别采用活性炭与H2O2脱色制得的多糖精制品，采用高效凝胶色谱法(高效液相色谱仪HP1050，美国；色谱柱ShodexOhpak SB-805 HQ，300mm×8mm，日本昭和电工；流动相重蒸水；流速0.6ml/min；蒸发光散射检测器(ELSD)SEDEX 75，法国；ELSD检测器漂移管温度50℃；ELSD检测器压力3.5bar；ELSD检测器gain值7；色谱工作站江申JS-3050型色谱工作站(带GPC软件)；Dextran标准分子量多糖Fluka公司。取制得的灵芝孢子多糖精制品加水溶解，制成5mg/ml溶液，高速离心后取上清液用0.45μm微孔滤膜过滤，取20μl注入色谱柱，记录色谱图)比较两种多糖精制品的色谱图，见图1，观察到二者组分基本一致，说明H2O2脱色不会破坏灵芝孢子多糖的结构。活性炭脱色首先过滤非常困难，其次脱色不完全，且多糖损失大。灵芝孢子多糖脱色素方法最终采用H2O2脱色法。
4蛋白质检查4.1考马斯亮蓝法取灵芝孢子多糖精制品各0.5g置10ml量瓶中，加水充分溶解，加水稀释至刻度，摇匀。滤纸过滤，取续滤液60μl；另取1mg/ml牛血清白蛋白30μl并加水30μl作为对照液，各加考马斯亮蓝试液3ml，分别混匀后室温放置15min，于595nm处比色测定。比较样品液与对照液的吸光度。三批精制品(批号20040101p，20040102p，20040103p)中蛋白质的含量均不超过1％。结果见表1。
表1蛋白质检查结果
4.2 UV法取灵芝孢子多糖精制品适量，加水制成1mg/ml的溶液，于200～400nm进行紫外扫描，三批精制品(批号20040101p，20040102p，20040103p)均未发现有核酸(260nm)及蛋白质(280nm)特征吸收峰。
二、药效学试验(一)对照品灵芝孢子多糖对动物移植性肿瘤的抑制作用1试验材料1.1受试药物对照品灵芝孢子多糖(简称1号)，采用专利03131837.1公开的提取方法制备，具体步骤为将灵芝孢子粉加入蒸馏水，加入量使灵芝孢子成形为准，混匀，制成颗粒，自然干燥，用CO2超临界萃取法去除其中的油脂类物质，称取脱脂灵芝孢子10Kg，装入提取罐中，加150Kg水，浸泡2小时，加热至沸，保持回流4小时，提取液离心，澄清过滤液浓缩至5Kg，加入3倍重量95％乙醇，静置24小时，使多糖沉淀，过滤，烘干，得灵芝孢子多糖。
1.2动物ICR种小白鼠，18-22g，雌雄各半，由中国药科大学动物室提供。合格证号SCXK(苏)2002-0011。饲料为颗粒饲料，由中国药科大学动物室供给。饲养条件空调房间，温度18-24℃，相对湿度70％。
1.3阳性药环磷酰胺(CTX)，江苏恒瑞医药股份有限公司。规格200mg/瓶，批号06060121。
2实验研究的主要内容2.1 1号口服灌胃给药对小鼠移植瘤Heps的抑制作用。
2.2 1号口服灌胃给药对小鼠移植瘤S180的抑制作用。
3实验方法和步骤3.1 1号口服灌胃给药对小鼠移植瘤Heps的抑制作用3.1.1给药途径口服灌胃(ip)3.1.2给药周期按移植性肿瘤研究方法接种Heps实体型，接种24小时后给药，ip给药，隔天一次，共给药4次，停药后第2天处死解剖小鼠。
3.1.3剂量设置共设4组，分别为空白对照组(生理盐水)1号160mg/kg1号40mg/kgCTX20mg/kg3.1.4实验方法取上述规格小鼠40只按移植性肿瘤研究方法接种Heps实体型，接种后24小时称鼠重，并随机分为4组，每组10只，雌雄各半，空白对照组与CTX组分别为阴、阳性对照组。接种24小时后给药，ip给药，每天一次，共给药7次，于停药后第2天小鼠称重，处死荷瘤小鼠并分离瘤块，称瘤重，所得数据进行统计学处理(t检验)。
3.1.5实验结果结果见表2，结果表明，与空白对照组相比，1号(160mg/kg，40mg/kg)组可显著地抑制Heps的肿瘤生长作用(P＜0.01，P＜0.05)。
表2 1号ip对小鼠移植瘤Heps的抑制作用(X±SD)(n＝10)
*P＜0.05**P＜0.01与空白对照组比较。
3.2 1号口服灌胃(ip)对小鼠移植瘤S180的抑制作用3.2.1给药途径口服灌胃(ip)3.2.2给药周期按移植性肿瘤研究法接种S180实体型，接种24小时后给药，ip给药，每天一次，共给药7次，停药后第2天处死解剖小鼠。
3.2.3剂量设置共设4组，分别为空白对照组(生理盐水)1号160mg/kg1号40mg/kgCTX 20mg/kg3.2.4实验方法取上述规格小鼠40只按移植性肿瘤研究法接种S180实体型，接种后24小时称鼠重，并随机分为4组，每组10只，雌雄各半，空白对照组与CTX组分别为阴、阳性对照组。接种24小时后给药，ip给药，每天一次，共给药7次，于停药后第2天小鼠称重，处死荷瘤小鼠并分离瘤块，称瘤重，所得数据进行统计学处理(t检验)。
3.2.5实验结果结果见表3，结果表明，与空白对照组相比，1号(160mg/kg，40mg/kg)组均可显著地抑制S180的肿瘤生长作用(P＜0.01，P＜0.05)。
表3 1号ip对小鼠移植瘤S180的抑制作用(X±SD)(n＝10)
*P＜0.05**P＜0.01与空白对照组比较(二)本发明灵芝孢子多糖对动物移植性肿瘤的抑制作用1试验材料1.1受试药物本发明灵芝孢子多糖(按实施例1制备，简称2号)。
1.2动物ICR种小白鼠，18-22g，雌雄各半，由中国药科大学动物室提供。合格证号SCXK(苏)2002-0011。饲料为颗粒饲料，由中国药科大学动物室供给；饲养条件空调房间，温度18-24℃，相对湿度70％。
1.3阳性药环磷酰胺(CTX)，江苏恒瑞医药股份有限公司。规格200mg/瓶，批号06060121。
2实验研究的主要内容2.1 2号尾静脉注射对小鼠移植瘤Heps的抑制作用。
2.2 2号尾静脉注射对小鼠移植瘤S180的抑制作用。
3实验方法和步骤3.1 2号尾静脉注射对小鼠移植瘤Heps的抑制作用3.1.1给药途径2号尾静脉注射(iv)3.1.2给药周期按移植性肿瘤研究法 接种Heps实体型，接种24小时后给药，iv给药，隔天一次，共给药4次，停药后第2天处死解剖小鼠。
3.1.3剂量设置共设4组，分别为空白对照组(生理盐水)2号3mg/kg2号1m/kgCTX30mg/kg3.1.4给药体积0.4ml/20g3.1.5实验方法取上述规格小鼠40只按移植性肿瘤研究方法接种Heps实体型，接种后24小时称鼠重，并随机分为4组，每组10只，雌雄各半，空白对照组与CTX组分别为阴、阳性对照组。接种24小时后给药，iv给药，每天一次，共给药4次，于停药后第2天小鼠称重，处死荷瘤小鼠并分离瘤块，称瘤重，所得数据进行统计学处理(t检验)。
3.1.5实验结果结果见表4，结果表明，与空白对照组相比，2号(3mg/kg，1mg/kg)组iv给药可显著地抑制Heps的肿瘤生长作用(P＜0.01，P＜0.05)，同时对实验小鼠的体重有减低作用，但与阳性药CTX组相比，影响很小，且效果明显优于1号(160mg/kg，40mg/kg)ip给药。
表4 2号iv对小鼠移植瘤Heps的抑制作用(X±SD)(n＝10)
*P＜0.05**P＜0.01与空白对照组比较3.2 2号尾静脉注射对小鼠移植瘤S180的抑制作用3.2.1给药途径尾静脉注射(iv)3.2.2给药周期按移植性肿瘤研究法接S180实体型，接种24小时后给药，iv给药，隔天一次，共给药4次，停药后第2天处死解剖小鼠。
3.2.3剂量设置共设4组，分别为空白对照组(生理盐水)2号3mg/kg
2号1mg/kgCTX 30mg/kg3.2.4给药体积0.4ml/20g3.2.5实验方法取上述规格小鼠40只按移植性肿瘤研究法接种S180实体型，接种后24小时称鼠重，并随机分为4组，每组10只，雌雄各半，空白对照组与CTX组分别为阴、阳性对照组。接种24小时后给药，iv给药，隔天一次，共给药4次，于停药后第2天小鼠称重，处死荷瘤小鼠并分离瘤块，称瘤重，所得数据进行统计学处理(t检验)。
3.2.6实验结果结果见表5，结果表明，与空白对照组相比，2号(3mg/kg，1mg/kg)组iv给药均可显著地抑制S180的肿瘤生长作用(P＜0.01，P＜0.05)，同时对实验小鼠的体重有减低作用，但与阳性药CTX相比，影响很小，且效果明显优于1号(160mg/kg，40mg/kg)ip给药。
表5 2号iv对小鼠移植瘤S180的抑制作用(X±SD)(n＝10)
*P＜0.05**P＜0.01与空白对照组比较。
图1是分别采用活性炭脱色与H2O2脱色的灵芝孢子多糖精制品的色谱比较图。图中ts.c.sla代表活性炭脱色的灵芝孢子多糖精制品，ts.sys.sla代表H2O2脱色的灵芝孢子多糖精制品。
具体实施例方式
以下通过实施例对本发明作进一步的阐述。
实施例1灵芝孢子除杂、破壁粉碎，加入蒸馏水，破壁后灵芝孢子粉与蒸馏水重量比为1∶0.25，制粒，≤60℃干燥4小时，水分含量≤5％，干燥后成型的灵芝孢子粉装入萃取器中，从萃取器底部通入CO2，控制温度为60℃，压力为26MPa，萃取时间为5小时，CO2流量0.6m3/h；从萃取器上部流出含有灵芝孢子油的CO2进入减压分离器，灵芝孢子油从减压分离器底部放出，CO2从减压分离器的顶部排出；将灵芝孢子油中的水分离除去后得到纯化的灵芝孢子油备用，从萃取器回收脱脂灵芝孢子粉；取脱脂后的灵芝孢子药渣加10倍量水，90℃，提取3次，每次1.5小时，合并提取液，静置24小时，过滤，减压浓缩至原体积的1/6；用95％乙醇沉淀，至含醇量80％，于4℃静置16小时；吸取上清液，回收乙醇，沉淀用95％乙醇适量洗涤3次，自然挥干乙醇，于≤60℃干燥，得粗多糖；取粗多糖加适量水溶解成10％的糖溶液，加氨水调节pH至7.8，离心去除沉淀，上清液加H2O2脱色，sevag法脱蛋白，透析，85％醇沉，沉淀依次用无水乙醇、丙酮洗涤3次，真空低温干燥，得灵芝孢子多糖精制品。多糖含量以无水葡萄糖(C6H12O6)计为93.2％。
实施例2灵芝孢子除杂、破壁粉碎，加入蒸馏水，制粒，≤60℃干燥4小时，干燥后成型的灵芝孢子粉装入萃取器中，从萃取器底部通入CO2，控制温度为35℃，压力为35MPa，萃取时间为4小时，CO2流量0.5m3/h；从萃取器上部流出含有灵芝孢子油的CO2进入减压分离器，灵芝孢子油从减压分离器底部放出，CO2从减压分离器的顶部流出；将灵芝孢子油中的水分离除去后得到纯化的灵芝孢子油备用，从萃取器回收脱脂灵芝孢子粉；取脱脂后的灵芝孢子药渣加12倍量水，70℃，提取3次，每次1.5小时，合并提取液，静置24小时，过滤，减压浓缩至原体积的1/6；用95％乙醇沉淀，至含醇量80％，于0℃静置15小时；吸取上清液，回收乙醇，沉淀用95％乙醇适量洗涤3次，自然挥干乙醇，于≤60℃干燥，得粗多糖；取粗多糖加适量水溶解成12％的糖溶液，加氨水调节pH至7.5，离心去除沉淀，上清液加H2O2脱色，sevag法脱蛋白，透析，85％醇沉，沉淀依次用无水乙醇、丙酮洗涤3次，真空干燥，得灵芝孢子多糖精制品。多糖含量以无水葡萄糖(C6H12O6)计为87.1％。
实施例3灵芝孢子除杂、破壁粉碎，加入蒸馏水，制粒4小时，≤60℃干燥，干燥后成型的灵芝孢子粉装入萃取器中，从萃取器底部通入CO2，控制温度为65℃，压力为20MPa，萃取时间为3小时，CO2流量1m3/h；从萃取器上部流出含有灵芝孢子油的CO2进入减压分离器，灵芝孢子油从减压分离器底部放出，CO2从减压分离器的顶部流出；将灵芝孢子油中的水分离除去后得到纯化的灵芝孢子油备用，从萃取器回收脱脂灵芝孢子粉；取脱脂后的灵芝孢子药渣加15倍量水，80℃，提取2次，每次1.5小时，合并提取液，静置24小时，过滤，减压浓缩至原体积的1/6；用95％乙醇沉淀，至含醇量80％，于0℃静置15小时；吸取上清液，回收乙醇，沉淀用95％乙醇适量洗涤3次，自然挥干乙醇，于≤60℃干燥，得粗多糖；取粗多糖加适量水溶解成15％的糖溶液，加氨水调节pH至7.0，离心去除沉淀，上清液加H2O2脱色，sevag法脱蛋白，透析，85％醇沉，沉淀依次用无水乙醇、丙酮洗涤3次，真空干燥，得灵芝孢子多糖精制品。多糖含量以无水葡萄糖(C6H12O6)计为73.6％。
实施例4灵芝孢子除杂、破壁粉碎，加入蒸馏水，制粒4小时，≤60℃干燥，干燥后成型的灵芝孢子粉装入萃取器中，从萃取器底部通入CO2，控制温度为60℃，压力为28MPa，萃取时间为2小时，CO2流量0.8m3/h；从萃取器上部流出含有灵芝孢子油的CO2进入减压分离器，灵芝孢子油从减压分离器底部放出，CO2从减压分离器的顶部流出；将灵芝孢子油中的水分离除去后得到纯化的灵芝孢子油备用，从萃取器回收脱脂灵芝孢子粉；取脱脂后的灵芝孢子药渣加20倍量水，90℃，提取2次，每次0.5小时，合并提取液，静置24小时，过滤，减压浓缩至原体积的1/6；用95％乙醇沉淀，至含醇量80％，于4℃静置18小时；吸取上清液，回收乙醇，沉淀用95％乙醇适量洗涤3次，自然挥干乙醇，于≤60℃干燥，得粗多糖；取粗多糖加适量水溶解成10％的糖溶液，加氨水调节pH至8，离心去除沉淀，上清液加H2O2脱色，sevag法脱蛋白，透析，85％醇沉，沉淀依次用无水乙醇、丙酮洗涤3次，真空干燥，得灵芝孢子多糖精制品。多糖含量以无水葡萄糖(C6H12O6)计为69％。
权利要求
1.一种灵芝孢子多糖的精制工艺，该工艺包括以下步骤a、灵芝孢子除杂、破壁粉碎，脱脂；b、温浸法水提取取脱脂后的灵芝孢子药渣加10-20倍量水，70-90℃，提取1-3次，每次0.5-2.5小时，合并提取液，静置，过滤，滤液浓缩；c、醇沉用85-95％乙醇沉淀，至含醇量75-85％，静置，分离沉淀物，用85-100％乙醇洗，干燥，得粗多糖；d、精制取粗多糖加适量水溶解，调节pH至7.5-8.5，离心去除沉淀，上清液加H2O2脱色，sevag法脱蛋白，透析，加95％乙醇至含醇量为70-90％醇沉，沉淀依次用无水乙醇和丙酮洗涤2-3次，真空干燥，得灵芝孢子多糖精制品。
2.根据权利要求1所述的灵芝孢子多糖的精制工艺，其特征在于该工艺包括以下步骤a、灵芝孢子除杂、破壁粉碎，制粒，干燥，用CO2超临界萃取法提取灵芝孢子油进行脱脂；b、温浸法水提取取脱脂后的灵芝孢子药渣加10倍量水，90℃，提取3次，每次1.5小时，合并提取液，静置，过滤，浓缩；c、醇沉用95％乙醇沉淀，至含醇量80％，静置，分离沉淀物，用95％乙醇洗，干燥，得粗多糖；d、精制取粗多糖加适量水溶解，调节pH至7.8，离心去除沉淀，上清液加H2O2脱色，sevag法脱蛋白，透析，85％醇沉，沉淀依次用无水乙醇和丙酮洗涤3次，真空干燥，得灵芝孢子多糖精制品。
3.根据权利要求1或2所述的灵芝孢子多糖的精制工艺，其特征在于该工艺灵芝孢子脱脂的方法采用CO2超临界萃取法提取灵芝孢子油，其工艺参数是萃取温度为35～65℃，萃取压力为20～35MPa，萃取时间为2～7小时，CO2流量0.5-1m3/h。
全文摘要
本发明公开了一种灵芝孢子多糖的精制工艺。该工艺将灵芝孢子除杂、破壁粉碎，脱脂；再进行温浸法水提取，提取液醇沉，分离沉淀物，得粗多糖；取粗多糖加适量水溶解，调节pH至7.5－8.5，离心去除沉淀，上清液加H
文档编号C08B37/00GK1944465SQ200610097229
公开日2007年4月11日 申请日期2006年10月25日 优先权日2006年10月25日
发明者冯鹏, 冯敏, 黄景苏, 钱一帆, 沈建, 陈亮, 王连安 申请人:南京中科集团股份有限公司